15г. 
Метод сухой химии в клиническом анализе мочи

Клиническое значение.

В настоящее время в клинической лабораторной диагностике, наряду с применением для определения физиологических и патологических компонентов мочи и крови методов «жидкой химии», все шире используются методология «сухой» химии. Они реализуются с применением специальных полосок, реагентные зоны которых содержат сухие реагенты, способные воздействовать на определенные метаболиты биологических жидкостей с изменением окраски индикаторной зоны.

Индикаторные тест-полоски применяются для полуколичественного и количественного определения диагностически значимых компонентов мочи, крови и других биосред. Их использование незаменимо для срочного анализа, выполняемого в присутствии пациента в поликлинике, приёмном отделении, в больничной палате или дома, на месте лечения пациентов.

Широкое применение во всем мире метода сухой химии в клиническом анализе мочи обусловлено:

• · простотой аналитической процедуры
• · низкой стоимостью анализа
• · высокой воспроизводимостью метода

Полифункциональные тест-полоски предназначены для качественного и полуколичественного экспресс-определения: эритроцитов, гемоглобина, глюкозы, кетоновых тел, билирубина, белка, рН, уробилиногена, удельного веса, аскорбиновой кислоты, нитритов и лейкоцитов в моче. Данные полоски дают возможность контролировать уровень вышеперечисленных аналитов (биохимическое исследование мочи в КЛД), подобрать соответствующую диету, а также корректировать ход лечения.

В основе метода лежит:

• · цветная реакция — образование окрашенного соединения, пропорционально концентрации аналита
• · оценка результата реакции — визуально или с помощью отражательного фотометра

Свет рассеивается волокнами материала тестовой зоны и поглощается молекулами, растворенными в жидкости между волокнами. Коэффициент диффузного отражения света реакционной зоной зависит от содержания поглощающих свет молекул.

Принцип действия поли-теста:

1. Эритроциты и гемоглобин: гемоглобин и миоглобин катализируют реакцию окисления хромогена, содержащегося в тестовой зоне тест-полоски, за счет перекисей органического происхождения. Для эритроцитов и гемоглобина даны отдельные цветовые шкалы. Пятнистое окрашивание или отдельные зеленые точки на сенсорном поле указывают на наличие интактных эритроцитов. Присутствие гемоглобина, гемолизированных эритроцитов и миоглобина в моче указывает равномерное зеленое окрашивание реакционной зоны.

Шкала определяемых значений:0,0; 5−10; 25; 50; >=250 эри/мкл.

2. Глюкоза: в основе метода определения глюкозы лежит специфическая ферментативная реакция окисления глюкозы до глюконовой кислоты и перекиси водорода. Под действием последней в присутствии фермента пероксидазы происходит окисление хромогена и образование окрашенного соединения. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию глюкозы в исследуемых образцах мочи. результаты показаний не зависят от значения рН, относительной плотности и наличия кетоновых тел.

Шкала определяемых значений: 0,0; 2,8; 5,6; 14,0; 28,0; >=56,0 ммоль/л.

3. Кетоновые тела: в основе метода определения кетоновых тел лежит серия последовательных химических реакций между кетоновыми телами, нитроферроцианидом натрия и диамином, в результате которых происходит образование окрашенного соединения. Интенсивность окраски, полученная в ходе химической реакции, определяется степенью взаимодействия нитроферроцианида натрия и диамина с кетоновыми телами и пропорциональна содержанию кетоновых тел в моче.

Шкала определяемых значений: 0,0; 0,5; 1,5;4,0; 8,0; >=16,0 ммоль/л.

4. Билирубин: метод определения основан на образовании комплекса соли диазония с билирубином. Даже незначительное окрашивание сенсорной зоны теста свидетельствует о положительном патологическом результате.

Шкала определяемых значений: 0,0; 9,0; 17,0;>=50,0мкмоль/л.

5. Белок (альбумин): в основе метода определения лежит метод химических рН индикаторов. В зависимости от количества белка в моче изменяется константа диссоциации, а, соответственно, и интенсивность окраски. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию белка в моче. Тест высокочувствителен к наличию альбумина, реагируя на его присутствие в моче уже в концентрации от 0,1−0,15 г/л. На определение белка не влияет величина рН мочи, но в экстремально щелочной моче (с рН>8.0) или в моче с исключительно высокой буферной емкостью, полоски индикаторные могут давать ложнопложительные реакции при отсутствии белка. Ложноположительные результаты может давать моча пациентов, принимавших хининовые препараты или лекарства на базе производных хинолина.

Шкала определяемых значений: 0,0; 0,3; 1,0; 3,0; >=10,0 г/л.

6. Кислотность (рН): сенсорная зона содержит рН индикаторы — метиловый красный и бромтимоловый синий. В зависимости от значений рН мочи изменяется окраска рН индикаторов. У здоровых людей в свежесобранной моче значение рН чаще всего составляет от 5 до 6.

Шкала определяемых значений: 5,0; 6,0; 6,5; 7,0; 7,5;8,0; 9,0 ед.

7. Уробилиноген: определение основано на реакции уробилиногена с р-диметиламинобензальдегидом с образованием окрашенного комплекса красного цвета. В норме возможно или отсутствие изменения окраски сенсорной зоны или ее образование, свидетельствующее о наличии уробилиногена менее 1,0 мг/дл.

Шкала определяемых значений: 3,5; 17,5; 35,0; 70,0; 140,0; >=210,0 мкмоль/л. контроль качество иммуноглобулин лабораторный.

8. Удельный вес (относительная плотность): тест основан на определении концентрации ионов в моче и хорошо коррелирует с рефрактометрическим методом при значении рН мочи 6,5ед. В присутствии катионов ионы водорода высвобождаются из комплексонов, что приходит к образованию окрашенного комплекса. Для правильного определения плотности при значениях рН мочи выше 7,0 ед. к полученному значению плотности необходимо прибавить коэффициент 0,005. При наличии в моче белка от 1,0 до 5,0 г/л или при кетоацидозе наблюдается тенденция к увеличению относительной плотности. Повышение относительной плотности вследствие повышения концентрации глюкозы свыше 1000мг/дл не определяется.

Шкала определяемых значений:1,000; 1,005; 1,015; 1,020; 1,025; 1,030.

• 9. Нитриты: определение основано на специфической для нитрита реакции по Гиссу. Реакция выявляет нитриты, что косвенно указывает на наличие бактерий в моче. Окраска реакционной зоны изменяется от бледно-розового до ярко-розового цвета. Появление незначительной розовой окраски зоны теста свидетельствует на существенную бактериурию. Длительная задержка мочи (4−8ч.) существенна для получения более точного результата анализа. исследование на нитриты желательно проводить спустя 10 часов после последнего употребления витамина С. За 3−4 дня до проведения анализа следует прекратить прием антибиотиков и химиотерапевтических лекарственных препаратов.
• 10. Лейкоциты: реакция основана на определении эстераз, находящихся в гранулоцитах. Эстеразы разлагают реагент, субструктура которого вступает в реакцию с солью диазония, что приводит к образованию окрашенного соединения. Изменение цвета сенсорной зоны при концентрации 15 лейкоцитов/мкл трудно однозначно оценить через 60секунд, но, как правило, это изменение легко определяется через 120 секунд. Наличие бактерий, трихомонад и эритроцитов в моче не оказывает влияние на реакцию. Наличие формальдегида и выраженной окраски мочи (вследствие присутствия билирубина или нитрофуранов) возможно более интенсивное окрашивание сенсорной зоны теста из-за наложения цветов. Шкала определяемых значений: 0,0; 15,0; 70,0; 125,0; 500,0 лейкоцитов/мкл.

Проведение определения.

Использовать только свежую нецентрифугированную мочу. Перед проведение анализа мочу тщательно перемешать. Для сбора мочи использовать только чистую посуду.

• 1. Открыть пенал, извлечь тест-полоску, пенал немедленно плотно закрыть крышкой.
• 2. Сенсорные зоны полоски полностью погрузить в мочу.
• 3. Через 2−3 секунды извлечь полоску и удалить избыток жидкости на сенсорных зонах осторожным прикосновение ребра полоски к сухой чистой фильтровальной бумаге на 2−3 секунды. Тест-полоску положить на ровную сухую поверхность сенсорными зонами вверх (вставить в соответствующее место анализатора мочи).
• 4. Визуальную оценку результатов биохимического анализа проводить через 60 секунд после погружения сенсорных зон тест-полоски в мочу, сравнивая интенсивность окраски каждой сенсорной зоны с соответствующей цветовой шкалой на этикетке упаковки при хорошем освещении (на анализаторе мочи результаты анализа выдает сам прибор).