Фармакогностическое изучение полыни гладкой и разработка лекарственной формы арглабина

Актуальность темы

В настоящее время одной из приоритетных задач здравоохранения является расширение ассортимента используемых лекарственных средств за счет внедрения в медицину новых препаратов растительного происхождения.

Многолетней медицинской практикой доказано, что фитопрепараты для лечения ряда заболеваний по эффективности не уступают синтетическим аналогам, а по отсутствию побочных эффектов и противопоказаний превосходят их. Борьба со злокачественными опухолями является одной из наиболее актуальных задач современной медицины. Разработка новых противоопухолевых препаратов позволяет расширить возможности лекарственного лечения злокачественных опухолей.

Одним из перспективных классов природных соединений являются сесквитерпеновые лактоны, обладающие выраженными цитотоксическими и противоопухолевыми свойствами, механизм действия которых основан на ингибировании фермента фарнезилтрансферазы, ответственного за образование злокачественных опухолей.

Среди огромного количества видов лекарственных растений, произрастающих в Казахстане, значительный интерес представляет род полынь (Artemisia L.). Одним из его представителей является полынь гладкая. При изучении химического состава данного вида установлено количественное содержание сесквитерпеновых лактонов и выделено новое биологически активное соединение арглабин [2,138], фармакологическое изучение его выявило противоопухолевые и радиосенсибилизирующие свойства [81, 102].

В связи с этим исследования полыни гладкой оказались актуальными и в фармакогностическом отношении.

Цель работы: Фармакогностическое изучение полыни гладкой и разработка на основе арглабина лекарственных форм для лечения онкологических заболеваний.

Для достижения поставленной цели предусматривалось решение следующих задач: провести сравнительные морфолого-анатомические исследования надземной части полыни гладкой и близких к ней видов, произрастающих в Казахстане, с целью выявления диагностических признаков и характера локализации эфирного масла для обоснования метода извлечения его из растительного сырьяпровести фитохимическое изучение биологически активных веществ в траве полыни гладкойизучить закономерности накопления сесквитерпеновых лактонов в траве полыни гладкой в зависимости от фазы развития и места её- произрастания. разработать методики качественного и количественного определения сесквитерпенового лактона арглабина в сырье и получить его водорастворимую формуразработать лекарственные формы на основе арглабина и провести их стандартизациюподготовить нормативные документы на траву полыни гладкой, субстанцию арглабина, лиофилизированный порошок для инъекций и мазь.

Научная новизна работы. Впервые проведены морфолого-анатомические исследования полыни гладкой и выполнено её- углубленное фитохимическое изучениеизучены закономерности накопления сесквитерпеновых лактонов в траве полыни гладкой в зависимости от фазы развития и места её- произрастанияразработаны методики качественного и количественного определения арглабина в сырье и подобраны оптимальные условия выделения его из сырьяполучена водорастворимая форма арглабина, на основе которой разработаны лекарственные формы.

Практическая значимость работы. Установлено, что полынь гладкая является перспективным источником для получения противоопухолевого средства. На основании данных фитохимического, морфологоанатомического и товароведческого анализа разработана временная фармакопейная статья на траву полыни гладкой (ВФС РК 42−218−99), фармакопейные' статьи на субстанцию арглабина (ФС РК 42−244−99) и арглабин лиофилизированный порошок для инъекций 0,04 г (ФС РК 42−24 599), проект временной фармакопейной статьи на арглабина мазь 2%. Препарат «Арглабин лиофилизированный» решением Президиума Фармакопейного комитета РФ от 16 октября 2002 г. рекомендован для регистрации в Российской Федерации (НД 42−12 585−02). Предложен метод очистки сырья от эфирного масла, который способствует улучшению качества арглабина нативного. Впервые для выделения арглабина из полыни гладкой использован метод углекислотной экстракции.

На защиту выносятся результаты фитохимического, фармакологического, морфолого-анатомического исследования полыни гладкой как источника сесквитерпенового лактона арглабина для получения противоопухолевого средстваразработанные методики качественного и количественного определения сесквитерпенового лактона арглабина в траве полыни гладкой. Получение водорастворимой формы арглабина. Разработанные на основе диметиламиноарглабина гидрохлорида порошок лиофилизированный 0,04 г для приготовления инъекционного раствора, мазь 2%, обладающие противоопухолевой активностью и низкой токсичностью.

Апробация работы. Результаты проведенных исследований доложены и обсуждены на 6-ом Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1999 г), международной конференции «Medicinal raw material and phytopreparations for medicine and agriculture» (Караганда, 1999 г.), международной научно-практической конференции «Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности» (Томск, 2000 г.), научно-практической конференции «Фитохимия для развития отечественной фармацевтической промышленности» (Караганда, 2000 г.), на заседании кафедр фармацевтической химии и фармакогнозии Сибирского государственного медицинского университета (Томск, 2002 г.), международной научно-практической конференции «Клинические аспекты применения противоопухолевого препарата «Арглабин» (Караганда, 2002 г.).

Диссертационная работа выполнена в Институте фитохимии МОН РК в рамках Республиканской целевой научно-технической программы «Разработка и внедрение в промышленное производство фитопрепаратов для обеспечения отечественными лекарственными средствами медицинских учреждений и населения Республики» Ц.0075 под руководством профессора С. М. Адекенова. Отдельные этапы работ выполнялись в Сибирском государственном медицинском университете (г. Томск) под руководством профессора С. Е. Дмитрука, фармакологические исследования проводились в Национальном Центре гигиены труда и профессиональных заболеваний (г. Караганда). Спектры ПМР, ЯМР-С13, масс-спектры снимали в Институте органической химии СО РАН им. Н. Н. Ворожцова (г. Новосибирск).

Публикации. По результатам исследований получен патент Республики Казахстан № 10 449, опубликовано 18 работ, которые отражают основное содержание диссертационной работы.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 144 страницах машинописного текста. В тексте приведены 22 таблицы и 27 рисунков. Библиографический указатель включает 198 источников литературы. Диссертационная работа состоит из введения, пяти глав, выводов, списка использованной литературы и приложения.

выводы.

1. Проведены фармакогностические исследования полыни гладкой и близких к ней видов, для которых установлены морфолого-анатомические признакидля основного лекарственного вида определены товароведческие показатели сырья (влажность не более 13%, зола общая не более 13%, зола, нерастворимая в соляной кислоте 3,5%, органической примеси не более 2%, минеральной примеси 1,5%, экстрактивных веществ (29,2+1,3) %, для измельченного сырья: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм не более 10%).

2. Изучен химический состав нового вида сырья, предложенного для медицины — травы полыни гладкой. Среди выявленных соединений аминокислоты (глутамин, аргинин, глутаминовая кислота, пролин, тирозин, триптофан, лейцин), флавоноиды (цирсилинеол, кастицин, лютеолин, бонанзин, пектолинаригенин), углеводы (глюкоза, рамноза, дульцит), кумарины (умбеллиферон), фенолокислоты (галловая, протокатеховая, кофейная, изованилиновая, сиреневая, салициловая, коричная), эфирные масла, сесквитерпеновые лактоны (арглабин, арголид).

3. Разработана методика количественного определения арглабина методом ВЭЖХ, позволяющая достоверно определить его содержание в траве полыни гладкой.

4. Для освобождения сырья полыни гладкой от присутствующих эфирных масел, которые снижают выход арглабина, разработана оригинальная установка полупромышленного типа, позволяющая извлекать эфирное масло, с использованием двух режимов: перегонкой с водяным паром и созданием вакуума при уменьшении температуры.

5. Разработан способ получения из травы полыни гладкой сесквитерпенового лактона арглабина. Предложенный способ выделения арглабина с помощью сжиженного диоксида углерода позволяет в 2,6 раз увеличить выход целевого продукта по сравнению с известным способом, где в качестве экстрагента используется хлороформ.

6. На основании фитохимических исследований предложена схема комплексной переработки сырья полыни гладкой, позволяющая выделять, кроме сесквитерпеновых лактонов, эфирное масло и очищенную сумму фенольных соединений.

7. Разработан компонентный состав и технология приготовления арглабина мази 2%, установлена её- безвредность и предложена методика стандартизации.

8. По результатам проведенных фитохимических и фармакологических исследований разработаны: а) ВФС на траву полыни гладкой (утверждена ФК АДЗ Республики Казахстан, регистрационный номер 42−218−99), б) ФС на арглабин (утверждена ФК АДЗ Республики Казахстан, регистрационный номер 42−244−99). в) ФС на арглабин лиофилизированный 0,04 г для инъекций, (утверждена ФК АДЗ Республики Казахстан, регистрационный номер 42 245−99). г) проект ВФС на арглабин мазь 2%.

9. Препарат «Арглабин лиофилизированный» решением Президиума Фармакопейного комитета РФ от 16 октября 2002 г. рекомендован для регистрации в Российской Федерации (НД 42−12 585−02).