Материалы и методы

Исследование проводилось на базе лаборатории акушерства и гинекологии с/х животных Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института и в хозяйствах Краснодарского края на фермах в 600, 400 и 300 голов дойного стада голштинской породы. Проверка на острую форму мастита осуществлялась путем клинического осмотра вымени и состояния секрета молочной железы.

Скрытую форму мастита определяли путем сдаивания последних струек на молочно-контрольную пластинку с добавлением тест диагностикума (БЕТТА-ТЕСТ), положительной реакцией считается образование желеобразного сгустка.

Определение острой и хронической токсичности осуществлялось на 79 белых мышах (массой 20−25 г) и 45 белых крысах (массой 150−200 г) [1]. Изучение местно-раздражающего действия проводили на 5 кроликах (массой 2300−2400 г) и 10 морских свинках (массой 250−270 г), изучение аллергизирующего действия средства проводили на 20 белых мышах (массой 20−25 г) и 10 морских свинках (массой 260−280 г) [6].

Результаты исследований

В ходе исследований была проведена акушерско-гинекологическая диспансеризации крупного рогатого скота. За 2010;2012 годы в хозяйствах Краснодарского края нами было обследовано 3868 коров. Из них выявлено с заболеванием маститом 1520 коров, что составляет 39,3%.

Ежегодные исследования животных на мастит с использованием тест-диагностикумов показали, что положительно реагирующих животных из года в год нарастало, несмотря на то, что поголовье ферм оставалось примерно на одном и том же уровне. Так процент заболеваемости в 2010 году составил 39,0% из 1290 обследованных животных, а в 2012 году — 39,6% из 1289 обследованных животных (Рисунок 1).

Рисунок 1 — Распространение мастита в некоторых хозяйствах краснодарского края

Также нами были проведены исследования по изучению сезонности возникновения мастита. Для этого на одной из ферм мы проводили помесячное исследование всего поголовья (Рисунок 2).

Рисунок 2 — Сезонность возникновения мастита у коров

Таким образом, исходя из данных полученных нами в ходе исследований сезонности возникновения мастита у коров, можно установить, что мастит коров имеет определенный сезонный характер и основные его пики приходятся на март-май и сентябрь-ноябрь. В эти месяцы было выявлено больных маститом коров от 2,5% до 4,1% от общего поголовья фермы. Это связано с тем, что в эти периоды животные находятся в плохих условиях содержания (в выгульных базах грязь, в корпусах постоянные сквозняки и повышенная влажность) и, как правило, именно эти причины ведут к снижению, как общего, так и местного иммунитета у животных. Так с декабря по февраль этот показатель снижается до 1,3−2,0%, а с июня по август до 1,2−1,7% от общего поголовья фермы.

При анализе клинических форм мастита у коров, нами была выделена следующая закономерность, представленная на рисунке 3.

Рисунок 3 — Процентное соотношение клинических форм мастита

В одном из хозяйств Краснодарского края за 2010;2012 годы мы отмечали у 119 коров больных клинически выраженным маститом — 41 корова, или 34,5% заболело серозным маститом, 67 коров, или 56,3% заболело катарально-гнойным маститом, а 11 коров, или 9,2% заболели геморрагическим маститом.

При анализе возникновения мастита в зависимости от физиологического состояния было проведено исследование на 218 коровах больных маститом, в результате мы установили, что в период лактации он проявляется у 107 — 49% коров, в период запуска — у 37 — 17% коров, а в период сухостоя — у 74 — 34% коров (Рисунок 4).

Рисунок 4 — Заболеваемость коров маститом в зависимости от физиологического состояния

Таким образом, наивысший процент заболеваемости маститом коров отмечается у животных в период лактации и период сухостоя. Причем в период лактации мастит диагностируют достаточно быстро, в результате чего назначается определенное лечение, чего нельзя сказать о животных находящихся в сухостойном периоде.

Диагностика животных в период сухостоя проводится редко, а чаще всего и вовсе не проводится, вследствие чего животные болеют маститом на протяжении всего периода, что впоследствии отражается на качестве и количестве молока, а также ведет к атрофии долей вымени.

В результате мониторинга было выявлено 74 коровы с воспалением вымени в периоде сухостоя и установлено, что 46 животных заболели на первые 15 дней, 17 коров — на 16−30 день, а 11 животных в оставшиеся дни сухостоя. При этом у 34 (46%) коров диагностировали клинически выраженный мастит, а у 40 (54%) коров — субклинический мастит (Таблица1).

Таблица 1 — Заболевание маститом коров в период сухостоя по дням (n=74).

Приступая к разработке нового, более эффективного средства для профилактики мастита у коров в период сухостоя, мы исходили из следующих предпосылок:

Во-первых, с учетом особенностей проявления мастита у коров в период сухостоя препарат должен предотвращать возможность попадания условно-патогенной микрофлоры через сфинктер молочного канала.

Во-вторых, при выборе антимикробного вещества учесть широту спектра его антибактериального влияния, а также фунгистатическую активность, избегая использования антибиотиков, сульфаниламидов и нитрофуранов. молочный рогатый корова мастит сухостойный В-третьих, чтобы избежать дополнительного раздражения тканей вымени, наблюдаемое при внутрицистернальном введении препаратов, новое средство должно обеспечить профилактическое действие при его использовании путем нанесения на соски вымени.

В результате анализа соответствующих литературных данных и разносторонних исследований при подборе компонентов и определения их оптимальных доз и соотношения, был определен следующий состав средства, которое включает в себя водорастворимый полимер, силикон, этиловый спирт, глицерин, полигексометиленбигуанид и гелеообразователь. Заявка на патент № 2 012 153 019.

Была проведена токсико-фармакологическая экспертиза для определения острой и хронической токсичности, а также раздражающего и аллергизирующего действия разработанного нами профилактического средства. Исследование острой токсичности провели в двух сериях опытов на белых мышах и белых крысах.

В первой серии опыта белым мышам и белым крысам препарат вводили перорально в следующих дозах: первой группе мышей и крыс по 0,1 и 1 мл соответственно; второй группе по 0,3 и 2 мл соответственно; третьей группе по 0,5 и 3 мл соответственно. Оставшиеся мыши и крысы составили контрольную группу, им препарат не вводили (Таблица 2).

В течение последующих 14 дней за животными вели клиническое наблюдение, обращая внимание на общее состояние, аппетит, поведенческие реакции, картину интоксикации, гибель мышей и крыс.

В результате проведенных исследований установлено, что средство для профилактики маститов у коров в сухостойный период при назначении внутрь, даже в максимально возможной для внутреннего применения дозе 0,5 мл для мышей и 3 мл для крыс в течение периода наблюдений не вызывали гибели и острой интоксикации подопытных животных.

У животных не отмечено отрицательных явлений в поведении, рефлексы сохранялись. Лишь в первые 1−5 часов у части животных опытных групп наблюдалось слюнотечение и стремление животных к воде. В последующем отклонений в общем состоянии не выявлено. По истечении срока наблюдений подопытных животных подвергли эвтаназии, вскрыли с проведением патологоанатомического исследований внутренних органов, при этом выраженных патологических изменений не обнаружили.

Таблица 2 — Результаты определения острой токсичности средства для профилактики мастита у коров в период сухостоя при однократном пероральном введении

Во второй серии опыта белым мышам и белым крысам препарат вводили подкожно в следующих дозах: мышам и крысам первой группы испытуемый препарат вводили подкожно в дозе 0,5 мл и 5 мл соответственно; второй группе в дозе 1 мл и 10 мл соответственно; третья группа животных служила контролем, этой группе препарат не вводили (Таблица 3).

В течение последующих 14 дней за животными вели клиническое наблюдение, обращая внимание на общее состояние, аппетит, поведенческие реакции, картину интоксикации, гибель мышей и крыс. В результате проведенных исследований установлено, что средство при подкожном введении, даже в максимально возможной для подкожного введения дозе 1 мл для мышей и 10 мл для крыс в течение периода наблюдений не вызывали гибели и острой интоксикации подопытных животных. У животных не отмечено отрицательных явлений в поведении, рефлексы сохранялись.

Только в первые 8 часов у части животных опытных групп наблюдалось стремление к воде и попытки вылизать место инъекции. В последующем отклонений в общем состоянии не выявлено. По истечении срока наблюдений подопытных животных убили декапитацией, вскрыли с проведением патологоанатомического и гистологического исследований внутренних органов, при этом выраженных патологических изменений не обнаружили.

Таблица 3 — Результаты определения острой токсичности средства для профилактики мастита у коров в период сухостоя при однократном подкожном введении.

Для определения хронической токсичности препарата использовалась беспородные белые мыши и белые крысы. Мышам первой группы испытуемый препарат вводили в желудок в дозе 0,3 мл на 1 введение в течение 7 дней. Крысам первой группы испытуемый препарат вводили в желудок в дозе 2 мл на 1 введение в течение 7 дней. За животными вели пристальное наблюдение, учитывая их поведение, общее состояние и аппетит. По истечению 7 дней после последнего введения препарата 5 мышей и 3 крысы было подвергнуто эвтаназии и вскрыто, было изучено патологическое состояние внутренних органов. За остальными 5 мышами и 2 крысами продолжали вести наблюдение в течение 3 недель, учитывая их поведение, общее состояние и аппетит.

Мыши и крысы второй группы служили контролем, им препарат не вводили. Условия содержания и кормления были аналогичны с животными первой группы. При патологическом изучении внутренних органов белых мышей и крыс первой группы каких-либо изменений в их структуре не наблюдалось. В течение всего периода наблюдений изменений в их поведении, общем состоянии и аппетите не наблюдалось, животные вели себя и поедали корм, аналогично животным из второй контрольной группы. Следовательно, разработанное средство по степени воздействия на организм теплокровных животных относится к веществам малоопасным (4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007−76).

Раздражающее действие средства для профилактики мастита у коров в период сухостоя определяли методом конъюнктивальных проб. Исследование проводили на кроликах и морских свинках, которым на конъюнктиву под верхнее веко правого глаза однократно нанесли одну каплю испытуемого средства (левый глаз служил контролем — 1 каплю стерильного изотонического раствора натрия хлорида). Сразу после закапывания исследуемого средства в глаз наблюдалась кратковременное покраснение (гиперемия) конъюнктивы, которое наблюдалось на протяжении 5 минут, затем покраснение исчезало. Так же после нанесения средства у животных в течение 10 минут наблюдалось слезотечение. Указанные изменения постепенно исчезали и уже через 15 минут никаких неблагоприятных последствий не наблюдалось. Через 24−48 часов проводили повторное исследования глаз у животных, неблагоприятных последствий не отмечали.

Аллергизирующие действие средства изучали на морских свинках и беспородных белых мышах, которым на протяжении 4 недель 5 раз в неделю изучаемое средство наносили на боковую поверхность туловища. После 10 накожных аппликаций проводилось тестирование участка кожи, на который наносилось изучаемое средство. Реакции кожи на изучаемое средство не наблюдалось. Число накожных аппликаций довели до 20. После 20 накожных аппликаций изучаемого средства положительных реакций кожи (эритема, пузырь, микро везикулы) не выявлено. Толщина кожной складки на месте нанесения препарата не увеличилась от исходного состояния.

Для оценки профилактической эффективности средства в период сухостоя у коров провели производственный опыт на 100 коровах, которых разделили на 2 группы опытную и контрольную по 50 животных в каждой. Коровам опытной группы во время запуска, непосредственно после последнего доения, вытирали соски вымени сухой салфеткой или полотенцем и наносили, с помощью метода погружения соска вымени в пластмассовый стаканчик, профилактическое средство, после чего коров определяют в группу сухостоя. Животных контрольной группы определяли в сухостой без средств фармакопрофилактики.

У подопытных животных 2 групп на 15-е сутки сухостойного периода и после отела исследовали молочную железу клиническими методами и постановкой тест-реакции, результаты отражены в таблице 4.

В контрольной группе на 15-е сутки сухостойного периода мастит обнаружили у 13 голов, в том числе у девяти — клинически выраженный и четырех — субклинический. В промежутке от 15-х суток до отела заболело еще 4 коровы. Таким образом, суммарная заболеваемость составила 34%.

Таблица 4 — Профилактическая эффективность средства для профилактики мастита у коров в период сухостоя

В опытной группе на 15-е сутки у двух коров обнаружен субклинический мастит. За весь период сухостоя было выявлено пять коров больных маститом. Из них три с клиническим и две с субклиническим, что составляет 10% к поголовью. В итоге, при использовании разработанного нами профилактического средства заболеваемость коров маститом снижается до 10% или в 3,4 раза, по сравнению с контролем.

В ходе исследований нами было установлено, что мастит коров имеет широкое распространение в Краснодарском крае и составляет в среднем 39,3% от поголовья ферм. В результате мониторинга состояния молочной железы у животных было установлено, что воспалением вымени приходится на первые 15 дней сухостоя.

В ходе проведенных работ было разработано средство для профилактики мастита у коров в сухостое. При апробации средства на лабораторных животных мы установили, что средство по степени воздействия на организм теплокровных животных относится к веществам малоопасным (4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007−76). А также не обладает раздражающим воздействием на ткани в зоне его применения и не обладает аллергизирующим действием. Установлено выраженное профилактическое действие средства при маститах у коров в период сухостоя.