Методы ТСХ, УФ-спектрофотометрии и фотоколориметрии в фармакопейном анализе лекарственных средств

Идентификация метилтестостерона и метандростеналона в смеси методом ТСХ.

Методика. На линию старта хроматографической пластинки марки Сорбфил-УФ-254 размером 510 см наносят 0,01 мл 0,1% стандартных растворов препаратов в этаноле и смесь веществ. Хроматографируют восходящим методом в системе растворителей гексан-ацетон 7:3. Когда фронт растворителя поднимется на 8 см, пластину вынимают и сушат на воздухе. Детекцию пятен проводят в УФ-свете или опрыскиванием пластины 10%-ным раствором фосфорно-молибденовой кислоты в ацетоне. После обработки пластину нагревают в сушильном шкафу при 110−120С в течение 1−2 мин. Идентификацию индивидуальных веществ в смеси проводят, рассчитывая и сравнивая величину R_f зон метилтестостерона и метандростенолона в смеси и стандартах.

Определение посторонних стероидных примесей в гидрокортизона ацетате методом ТСХ.

Методика. На линию старта пластинки «Сорбфил-УФ-254» размером 815 см наносят 0,01 мл 0,01% раствора (100 мкг) субстанции гидрокортизона ацетата в смеси 95% спирт-хлороформ (1:1); 0,005 мл (0,5 мкг); 0,01 мл (1мкг); 0,015мл (1,5кг) и 0,02мл (2мкг) растворов стандартных образцов веществ-свидетелей (СОВС) гидрокортизона и гидрокортизона ацетата.

Хроматографируют восходящим методом в камере со смесью растворителей хлороформ — метиловый спирт — вода (95:5:0,2). Длина пробега растворителя — 13 см. Высушенную на воздухе пластинку просматривают в УФ-свете при 254 нм.

Пятна посторонних примесей на хроматограмме испытуемого препарата сравнивают по величине и интенсивности окраски с пятнами СОВС: пятно примеси гидрокортизона сравнивают с пятном СОВС гидрокортизона, пятна других возможных примесей сравнивают с пятнами СОВС гидрокортизона ацетата. Суммарное содержание примесей не должно превышать 4%.

Приготовление растворов СОВС. 0,01 г гидрокортизона (стандарт) и 0,01 г гидрокортизона ацетата растворяют в 70 мл смеси 95% спирт-хлороформ (1:1) в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора той же смесью растворителей до метки и перемешивают.

Подтверждение подлинности дексаметазона в лекарственной форме «Раствор дексаметазона 0,1% (глазные капли)» методом ТСХ.

Состав:

Дексаметазона натрия фосфата в пересчете на дексаметазон 0,1 г Вспомогательные вещества:

Воды для инъекций до 100 мл.

Методика. 0,005 мл препарата (5 мкг в пересчете на дексаметазон) наносят на линию старта пластинки Сорбфил UV-254 размером 510 см. Рядом наносят 0,005 мл 0,13% раствора свидетеля — дексаметазона натрия фосфата (5 мкг в пересчете на дексаметазон). Пластинку высушивают на воздухе 10 мин. Хроматографируют в системе: н-пропиловый спирт (ТУ 6−09−4344−77, х.ч.) — аммиака раствор концентрированный (7:3). Когда фронт подвижной фазы дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, подсушивают на воздухе в течение 10 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм. Основное пятно на хроматограмме испытуемого препарата должно находиться на уровне основного пятна на хроматограмме раствора свидетеля — дексаметазона натрия фосфата.

Количественное определение дексаметазона в глазных каплях.

Состав:

Дексаметазона натрия фосфата в пересчете на дексаметазон 0,1 г Вспомогательные вещества Воды для инъекций до 100 мл.

Количественное определение.

0,5 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл. Доводят объем раствора до метки 0,1 М раствором натра едкого, перемешивают. Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 241 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 0,1 М раствор натра едкого.

Содержание дексаметазона натрия фосфата в пересчете на дексаметазон в 1 мл препарата вычисляют по формуле (4):

(4).

где: А — оптическая плотность спектрофотометрируемого раствора препарата, см-1.

383 — удельный показатель поглощения дексаметазона при длине волны 241 нм, (Е, см %)-1.

Содержание С22Н28FNа2О8Р (дексаметазона натрия фосфата) в пересчете на дексаметазон в 1 мл препарата должно быть от 0,0009 до 0,0011 г.

Количественное определение преднизолона в таблетках по 0,001 г и 0,005 г.

Методика. Точную навеску растертых в порошок таблеток, содержащую около 0,001 г преднизолона, помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 25−30 мл 95% спирта, встряхивают в течение 5−6 мин, доводят до метки 95% спиртом и снова перемешивают, фильтруют в сухую колбу, отбрасывая первые 10−15 мл фильтрата; 25 мл фильтрата вносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят 95% этанолом до метки, перемешивают и измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 242 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, применяя в качестве контрольного раствора 95% этанол. Повторяют такое же измерение с 0,001% раствором РСО преднизолона.

Содержание преднизолона должно быть 0,0009−0,0011 г или 0,0045−0,0055 г в пересчете на среднюю массу одной таблетки. Расчет проводят по формуле (5):

(5).

где: F — рефрактометрический фактор определяемого ингредиента;

с1 — концентрация сопутствующего ингредиента, %;

F1 — рефрактометрический фактор сопутствующего вещества;

V — объем растворителя, взятый для приготовления ЛФ, мл;

a — навеска ЛФ, взятая для анализа, г Следует отметить, что содержание сопутствующих веществ в этой формуле (с₁, с₂ и т. д.) должно быть выражено в %.

Количественное определение преднизолона и преднизолона ацетата в мази.

Методика. К точной навеске мази, которая содержит около 0,0025 г преднизолона (или преднизолона ацетата), приливают 10 мл горячего 95% этанола, перемешивают и фильтруют в мерную колбу вместимостью 50 мл. Экстракцию повторяют тремя порциями по 10 мл горячего этанола. После охлаждения до комнатной температуры фильтрат доводят до метки 95% этанолом и перемешивают. 10 мл полученного раствора вносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят до метки 95% этанолом, перемешивают и измеряют оптическую плотность в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 242 нм, применяя в качестве нулевого раствора 95% этанол.

Повторяют такое же измерение с 0,001% раствором РСО преднизолона (или преднизолона ацетата) в 95% спирте. Расчет проводят по формуле (6).

где: V — объем растворителя, использованного для растворения вещества, мл;

Р — средняя масса анализируемого порошка, г;

а — навеска лекарственной формы, г.

Количественное определение метилтестостерона в таблетках по 0,005 г.

Методика. Около 0,05 г растертых в порошок таблеток (точная навеска) помещают в мерную колбу с притертой пробкой вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки 95% этанолом и встряхивают в течение 5 мин. Фильтруют в сухую колбу через беззольный фильтр, отбрасывая первые 10−15 мл фильтрата. Вносят пипеткой 5 мл фильтрата в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем до метки 95% этанолом и измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 241 нм в кювете с толщиной слоя 1 см; нулевой раствор — 95% этанол.

Расчет проводят по формуле (7). Значение удельного показателя поглощения метилтестостерона, Е=540 (табл. 1).

Содержание метилтестостерона должно быть 0,0045−0,0055 г в пересчете на среднюю массу одной таблетки. [4].