Изучение влияния различных питательных сред, а также отдельных их компонентов на этапах микроразмножения и укоренения in vitro

На этапе микроразмножения экспланты сортообразцов винограда были пересажены на питательные среды для размножения М₂, ДМ₂, БМ₂, состав которых приведен в таблице 4.

Таблица 4 — Состав питательных сред, используемых на этапе микроразмножения

На питательных средах М₂, БМ₂, ДМ₂ экспланты культивировали 14 дней, в этот период у них происходила интенсивная пролиферация побегов из нижних узлов.

В конце пассажа экспланты представляли собой конгломераты из почек и микропобегов.

Эти агрегаты почек расчленяли и пересаживали на свежую питательную среду, при этом был определен коэффициент размножения (таблица 5).

Таблица 5 — Коэффициент размножения у оздоравливаемых сортообразцов винограда на питательных средах БМ2, ДМ2, М2

Как видно из данных, приведенных в таблице 5, коэффициент размножения у всех перечисленных сортов выше на стандартной среде М₂. На средах БМ₂, ДМ₂ наблюдались морфологические изменения растений-регенерантов — побурение ткани, а также витрификация. В дальнейшем среды БМ₂ и ДМ₂ больше не использовали для микроразмножения.

В связи с этим возникла необходимость в подборе оптимального состава питательной среды для дальнейшего клонального микроразмножения оздоравливаемых сортообразцов винограда.

Одним из факторов, определяющих развитие меристематической ткани на искусственной питательной среде в условиях in vitro, является наличие в ней регулятора роста цитокинина, который снимает апикальное доминирование и стимулирует пролиферацию. Поэтому был поставлен опыт по выявлению наиболее эффективной концентрации фитогормона для оздоравливаемых сортообразцов винограда с учетом их генотипической специфики. В питательную среду Мурасиге и Скуга вводили 6-БАП в различных концентрациях (0,1; 0,2; 0,4 мг/л) (таблица 6) и высаживали регенеранты оздоравливаемых сортов винограда. В ходе опыта проводилось изучение влияния концентрации 6-БАП на размножение регенерантов.

Таблица 6 — Влияние концентрации цитокинина 6-БАП на коэффициент размножения регенерантов оздоравливаемых сортообразцов винограда в условиях in vitro

Как видно из данных, приведенных в таблице 6, более высокий коэффициент размножения у всех испытуемых сортообразцов винограда был на среде, содержащей 6-БАП в концентрации 0,4 мг/л.

Следует также отметить, что способность к размножению у оздоравливаемых сортообразцов винограда была неодинакова. Так, среди сортов самый высокий коэффициент размножения был у образцов Каберне-Совиньон 5а, Ркацители Магарача, Рислинг 830, Рислинг 7−12−201−15−1 и составил 9,9; 9,9; 10,2; 9,7, соответственно.

Слабее других размножались сорта: Алиготе клон, Пино белый 6, Пино белый 31, Пино серый 46, Новоукраинский ранний, Мускат одесский, Мерло 14. Коэффициент размножения у них был в пределах: 8,6; 8,9; 8,8; 8,9; 8,9; 6,0, соответственно.

Учитывая довольно низкую способность к размножению некоторых сортообразцов винограда в условиях in vitro, были проведены исследования по подбору более эффективного состава питательной среды.

В опыте испытывались два варианта питательной среды Мурасиге и Скуга, в которую помимо цитокинина 6-БАП добавляли еще одно ростовое вещество — гибберелловую кислоту в концентрации 0,1 и 0,2 мг/л.

В ходе опыта был отмечен интенсивный рост меристематической ткани, укрупнение листовых пластинок уже в первые две недели. Однако здесь наблюдалась очень сильная витрификация микропобегов (таблица 7).

Таблица 7 — Развитие регенерантов на среде с содержанием гиббереллина

Как видно из данных, приведенных в таблице 7, коэффициент размножения у всех испытуемых сортообразцов винограда на среде с гиббереллином довольно высок.

Причем, в варианте с концентрацией гибберелловой кислоты — 0,2 мг/л пролиферация была более активной, коэффициент размножения был выше у всех испытываемых сортообразцов, чем в варианте с содержанием ГК — 0,1 мг/л. Следует также отметить разницу в способности к размножению в условиях in vitro между различными сортами винограда.

Так, у сорта Пино белый 6 и Пино серый 46 коэффициент размножения был выше, чем у других образцов и составил 19,1 и 19,2. Слабее других размножался сорт Рислинг 830. Коэффициент размножения у него был 18,2.

Однако следует отметить очень сильную витрификацию у регенерантов испытуемых сортообразцов на среде с гиббереллином. Причем, в обоих вариантах она была очень высокой и составила у всех сортообразцов 89,5−91,3%.

Следующий этап микроклонального размножения — укоренение полученных микрорастений в условиях in vitro.

Для получения ризогенеза регенеранты высаживались на обедненную жидкую питательную среду Мурасиге и Скуга, содержащую половинное количество макрои микроэлементов, полный набор витаминов и фитогормон ауксин.

В исследованиях испытывали два вида ауксинов: в-индолилуксусную кислоту и б-нафтилуксусную кислоту в концентрациях — 0,2 мг/л. Результаты опыта приведены в таблице 8.

Результаты исследований показали, что оба ауксина в-ИУК и &-НУК вполне приемлемы для использования их в качестве интродуктов ризогенеза у пробирочных растений, так как существенных различий в корневой системе у испытуемых сортообразцов не обнаружено.

Таблица 8 — Рост корневой системы в зависимости от используемого ауксина у пробирочных растений оздоравливаемых сортообразцов винограда