Фармакогностическое изучение травы сабельника болотного

Актуальность проблемы. Одной из важных проблем современной медицины является лечение заболеваний опорно-двигательного аппарата. Несмотря на большие различия в причине возникновения (перенесенная инфекция, аутоиммунный конфликт, нарушения обмена мочевой кислоты и т. д.), заболевания суставов имеют в своей основе общие механизмыразвития. Основным патогенетическим механизмом в данном случае является воспаление, в результате которого наступает повреждение тканей суставов, выделение экссудата (воспалительной жидкости) и замещение поврежденных тканей рубцом. Чередование. этих процессов или одновременное их протекание и формирует клиническую картину болезни: заболевания суставов характеризуются болью, покраснением, отеком, повышением температурыв области поражения, а также нарушением функции соответствующего сустава.

Поскольку, для этой группы заболеваний, боль является, основной причиной, заставляющей обратиться за медицинской помощью, то вполне* естественно, что группа нестероидных противовоспалительных препаратов является — одной из ведущих и успешно применяемых при лечении вышеуказанных заболеваний в сочетании: с глюкокортикостероидами и иммуномодуляторами. Однако их использование вызывает ряд негативных явлений, в том числе, вредное воздействие на желудочно-кишечный тракт, а одновременное, использование нескольких противовоспалительных нестероидных препаратов повышает риск сердечных заболеваний в 6 раз. Это следует принимать во внимание, учитывая тот факт, что заболевания опорно-двигательной системы наблюдаются в зрелом и пожилом возрасте, а применение противовоспалительных препаратов является длительным или постоянным.

В то же времяв ряде случаев при заболеваниях суставов могут оказаться эффективными растительные препараты. Для лечения заболеваний суставов выбирают растения, обладающие противовоспалительным, мочегонным (противоотеч-ным), регулирующим обменные процессы, обезболивающим, седативным, общеукрепляющим, десенсибилизирующим действием. Среди растений, применяемых при заболеваниях этих нозологических групп, в традиционной медицине и в виде биологически" активных добавок к пище широко применяется сабельник болотный -! Comarum palustre Е., семRosaceae. Преимуществом" использования растительных препаратов является отсутствие серьезных побочных явлений, что позволяет применять их длительное время.

Однако ^широкое' использование: сабельника болотного сдерживается тем, что недостаточно данных по-фармакогностическому изучению и фармакологическому подтверждению эффективности препаратов из него., В частности, нет данных по со-'I держанию: основныхгрупп биологически активных соединений, не изучены товароведческие показатели, сырья, не исследована противовоспалительная активность препаратов сабельника;

Поэтому фармакогностическое исследование травы сабельника болотного является актуальной темой фармацевтической науки и практики.

Цель работы.

Щелью настоящих исследований являлось фармакогностическое изучение травысабельника болотного, разработка технологии и нормативнойдокументации на сырье и сабельника болотного экстракт жидкий;

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести качественное и количественное определение основных групп биологически активных соединений травы сабельника болотного (БАС):

2. Выделите и идентифицировать индивидуальные соединения, содержащиеся в траве сабельникаболотного и определяющие его биологическую активность.

3. Установить основные морфолого-анатомические признаки и товароведческие показатели сырья. .

4. Разработать проект фармакопейной статьи на сырье (траву) сабельника болотного.

5. Разработать технологию сабельника болотного экстракта жидкого (1:1)'и t методы: его стандартизации- 6 ¦ '.

6. Изучить противовоспалительную активность сабельника болотного экстракта жидкого (1:1).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской государственной фармацевтической академии Росздрава (№ госрегистрации 01.200.213 550) в рамках проблемы «Фармация» Ученого совета Министерства здравоохранения и социального развития РФ, секция № 38.

Впервые установлен компонентный состав полифенольного комплекса травы сабельника болотного методом ВЭЖХ. С помощью этого метода выделено и идентифицировано 15 компонентов, 9 из которых идентифицированы для исследуемого вида впервые: флавоноиды — гесперидин, лютеолин-7-гликозид, робинин, виценин, дигидрокверцетин, гиперозидоксикоричные кислоты — цикоревая, кофейнаякума-рины — умбеллиферон. Преобладающими компонентами являются: апигенин, дигидрокверцетин, робинин и рутин.

Установлено, что тритерпеновые сапонины травы сабельника болотного представлены 4 гликозидами, агликоном которых является олеаноловая кислота, которая также присутствует в растении в свободной форме. Методом ВЭЖХ доказано, что агликоном тритерпеновых сапонинов травы сабельника болотного является олеаноловая кислота.

Впервые проведена количественная оценка содержания в траве сабельника болотного фенолкарбоновых кислот, тритерпеновых сапонинов, кумаринов. Изучен моносахаридный состав полисахаридов травы сабельника болотного.

Разработаны основные показатели, определяющие качество сырья. Предложены критерии оценки качества и идентификации сырья по его основным морфологическим и анатомическим признакам. Проведена валидация предлагаемых методик качественного и количественного анализа сырья по показателям «специфичность», «линейность», «правильность», «предел обнаружения», «отсутствие систематической ошибки».

Впервые разработана технологическая схема получения сабельника болотного экстракта жидкого (1:1). Разработаны методики количественного определения основных групп биологически активных веществ.

Установлена специфическая фармакологическая активность сабельника болотного экстракта жидкого (1:1), подтвердившая его противовоспалительное действие.

Практическая значимость результатов исследования.

Установлены характерные диагностические признаки сырья (травы) сабельника болотного.

Проведена стандартизация травы сабельника болотного с учетом современных требований, предъявляемых к качеству лекарственного растительного сырья.

Обоснована целесообразность применения травы сабельника болотного для получения сабельника болотного экстракта жидкого (1:1) и. его дальнейшего изучения с целью внедрения его в медицинскую практику в качестве противовоспалительного средства.

Внедрение результатов исследования.

Проект ФС «Сабельника болотного трава — Comari palustris herba» принят на экспертизу в Институт стандартизации и контроля лекарственных средств Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (письмо № 5273 от 27.12.06) для рассмотрения и утверждения.

Получены акты апробации технологии и методов анализа сабельника болотного экстракта жидкого (1:1) на базе экспериментального участка фитоцеха ФГУП «Пятигорская фармацевтическая фабрика» от 29.05.2006 г. Положения, выдвигаемые на защиту.

1. Результаты изучения химического состава травы сабельника болотного методами ТСХ, ВЭЖХ, БХ и препаративной хроматографии.

2. Данные качественного и количественного анализа основных групп биологическа активных соединений сырья (травы) сабельника болотного.

3. Выявленные характерные морфолого-анатомические диагностические признаки сырья (травы) сабельника болотного.

4. Основные положения стандартизации сырья (травы) сабельника болотного, сабельника болотного экстракта жидкого и настойки «Сабельник Эвалар».

5. Результаты изучения фармакологической активности суммы тритерпеновых сапонинов и сабельника болотного экстракта жидкого (1:1).

Апробация работы и публикации.

Основные положения диссертационной работы апробированы на межрегиональной конференции по фармации и фармакологии (г. Пятигорск, 2003, 2004, 2005 гг.).

Объём и структура диссертации.

Работа изложена на 153 страницах машинописного текста, содержит 45 таблицу, 29 рисунков и 20 расчётных формул. Состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 150 источников, в том числе 11 иностранных и приложения.

СОКРАЩЕНИЯ.

Б АД — биологически активная добавка.

БАС — биологически активные соединения.

БХ — бумажная хроматография.

ВРПС — водорастворимые полисахариды.

ВЭЖХ — высокоэффективная жидкостная хроматография.

ГК — глюкокортикоиды.

ГЦ — гемицеллюлоза.

НПВС — нестероидные противовоспалительные средства.

ПВ — пектиновые вещества.

РА — ревматоидный артрит.

РСО — рабочий стандартный образец.

ТСХ — хроматография в тонком слое сорбента.

ФС — фармакопейная статья.

Б — г. Бийск, Алтайского края;

БЧ — Бакчарский район;

Т — Томск,.

А — Алтайский район.

Кор" - коричневая окраска зоны адсорбции;

Красно — кор" - красно-коричневая окраска зоны адсорбции;

Ж" - желтая окраска зоны адсорбции;

Г" - голубая окраска зоны адсорбции;

Син" - синяя окраска зоны адсорбции;

Син-Ф" - сине-фиолетовая окраска зоны адсорбции;

Ярко-г" - ярко-голубая окраска зоны адсорбции;

Светло-г" - светлоголубая окраска зоны адсорбции;

Зел-г" - зеленовато-голубая окраска зоны адсорбции;

Ж-Зел" - жёлто-зелёная окраска зоны адсорбции.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ.

1. Впервые установлено присутствие в траве: сабельника болотного, флавоноидов: гесперидина, лютеолин-7-гликозида, робинина, виценина, дигидрокверце-тина, гиперозидафенолкарбоновых кислот: цикоревой кислотыкумаринов: умбёл-лиферонаорганических кислот: лимонной, щавелевой и винной:

2: Выделены и идентифицированы на основании изучения-физико-химических I и спектральных характеристик кверцетин,. кемпферол (флавоноиды) — кофейная? кислота (оксикоричные кислоты) — олеаноловаяжислота (тритерпеновые сапонины):

3. Установлено количественное содержание. в сырье (траве) сабельника болот-f ного дубильных веществ (11.9 — 14.7%) — оксикоричных кислот (0.391 — 0.459%) — флавоноидов (0:51, — 0.59%) — кумаринов (0:57 — 0:67%) тритерпеновых сапонинов^.

0.98 — 1.01%) — каротиноидов (11.3 — 12.5мг%) — свободных органических кислот (2.51 — 3.54%) — полисахаридов (0.14%). | 4. Изучен аминокислотный состав растения. Главными компонентами являюте ся аспарагиновая, глютаминовая кислоты и лейцинBi траве: сабельника болотного^ обнаружено 28 микроэлементовдоминирующие из которых К, Са, Mg, Na, Fe, Р,.

Mn.

5- Определены^ основные морфолого-анатомические признаки сырьяпозволяющие достоверно^{идентифицировать} сырье — травусабельника болотного.

6. Подобраны оптимальные: условия получения? экстракта травы сабельника" болотного жидкого (1:1), определены технологические показатели сырья. Установлены показатели-качества экстракта. $.

7. Проведен сравнительный анализ экстракта жидкого сабельника болотного и: настойки «Сабельник Эвалар» по содержанию флавоноидов,. тритерпеновых сапонинов, дубильных веществ и свободных органических, кислот.

8. Установлена противовоспалительная активность сабельника болотного экстракта жидкого и суммы тритерпеновых сапонинов, выделенных из травы сабельни-, ка болотного на крысах на модели адъювантного артрита. Сабельника болотного экстракт жидкий оказал достоверно значимое противовоспалительное действие, превышающее в 2,4 раза эффект настойки^ «СабельникЭвалар».

3. 138.

9. По классификации Ходжа и Стернера сабельника болотного экстракт жидкий и сумма тритерпеновых сапонинов этого растения относятся к веществам VI класса токсичности и являются безопасными для здоровья человека. Для сабельника болотного экстракта жидкого острая токсичность составила 28 846,15 мг/кгдля суммы тритерпеновых сапонинов, выделенных из травы сабельника болотного — более 40 000 мг/кг.

10. Разработана ФС «Сабельника болотного трава — Comari palustris herba» в соответствии с требованиями ОСТа 91 500.05−001−00.