Иммунитет и специфическая профилактика

Живые вакцины Иммунитет при КЧС обусловлен ВНА. Из-за отсутствия экспрессии вирусспецифических белков на поверхности клеток иммунные реакции, направленные на цитолиз инфицированных клеток, не «работают». Однако формирование резистентности к заражению вакцинированных свиней происходит до выявления ВНА. Лейкоциты и лимфоциты иммунизированных свиней способны лизировать аутогенные инфицированные ВКЧС клетки (лейкоциты). Однако эти же клетки либо вовсе не вызывают цитолиз незараженных лейкоцитов, либо лизируют их в меньшей степени. Возможно, что наряду с нейтрализацией ВКЧС AT важную роль играют иммунологические реакции, опосредуемые клетками, в частности ЕК (естественные киллеры) и ЦТЛ (цитотоксические лимфоциты).

Однако при анализе методом проточной цитометрии с использованием специфических моноклональных антител линии лейкоцитов свиней, инфицированных штаммами Вашингтон и Селлпест ВКЧС типичные симптомы болезни развивались у животных, зараженных штаммами Вашингтон и Альфорт. Они сопровождались значительной лейкопенией и слабой краткосрочной активностью В-клеток, отмечена также слабая стимуляция популяции Т-клеток. У животных, инфицированных аттенуированным штаммом Селлпест, наблюдали активацию иммунного ответа.

Впервые о возможности иммунизации свиней против КЧС сообщил Дорсет в 1904 г. В результате опытов по симультанным прививкам (одновременное применение сыворотки содержащей НАТ к ВКЧС и заражение кровью больных свиней) было доказано, что этим способом можно вызвать у свиней прочный и продолжительный иммунитет. В 1931 году этот метод был введен в ветеринарную практику. Однако после такой иммунизации иногда регистрировались осложнения, систематические прививки могли создавать стационарные очаги КЧС.

Новая эра в специфической профилактике КЧС (начиная с 50-х годов) связана с получением аттенуированных вакцинных штаммов: Ровак и Гудзон, которые были оставлены по причине высокой реактогенности — вызывали гибель части привитых животных (до 30%) и нарушение эмбрионального развития, а также китайского лапинизированного (адаптированного к организму кроликов) «С» синонимы («К», LC, LPC), и двух культуральных — японского (GPE) и французского (Tiverval). При усовершенствовании технологии изготовления живой вакцины из китайского штамма С последний адаптировали к размножению в различных культурах клеток. Используя этот штамм, был приготовлен ряд культуральных вакцин, которые занимают первое место в арсенале средств специфической профилактики против КЧС. Это ВГНКИ, ЛК-ВННИВВиМ; АСВ-лапинизированная (Россия); Suvac (Венгрия); Cellpest (Польша); Pestiffa (Merial, Франция);TVM (Чехия); Egermann (Reims, Германия); Norden; Мinnesota Anchor; Colvasan Sanocon Portcivac (Мексика); «Челвак»; Сidepest; gpE; PAV-250; МРК-LC и др [32, 31, 47, 24, 44, 45, 57].

Сухая лапинизированная вирусвакцина (АСВ) из штамма «К» против чумы свиней представляет собой высушенную вирусосодержащую ткань селезенки, лимфоузлов и дефибринированную кровь кроликов, зараженных лапинизированным вирусом чумы свиней штамма «К». Сухие культуральные вакцины отличаются от вирусвакцины АСВ более высоким содержанием вакцинного вируса: ВГНКИ — примерно в 10 раз, ЛК-ВНИИВВиМ — в 10−100 раз.

Сухая культуральная вирусвакцина ВГНКИ представляет собой культуральный штамм «К» вируса КЧС, выращенный в первичной культуре клеток почки плода свиньи (ППС) лиофильновысушенный.

Сухая культуральная вирусвакцина ЛК-ВННИВВиМ против КЧС получена на основе шт. К ВКЧС, выращенного в культуре клеток тестикул ягнят и лиофильно высушенного. Препарат обладает высокой иммуногенностью и полностью лишен вирусных контаминантов, патогенных для свиней. Вакцина не уступает по активности лучшим мировым аналогам — вирусвакцине GPE (Япония) и Phiverval (Франция), но и превосходит их по универсальности применения и потенциальной безвредности. Все характеристики вирусвакцины ЛК-ВНИИВВиМ соответствуют требованиям Европейской фармакопеи и общепризнанным мировым стандартам. С помощью живой вирусвакцины ЛК-ВНИИВВиМ можно создавать специфическую защиту от заболевания и гибели 100% вакцинированных свиней уже через 48 ч после однократного внутримышечного введения ее в дозе 6,0 lg ИмД50/гол.

Штамм К обладает слабой реактогенностью для свиней всех возрастов, включая новорожденных поросят и супоросных свиноматок, он не передается неиммунным животным и при совместном содержании с иммунными, и не реверсирует при пассировании на свиньях (6−12 до 30 пассажей). Шт. К может проникать через плацентарный барьер, однако, он не приводит к аномалиям развития плода [31, 32]. Он также не персистирует у привитых свиней, а после экспериментального заражения последних вирулентный вирус не выделяется из организма вакцинированных животных. После однократной прививки свиней старше 3-месячного возраста иммунитет наступает через 3−5 дней.

В 1994 году во ВНИИВВиМ получен методом селекции вакцинный штамм «ЛК-К» из штамма «ЛК» — ВНИИВВиМ. Этот штамм обладает способностью репродуцироваться как в первичных, так и перевиваемых культурах клеток, накапливаться в высоких титрах. Он очень иммуногенен, вызывает 100%-ную иммунную защиту. Фенотипически шт. ЛК-КС отличался от шт. С отсутствием вызывать гипертермическую реакцию у кроликов при внутривенном введении [47]. Вакцину применяют двукратно внутримышечно по 2,0 мл с интервалом 10−14 дней. Противопоказаний к применению вакцины нет. Свиноматок вакцинируют в любые сроки супоросности, но не позднее, чем за три недели до опороса. Иммунитет наступает через 30 дней после первой вакцинации и сохраняется в течение 6 месяцев.

НПО «Нарвак» выпускает сухую культуральную вирусвакцину «КС» против КЧС, которая применяется в отдельных свиноводческих хозяйствах Республики Беларусь. Эта живая лиофилизированная вакцина из клонированного шт. ЛК. Вирус выращивается в роллерной культуре клеток ТЯ. Вакцина «КС» отличается от аналогичных живых вакцин против КЧС («ЛК-ВНИИВВиМ», «С», «GP» и др.) более высокой концентрацией вакцинного вируса (106,5−107,5 ТЦД50/мл) или (<8,0 lg ИмД50/мл), получаемого при его репродукции in vitro, и в способе ее применения. В основе применения препарата, в неблагополучных по КЧС хозяйствах, лежит гипервакцинация, при которой вакцина «КС» вводится свиноматкам (можно супоросным) и хрякам в дозе 500 000−1 000 000 ИмД50, а поросятам (можно новорожденным) — 200 000 ИмД50 по схеме: свиноматкам — за две недели до случки и за 20−30 дней до опороса; поросятам на 10−15-й и 90−100-й дни жизни; хрякам 2 раза в год. Вакцина неревертабельна (неверсибельна), нереактогенна и безопасна для свиней любого возраста, не передается горизонтально, быстро создает продолжительный напряженный иммунитет (не менее 2 лет) у иммунокомпетентных свиней.

В двух хозяйствах (25 000 свиней), где гипервакцинация длилась 10−12 месяцев, КЧС была полностью ликвидирована, в дальнейшем перешли на профилактические прививки свиней вакциной ЛК-ВНИИВВиМ согласно наставлению (1000 ИмД50). Спустя два года оба хозяйства оставались благополучными по КЧС [48, 47, 43].

Вакцина Сidepest получена из штамма С адаптированного к культуре клеток почки свиньи линия SK-6. Рекомендуемая доза для практического применения — 400−600 ТКИД50. У 6−8 недельных серонегативных поросят прочный иммунитет наступал на 7-й день и длился более 6 месяцев (срок наблюдения). Титр ВНА у них через 6, 12, и 26 недель после вакцинации был 1:16−1:256, который защищал всех привитых животных от заболевания и гибели после заражения вирулентным вирусом, однако через две недели после заражения титр ВНА увеличивался (1:200−1:1000), что свидетельствовало об ограниченном размножении вирулентного вируса в вакцинированном организме, клинически устойчивом к экспериментальному заражению.

Вакцину Pestiffa производит фирма «Мериал» используя для размножения вакцинного вируса линию клеток почки ягнят (IR04). При интраназальном заражении привитых свиней (шт. С, вакцина Pestiffa) в дозе 100 ИД50 свиньи с титром ВНА 1:12,5-<1:50 проявляли все признаки инфицирования, кроме гибели. При титре 1:50−1:300 вирус размножался (бустерный эффект), но не выделялся и не распространялся горизонтально, что представляет интерес с эпизоотологической точки зрения.

Штамм С, адаптированный к клеткам RK13 (почки кролика) уже после 10 пассажей утратил исходную патогенность, сохранив высокую иммунизирующую активность и получил название СРА (C-Porto-Allegre), а вакцина из него — PAV-250. Для его промышленного размножения более эффективной оказалась культура клеток эмбриона кролика.

Японский вакцинный штамм GPE получили пассированием слабовирулентного штамма ALD в разных клеточных культурах при 30єС. Вакцинный шт. GPE в отличие от исходного вирулентного хорошо размножался в культуре клеток морской свинки (G-маркер) при 30єС и плохо при 40єС (Т-маркер). GPE — вакцина на основе этого штамма стимулирует выработку ВНА (вируснейтрализующие антитела) у молодняка в титре 1:32−1:256 [47].

Штамм Tiverval получили из вирулентного штамма Альфорт после более чем 170 серийных пассажей в КК при 29−30єС, и его идентифицируют по нескольким маркерам in vitro.

В Болгарии получена лиофилизированная живая бивалентная вакцина против КЧС и болезни Ауески. Препарат оказался безвредным для поросят и овец, стимулирует стойкий иммунитет к обеим инфекциям.

Существуют рекомбинантные вакцины, полученные на основе вирусов осповакцины и псевдобешенства, но до настоящего времени применение их ограничено.

В настоящее время для повышения иммунного ответа широкое применение получили иммуностимуляторы, которые усиливают иммунный ответ и в ряде случаев снижают реактогенность, способствуя тем самым развитию более напряженного иммунитета. Установлено, что иммунизация свиней против КЧС совместно с натрием тиосульфатом значительно активизирует иммуноморфогенез у животных, что проявляется увеличением в периферических органах иммунной системы в 1,5−2,5 раза количества плазматических клеток и в 1,5 раза специфических антител в сыворотке крови. Титры специфических АТ у всех вакцинированных с натрием тиосульфатом животных достигали максимума через 3 месяца после вакцинации (80±10,13), против 56±8,67 у животных иммунизированных без него [14].

В ВНИИВВиМ разработаны: порошковидная вакцина для энтерального применения из штамма «ЛК-К», предназначенная для вакцинации диких и домашних свиней с активностью 3,0−3,8 lg БОЕ50/0,1мл; сухая культуральная вирусвакцина против КЧС из штамма «ЛК-К» для аэрозольной вакцинации.

При скармливании диким кабанам (1300 голов) смеси, состоящей из 2 кг зерна и 18 г вакцины в расчете на одно животное дважды с интервалом в 3 дня, через месяц у исследованных животных наступал напряженный иммунитет у 69%, а через 3 месяца у 80−90% с титром ВНА 1:8, который сохранялся на удовлетворительном уровне не менее 3 месяцев, т. о. по эффективности пероральный метод не уступал парентеральному.

Групповые методы иммунизации — аэрозольный и пероральный, имеют ряд преимуществ перед внутримышечным: высокая производительность труда, физиологический путь введения, низкая реактогенность вакцин, быстрота наступления иммунитета. Недостатком этих методов является большой расход вакцин и поэтому в последние годы они используются очень редко.

В ВНИИВВиМ разработан и испытан с положительным эффектом способ пероральной вакцинации новорожденных поросят против КЧС.

В виду того, что поросята рождаются от иммунной свиноматки абсолютно интактными (лат. intactus нетронутый) — неповрежденный, не вовлеченный в какой-либо процесс), практически стерильными и иммунологически компетентными так как ни один класс AT, циркулирующих в организме свиноматки, не передается плоду в силу строения плаценты (синдесмохориальный), обязательным условием является вакцинация тотчас после рождения до контакта с инфицированной средой и до одного приема молозива. Поросят допускают к соскам матки не ранее, чем через 30 мин после вакцинации последнего поросенка. Вакцинировать подсосных поросят, уже получивших молозиво иммунных свиноматок, не имеет смысла, так как при наличии колостральных AT поствакцинальный иммунитет у поросят не формируется. Вынужденная вакцинация поросят отъемного возраста чревата риском провокации инфекции, так как нейтрализуя остатки материнских AT, вакцина лишает поросят возможности защищаться в инфицированной среде. Следовательно, вакцинировать поросят до отъема еще рано, а после отъема уже поздно. При пероральном введении вакцинный вирус проникает в организм через естественные ворота инфекции, где организм биологически подготовлен к встрече с агентом, благодаря мощным лимфоидным образованиям глоточного кольца, которые сразу же запускают иммунный процесс. Кроме того, вакцинный вирус, блокируя чувствительные рецепторы, подчиняя метаболизм клетки и ее энергетический потенциал регулирующему влиянию генома вакцинного вируса, лишает полевой вирус обязательных условий, необходимых для проникновения и репродукции. Срабатывает механизм упреждения. Таким образом, ни последующее инфицирование поросят полевым вирусом, ни массированное поступление с молозивом AT, не способны прервать или повлиять на формирование полноценного (с секреторным компонентом) иммунитета против КЧС. Установлено, что однократной пероральной вакцинации новорожденных поросят живой вирусвакциной (ЛК-ВНИИВВиМ) достаточно, чтобы защитить их от заболевания в течение всего технологического цикла выращивания вплоть до сдачи на мясокомбинат.

Сотрудниками ВНИИВВиМ был выделен полевой изолят ВКЧС № 187Л, обладающий низкой вирулентностью для 3−4-месячных поросят, но идентичный шт. Ши-Мынь.

Длительный эпизоотологический мониторинг позволил выявить причинно-следственную связь между вакцинацией против КЧС и возникновением отечной болезни поросят (ОБП). Оказалось, что ОБП может появляться как осложнение после воздействия на поросят не только вирулентного, но и аттенуированного ВКЧС. При этом исход смешанного течения вакцинно-инфекционных процессов заканчивается лидерством ОБП и гибелью от нее части свиней [17].

Профилактическое применение живых вакцин против КЧС не допускает каких-либо отклонений от требований наставлений так как это может привести к серьезным последствиям — гибели молодняка, понижению напряженности иммунитета и др. Наиболее распространенными нарушениями в применении вакцин против КЧС является невыполнение требований инструкции (по профилактике и ликвидации КЧС) о исключении из цикла воспроизводства в неблагополучных по КЧС хозяйствах иммунизированных свиноматок после осеменения и в период беременности в 10-кратной дозе. Таким образом возникает необходимость поросят от таких свиноматок вакцинировать тоже в 10-кратной дозе, а так же не соблюдение обязательного временного разрыва между вакцинацией против КЧС и применением других биологических препаратов и лекарственных средств. Это вызывает неудовлетворительный физиологический статус привитых животных.

Эффективность вакцинации при КЧС во многом зависит от схемы иммунизации супоросных свиноматок, поросят различных возрастных групп и их ревакцинации. Схемы вакцинации разрабатывают с учетом иммунологического статуса вакцинированных свиней и эпизоотической ситуации. В Республике Беларусь предписана следующая схема вакцинации: с целью передачи потомству материнского иммунитета свиноматок рекомендуют вакцинировать за 10−14 дней до случки однократной дозой, а полученных от них поросят — на 30−45-й день жизни и ревакцинировать их в 85−100-дневном возрасте в той же дозе. Другие вакцины разрешается применять с интервалом не менее 14 дней до и после вакцинации против КЧС.

В хозяйствах, неблагополучных и угрожаемых по классической чуме свиней: — свиноматок — за 10−14 дней до случки в однократной дозе. Поросят подвергать вакцинации в 10−15-дневном возрасте первично 10-кратной дозой вакцины, а повторнов 35−40-дневном возрасте однократной дозой и ревакцинировать их в 85−100-дневном возрасте в той же дозе вакцины. Другие вакцины разрешается применять с интервалом не менее 14 дней до и после вакцинации против КЧС [31, 40, 43].

Главным недостатком перечисленных выше живых вакцин является невозможность идентификации ВНА индуцированных вакцинными и полевыми штаммами ВКЧС. Эту проблему решает создание маркированных вакцин.