Двунаправленный фаговый вектор с промотором Grp78

Комбинирование обеих стратегий прицельного действия на опухоли (использование лигандов и опухолеспецифических промоторов) может быть трудным заданием, но оно определенно было бы большим успехом в прицельной генной терапии рака.

В 2012 году, группа ученых разработала двухнаправленную AAVP фаговую частицу, использующую одновременно лиганд-опосредованную (RGD4C) и транскрипционно-опосредованные стратегии (при этом вирусный промотор CMV был заменен на опухолеспецифичный промотор Grp78 в трансгенной кассете AAV). Данная комбинация, в теории, должна вызывать экспрессию трансгенов только лишь в сосудах опухолей и опухолевых клетках.

Kia и коллеги в исследованиях показали долгосрочную экспрессию трансгена AAVP под регуляцией крысиного промотора Grp78 в линиях клеток глиобластомы — гораздо более лучший результат по сравнению с использованием промотора CMV, который со временем подвергался заглушению.

Анализ проточной цитометрии экспрессии зеленого флюоресцентного протеина (green fluorescent protein (GFP)) под регуляцие Grp78, трансдуцированных RGD4C-AAVP/Grp78-GFP клетках 9L, показало значительное улучшение с 57% (39 дней после трансдукции вектора) до 85% (97 дней после трансдукции вектора). В то же время, только 37% клеток, трансдуцированных RGD4C-AAVP/CMV-GFP показали экспрессию GFP на 39й день, и только 11% - на 97й день.

Также при использовании HSVtk/GCV под контролем Grp78 наблюдалась более выраженная гибель опухолевых клеток, нежели при использовании промотора CMV, как in vitro, так и in vivo.

Исследования in vivo показали, что при повторном росте опухолей после терапии, повторное применение GCV привело к ингибированию роста опухоли в мышах, получивших RGD4C-AAVP/Grp78-HSVtk, и почти полное отсутствие эффекта у мышей, получивших RGD4C-AAVP/CMV-HSVtk.

Также, при использовании анализа Вестерн блот, было показано, что при использовании HSVtkGCV наблюдается активация обоих промоторов — эндогенного Grp78 и RGD4C-AAVP/Grp78-HSVtk вектора.