ΠΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΠ½Π°Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ
ΠΡΠΎΡΡΠΎΡΠ°, Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΡΡ ΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ Π½Π°Π΄Π΅ΠΆΠ½ΡΠ΅ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅, Π½Π΅ ΠΏΡΠΈΠ±Π΅Π³Π°Ρ ΠΊ ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π² Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΡΡ , ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ΅ΡΡΡ 1) ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΠ¦Π -Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΎΠΊ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈ 2) ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±ΠΎΠΌ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°, ΠΏΡΠΈΠ΅ΠΌΠ»Π΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎ-Π²Π°Π½ΠΈΡ. ΠΠ»Ρ ΠΏΡΡΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΠ¦Π Π²ΠΏΠΎΠ»Π½Π΅ ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π½ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄. ΠΡ ΡΠ°ΡΡΠΌΠΎΡΡΠΈΠΌ Π·Π΄Π΅ΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ°ΡΠΏΡΠΎΡΡΡΠ°Π½Π΅Π½Π½ΡΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄… Π§ΠΈΡΠ°ΡΡ Π΅ΡΡ >
ΠΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΠ½Π°Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ (ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ°Ρ, ΠΊΡΡΡΠΎΠ²Π°Ρ, Π΄ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½Π°Ρ)
ΠΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΠ½Π°Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ
ΠΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΠ½Π°Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ — ΡΡΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ in vitro, Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ ΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π²ΡΠ΄Π΅Π»ΠΈΡΡ ΠΈ ΡΠ°Π·ΠΌΠ½ΠΎΠΆΠΈΡΡ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΠΠ Π² ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅, ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΌ ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ΅ Π² 108 ΡΠ°Π·. Π’Π°ΠΊΠ°Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠ°Ρ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Ρ Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±ΠΎΠ³Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠΏΡΠΎΡΠ°Π΅Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠ΅Π³ΠΎΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ° ΠΠΠ-ΠΠ΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΠΈ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΠ¦Π : Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠ΅ ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ, ΠΏΡΡΠΌΠΎΠ΅ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΈΡΠΎΡ ΠΎΠ½Π΄ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ, Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· Π²Π°ΡΠΈΠ°ΡΠΈΠΉ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ ΠΈ Π²ΡΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π²ΠΈΡΡΡΠ½ΡΡ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½ΠΎΠ².
ΠΡΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΠ¦Π ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ Π΄Π²Π° ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°, ΡΠ»Π°Π½ΠΊΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΡΡΡΠΈΠΉ Π½Π°Ρ ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ ΠΠΠ; ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π·Π°ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π² ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΡΡΠΈΡ ΡΡ ΡΠΈΠΊΠ»Π°Ρ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ, ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΌΠΈ ΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅ΠΉ Π΄ΠΎΡΡΡΠΎΠΉΠΊΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ Ρ ΡΡΠΈΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·ΠΎΠΉ. ΠΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ ΠΎΡΠΈΠ΅Π½ΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΡΠ°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΡΡΠΎ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π· Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ. ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΠΊΠ°Π΅Ρ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ Π½ΠΈΠΌΠΈ, ΡΠ΄Π²Π°ΠΈΠ²Π°Ρ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ° ΠΠΠ.
Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΏΡΠΈΠ±Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΏΠΎ ΡΠΎΡΠΌΡΠ»Π΅ 2n, Π³Π΄Π΅ ΠΏ — ΡΠΈΡΠ»ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π΄ΡΠΈΡ ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. ΠΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ ΡΠΈΠ·ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ°ΡΡΡΡ Π² ΠΊΠΎΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π·Π°ΡΡΡΠΎΠΉΠΊΠΈ, ΠΎΠ½ΠΈ Π΄Π΅ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½ΠΈΡΡΡΡ ΡΠ°ΠΌ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ — ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΠΠ, ΡΠ°Π²Π½ΡΠΉ ΠΏΠΎ Π΄Π»ΠΈΠ½Π΅ ΡΠ°ΡΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΡ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² Π½Π° ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ΅ ΠΠΠ. ΠΠ΅Π΄Π°Π²Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΈ, ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΈΠ΄Π΅Ρ Π³ΠΎΡΠ°Π·Π΄ΠΎ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎ, Π΅ΡΠ»ΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ, Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΈΠ· Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΈ Thermits aquaticus. Π ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΎΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΠ»Π°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΠ»ΡΠ½ΠΎΠ²Π° ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ I Π. coli, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π²ΡΠ΅Π³ΠΎΡΡ ΡΠ°Π½Π΅Π΅, ΠΠΎΠ΄-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π° ΡΠΎΡ ΡΠ°Π½ΡΠ΅Ρ ΡΠ²ΠΎΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠ΅ΠΏΠ»ΠΎΠ²ΠΎΠΉ Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ, ΠΈ Π½Π΅Ρ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ Π² Π·Π°ΠΌΠ΅Π½Π΅ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΊΠ»Π°. ΠΡΠ΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠΎΠΈΠ½ΡΡΠ²ΠΎ Π½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ Π·Π°ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π² Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΌ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ½ΠΎΠΌ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΡΠΌΠ΅ Π΄Π΅ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ Π΅Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ, ΡΡΠΎ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ°Π΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ, ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠΉ Π²ΡΡ ΠΎΠ΄ ΠΈ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΡ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΡΡΡΠ΅ΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ.
ΠΡΠ° ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ° ΠΎΠΏΠΈΡΡΠ²Π°Π΅Ρ ΠΠ¦Π -Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ Taq ΠΈ ΡΡΡΠ°ΡΠ΅Π³ΠΈΡ ΠΏΡΡΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΠ¦Π -Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ.
1. ΠΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠΈ
1.1 ΠΠ±ΠΎΡΡΠ΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅
Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ Π² 0,5- ΠΈΠ»ΠΈ 1,5 ΠΌΠ» ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠΆΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠ°Ρ ΠΠΏΠΏΠ΅Π½Π΄ΠΎΡΡ. ΠΠ±ΠΎΡΡΠ΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π»Ρ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π° ΠΈ ΠΎΡ Π»Π°ΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΡΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΎΡΡΡΠΌ ΠΈ ΡΠΎΡΡΠΎΡΡΡ Π²ΡΠ΅Π³ΠΎ Π»ΠΈΡΡ ΠΈΠ· Π½Π°Π±ΠΎΡΠ° Π²ΠΎΠ΄ΡΠ½ΡΡ Π±Π°Π½Ρ Ρ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ΄Ρ, ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΡΠ΅Π½Ρ ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΡΠΌ ΠΈ Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ°ΡΡ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΉ Π±Π»ΠΎΠΊ, ΡΠΏΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅ΠΌΡΠΉ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΎΡΠΎΠΌ. Π’Π°ΠΊΠΎΠΉ Π±Π»ΠΎΠΊ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ Π°Π²ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. Π£ΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΠΌ Π½Π΅Π°Π²ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ ΠΠ¦Π ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΡΠ΄ΠΎΠ²Π»Π΅ΡΠ²ΠΎΡΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π²ΠΎΠ΄ΡΠ½ΡΠ΅ Π±Π°Π½ΠΈ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ ΠΌΠ°ΡΠ»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈΠ»ΠΈ Π²ΠΎΠ·Π΄ΡΡΠ½ΡΠ΅ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ Π±Π»ΠΎΠΊΠΈ. ΠΠΎΠ΄ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈ ΠΌΠ°ΡΠ»ΡΠ½ΡΠ΅ Π±Π°Π½ΠΈ ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π±ΡΡΡΡΡΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠ»ΠΎΠΎΠ±ΠΌΠ΅Π½, ΡΠ΅ΠΌ Π²ΠΎΠ·Π΄ΡΡΠ½ΡΠ΅ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ Π±Π»ΠΎΠΊΠΈ, Π½ΠΎ Π½Π΅ Π²ΡΠ΅Π³Π΄Π° ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΠΌΡΡ ΡΠΈΡΡΠΎΡΡ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ.
ΠΡΠ»ΠΈ Π³ΠΎΠ²ΠΎΡΠΈΡΡ ΠΎ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ Π±Π»ΠΎΠΊΠ°Ρ , ΡΠΎ Π½Π°ΠΈΠ»ΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π°Π»ΡΠΌΠΈΠ½ΠΈΠ΅Π²ΡΡ ΡΡΠ°ΡΠΈΠ²ΠΎΠ² Ρ ΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠΈΠ΅ΠΌ ΠΏΠΎ ΡΠΎΡΠΌΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΎΠΊ. Π¨ΡΠ°ΡΠΈΠ²Ρ Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΌΠΈ ΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠΈΡΠΌΠΈ, Π·Π°ΠΏΠΎΠ»Π½Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠ΅ΡΠΊΠΎΠΌ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΌΡΠ³ΠΊΠΈΠΌΠΈ ΡΡΠ΅ΠΊΠ»ΡΠ½Π½ΡΠΌΠΈ ΡΠ°ΡΠΈΠΊΠ°ΠΌΠΈ, Π½Π΅ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π½Ρ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΡΠ°ΠΊΠΈΠ΅ Π½Π°ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΠΈ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡ ΠΌΠ°Π»ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠ»ΠΎΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΈ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Ρ ΠΏΠΎΠ΄Π΄Π΅ΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ Π½Π΅ Π΄ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ².
Π Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅Π΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½ΠΎ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π°Π²ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΡΡΡΡΠΎΠΉΡΡΠ² Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Ρ ΡΡΠ°ΡΡΠΈΠ΅ΠΌ Π³ΠΎΠ΄-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ. Π ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌ ΠΈΠ· Π°ΠΏΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ ΠΈΠ· ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ΄ΡΠ½ΠΎΠΉ Π±Π°Π½ΠΈ Π² Π΄ΡΡΠ³ΡΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡΠΈΡ ΡΠΎΠ±ΠΎΡ. Π Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΌ — ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ ΠΏΠΎΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½Ρ Π² ΠΏΠΎΠ»ΠΎΡΡΡ, Π² ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅Π½Π° Ρ ΠΎΠ»ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΈ Π³ΠΎΡΡΡΠ΅ΠΉ Π²ΠΎΠ΄Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΊΠΎΠΌΠΏΡΡΡΠ΅ΡΠΎΠΌ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΎΡΡΡΠΌ ΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠΌ, ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½Π½ΡΠΌ Ρ ΠΊΠ»Π°ΠΏΠ°Π½Π°ΠΌΠΈ ΡΡΡΡΠΎΠΉΡΡΠ²Π°, ΠΏΠΎΠ΄Π°ΡΡΠ΅Π³ΠΎ Π²ΠΎΠ΄Ρ. ΠΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΠΉ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΊΠΎΠΌΠΏΡΡΡΠ΅ΡΠΎΠΌ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΉ Π±Π»ΠΎΠΊ, ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½Π½ΡΠΉ Π΄Π»Ρ Π°Π²ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈΠΎΠ±ΡΠ΅ΡΡΠΈ Ρ ΡΠΈΡΠΌΡ Perkin Elmer-Cetus Instruments. ΠΠ½ ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· Π°Π»ΡΠΌΠΈΠ½ΠΈΠ΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°ΡΠΈΠ²Π° Π½Π° 48 ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ², ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π°Π΅ΡΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ, ΠΎΡ Π»Π°ΠΆΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ ΠΆΠΈΠ΄ΠΊΠΎΡΡΡΡ ΠΈ Π΄Π»Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π·Π°ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π»ΡΠ±ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ»Ρ ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π°. Π‘ΠΎΠ±Π»ΡΠ΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ Π΄Π°Π΅Ρ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠΊΠ²ΠΈΠ²Π°Π»Π΅Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΈ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΏΡΠΈ Π»ΡΠ±ΠΎΠΌ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π΅ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ.
1.2 ΠΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ
ΠΠΎΠΌΠΈΠΌΠΎ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΠΠ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ, ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΠ¦Π ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡ Π±ΡΡΠ΅Ρ, Π΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ·ΠΈΠ΄ΡΡΠΈΡΠΎΡΡΠ°ΡΡ, Π΄Π²Π° ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°, ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΡ Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ Ρ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅ΠΌΡΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠΌ, ΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ Taq. ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ ΠΠ¦Π , ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΠΈΠΉ 7-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡ 50 ΠΌΠΌ KG, 10 ΠΌΠΌ Π’ΡΠΈΡ-HCl, ΡΠ 8,4, 2,5 ΠΌΠΌ MgCl2 ΠΈ 100 ΠΌΠΊΠ³/ΠΌΠ» ΠΆΠ΅Π»Π°ΡΠΈΠ½Ρ. ΠΠ΅Π»Π°ΡΠΈΠ½Π° ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΡΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½Π΅Π΅ ΠΠ‘Π, ΡΠ°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΎΠ½Π° Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²Π° ΠΊ ΠΊΠΎΠ°Π³ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ Π½Π° ΡΡΠ°ΠΏΠ΅ Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΈ Π»Π΅Π³ΠΊΠΎ ΡΡΠ΅ΡΠΈΠ»ΠΈΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ Π°Π²ΡΠΎΠΊΠ»Π°Π²ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ. ΠΠ΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠΈ Π΄Π»Ρ Π½Π°ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π²ΡΠΎΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ ΠΠΠ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠΌΠ°ΡΡΠΈΠ²Π°ΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ 10%-Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ»ΡΡΠ»ΡΡΠΎΠΊΡΠΈΠ΄Π°, Ρ ΠΎΡΡ ΠΏΠΎ Π½Π°ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΎΠΏΡΡΡ ΡΡΠΎ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π² Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½ΠΈ ΠΈΠ½Π³ΠΈΠ±ΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ ΠΈ ΡΠ½ΠΈΠΆΠ°Π΅Ρ Π²ΡΡ ΠΎΠ΄ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ° Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. ΠΡΠ»ΠΈ ΠΠΠ‘Π Π²ΡΠ΅-ΡΠ°ΠΊΠΈ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ΡΡΡ, Π΄Π»Ρ ΡΠ΄ΠΎΠ±ΡΡΠ²Π° ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΡΠΎΠ²ΠΈΡΡ 10-ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΡΠΉ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ ΠΈ Ρ ΡΠ°Π½ΠΈΡΡ Π΅Π³ΠΎ ΠΏΡΠΈ — 20 Β°C.
ΠΠ΅ΠΉΡΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡ ΡΡΠΈΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈΠΎΠ±ΡΠ΅ΡΡΠΈ Ρ ΡΡΠ΄Π° ΠΊΠΎΠΌΠΌΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΡΠΈΡΠΌ. ΠΠ°ΡΡΠ°ΡΡ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠ½ΠΈΠΆΠ΅Π½Ρ, Π΅ΡΠ»ΠΈ Π·Π°ΠΊΡΠΏΠ°ΡΡ Π»ΠΈΠΎΡΠΈΠ»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈ ΠΈ Π΄Π΅Π»Π°ΡΡ ΠΈΠ· Π½ΠΈΡ Π²ΠΎΠ΄Π½ΡΠ΅ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡ. ΠΡΠ΅ΠΆΠ΄Π΅ ΡΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΈΡΡΡΠΏΠΈΡΡ ΠΊ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅, ΡΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ Π½Π΅ΠΉΡΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠΎΠΊΠΈΡΡΡ Π½Π°ΡΡΠΈΡ ΠΈ ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΡΠ°Π·Π²Π΅ΡΡΠΈ, ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΠΈΠ² ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΏΠΎ Π£Π€-ΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ. ΠΠ»Ρ Ρ ΡΠ°Π½Π΅Π½ΠΈΡ Π³ΠΎΡΠΎΠ²ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π²ΡΠ΅Ρ ΡΡΠΈΡΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠΉ 8 ΠΌΠΌ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ Π·Π°ΠΌΠΎΡΠ°ΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡ ΠΏΡΠΈ — 20 Β°C.
ΠΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΠ¦Π ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ 20 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ². ΠΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΈ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π΄Π»ΠΈΠ½Π½ΡΠ΅ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ, Π½ΠΎ ΠΎΠ½ΠΈ ΡΠ΅Π΄ΠΊΠΎ Π±ΡΠ²Π°ΡΡ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡ. Π 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ° ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, Π½Π΅ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ. Π’Π°ΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ°ΡΡΡΡ Π² Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ ΠΠ¦Π , ΡΡΠΎ ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π΅Ρ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ Π²Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ°ΠΉΡΠΎΠ² ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ². ΠΡΠ»ΠΈ ΠΎ ΠΏΠΎΠ΄Π»Π΅ΠΆΠ°ΡΠ΅ΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈΠΌΠ΅Π΅ΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΎΠ³ΡΠ°Π½ΠΈΡΠ΅Π½Π½Π°Ρ ΠΈΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΡ, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΈ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ Ρ ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΌ ΠΏΠΎΠΏΡΠ°Π²ΠΊΠΈ Π½Π° ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ «ΠΏΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΠΈ» ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ° ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ Π΄ΠΎΡΡΡΠΎΠΉΠΊΠΈ. ΠΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ Ρ ΡΠ°Π½ΠΈΡΡ Π² ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ 10 ΠΌΠΊΠΌ Π² Π’Π-Π±ΡΡΠ΅ΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ —20Β°Π‘.
ΠΠΎΠ΄Π±ΠΎΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² Π΄Π»Ρ ΠΠ¦Π — ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ ΡΠΌΠΏΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ. Π‘ΠΎΠ±Π»ΡΠ΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΡΡΠ΅Π±ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ²Π°Π΅Ρ Π²Π΅ΡΠΎΡΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ², ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π½ΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ.
1. ΠΡΠ±ΠΈΡΠ°ΠΉΡΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ Ρ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ GC ~50% ΠΈ ΡΠ»ΡΡΠ°ΠΉΠ½ΡΠΌ ΡΠ°ΡΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ. Π‘Π»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ ΠΈΠ·Π±Π΅Π³Π°ΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² Ρ ΠΏΡΠΎΡΡΠΆΠ΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΏΡΡΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠΌΠΈ, ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΏΠΈΡΠΈΠΌΠΈΠ΄ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΠΌΠΈ ΠΈΠ»ΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠΌΠΈ Π½Π΅ΠΎΡΠ΄ΠΈΠ½Π°ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΌΠΈ.
2. ΠΠ·Π±Π΅Π³Π°ΠΉΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ Ρ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΡΠΌΠΈ Π²ΡΠΎΡΠΈΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ°ΠΌΠΈ. ΠΠ»Ρ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π²ΡΠΎΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ ΠΎΡΠ΅Π½Ρ ΠΏΠΎΠ»Π΅Π·Π½Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΡΡΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΡ, ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½Π½ΡΠ΅ Π΄Π»Ρ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° Π²ΡΠΎΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡ Π ΠΠ, ΠΈ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΡ ΠΏΠΎΡΡΡΠΎΠ΅Π½ΠΈΡ Π΄ΠΎΡ-ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ.
3. ΠΡΠΎΠ²Π΅ΡΡΡΠ΅ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ Π½Π° ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π΄ΡΡΠ³ Π΄ΡΡΠ³Ρ. ΠΡΠ΅Π²ΠΈΠ΄Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ, ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π°ΡΡΠΈΠ΅ΡΡ Π΄ΡΡΠ³ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΌ, Π½Π΅ ΡΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΡΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡ Π² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΡΡΡΠ΅ΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ.
Π₯ΠΎΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ½ΡΡΠ²ΠΎ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΎΠΊ Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°ΡΡ, Π±ΡΠ²Π°ΡΡ ΡΠ»ΡΡΠ°ΠΈ, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΠΈ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ ΡΠΎΠ²Π΅ΡΡΠ΅Π½Π½ΠΎ Π½Π΅ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π½Ρ Π΄Π»Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΆΠ΅Π»Π°Π΅ΠΌΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ. ΠΡΠΈΡΠΈΠ½Π° ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΎΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΠΊΠ° Π½Π΅ΡΡΠ½ΠΎΠΉ. ΠΠΎ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΡ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΏΡΠΎΡΡΠΎΠΉ ΡΠ΄Π²ΠΈΠ³ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ Π½Π° Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ «Π²Π²Π΅ΡΡ » ΠΈΠ»ΠΈ «Π²Π½ΠΈΠ·» ΡΠ΅ΡΠ°Π΅Ρ ΠΏΡΠΎΠ±Π»Π΅ΠΌΡ.
7Π°-7-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈΠΎΠ±ΡΠ΅ΡΡΠΈ Ρ ΡΡΠ΄Π° ΡΠΈΡΠΌ. ΠΠ»Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΠ¦Π ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ Π² ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ 2 Π΅Π΄. Π² 100 ΠΌΠΊΠ» ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ. ΠΠ»Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ² ΠΠΠ, ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡΠΈΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΉ ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡΡ, Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ, ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΡΠΌ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠ°Π΄-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ 1−4 Π΅Π΄. Π½Π° 100 ΠΌΠΊΠ» ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ. Π£Π²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° Π²ΡΡΠ΅ ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΏΡΠΈΠ²Π΅ΡΡΠΈ ΠΊ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π½ΠΈΡ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ Π½Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π° ΠΈ ΠΊ ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π²ΡΡ ΠΎΠ΄Π° ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°.
1.3 ΠΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ½ΡΡ ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ²
ΠΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΠ½Π°Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠΌΠ°ΡΡΠΈΠ²Π°Π΅Ρ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±Π°ΡΠΈΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ² ΠΏΡΠΈ ΡΡΠ΅Ρ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ°Ρ , ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ ΡΡΠ΅ΠΌ ΡΡΠ°ΠΏΠ°ΠΌ ΡΠΈΠΊΠ»Π° Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ, — Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ, ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Ρ ΠΈ Π΄ΠΎΡΡΡΠΎΠΉΠΊΠ΅.
ΠΠ±ΡΡΠ½ΠΎ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΡΡΡ ΠΏΡΡΠ΅ΠΌ ΠΊΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π° ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ° Π΄ΠΎ 90−95Β°Π‘, Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³, ΠΎΡ Π»Π°ΠΆΠ΄Π°Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·Π΅Ρ Π΄ΠΎ 40−60Β°Π‘, ΠΈ Π΄Π°Π»Π΅Π΅ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π°ΡΡ Π΄ΠΎ 70−75Β°Π‘, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΈΡΡ Π΄ΠΎΡΡΡΠΎΠΉΠΊΡ ΠΎΡΠΎΠΆΠΆΠ΅Π½Π½ΡΡ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΎΠΊ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ 7Π°-7-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ. ΠΡΠ΅ΠΌΡ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈ 70−75 Π‘Π‘ Π²Π°ΡΡΠΈΡΡΡΡ Π² Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ ΠΎΡ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ. ΠΠ»ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΊΠ°ΡΠΊΠ° ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΈΠΏΠΎΠΌ ΠΎΠ±ΠΎΡΡΠ΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π»Ρ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π° ΠΈ ΠΎΡ Π»Π°ΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΡ. ΠΠ° ΠΎΠ΄Π½ΠΈΠΌ Π»ΠΈΡΡ ΠΈΡΠΊΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ, ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠΌΠ΅Π½Ρ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ Π½Π΅ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΈ Π΄Π»Ρ ΡΠΎΠΊΡΠ°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π΄Π»ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠΈΠΊΠ»Π° ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π²ΡΠ΅Π³Π΄Π° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΡΡ Π±ΡΡΡΡΡΠ΅ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠΊΠ°ΡΠΊΠΈ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ, ΡΡΠΎΠ±Ρ Π±ΡΡΡ ΡΠ²Π΅ΡΠ΅Π½Π½ΡΠΌ, ΡΡΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Π²ΡΠ΅-ΡΠ°ΠΊΠΈ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π»ΠΈΡΡ Π΄ΠΎ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ, Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΡΠΊΠ°ΡΠΊΠ° ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΠΈΡΡ, ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄Ρ Π·Π°ΠΌΠ΅ΡΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ Π² ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎΠΌ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. Π’Π΅ΡΠΌΠΎΠΏΠ°ΡΠ° Π΄Π»Ρ Π·Π°ΠΌΠ΅ΡΠ° Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠ½ΡΠΎΠ±Π°Ρ ΠΈ ΡΠΈΡΡΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΠΉ ΡΡΠ΅ΡΡΠΈΠΊ ΠΎΡΠ΅Π½Ρ ΠΏΠΎΠ»Π΅Π·Π½Ρ Π΄Π»Ρ ΡΡΠΈΡ ΡΠ΅Π»Π΅ΠΉ.
ΠΠ±ΡΡΠ½ΠΎ Π΄Π»ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠΌΠ΅Π½Ρ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡ Π΄Π»Ρ 100 ΠΌΠΊΠ» ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π² 1,5 ΠΌΠ» ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠ°Ρ ΠΈ Π²ΠΎΠ΄ΡΠ½ΡΡ Π±Π°Π½ΡΡ , Π½Π°ΡΡΡΠΎΠ΅Π½Π½ΡΡ Π½Π° 72Β°, 93ΠΎ ΠΈ 55 Β°C, ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ°Ρ:
1) 72Β° — 93Β°Π‘— 1 ΠΌΠΈΠ½,
2) 93 — 55Β°Π‘— 1 ΠΌΠΈΠ½,
3) 55 — 72 Β°C — 45 Ρ.
ΠΡΠ΅ΠΌΡ ΡΠΊΠ°ΡΠΊΠ° Π΄Π»Ρ ΡΠ°ΠΊΠΈΡ ΠΆΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ², Π½ΠΎ Π² Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π±Π»ΠΎΠΊΠ΅ Ρ ΡΠΎΡΠΌΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠΈΡΠΌΠΈ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅, ΠΏΠΎ ΠΊΡΠ°ΠΉΠ½Π΅ΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠ΅, Π² Π΄Π²Π° ΡΠ°Π·Π°. ΠΠ΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ΅Π² Π½Π° ΡΡΠ°ΠΏΠ΅ Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ — ΠΎΠ΄Π½Π° ΠΈΠ· Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ°ΡΠΏΡΠΎΡΡΡΠ°Π½Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½ Π½Π΅ΡΠ΄Π°Ρ ΠΏΡΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΠ¦Π Π²ΡΡΡΠ½ΡΡ. ΠΠ°ΠΊ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΠΎ, ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ, Π΅ΡΠ»ΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½Π°Ρ ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π½Π°Π³ΡΠ΅ΡΠ° Π²ΡΡΠ΅ 90 Β°C. Π§ΡΠΎΠ±Ρ Π³Π°ΡΠ°Π½ΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅, ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ Π΄ΠΎΠ²Π΅ΡΡΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π΄ΠΎ 93 Β°C. ΠΠ°ΠΊ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΡΠΎΡ ΡΡΠ±Π΅ΠΆ Π΄ΠΎΡΡΠΈΠ³Π½ΡΡ, ΠΎΠ±ΡΠ°Π·Π΅Ρ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΎΡ Π»Π°ΠΆΠ΄Π°ΡΡ Π΄ΠΎ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ. ΠΠΎΠ»Π³Π°Ρ Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π½Π΅ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΉ; Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΠΈΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ Π½Π΅ΠΏΡΠΎΠ΄ΠΎΠ»ΠΆΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ Π²ΠΎΠ·Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡ ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π΅Ρ ΠΏΠΎΠ΄Π΄Π΅ΡΠΆΠ°Π½ΠΈΠ΅ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π²ΡΠ΅ΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. Π§ΡΠΎΠ±Ρ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΎΡΠ²ΡΠ°ΡΠΈΡΡ ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΡ Π²Π»Π°Π³ΠΈ Π·Π° ΡΡΠ΅Ρ ΠΈΡΠΏΠ°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Ρ ΠΏΠΎΠ²Π΅ΡΡ Π½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π½Π°ΡΠ»ΠΎΠΈΡΡ Π½Π° Π½Π΅Π΅ 50 ΠΌΠΊΠ» ΠΌΠΈΠ½Π΅ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ°ΡΠ»Π°.
Π’Π΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ° ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΡ ΠΎΡ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ ΠΈ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Π½ΠΈΡ Π² Π½Π΅ΠΉ GC-nap. ΠΠ»Ρ ΡΠΈΠΏΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ 20 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΈ 50%-Π½ΡΠΌ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ GC-nap ΠΏΠΎΠ΄Π±ΠΎΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ Ρ ΠΎΡΠΎΡΠΎ Π½Π°ΡΠΈΠ½Π°ΡΡ Ρ 50−60Β°Π‘. ΠΠ·-Π·Π° Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠΎΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ·Π±ΡΡΠΊΠ° Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΏΠΎΡΡΠΈ ΠΌΠ³Π½ΠΎΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΠΈ Π½Π΅ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ Π΄ΠΎΠ»Π³ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π°. ΠΠ½ΠΎΠ³Π΄Π° ΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΠΌ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π°ΡΡ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ ΠΈ ΠΏΡΠΈ 72 Β°C, Ρ. Π΅. ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ Π΄ΠΎΡΡΡΠΎΠΉΠΊΠΈ. ΠΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠΏΡΠΎΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π²ΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°: ΠΎΠ½Π° ΡΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ ΠΊ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΡΠΈΠΊΠ»Ρ.
Π Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ , ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° Π΄ΠΎΡΡΡΠΏΠ½Ρ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ 12−15-Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠ΅ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ, ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ° ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° 40 Β°C. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ Π½Π΅ ΡΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ Π½Π° ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ Π΄ΠΎΡΡΡΠΎΠΉΠΊΠΈ 72 Β°C. ΠΡΠ΅ΠΎΠ΄ΠΎΠ»Π΅ΡΡ ΡΡΡ ΡΡΡΠ΄Π½ΠΎΡΡΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ. ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡ ΡΠ°ΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠΈΠ²Π½ΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ ΠΏΡΠΈ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΈΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ°Ρ , ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ΄Π»ΠΈΠ½ΠΈΡΡ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ Π½Π° Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΈ ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ°ΠΌΡΠΌ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΈΡ . ΠΡΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠΈΠ³Π°Π΅ΡΡΡ Π»ΠΈΠ±ΠΎ Π·Π° ΡΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΎΠΌΠ΅ΠΆΡΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±Π°ΡΠΈΠΈ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ ΠΌΠΈΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΈ 55−60Β°Π‘ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΡΠ΅ΠΌ ΠΌΠ΅Π΄Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π°Π½ΠΈΡ ΠΎΡ 40 Π΄ΠΎ 72 Β°C.
Π’Π΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ° Π΄ΠΎΡΡΡΠΎΠΉΠΊΠΈ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ° 72 Β°C ΠΎΡΠ΅Π½Ρ Π±Π»ΠΈΠ·ΠΊΠ° ΠΊ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅, ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π° Taq ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΠ΅Ρ ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ. ΠΠ°ΠΊ ΡΠΆΠ΅ ΠΎΡΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎ, ΠΏΡΠΎΠ΄ΠΎΠ»ΠΆΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΈ 72 Β°C Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΡ ΠΎΡ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ° ΠΠΠ. Π‘ΡΠΈΡΠ°Π΅ΡΡΡ, ΡΡΠΎ ΠΠ°-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π° ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ 1000 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² Π·Π° 1 ΠΌΠΈΠ½, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΎΠΏΡΠΎΠ±ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΈ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΎΠ΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±Π°ΡΠΈΠΈ. ΠΡΠ°ΠΏ ΡΠ΄Π»ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌ ΠΈΡΠΊΠ»ΡΡΠΈΡΡ, Π΅ΡΠ»ΠΈ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ, Π½Π΅ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°ΡΡΡΡ 150 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ². ΠΡΠΈ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π΅ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΡΠ°ΠΏΠ°ΠΌΠΈ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° ΠΈ Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Π±ΡΠ΄ΡΡ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡ Π² Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π΅ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡ 70−75Β°Π‘ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΠ΅ΠΊΡΠ½Π΄, ΡΡΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ Π΄Π»Ρ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΠΉ Π΄ΠΎΡΡΡΠΎΠΉΠΊΠΈ ΠΎΡΠΎΠΆΠΆΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ.
2. ΠΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ «Π²ΡΡΡΠ½ΡΡ»
ΠΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ°, ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½Π½Π°Ρ Π² ΡΡΠΎΠΌ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅, ΠΏΡΠ΅Π΄Π½Π°Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½Π° Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΠΠ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π΄ΠΎ 500 ΠΏ. Π½. ΠΠ΅ΡΠ°Π»ΠΈ Π΅Π΅ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½Ρ Π² ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ Ρ ΡΠ΅Π»ΡΠΌΠΈ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°. Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½Π°Ρ ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π² ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ΅ 100 ΠΌΠΊΠ» Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π΅Ρ 1 ΠΌΠΊΠ³ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°, 1-ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠΎΠ»Π΅Π²ΠΎΠΉ Π±ΡΡΠ΅Ρ, 1 ΠΌΠΌ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°, 0,2 ΠΌΠΌ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ dNTP ΠΈ 2,5 Π΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡ ΠΠ°Π΄-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ. Π ΠΏΡΠΈΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠ°ΡΡΠ½ΠΎΠΌ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ΅ ΡΠ°ΠΉΠΎΠ½, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Ρ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠΌΠΈ ΠΏΡΠΎΠ±Π°ΠΌΠΈ. Π’Π΅ΠΏΠ΅ΡΡ Π΄Π»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΠΠ Π±Π΅Π· ΠΏΡΠ΅Π΄Π²Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π΅Π΅ ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ.
ΠΡΡΠΌΠΎΠ΅ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ Π΄Π²Π° Π²Π°ΠΆΠ½ΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄ ΡΡΠ°Π΄ΠΈΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΌ ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠ¦Π Π² ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΠΈ Π²ΠΈΡΡΡΠ½ΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ°Ρ .
1. ΠΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π΄ΡΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ, ΡΠ°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ Π΅Π΅ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ in vitro ΠΈ ΠΎΠ½Π° Π½Π΅ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΡ ΠΎΡ ΠΆΠΈΠ²ΡΡ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌ. 2. ΠΠ΅ΡΠΎΠ΄ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π±ΡΡΡΡ ΠΈ Π½Π°Π΄Π΅ΠΆΠ΅Π½, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ Π² Π½ΠΎΡΠΌΠ΅ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°. ΠΡΠ»ΠΈ ΠΆΠ΅ ΠΌΡ ΠΈΠΌΠ΅Π΅ΠΌ Π΄Π΅Π»ΠΎ Ρ ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΠ¦Π -ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΌΠΈ, ΡΠΎ Π΄Π»Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ° ΠΈΡ Π½ΡΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠΈΡΡ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ, ΠΏΡΠΎΠΈΡΡΠ΅Π΄ΡΠΈΠ΅ Π² ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, ΠΎΡ ΡΠ»ΡΡΠ°ΠΉΠ½ΡΡ ΠΎΡΠΈΠ±ΠΎΠΊ ΠΏΡΠΈ Π΄ΠΎΡΡΡΠΎΠΉΠΊΠ΅ ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·ΠΎΠΉ Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΠ¦Π . ΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΈΡ Π°ΡΡΠ΅ΡΠ°ΠΊΡΠΎΠ² ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΎΠ·Π°ΠΈΡΠ½ΡΡ Π°Π»Π»Π΅Π»Π΅ΠΉ Π²ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°ΡΠΈΠΈ in vitro.
ΠΡΠΎΡΡΠΎΡΠ°, Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΡΡ ΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ Π½Π°Π΄Π΅ΠΆΠ½ΡΠ΅ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅, Π½Π΅ ΠΏΡΠΈΠ±Π΅Π³Π°Ρ ΠΊ ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π² Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΡΡ , ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ΅ΡΡΡ 1) ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΠ¦Π -Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΎΠΊ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈ 2) ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±ΠΎΠΌ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°, ΠΏΡΠΈΠ΅ΠΌΠ»Π΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎ-Π²Π°Π½ΠΈΡ. ΠΠ»Ρ ΠΏΡΡΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΠ¦Π Π²ΠΏΠΎΠ»Π½Π΅ ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π½ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄. ΠΡ ΡΠ°ΡΡΠΌΠΎΡΡΠΈΠΌ Π·Π΄Π΅ΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ°ΡΠΏΡΠΎΡΡΡΠ°Π½Π΅Π½Π½ΡΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ Π‘ΡΠ½Π³Π΅ΡΠ°, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΠΈΠΉ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Ρ-ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°ΡΠΎΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ. Π‘ΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΠ¦Π -Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΎΠΊ Π² ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏΠ΅ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ΅Ρ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ. Π ΠΈΠ΄Π΅Π°Π»Π΅, Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ Π½Π°ΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΡΡΡΠ°Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΡΠΎΡΠΎΠ½Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ. ΠΠΎΠ²ΡΡΠ°Ρ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° Π² ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ, ΡΡΠΎ ΠΎΡΠ»ΠΎΠΆΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΎΠ΄ΠΎΠ»Π΅ΡΡ. Π ΡΠΎΠΌΡ ΠΆΠ΅ Π΄Π»Ρ ΡΡΡΡΠ°Π½Π΅Π½ΠΈΡ Π·Π°ΡΡΡΠ΄Π½Π΅Π½ΠΈΠΉ, ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Π½ΡΡ ΡΠΎ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ²Π°ΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΠΈΡΡ ΠΏΡΠ΅Π΄Π²Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΡΡΡΠ΅ΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·ΠΎΠΌ Π² Π³Π΅Π»Π΅ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉ Π³ΡΠ°Π΄ΠΈΠ΅Π½ΡΠ½ΡΠΉ Π³Π΅Π»Ρ.
Π ΠΊΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΠΎΠΌ ΡΡΠ΅ΡΠ΅, Π΅ΡΠ»ΠΈ ΡΡΠΈ ΠΎΡΠ»ΠΎΠΆΠ½Π΅Π½ΠΈΡ Π½ΠΈΠΊΠ°ΠΊ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π½Π΅ ΡΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΎΠ΄ΠΎΠ»Π΅ΡΡ, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ, ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π°ΡΡΠΈΠ΅ΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π½Π° ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΡΡΡΠ΅ΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ.
ΠΡΠ΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎ Π½Π΅ΡΠ΄ΠΎΠ±ΡΡΠ²ΠΎ, Π²ΡΠ·Π²Π°Π½Π½ΠΎΠ΅ ΠΏΡΡΠΌΡΠΌ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΠ¦Π , ΠΎΠ±ΡΡΠ»ΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΎ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΊ Π±ΡΡΡΡΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΡΡΠΎΡΠΈΠ°ΡΠΈΠΈ, ΡΡΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠ°Π΅Ρ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Ρ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½Π°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ° Π½Π° ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈΠ»ΠΈ Π±Π»ΠΎΠΊΠΈΡΡΠ΅Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ Π΄ΠΎΡΡΡΠΎΠΉΠΊΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠ° — ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ°. Π£ΡΡΡΠ°Π½ΠΈΡΡ ΡΡΠΎ ΠΏΡΠ΅ΠΏΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ, ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΠΈΠ· Π²Π°ΡΠΈΠ°Π½ΡΠΎΠ² ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΡ ΠΠ¦Π Ρ ΡΠ΅Π»ΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ².
3.1 Π‘Π΅ΠΊΠ²Π΅ΡΡΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ²
ΠΠ»Ρ ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ², ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΡ ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ, Π²ΡΠ±Π΅ΡΠΈΡΠ΅ ΠΎΠ΄Π½Ρ ΠΈΠ· Π΄Π²ΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊ.
1. ΠΠ΅Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·Π΅Ρ NaOH, ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ Π² Π»Π΅Π΄, Π½Π΅ΠΉΡΡΠ°Π»ΠΈΠ·ΡΠΉΡΠ΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ, ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠ΅Π³ΠΎ Π±ΡΡΡΡΠΎ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΈΡΠ΅ ΠΠΠΠ Π°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΈΡΠ΅ ΠΠΠ Π² Π±ΡΡΠ΅ΡΠ΅, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½Π°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ, ΠΏΡΠΈ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π°.
2. ΠΠ΅Π½Π°ΡΡΡΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·Π΅Ρ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ, Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ Π±ΡΡΡΡΠΎ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ Π² ΡΠΏΠΈΡΡΠΎΠ²ΡΡ Π±Π°Π½Ρ, ΠΎΡ Π»Π°ΠΆΠ΄Π΅Π½Π½ΡΡ Π΄ΠΎ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΡΡΡ ΠΎΠ³ΠΎ Π»ΡΠ΄Π°, Π·Π°ΠΌΠ΅Π΄Π»ΠΈΠ² ΡΠ°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ ΡΠ΅Π°ΡΡΠΎΡΠΈΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ. ΠΠΎΠ±Π°Π²ΡΡΠ΅ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½Π°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ ΠΈ Π½Π°Π³ΡΠ΅ΠΉΡΠ΅ Π΄ΠΎ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π°.
ΠΠ»Ρ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΠΠΠ ΠΏΠΎΠ΄Ρ ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΎΠ±Π° ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π°. Π‘Π΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ ΠΠ¦Π ΠΏΠΎ ΡΡΠΈΠΌ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΡΠΌ Π³ΠΎΡΠ°Π·Π΄ΠΎ ΡΡΡΠ΄Π½Π΅Π΅, ΡΠ°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ Π»ΠΈΠ½Π΅ΠΉΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΠΠ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠΊΠ»ΠΎΠ½Π½Ρ ΠΊ ΡΠ΅Π°ΡΡΠΎΡΠΈΠ°ΡΠΈΠΈ, ΡΠ΅ΠΌ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π²ΡΠ΅ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ.
3.2 Π‘Π΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ
ΠΠ°ΡΡΡΠ΄Π½Π΅Π½ΠΈΡ, ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Π½ΡΠ΅ Ρ ΡΠ΅Π°ΡΡΠΎΡΠΈΠ°ΡΠΈΠ΅ΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅ΠΎΠ΄ΠΎΠ»Π΅ΡΡ, Π΅ΡΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΡΠΎΠ²ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ ΠΠΠ ΠΏΡΡΠ΅ΠΌ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ Π² Π³Π΅Π»Π΅ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΈΡ Π² ΡΠ°ΠΌΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΠ¦Π . ΠΠ»Ρ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π½Π΅ ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ 500 ΠΏ. Π½. ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ Ρ ΡΡΠΏΠ΅Ρ ΠΎΠΌ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠ΅ Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΡΠ΅ Π³Π΅Π»ΠΈ. Π ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ΄Ρ ΠΎΠ΄ Π½Π΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π΅Π½. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ Π½Π΅Π΄Π°Π²Π½ΠΎ ΠΌΡ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π»ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡΠΈΠΉ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΠΠ Π² Ρ ΠΎΠ΄Π΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΠ¦Π .
ΠΡΠ° ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π΄ΡΡΠ° ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠΌΠ°ΡΡΠΈΠ²Π°Π΅Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π½Π΅ΡΠΊΠ²ΠΈΠ²Π°Π»Π΅Π½ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ² Π΄Π²ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² Π΄Π»Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ, ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π·Π° ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΠ΅ 20−25 ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ ΠΈ Π·Π° ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠ΅ 5−10 ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² Π² ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ° ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ· ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² — ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ.
Π ΠΈΡ. 4, Π Π΄Π΅ΠΌΠΎΠ½ΡΡΡΠΈΡΡΠ΅Ρ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄ΡΠΠΠ ΠΈ ΠΎΡΠΠΠ Π² Ρ ΠΎΠ΄Π΅ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΠ΅ΠΉ ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ΅ ΡΠΎΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΎΠΊ 50:0,5 ΠΏΠΌΠΎΠ»Ρ Π² 100 ΠΌΠΊΠ» ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ. ΠΠ°ΠΊ ΠΈ ΠΎΠΆΠΈΠ΄Π°Π»ΠΎΡΡ, ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π΄ΡΠΠΠ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ Π΄ΠΎ ΠΌΠΎΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΡΡΠ΅Π·Π½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΡ ΠΈΠ· ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ· ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ², ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΡΠΎΠΉ ΠΠΠ Π½Π°ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ ΠΎΡΠ΅Π½Ρ ΠΌΠ΅Π΄Π»Π΅Π½Π½ΠΎ. Π€ΡΠ°ΠΊΡΠΈΡ ΠΎΡΠΠΠ ΠΏΠΎΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ, Π½Π°ΡΠΈΠ½Π°Ρ Ρ 25-Π³ΠΎ ΡΠΈΠΊΠ»Π°, Ρ ΠΌΠΎΠΌΠ΅Π½ΡΠ°, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° Π·Π°ΠΏΠ°Ρ Π»ΠΈΠΌΠΈΡΠΈΡΡΡΡΠ΅ΠΉ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ ΠΏΠΎΡΡΠΈ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΈΡΡΠ΅ΡΠΏΠ°Π½. ΠΠΎΡΠ»Π΅ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΎΠΉ Π½Π°ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°Π΄ΠΈΠΈ Π±ΡΡΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΡΡΠ° ΠΎΡΠΠΠ Π½Π°ΠΊΠ°ΠΏΠ»ΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π»ΠΈΠ½Π΅ΠΉΠ½ΠΎ, ΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ ΠΎΠΆΠΈΠ΄Π°ΡΡ Π² ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°.
Π Π°Π·Π½ΡΠ΅ ΡΠΎΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² Π΄Π°Π΄ΡΡ Π² ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏΠ΅ ΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΡΡ ΠΊΠ°ΡΡΠΈΠ½Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΎΡΠΠΠ. Π Π°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ Π½Π΅ΡΠ°Π²Π½ΡΠ΅ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ 50:5, 50:0,5, 50:0,05 Π΄Π°ΡΡ Π·Π° 30 ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΎΡΠΠΠ, ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°ΡΡΠ΅Π΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ Π΄ΡΠΠΠ. ΠΠ°ΠΊ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΠΎ, ΡΠΎΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 50:0,5 ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ 30 ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² ΠΠ¦Π 1−5 ΠΏΠΌΠΎΠ»Ρ ΠΎΡΠΠΠ. ΠΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½Π½Π°Ρ ΠΎΡΠΠΠ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π° Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π»ΠΈΠΌΠΈΡΠΈΡΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ° ΠΠ¦Π ΠΈΠ»ΠΈ Π²Π½ΡΡΡΠ΅Π½Π½Π΅Π³ΠΎ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ° ΠΏΠΎ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡ Π΅ΠΌΠ΅ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ½Π·ΠΈΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠΈ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ. Π‘ΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ Π±ΡΠ΄ΡΡ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ³Π΅Π½Π½ΡΠΉ 5'-ΠΊΠΎΠ½Π΅Ρ ΠΈ Π² ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½ΠΈ ΡΡΠ΅ΡΠ΅Π½Π½ΡΠΉ 3'-ΠΊΠΎΠ½Π΅Ρ Π²ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠ΅ΠΆΠ΄Π΅Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π°ΠΌΠΈ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π°. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΏΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½Π°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΎΠΊ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΏΠΎΠ»Π½Π°Ρ ΠΎΡΠΠΠ. ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠΌ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ.
1. ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄ΠΈΡΠ΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ ΠΠ¦Π ΠΏΠΎ ΡΠΆΠ΅ ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ΅, ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½ΠΈΠ² ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² Π½Π° 50 ΠΏΠΌΠΎΠ»Ρ ΠΈ 0,5 ΠΏΠΌΠΎΠ»Ρ Π² 100 ΠΌΠΊΠ» ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ. ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄ΠΈΡΠ΅ 30— 35 ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ. ΠΡΠ»ΠΈ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΎΠ±Π΅ ΡΠ΅ΠΏΠΈ, ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΡΠΎΠ²ΡΡΠ΅ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·Π΅Ρ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌ ΡΠΎΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΡ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΎΠΊ.
2. ΠΠΎΡΠ»Π΅ Π·Π°Π²Π΅ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΠ¦Π ΡΠΌΠ΅ΡΠ°ΠΉΡΠ΅ 100 ΠΌΠΊΠ» ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Ρ 2 ΠΌΠ» Π΄ΠΈΡΡΠΈΠ»Π»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ΄Ρ, Π·Π°ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡΠ΅ ΡΡΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΎΡ Centricon 30 ΠΈ Π΄Π»Ρ ΡΠ΄Π°Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΈΠ·Π±ΡΡΠΊΠ° dNTP ΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΎΠ² Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° ΠΎΡΡΠ΅Π½ΡΡΠ½ΡΡΠ³ΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ 5000 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½ Π² ΡΠΎΡΠΎΡΠ΅ Ρ ΡΠΈΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ Π½Π°ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΎΠΌ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΎΠΊ.
3. ΠΡΡΡΡΠΈΡΠ΅ 10 ΠΈΠ· 40 ΠΌΠΊΠ» ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠ° ΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΈΡΠ΅ Π² 10 ΠΌΠΊΠ» ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½Π°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π±ΡΡΠ΅ΡΠ°, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠ΅Π³ΠΎ 1 ΠΏΠΌΠΎΠ»Ρ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½Π°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°.
4. ΠΡΠΎΠ³ΡΠ΅ΠΉΡΠ΅ ΡΠΌΠ΅ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅Ρ — ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ° ΠΏΡΠΈ 65 Β°C Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 2 ΠΌΠΈΠ½, Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΠΎΡΡΠ°Π²ΡΡΠ΅ ΠΎΡ Π»Π°ΠΆΠ΄Π°ΡΡΡΡ Π΄ΠΎ 30 Β°C Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 20 ΠΌΠΈΠ½.
5. ΠΠΎΠ±Π°Π²ΡΡΠ΅ 1 ΠΌΠΊΠ» 100 ΠΌΠ DDT, 2 ΠΌΠΊΠ» ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π΄Π»Ρ Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΊΠΈ, ΡΠ°Π·Π²Π΅Π΄Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π² ΡΠΎΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 1/100, 0,5 ΠΌΠΊΠ» dATP, 10 ΠΌΠΊΠΠΈ/ΠΌΠΊΠ», 2 ΠΌΠΊΠ» ΠΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ Π’7.
6. ΠΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ 3,5 ΠΌΠΊΠ» ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π² ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΡ ΠΈΠ· 4 ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΎΠΊ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΡ 2,5 ΠΌΠΊΠ» ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π΄ΠΈΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ·ΠΈΠ΄ΠΎΠ², ΠΈ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ 5 ΠΌΠΈΠ½ ΠΏΡΠΈ 37 Β°C.
ΠΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΈΡΠ΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ 4 ΠΌΠΊΠ» 95%-Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΡΠΌΠ°ΠΌΠΈΠ΄Π°, 20 ΠΌΠΌ ΠΠΠ’Π; ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ΅ΠΉΡΠ΅ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 2 ΠΌΠΈΠ½ ΠΏΡΠΈ 75 Β°C ΠΈ Π½Π°Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ Π½Π° ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½Π°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΉ Π³Π΅Π»Ρ.
ΠΠ°ΠΊΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅
ΠΠ¦Π ΠΎΡΠΊΡΡΠ²Π°Π΅Ρ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ Π±ΡΡΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·Π° ΠΌΠΈΠ»Π»ΠΈΠΎΠ½ΠΎΠ² ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ ΠΈΠ½Π΄ΠΈΠ²ΠΈΠ΄ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΠΠ, ΡΡΠΎ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠΏΡΠΎΡΠ°Π΅Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠΉ Π΅Π΅ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·.
ΠΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠ΅ΠΏΠ½ΠΎΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΡΡ ΠΈΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ, ΡΡΠ°Π·Ρ ΠΆΠ΅ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΎ ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ΅ΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ. ΠΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ΠΉ Π΄Π»Ρ ΠΠ¦Π -Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½Π°Ρ ΠΠΠ, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ ΠΊΠΠΠ, ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½Π°Ρ ΠΏΡΡΠ΅ΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ Π ΠΠΠ§ΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΡΡ ΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠΠΡΠΈ Π°Π²ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΠ¦Π ΠΈ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΠΈ Π½Π΅ΡΠ°Π΄ΠΈΠΎΠ°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΡ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΠΎΠ² Π΄Π»Ρ ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΠΠ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΠ½Π°Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ ΠΎΠ±Π΅ΡΠ°Π΅Ρ ΡΡΠ°ΡΡ Π² Π±ΡΠ΄ΡΡΠ΅ΠΌ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎ-Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π΄ΡΡΠΎΠΉ. ΠΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ Π²Π΅Π»ΠΈΠΊΠ° Π±ΡΠ΄Π΅Ρ ΠΈ Π΅Π΅ ΡΠΎΠ»Ρ Π² Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠ΅ Π½Π°ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ Π·Π°Π±ΠΎΠ»Π΅Π²Π°Π½ΠΈΠΉ.