Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Исследование компонентов протеолитических систем крови в качестве субстратов цистеиновых катепсинов

Диссертация: Исследование компонентов протеолитических систем крови в качестве субстратов цистеиновых катепсинов
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Стрептокиназа широко применяется в медицине в качестве тромболитика. Известно, что время ее существования в кровяном русле находится в диапазоне 1−3 часов. После введения стрептокиназы возникает несколько разных конкурирующих биохимических механизмов. Она связывается с циркулирующим плазминогеном с образованием активаторного комплекса, который адсорбируется на фибрине. Кроме того, часть… Читать ещё >

Исследование компонентов протеолитических систем крови в качестве субстратов цистеиновых катепсинов (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • 1. ВВЕДЕНИЕ
  • 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 2. 1. Цистеиновые катепсины лизосом
      • 2. 1. 1. Особенности строения и физико-химические свойства цистеиновых катепсинов
      • 2. 1. 2. Методы выделения и очистки цистеиновых катепсинов
      • 2. 1. 3. Ингибиторы цистеиновых катепсинов
      • 2. 1. 4. Субстратная специфичность цистеиновых катепсинов
        • 2. 1. 4. 1. Субстратная специфичность цистеиновых катепсинов в отношении низкомолекулярных субстратов
        • 2. 1. 4. 2. Протеолитическое действие цистеиновых катепсинов на белковые субстраты
        • 2. 1. 4. 3. Участие цистеиновых катепсинов в протеолизе белков в норме и при ^ патологии
    • 2. 2. Общая характеристика важнейших протеолитических систем крови
      • 2. 2. 1. Белковые компоненты протеолитических систем крови как возможные субстраты цистеиновых катепсинов
      • 2. 2. 2. Физико-химические свойства и функции фактора D системы комплемента
      • 2. 2. 3. Физико-химические свойства и функции С1-ингибитора системы комплемента
      • 2. 2. 4. Физико-химические свойства и функции тромбина
      • 2. 2. 5. Строение и свойства фибрина
      • 2. 2. 6. Строение и физико-химические свойства стрептокиназы
      • 2. 2. 7. Превращение плазминогена в плазмин под действием стрептокиназы
  • СОБСТВЕННЫЕ ДАННЫЕ
  • 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
    • 3. 1. Аппаратура и реактивы
    • 3. 2. Источники белковых препаратов
    • 3. 3. Определение активности цистеиновых катепсинов
      • 3. 3. 1. Определение БАПНА-гидролазной активности
      • 3. 3. 2. Определение активности цистеиновых катепсинов в отношении Z-Lys-0-Np*HCl)
      • 3. 3. 3. Определение активности цистеиновых катепсинов в отношении Z-Phe-Arg-NHMec
    • 3. 4. Выделение и очистка белков системы комплемента
      • 3. 4. 1. Получение Cls' субкомпонента
      • 3. 4. 2. Получение С1-ИНГ
      • 3. 4. 3. Получение фактора D системы комплемента
      • 3. 4. 4. Получение сыворотки, частично истощенной по фактору D системы комплемента (RD)
    • 3. 5. Обработка белковых препаратов цистеиновыми катепсинами
    • 3. 6. Определение функциональной активности компонентов протеолитических систем крови
      • 3. 6. 1. Регистрация активности фактора D
      • 3. 6. 2. Регистрация активности Cls' и С1-ИНГ
      • 3. 6. 3. Регистрация активности плазмина
      • 3. 6. 4. Турбидиметрический метод регистрации процессов свертывания — фибринолиза
    • 3. 7. Количественное определение белка
    • 3. 8. Электрофорез в полиакриламидном геле
    • 3. 9. Изучение продуктов протеолиза стрептокиназы методом гель-фильтрации
    • 3. 10. Ионообменная хроматография на КМ-целлюлозе
    • 3. 11. Методы математической обработки
  • 4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
    • 4. 1. Получение очищенных препаратов цистеиновых катепсинов и исследование их некоторых свойств
      • 4. 1. 1. Разработка способа выделения и очистки цистеиновых катепсинов из почки человека
      • 4. 1. 2. Исследование активности цистеиновых катепсинов в отношении низкомолекулярных субстратов
        • 4. 1. 2. 1. Изучение зависимости активности цистеиновых катепсинов от рН и продолжительности хранения
        • 4. 1. 2. 2. Исследование активности цистеиновых катепсинов в отношении БАПНА
        • 4. 1. 2. 3. Исследование активности цистеиновых катепсинов в отношении Z-Lys-0-Np*HCl
        • 4. 1. 2. 4. Исследование активности цистеиновых катепсинов в отношении Z-Phe-Arg-NHMec
    • 4. 2. Исследование действия цистеиновых катепсинов на компоненты системы комплемента
      • 4. 2. 1. Исследование действия цистеиновых катепсинов на функциональную активность фактора D системы комплемента
      • 4. 2. 2. Влияние цистеиновых катепсинов на функциональную активность С1 — ингибитора
    • 4. 3. Турбидиметрическая регистрация процессов свертывания и фибринолиза
    • 4. 4. Исследование действия цистеиновых катепсинов на белковые компоненты системы свертывания крови и фибринолиза
      • 4. 4. 1. Турбидиметрическая регистрация показателей свертывания и фибринолиза с использованием интактной и обработанной цистеиновыми катепсинами плазмы
      • 4. 4. 2. Исследование действия цистеиновых катепсинов на тромбин
      • 4. 4. 3. Исследование действия цистеиновых катепсинов на фибрин
      • 4. 4. 4. Исследование действия цистеиновых катепсинов на плазмин
      • 4. 4. 5. Исследование функциональной активности стрептокиназы в ходе ее обработки цистеиновыми катепсинами
    • 4. 5. Изучение протеолитического действия цистеиновых катепсинов в отношении стрептокиназы
      • 4. 5. 1. Исследование продуктов деградации стрептокиназы электрофоретическим методом
      • 4. 5. 2. Гель-фильтрация продуктов протеолиза стрептокиназы под действием цистеиновых катепсинов

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

Белки биологических жидкостей человека находятся в состоянии постоянного обновления, то есть их катаболизм уравновешен процессом тканевого биосинтеза. Различают два механизма катаболизма белков: (1) внеклеточный ограниченный протеолиз, наблюдаемый в ходе функционирования протеолитических систем крови, и (2) внутриклеточный лизосомальный протеолиз. Внеклеточнный протеолиз приводит к осуществлению функционального эффекта протеолитических систем и к настоящему времени достаточно хорошо изучен. Продукты внеклеточного протеолиза являются достаточно крупными белками или полипептидами и могут подвергаться дальнейшему катаболизму в клеточных лизосомах, в которые они поступают в результате эндоцитоза [5, 17, 26, 110]. Ведущую роль в лизосомальном протеолизе играют цистеиновые катепсины. Эти ферменты осуществляют тотальный протеолиз белков в лизосомах, обеспечивая и регулируя процессы клеточного питания и обновления белковых структуру, 26]. Они участвуют в процессинге многих внутрии внеклеточных белков [1, 33, 70, 75, 89, 106, 112, 157, 164, 179, 186]. Катепсины вовлечены во многие патологические процессы: при воспалении, злокачественном росте и других патологических процессах они выходят из клеток и появляются во внеклеточном матриксе и в плазме крови. При этом они могут воздействовать на белки крови и изменять их свойства [16, 92, 95, 100, 102, 107, 117]. Определение катепсинов в биологических жидкостях организма и биоптатах тканей имеет важное прогностическое значение, поскольку уровень их коррелирует с ростом и метастазированием опухолей [20, 22, 29, 95, 107, 143].

Изучение протеолитических ферментов лизосом, к которым относятся цистеиновые катепсины, является одним из важнейших и интенсивно развивающихся направлений современной биохимии [5, 17, 26, 41], однако спектр белковых субстратов, применяемых для их исследования, весьма ограничен. В литературе практически отсутствует информация о воздействии цистеиновых катепсинов на белковые компоненты протеолитических систем крови. Кроме того, отмечается, что катаболизм многих белков плазмы не ясен и нуждается в дальнейшем изучении [17, 26]. Вместе с тем, разработанные на кафедре биохимии СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова методы их исследования [12, 25, 44, 53] позволяют оценить возможность протеолиза по изменению функциональных свойств отдельных компонентов указанных систем.

Некоторые участники протеолитических систем используются (плазмин, активаторы плазминогена) или могут использоваться (фактор D, С1-ингибитор комплемента) в качестве медицинских препаратов, поэтому исследование участия катепсинов в фармакокинетике таких препаратов представляется особенно важным.

Актуальность изучения участия цистеиновых катепсинов в деградации белковых компонентов протеолитических систем крови обусловлена не только возможностью получения новых данных об их субстратной специфичности, но и выяснением функционального значения цистеинового протеолиза.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ. Главной целью настоящей работы явилось выяснение спектра протеолитического действия цистеиновых катепсинов в отношении белковых компонентов протеолитических систем крови. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработка достаточно простого, нетрудоемкого способа выделения тканевых цистеиновых катепсинов с высоким выходом ферментов.

2. Исследование влияния цистеиновых катепсинов на функциональную активность фактора D и С1-ИНГ комплемента, тромбина, плазмина, а также активатора плазминогена стрептокиназы. Усовершенствование методов регистрации функциональной активности этих компонентов.

3. В случае обнаружения протеолиза исследованных белков под действием цистеиновых катепсинов, анализ продуктов их деградации.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Разработан новый способ выделения и очистки цистеиновых катепсинов из экстрактов тканей, обеспечивающий высокий выход ферментов, ускорение и упрощение процедуры очистки. Впервые обнаружено, что цистеиновые катепсины вызывают деградацию стрептокиназы, что приводит к снижению, а затем и к полной потере ее плазминоген-активирующей способности. Обнаружено, что тромбин, плазмин, фибрин, фактор D и С1 — ингибитор системы комплемента устойчивы в действию цистеиновых катепсинов. Усовершенствована методика турбидиметрической регистрации процессов свертывания крови и фибринолиза. Разработан новый метод регистрации эффективности процесса активации плазминогена.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ. Обнаружение способности цистеиновых катепсинов вызывать деградацию стрептокиназы развивает представление об их специфичности в отношении белковых субстратов. Быстрый протеолиз этого белкового препарата, используемого для активации фибринолиза in vivo, может быть причиной кратковременности его действия.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Практическую значимость имеют методы, разработанные и использованные в работе. (1) Способ выделения и очистки цистеиновых катепсинов может служить основой для получения индивидуальных катепсинов, а также ферментного препарата, перспективного для энзимотерапии ран. (2) Способ определения активности активаторов плазминогена с использованием турбидиметрии может быть использован для исследования фармакодинамики активаторов плазминогена.

Кроме того, он удобен для контроля состояния у больных с нарушениями системы свертывания и фибринолизаметод позволяет одновременно и быстро определить ряд диагностически важных показателей.

Обнаруженная нами устойчивость тромбина, плазмина, фибрина, фактора D и С1-ИНГ к действию цистеиновых катепсинов можно рассматривать как благоприятный факт в случае применения катепсинов для местной энзимотерапии.

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ следующие основные положения:

1. При выделениии цистеиновых катепсинов из тканей замена общепринятой процедуры фракционирования экстракта ткани сульфатом аммония проведением ионообменной хроматографии позволила упростить метод выделения ферментов и увеличить их выход.

2. Тромбин, плазмин, фактор D комплемента и С1 — ингибитор сохраняют свою функциональную активность при обработке их цистеиновыми катепсинами. Не происходит лизиса фибриновых сгустков под действием цистеиновых катепсинов.

3. Стрептокиназа является хорошим субстратом цистеиновых катепсинов и разрушается под их действием с полной потерей своей активности.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации доложены на научной конференции, посвященной 100-летию кафедры биохимии СПбГМУ (Санкт-Петербург, 1998) — на научной конференции, посвященной 200-летию Военно-медицинской академии (Санкт-Петербург, 1999) — на научной конференции «Структура и функции протеолитических ферментов», (Москва, 2000) — на научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика Н. И. Буланкина (Харьков, 2001) — на биохимическом конгрессе Biocatalysis-2002 (Москва, 2002).

ВНЕДРЕНИЕ. Разработанные методы внедрены и используются в практике научных исследований и в учебном процессе на кафедре биохимии Санкт-Петербургского Государственного медицинского Университета имени акад.И. П. Павлова и могут быть рекомендованы к внедрению в научных учреждениях, занимающихся исследованием системы свертывания крови (ЦНИИ гематологии и переливания крови (Москва), Кировский НИИ гематологии и переливания крови МЗ РФ, НИИ особо чистых биопрепаратов (Санкт-Петербург)).

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ.

Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, общего заключения и выводоввключает 12 таблиц, 18 рисунков и список литературы, содержащий 222 источника, в том числе 164 зарубежных.

6. ВЫВОДЫ.

1. Разработан способ выделения и очистки цистеиновых катепсинов из почки человека, обеспечивающий сокращение и упрощение процедуры очистки, а также существенное увеличение выхода ферментативной активности.

2. Цистеиновые катепсины из почки человека не вызывают инактивации очищенных препаратов С1-ингибитора и фактора D системы комплемента, препаратов тромбина и плазмина, а также не вызывают лизиса фибринового сгустка.

3. Показатель Тплато на турбидиметрической кривой свертывания кровифибринолиза находится в обратной зависимости от концентрации интактной стрептокиназы и может быть использован для исследования катаболизма активаторов плазминогена.

4. Стрептокиназа является хорошим субстратом для действия цистеиновых катепсинов из почки человека и подвергается глубокому протеолизу до низкомолекулярных пептидов.

5. Динамика изменения функциональной активности стрептокиназы и появления продуктов протеолиза в ходе инкубации препарата с цистеиновыми катепсинами свидетельствует о ведущей роли катепсина В в деградации этого белка.

5.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Цистеиновые катепсины играют ведущую роль в лизосомальном протеолизе. Поскольку эти протеиназы обладают широким спектром действия в отношении белковых субстратов, можно предположить их участие в катаболизме компонентов протеолитических систем.

В настоящей работе нами усовершенствован метод выделения цистеиновых катепсинов, источником ферментов служили почки человека, полученные в ранние сроки после вскрытия.

В ходе выделения и очистки катепсинов мы произвели замену этапа фракционирования экстракта ткани сульфатом аммония процедурой ионообменной хроматографии. Это позволило не только сократить и упростить метод выделения и очистки цистеиновых катепсинов, но и увеличить выход ферментов. На этом этапе очистки выход ферментов достиг. 130−160%, в то время как в общепринятых процедурах выделения цистеиновых катепсинов [53, 74, 169, 176, 200] после высаливания сульфатом аммония он составлял всего 30−60%.

Разработанная нами схема очистки цистеиновых катепсинов может быть применена в качестве основной процедуры для получения отдельных катепсинов. Кроме того, суммарно цистеиновые катепсины весьма перспективны в качестве лекарственных препаратов. В настоящее время для очистки ран широко применяют трипсин [8,14, 56, 57]. Подобно трипсину, цистеиновые катепсины обладают широкой субстратной специфичностью. Их преимуществом перед трипсином является большой диапазон рН-оптимума в кислой среде, которая характерна для очагов воспаления. В дополнение к этому, как это было нами показано, препараты цистеиновых катепсинов чрезвычайно стабильны при хранении.

Возможность применения цистеиновых катепсинов в медицине делает проблему изучения их субстратной специфичности еще более актуальной. В настоящее время описано небольшое количество белковых субстратов цистеиновых катепсинов (Таблица 1). Мы попытались расширить перечень возможных объектов лизосомального цистеинового протеолиза за счет компонентов протеолитических систем крови, катаболизм которых в настояшее время мало изучен. У всех исследованных нами белков имеются потенциальные сайты для действия цистеиновых катепсинов (Таблица 3). Возможное действие протеаз можно было оценить в функциональных тестах. Один из функциональных тестов, а именно, способ определения активности стрептокиназы на основе турбидиметрической регистрация процесса свертывания и лизиса фибринового сгустка был разработан нами. Этот метод прост в исполнении и может быть использован для определения и других активаторов плазминогена. Он был применен, наряду с другими стандартными лабораторными тестами для оценки коагуляционного статуса и фибринолиза у больных с механическими искусственными клапанами сердца.

Инкубация компонентов комплемента (фактор D, С1-ингибитор) с цистеиновыми катепсинами не повлекла за собой изменений функционирования системы. По-видимому, цистеиновые катепсины не играют решающей роли в катаболизме этих белков. И хотя в нашем исследовании не удалось получить информации о механизмах лизосомальной деградации компонентов комплемента, выявленный нами факт устойчивости белков этой системы к цистеиновым катепсинам можно рассматривать как благоприятный в случае их использования для местной энзимотерапии.

После обработки цистеиновыми катепсинами плазмы крови нами не было выявлено изменения ни показателей свертывания, ни показателей фибринолиза. Также не было зарегистрировано каких-либо изменений показателей свертывания после предварительной обработки цистеиновыми катепсинами препарата тромбина, используемого для активации свертывания. Кроме того, нами было показано, что плазмин полностью сохранял свою эстеразную активность после обработки цистеиновыми катепсинами.

По данным литературы, только один из белков системы гемостаза, а именно, фибриноген был испытан в качестве субстрата катепсина В. Авторы [92, 117] описали, что катепсин В, полученный из печени человека вызывает деградацию in vitro как дегликозилированного, так и гликозилированного фибриногена. В нашем случае, цистеиновые катепсины не вызывали лизиса сформированного в ходе свертывания фибринового сгустка. Поскольку фибриноген подвергается катаболизму в кровяном русле, вряд ли его гидролиз цистеиновыми катепсинами играет существенную роль.

В противоположность эндогенным белкам протеолитических систем экзогенный активатор плазминогена — стрептокиназа — подвергалась быстрой инактивации в ходе ее обработки цистеиновыми катепсинами.

Это проявлялось в изменении показателей фибринолиза, а затем и в полном его прекращении. Разработанный нами метод регистрации функциональной активности стрептокиназы позволил наблюдать за динамикой процесса. При исследовании характера изменения показателей фибринолиза от продолжительности обработки стрептокиназы (250 ME) цистеиновыми катепсинами (0,2U) нами было установлено, что первоначально (10 — минутная обработка) отмечается увеличение только одного показателя — Тплато — времени сохранения максимума светопоглощения. Так как этот показатель характеризует процесс образования и накопления активного плазмина, то есть зависит от количества молекул стрептокиназы, способных образовать активаторный комплекс, то его увеличение свидетельствует о том, что первоначально происходит снижение скорости активации плазминогена из-за уменьшения количества функционально активных молекул стрептокиназы. Однако, на первоначальном этапе обработки их еще достаточно, чтобы активировать весь имеющийся плазминоген. Это подтверждается неизменностью времени и максимальной скорости лизиса (показатели — Тлиз и Улиз). Указанные величины определяются количеством активного плазмина, образованного из плазминогена под действием активаторного комплекса. При увеличении продолжительности обработки стрептокиназы (18 мин) препаратом катепсинов наряду с дальнейшим увеличением показателя Тплато происходит и заметное увеличение показателя Тлиз (времени лизиса), то есть снижение скорости фибринолиза. Это можно объяснить уменьшением не только скорости образования комплекса стрептокиназа-плазминоген, но и количества активированного плазмина. Таким образом, в этот период процесс образования активированного плазминогена начинает лимитироваться количеством функционально активной стрептокиназы. После 30 минутной обработки стретокиназы лизиса сгустка не наблюдается, то есть она полностью теряет свою плазминоген — активирующую способность.

Исследование зависимости показателей фибринолиза от количества цистеиновых катепсинов, использованных для обработки стрептокиназы (в диапазоне концентраций от 50 до 400 mU, при 10-мин. инкубации) выявило линейную зависимость в отношении показателя ТплаТо (времени сохранения максимума светопоглощения). Поскольку, величина этого показателя наиболее точно отражает количество активной стрептокиназы в системе, была рассчитана удельная активность цистеиновых катепсинов в отношении стрептокиназы. Она составила (3900+110) ME «мин*1 ' мг» 1 белка препарата цистеиновых катепсинов.

Изменения же показателя Тлиз (времени лизиса) в зависимости от количества катепсинов имела «пороговый» характер: при уровне катепсинов от 50 до 200 mU время лизиса сохранялось неизменным, а при дальнейшем увеличении количества ферментов этот показатель начинал возрастать.

После обнаружения инактивации стрептокиназы при ее обработке цистеиновыми катепсинами нами была исследована связь динамики процесса с протеолизом белка.

С помощью электрофореза и гель-фильтрации нами было установлено, что стрептокиназа действительно подвергается глубокому протеолизу под действием цистеиновых катепсинов, в то время как в контроле она сохраняет первоначальную активность и не подвергается спонтанному распаду в течение как минимум 120 мин. Обработка стрептокиназы препаратом цистеиновых катепсинов приводила к постепенному разрушению белка. Первоначально, наряду с неповрежденными молекулами стрептокиназы (89 кДа), обнаруживались низкомолекулярные неактивные пептиды (4,5−8,5 кДа) и достаточно крупные фрагменты (около 50 кДа), возможно еще обладающие плазминоген-активирующей способностью. Последние в дальнейшем также подвергались распаду до более мелких неактивных фрагментов (32 кДа). В результате исчерпывающего протеолиза в среде оставались только неактивные низкомолекулярные пептиды.

Как известно [108, 163, 183], активация плазминогена идет только в составе активаторного комплекса со стрептокиназой. В литературе [98, 104] имеются данные о том, что для образования полноценного активаторного комплекса необходимо наличие всех трех (а, Р, у) доменов стрептокиназы. уДомен участвует в экспонировании активного центра в плазминогене активаторного комплекса, а, а — домен участвует в связывании интактного плазминогена. Последний под действием активаторного комплекса превращается в активный плазмин, способный расщеплять фибрин, но не способный к аутокатализу. Известно также [116, 183], что утрата аминокислот (15 и 20, соответственно) с N — и С — концевых частей не отражается на функциональной активности стрептокиназы. А более короткие фрагменты [205] являются неактивными.

Анализ первичной структуры стрептокиназы показывает, что в концевых областях имеются связи, образованные парами основных аминокислот. Такие же связи имеются в а-домене, между участками связывания с интактным плазминогеном и плазминогеном комплекса. Полученные нами данные о динамике изменения активности стрептокиназы при ее обработке цистеиновыми катепсинами и о характере продуктов протеолиза свидетельствуют о том, что первоначально расщепление идет в ее концевых областях. Как известно [79, 80], наибольшую специфичность к таким связям имеет катепсин В, который является основным компонентом полученного нами препарата цистеиновых катепсинов.

Стрептокиназа широко применяется в медицине в качестве тромболитика. Известно, что время ее существования в кровяном русле находится в диапазоне 1−3 часов [50]. После введения стрептокиназы возникает несколько разных конкурирующих биохимических механизмов [50]. Она связывается с циркулирующим плазминогеном с образованием активаторного комплекса, который адсорбируется на фибрине. Кроме того, часть стрептокиназы может связываться с антителами, и образующиеся иммунные комплексы удаляются из кровотока. Можно предположить, что эти комплексы подвергаются эндоцитозу и дальнейшей деградации в лизосомах. По данным [116], некоторое количество белка подвергается частичному протеолизу в комплексе с плазмином. Однако, этот процесс отличается низкой скоростью: за 2 часа инкубации наблюдали частичный протеолиз примерно 25% стрептокиназы. В наших же экспериментах за 30 минут происходила глубокая деградация стрептокиназы с образованием низкомолекулярных пептидов. Наши данные позволяют объяснить быструю инактивацию стрептокиназы in vivo ее лизосомальным протеолизом.

Имеющиеся в настоящее время в литературе данные о белковых субстратах цистеиновых катепсинов не достаточны для широких обобщений по этому вопросу. Наши исследования позволили исключить ряд белков (фактор D и С1-ингибитор комплемента, плазмин, тромбин, фибрин) из числа возможных объектов действия цистеиновых катепсинов и включить в перечень их субстратов (Табл. 1) еще один белок, а именно стрептокиназу. Стрептокиназа в качества субстрата цистеиновых катепсинов имеет целый ряд преимуществ по сравнению с другими белками. Первое преимущество связано с доступностью этого белкового препарата, производство которого во всем мире осуществляется в широких масштабах. Во-вторых, процесс протеолиза стрептокиназы происходит достаточно быстро — в течение нескольких минут, в то время как протеолиз наиболее широко применяемых субстратов, таких как (азо)казеин, гемоглобин, альбумин, протамин и гистоны, осуществляется медленно, в течение нескольких часов [5, 39, 77, 80]. Кроме того, нами разработан метод определения стрептокиназы по ее функциональной активности. Метод характеризуется простотой исполнения и является строго количественным. С помощью предложенного нами метода можно исследовать протеолиз стрептокиназы и под действием других ферментов, а также изучать процесс катаболизма и других активаторов плазминогена.

Показать весь текст

Список литературы

  1. А. В., Галоян А. А. Катепсин В головного мозга как дипептидилкарбоксипептпдаза, превращающая провазопрессорные, проопиоидные и модельные пептиды // Вопр. мед. химии. — 1987. — Т. 33, вып. 5.-С. 78−81.
  2. Р. Б., Житкова Ю. В., Федоренко Я. Э., Казанская Н. Ф. Каталитические свойства плазмина и эквимолярного комплекса плазмин стрептокиназа в реакциях с различными субстратами и ингибиторами // Укр. биох. журн. — 1991.- т. 63, № 1. — С. 13−20.
  3. Активация ключевых проферментов системы свертывания крови Е — фрагментом фибрина / Платонова Т. М., Сломинский О. И., Черниченко Т. М. и др. // Укр. биох. журн. 2002. — т. 74, № 2. — С. 25 -29.
  4. Г. В. Регуляция фибринолиза в экспериментальных услових В сб: Стрептокиназа и другие протеолитические ферменты (Биосинтез, очистка, экспериментальные и клинические испытания) -Минск.-1979.-С. 10−26.
  5. А. Д., Хит М. Ф. Лизосомальные ферменты В кн.: Лизосомы. Методы исследования. — М.: Мир. — 1980. — С. 25 — 156.
  6. И. И. Белки системы гемостаза — В кн.: Белки и пептиды: В 2 т. отв. ред. Иванов В. Т., Липкин В. М. — М.: Наука. — 1995. — Т. 1. — С. 397−419.
  7. В. А. Домены крупные, функционально важные блоки молекул фибрина // Биох. человека и животных. — 1982. — № 6. -С. 38 — 57.
  8. Т. Т. Применение ферментов в медицине // Соросовский образовательный журнал 1996. — № 3. — С. 23 — 27.
  9. А. Ш., Мухачева И. А., Терсенов О. А., Кинетика активации протромбина фактором Ха // Укр. биох. журн. — 1981. -т. 53, № 4.- С. 30−34.
  10. Бышевский A. ILL, Галян С. JI. Витамин К зависимые белки системы свертывания крови // Успехи соврем, биол. — 1983. — № 2. — С. 272 -280.
  11. Бышевский A .ILL, Терсенов О. А., Галян С. JL, Чирятьев Е. А., Левен П. И. Биохимические компоненты свертывания крови // Свердловск: Из-во Урал. Ун-та, 1990. 212 с.
  12. Л. В. Регуляция и саморегуляция альтернативного пути активации комплемента: Автофер. дисс. докт. мед. наук. СПб. — 1996. -31 с.
  13. Л. В., Щербак И. Г., Бельтюков П. ., Рюмина Е. В. Строение и свойства протеиназ системы комплемента // Укр. биохим. журнал 1990. — Т 62. — № 6. — С. 5 — 15.
  14. В. Ф. Офтальмология: Энзимотерапия и экстракорпоральная гемокоррекция. Руководство для врачей СПб.: Гуманистик. -2002.-310 с.
  15. М., Уэбб Э. Ферменты М.: Мир. — 1982. — 118 с.
  16. Э.А. Цистеиновые протеиназы при неопластической трансформации // Вопр. мед. химии. 2001. — Т. 47, вып. 1. — С. 490 491.
  17. Дин Р. Процессы распада в клетке. М.: Мир, 1981. — 120 с.
  18. В. В. Влияние некоторых факторов на функциональную активность первого компонента комплемента человека: Авторефер. дисс. канд. мед. наук. СПб. — 1992. — 19 с.
  19. В. В. Белок белковые взаимодействия альфа — 2 — макроглобулина человека и их функциональные последствия: Авторефер. дисс. докт. мед. наук.- С.П. — 2000. — 34 с.
  20. JI. С., Козырева Е А., Басалык К. И. и др. Прогностическое значение определения активности катепсина В в злокачественных опухолях яичников // Вопр. мед. химии. 1994. — Т. 40, № 1. — С. 25 -27.
  21. Кинины и сердечно-сосудистая система / Медведев М. А., Киселев В. И., Панченко A. JI и др.//Новосибирск. Наука.- 1992. — 190 с.
  22. JI. Н., Гидранович Л. Г., Шиленок В. Н. Активность протеолитических процессов при заболеваниях щитовидной железы / Вопр. мед. хим. 2000. — 46, вып. 5 — с. 518−519.
  23. JI. В., Соляков JT. С. Получения из сыворотки крови человека факторов В и D альтернативного пути активации комплемента // Биоорганическая химия. 1982. — т.8, № 3. — с. 342 — 348.
  24. JI. В. Белки системы комплемента. В кн.: Белки и пептиды: В 2 т. отв. ред. Иванов В. Т., Липкин В. М. М.: Наука. — 1995. — Т.1. — С. 385 — 396.
  25. Концентрационно функциональные взаимодействия в альтернативном пути активации комплемента / Галебская Л. В. и др. // Биохимия. — 1993.-т.5, вып. 11. — С. 1796- 1800.
  26. Т. А. Катаболизм белка в лизосомах Новосибирск: «Наука».-1990.- 189 С.
  27. Т. И., Соколовская Л. Т., Прусская В. В., Кудинова С. А. Турбидиметрический экспресс микрометод одновременной оценки параметров свертывания и фибринолиза в плазме крови // Укр. биох. журн. — 1993. — т. 65, № 2. — С. 23 — 30.
  28. Л. А., Гуреева Т. А., Лубкова О. Н., Орехович В. Н. Характеристика двух активных в нейтральной среде тиоловых протеиназ селезенки // Биохимия. 1982. — Т. 47, № 6. — С. 1299 -1307.
  29. Л. А. Протеолитические ферменты в процессах онкогенеза // Вопр. мед. хим. 1991.-Т. 37, № 6.-С. 15−21.
  30. В. Г. Диагностика и лечение диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови -М.: Медицина. 1993. — 160 с.
  31. Е. М. Трехмерная модель молекулы фибрин(оген)а и фибриновых фибрилл // Укр. биох. журн. 1997. — т. 69, № 5 — С. 2432.
  32. А. В., Тищенко Е. Г. Комбинированный тромболизис — новое направление исследования активаторов плазминогена третьего поколения // Вопр. биол. мед. и фарм. химии. 2000. — № 1. — С. 6 — 10.
  33. Н. Н., Панин Л. Е., Николаев Ю. А. и др. Некоторые механизмы вовлечения лизосом в процессы тканевого повреждения // Вопр. мед. хим. 1990. — Т. 36, № 6. — С. 5 — 8.
  34. Л.В. Структурная организация молекулы фибриногена // Укр. биох. журн. 1985. — т. 57, № 5. — С. 36−49.
  35. JI. В., Новохатний В. В., Привалов П. Л. Получение и исследование структурной организации D фрагмента молекулы фибриногена // Молек. биол. — 1982. — вып. 6. — С. 1195 — 1202.
  36. В. В. Белки ингибиторы протеолитических ферментов. — В кн.: Белки и пептиды: В 2 т. отв. ред. Иванов В. Т., Липкин В. М. — М.: Наука. — 1995. -Т. 1. — С. 170 — 182.
  37. В. Н. Значение исследований структурно-каталитической специфики стрептокиназы для технологии получения ее препаратов. В сб: Стрептокиназа в регуляции свертывающей и противосвертывающей систем крови. Минск. — 1985. —С. 43 -58.
  38. В. Н. Структурная организация молекулы стрептокиназы // Биоорг. химия. 1993. — С. 169 — 179.
  39. Н. Н. Протеолитическое действие катепсина В на гистоны тимуса теленка: Авторефер. дисс. канд. биол. наук.- Л. 1986. — 22 с.
  40. Л. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: «Наука» 1985. — 536 с.
  41. Л. Е., Маянская Н. Н. Лизосомы: роль в адаптации и восстановлении — Новосибирск: «Наука».- 1987.-73 с.
  42. Е. Н. Тромболитические средства // Клиническая фармакология и терапия. 1998. — Т. 7, № 1.
  43. И. Ю., Айсина Р. Б., Мухаметова Л. И., Варфоломеев С. Д. Кинетические свойства активаторных комплексов плазмин -стафилокиназа и плазмин(оген) стрептокиназа in vitro // Биохимия. — 1999. -Т. 64, вып. 1 — С. 83 — 93.
  44. Симкина Н Б. Многообразие проявлений антипротеолитического действия С1-ингибитора в системе комплемента: Авторефер. дисс. канд. мед. наук.- СПб. 2001. — 19 с.
  45. Р. Методы очистки белков М.: «Мир». — 1985. — 358 с.
  46. JI. С., Козлов JI. В. Эффективный метод одновременного получения из сыворотки крови человека высокоочищенных факторов В и D альтернативного пути активации комплемента // Биоорганическая химия. 1983. — Т.9, N 4. — С. 462 — 469.
  47. Способ получения микробного ингибитора протеолитического фермента террилитина / Кашкин А. П., Стати JI. Б., Дмитриева Г. В. и др. А.С. 777 058 СССР. — Опубл. 07.11.80. С12Д 13/00 — Бюл.№ 41.
  48. С. М. Тромбин регулятор процессов воспаления и репарации тканей // Биохимия.— 2001. — т. 66, вып. 1.- С.14−27.
  49. В. А., Гуткин Д. В., Васильев А. В. Современные представления о биогенезе лизосомальных белков в норме и при паталогии // Вопр. мед. химии. — 1992. Т. 38, вып.25. — С. 4 — 13.
  50. Фибринолиз. Современные фундаментальные и клинические концепции. Под. ред. П. Дж. Гаффни, С. Балкув Улютина. — М., Медицина. — 1982. — 240 с.
  51. . Д., Прокопьев А. А., Кинетический метод количественного определения комплемента // Иммунология. 1986. -№ 3. — С. 66 — 69.
  52. Ю. Н., Надежкина А. В., Северин С. Е. Тромбин: биологическое значение и пути регуляции активности // Вопр. биол. мед. и фарм. химии. 2000. — № 3. — с. 3 — 14.
  53. И. Г., Жлоба, А .А. Активация катепсина В восстановленными формами пиридиннуклеотидов и тиоловыми соединениями -Биохимия. 1979.- Т. 44, № 12.- С. 2218−2226.
  54. И. Г., Никандров Н. Н., Фаенкова В. П., Кирпиченок JI. Н. Исследование продуктов протеолитического действия катепсина В на некоторые белковые субстраты // Вопр. мед. химии. — 1987. — Т. 33, вып. 5. С. 115−119.
  55. И. Г. Протеолитический каскад каскад порогов // Ученые записки: Изд. СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова. — 1997. — Т.4, № 1. — С. 43 — 50.
  56. А. И., Толстых П. И., Дадашев А. И., Марщава О. М. Местная пролонгированная энзимотерапия гнойных // Хирургия. -1992.-№ 7.-С.48 -50.
  57. Э. П. Ферментные препараты в клинической практике // Клинич. фармакология и терапия. 1998. — Т. 1 — С. 17−20.
  58. Г. А. Калликреин кининовая система: новые факты и концепции //Вопр. мед. химии. —2001. — Т. 47, вып.1. — С. 20 — 42.
  59. A new purification procedure of human kidney cathepsin H, its properties and kinetic data / Popovic Т., Brzin J., Kos J., et al. // Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1988.-V. 369.- P. 175−183.
  60. A selective inhibitor of cathepsin В in vivo / Towatari T. et al. // FEBS Lett. 1991.-V. 280.- P. 311 -315.
  61. Abrahamson M, Alvarez-Fernandez M, Nathanson С. M. Cystatins // Biochem Soc Symp. 2003. — V. 70. — P. 179−199.
  62. Action of cathepsin L on oxidized В chain of bovine insulin /KargelH. J., Dettmer R., Etzold G. et al. // FEBS Lett. — 1980. — V. 114, N2. — P. 257 — 260.
  63. Action of human liver cathepsin В on the oxidized insulin В chain / Mc Kay M. J., Offermann M. K., Barrett A. J., Bond J. S. // Biochem. J. -1983. V. 213, N2. — P. 567 — 571.
  64. Al Jassabi S. Purification and characterization of cathepsin L from skeletal muscle of the lizard Agama stellio stellio // Biochemistry. — 2000.- V. 65, N 8. P. 959 — 962.
  65. Alvin E., Davis A. E. CI inhibitor and hereditary angioneurotic edema // Ann. Rev. Immunol. 1988. — V.6. — P. 595 — 628.
  66. Amino acid sequens of human D of the alternative complement pathway / Niemann M. A., Brown A. S., Bennett J. S. et al. // Biochemistry. 1984.- V. 23, № 1. P. 2482−2486.
  67. Amino acid sequens of the human kidney cathepsin H and L / Ritonja A., Popovic Т., Kotnik M. et al. // FEBS Lett. 1988. — V. 228. — P. 341 -345.
  68. Arlaud G. J., Reboul A., Meyer C., Colomb M. G. Purification of proenzymic and activated human Cls free of Clr. Effects of calcium and ionic strength on activated Cls // Biochim. Biophis. Acta. 1977. — V. 485, № 1. -P. 215 -226.
  69. Arlaud G. J., Sim R. В., Duplaa A., Colomb M. G. Differential elution of Clq, Clr and Cls from human CI bound to immuno aggregates // Mol. Immunol. 1979. — V. 16, № 7. — P. 445−450.
  70. Aronson N. N., Barrett A. J. The srecifity of cathepsin В // Biochem. J. -1978.-V. 171.- P. 759−765.
  71. Astrup T. S. Arch. Biohem. Biophys. — 1952. — V. 40, № 2. — P. 345−351.
  72. Azaryan A, Barkhudaryan N, Galoyan A. Some properties of human and bovine brain cathepsin В // Neurochem Res. 1985. — V. 10. — P. 1511 -1524.
  73. Azaryan A, Galoyan A. Human and bovine brain cathepsin L and cathepsin H: purification, physico-chemical properties, and specificity // Neurochem Res.- 1987. -V.12, N2.- P. 207−213.
  74. Baici A., Gyger Marazzi M. The slow, tight-binding inhibition of cathepsin В by leupeptin // Eur. J. Biol. Chem. — 1982. — V. 129, № 1. -P. 33−41.
  75. Bansal R. In vitro conversion proinsulin to insulin by cathepsin В antibodies // Acta diabetol. Lat. 1980. — V. 17, N 3 — 4. — P. 255 — 256.
  76. Barrett A. J. Human cathepsin Bl. Purification and some properties of the enzyme // Biochem J. 1973. — V. 131, N4.- P. 809 — 822.
  77. Barrett A. J. Cathepsin В and other thiol proteinase In: Proteinases in mammalian cells and tissues — Amsterdam — Elsevier. North — Holland Biochemical Press. — 1977. — P. 181 -208.
  78. Barrett A. J. Protein degradation in health and disease. Introduction: the classification of proteinases // Ciba. Found. Symp. 1979. — V. 75. — P. 1 -13.
  79. Barrett A. J. Fluorimetic assays for cathepsin В and cathepsin H with methil-coumarylamide substrates // Biochem. J. 1980. — V. 187, № 3. -P. 909−912.
  80. Barrett A. J., Kirschke H. Cathepsin B, cathepsin H and cathepsin L // Meth. Enzymol. -1981. -V. 80.- P. 535 -561.
  81. Barrett A. J. The cystatins: A diverse superfamily of cysteine peptidase inhibitors // Biomed. Biochem. Acta. 1986. — V. 45, № 11 — 12. — 1363 -1374.
  82. Bell W. R. Therapeutic agents pharmacokinetics and pharmacodynamics // Rev. Cardiovasc. Med. — 2002. — V. 3, Suppl 2. — P. 34 — 44.
  83. Bedi G. S, Balwierczak J., Back N. Rodent kinin forming enzyme systems — I. Purification and characterization of plasma kininogen // Biochem. Pharmacol. — 1983. — V. 32. -P. 2061 — 2069.
  84. Biochemical properties and intracellular processing of lysosomal cathepsins В and H / Nishimura Y., Tsuji H., Kato K. et al. // Biol Pharm. Bull.-1995.-V. 6. P. 829 — 836.
  85. Bode W., Huber R. Natural protein proteinase inhibitors and their interaction with proteinases // Europ. J. Biochem. — 1992. V. 204, № 2. -P. 433 -415.
  86. Bretz U., Dewald В., Ruch W. Cellular mechanisms of proteinases release from inflammatory cells and the degradation of extracellular proteins In: Protein degradation in Health and Disease. Amsterdam — 1980. — P. 105 -121.
  87. Bock S. C., Skriver K., Nielsen E., Thogersen H.C. et al. Human CI inhibitor: primary structure, cDNA cloning, and chromosomal ocalization // Biochemistry. 1986. — V. 25. — P. 4292 — 4301.
  88. Brower M. S., Harpel P. C. Proteolytic cleavage and inactivation of 2-plasmin inhibitor and CI inactivator by human polymorphonuclear leukocyte elastase // J. Biol. Chem. 1982. — V. 257. — P. 9849 — 9854.
  89. Burleigh M. C., Barrett A. J., Lazarus G. S. Cathepsin Bl. A lysosomal enzyme that degrades native collagen // Biochem J. 1974. — V. 137.1. P. 387−398.
  90. Carbohydrate composition of the second, third and fitht components and factors В and D of human complement / Towana M., Niemann M. A., Garner G. et al. // Mol. Immunol. 1985. — V. 22, № 2.-P. 107−111.
  91. Carrell R. W., Boswell D. R. Serpins: the superfamily of serine protease inhibitors // Proteinase Inhibitors. 1986. — P. 403 -420.
  92. Catabolitic properties of aglycofibrinogen synthesized by tunicamycin-treated human hepatoma (HepG2) cells and rabbit hepatocytes / Barsigian C., Gilman P., Base W. et al. // Biochim. Biophis. Acta. 1986. — V. 833, № 1. — P. 552−558.
  93. Catanese J., Kress L. F. Enzymatic inactivation of human plasma CI -inhibitor and 1 antichimotrypsin by Pseudomonas aeroginosa proteinase and elastase // Biochem. Biophys. Acta. — 1984.- V. 789. — P. 37−43.
  94. Cathepsin В and L in sinovial fluids from patients with rheumatoid arthritis and the effect of cathepsin В on the activation of pro — urokinase / Ikeda Y., Ikata M., Mihiro T. et al. // J. Med. Invest. 2000. — V.47.-P. 61 -75.
  95. Cathepsin В indicator for the release of lysosomal cysteine proteinases in severe trauma and inflammation / Assfalg — Machleidt I., Jochum M., Nast — Kolb D. et al. // Biol Chem Hoppe Seyler. — 1990. — V. 371, Suppl. — P. 211 -222.
  96. Cathepsin H: an endoaminopeptidase from rat liver lysosomes / Kirschke H., Langner J., Wiederanders B. // Acta. Biol. Med. Ger. 1977. — V. 36. -P. 185−199.
  97. Cathepsin L. A new proteinase from rat-liver lysosomes / Kirschke H., Langner J., Wiederanders B. et al. // Eur. J. Biochem. 1977. — V. 74. P. 293−301.
  98. Chimerism reveals a role for the streptokinase Beta domain in nonproteolytic active site formation, substrate, and inhibitor interactions / Gladysheva I. P, Sazonova I. Y, Chowdhry S. A, et al // J. Biol. Chem. -2002.-V. 277.- P. 26 846−26 851.
  99. Characterization of porcine plasma fibronectin and its fragmentation by porcine liver cathepsin В / Isemura M., Yosizawa Z., Takahashi K. et al. // J. Biochem. 1981. — V. 90, № 1. — P. 1 — 9.
  100. Cicardi M., Mannucci P. M., Castelli R., Rumi M. G., Agostoni A. Reduction in transmission of hepatitis С after the introduction of a heat-treatment step in the production of CI inhibitor concentrate // Transfusion.- 1995.- V.35,N.3.- P.209−212.
  101. Complement actuvation by the alternative pathway is modifld in renal failure: the role of D / Pascual M., Paccaud J. P., Macon K. et al. // Clin. Nephrol.- 1989.-V. 32, № 4.-P. 185 193.
  102. Concentrations of lysosomal cysteine proteases are decreased in renal cell carcinoma compared with normal kidney / Kirschke H., Clausen Т., Gohring B. D., et al. // J. Cancer. Res. Clin. Oncol. 1998. — V. 124. P. 60−61.
  103. Cristal structure of the Catalitic Domain of Human Plasmin Complexed with Streptokinase / Wang X., Lin X., Loy J. A. et al. // Science. 1998. — V. 281. — P. 1662 — 1665.
  104. Cysteine Proteinases and Inhibitors. / Machleidt W., Machleidt J., Muller-Esterl W. et al. In: Proc. Int. Symp., Portoroz, Sept. 15 — 18, 1985. Berlin- New York. — 1986. — p. 705 — 717.
  105. Degradation of exracellular-matrix proteins by cathepsin В from normal and tumour tissues / Buck M. R., Karustis D. G., Day N. A. et al. // Biochem J. 1992. — V. 282. — P. 273 — 278.
  106. Determination of cathepsin В and H in sera and synovial fluids of patients with diffent joint diseases / Gabrijelcic D., Annan-Pran A., Rodic B. et al. // J .Clin. Chem. and Clin. Biochem. 1990. — V. 28, № 3. -P. 149- 153.
  107. Domain interactions between streptokinase and human plasminogen.1.y J. A, LinX, Schenone M., et al. // Biochemistry. 2001. — V. 40. — P. 14 686−14 695.
  108. L. E., Glaumann H. // Plasma protein secreted by the liver London.- N. — Y.: Acad. Press. — 1983. — P. 55 — 94.
  109. Etherington D. J. Bovine spleen cathepsin B1 and collagenolytic cathepsin. A comparative study of the properties of the two enzymes in the degradation of native collagen // Biochem J. 1976. — V. 153, N. 2. — P. 199 209.
  110. Evans P., Etherington D. J. Characterisation of cathepsin В and collagenolytic cathepsin from human placenta // Eur. J. Biochem. 1978. — V. 83, N. 1. — P. 87 — 97.
  111. Evidence for the interaction of valine — 10 in cystatin С with the S2 subsite of cathepsin В / Lindahl P., Ripoll D., Abrahamson M. et al. // Biochemistry. 1994. — V. 33, № 14. — P. 4384 — 4392.
  112. Faktor D in the alternative pathway of complement activation, physicochemical characterization and functional role / Dierich M.P., Hadding U., Konig W. et al. // Immunochemistry. -1974. V. 11. — № 9. -P. 527 — 532.
  113. Fuchs R., Machleidt W., Gassen H.G. Molecular cloning and secuencing of cDNA coding for mature human kidney cathepsin H // Biol. Chem. Hoppe Seyler. — 1988. — V. 369. — P. 469 — 475.
  114. Function of streptokinase fragments in plasminogen activation / Shi G.Y., Chang В. I., Chen S. M. et al. // Biochem. J. 1994. — V. 304. — P. 235−241.
  115. Gabrijelcic D., Gollwitzer R., Popovic Т., Turk V. Proteolitic cleavage of human fibrinogen by cathepsin В // Biol. Chem. Hoppe -Seyler 1988. — V. 369. — P. 287 — 292.
  116. Gray R. J. Texas Heart Institute Journal. — 1996. — V. 23. — p. 36 -41.
  117. Generation of matrix-degrading proteolytic system from fibronectin by cathepsins B, G, H, L / Blondeau X., Lambert V. S., Emod I. et al. // BioI.Chem. Hoppe-Seyler. 1993. — 374, № 8. — P. 651 — 656.
  118. Hager К., Nenfanger S., Vogle Т., Piatt D. Age-dependency of the fibrinolytic system // Blut. 1990. — V. 60. — N. 2. — P. 115 — 120.
  119. Hanada K.} Tamai M., Adachi T. et al. // Proteinase inhibitors: Medical and biological aspects Tokyo: Japan Sci. Soc. Press- Berlin: Springer — Verlag. — 1983. — P. 25−36.
  120. Нага K., Kominami E., Katunuma N. Effect of proteinase inhibitors on intracellular processing of cathepsin В, H and L in rat macrophages // FEBS Lett. 1988. — V. 231. — P. 229 — 231.
  121. Harpel P.C., Cooper N.R., Studies on human plasma Cl-inactivator-enzyme interactions. 1. Mechanisms of interaction with С Is, plasmin and trypsin // J. Clin. Invest. 1975. — V. 55. — P. 593 — 604.
  122. Hashida S., Towatari Т., Kominami E., Katanuma N. Inhibition by E-64 derivatives of rat liver cathepsin В and cathepsin L in vitro and in vivo // J. Biochem. 1980. — V. 88, N. 6. — P. 1805- 1811.
  123. Hill R. E., Shaw P. H., Boyd P. A., Baumann H., Hastie N. D. Plasma protease inhibitors: divergence within the reactive centre region // Nature. -1984.- V.311.-P. 175- 177.
  124. Hu L.-Y., Abeles R. H. Inhibition of cathepsin В and papain by peptidyl a ketoeters, a keto amides, a — diketones, and a — ketoacid // Arch. Biochem. and Biophys. — 1990. — V. 281, № 2. — P. 271 — 274.
  125. Human cisteine proteinases and their protein inhibitors stefms, cystatins and kininogens / Turk V., Brzin G., Kotnik M. et al. // Biomed. Biochem. Acta. — 1986. -V.45,№ 11−12. -P. 1375- 1384.
  126. Jackson K.W., Tang J. Complete Amino Acid Sequence of Streptokinase and Its Homology with Serine Proteases // Biochemistry. -1982. V. 21, N26. — P. 6620 — 6625.
  127. Jarvinen M., Hopsu Havu V. K. Alpha — N — benzoylarginine — 2 -naphthylamide hydrolase (cathepsin Bl?) from rat skin. I. Preliminary experiments with skin extract // Acta Chem. Scand. B. — 1975. — V. 29, N. 6. P. 671 -676.
  128. Jonson D. M. A., Gagnon J., Reid К. В. M. Amino acid sequence of human factor D of the complement system, similarity in sequence between factor D and proteases of nonplasma origin // FEBS Lett. 1984. — V. 116, № 2. — P. 347−351.
  129. Jonson D. M. A., Gagnon J., Reid К. В. M. Factor D in the alternative patway of human complement, purification, aligment and N -terminal acid sequences of the serine residue at active site // Biochem. J. -1980. V. 187, № 3. — P. 863 — 874.
  130. Kaplan A. P., Joseph K., Shibayama Y. et. al. Bradykinin formation // Clin. Rev. Aller. Immunol. 1998. — V. 16. — P. 403 — 429.
  131. K., Fujita T. // Biochim. Biophys. Acta. 1974. — V. 336, № 2. — P. 191−200.
  132. Kim D. M., Lee S. J., Yoon S. K., Byun S. M. Specificity role of the streptokinase С terminal domain in plasminogen activation // Biochem. Biophys. Res Commun. — 2002. — V. 290, N 1. — P. 585−588.
  133. Kim S., Narajana S.V. L., Volanakis J.E. Mutational analysis of the substrate binding site of human complement factor D // Biochemistry. -1994.-V. 33, № 48.-P. 14 393 14 399.
  134. Kim S., Narajana S.V.L., Volanakis J.E. Catalytic role of a surface loop the complement serine protease factor D // J. Immunol. 1995. — V. 154, № 11.-P. 6073−6079.
  135. Kinetic study of the interaction between rat haptoglobin and rat liver cathepsin В / Pagano H., Engler R., Gelin M. et al. // Can. J. Biochem. -1980.-V. 58, N5.-P. 410−417.
  136. Kininogens as thiol proteinase inhibitors / Sasaki M., Ohkubo I., Hidashiyama S. et al. In: Cysteine Proteinases and Inhibitors. Proc. Int. Symp., Portoroz, Sept. 15 — 18, 1985. Berlin- New York. — 1986. — p. 393 -412.
  137. Kirschfink M., Nurnberger W. CI inhibitor in anti inflammatory therapy: from animal experiment to clinical application // Molecular Immunology. — 1999. — V. 36, N. 4 — 5. — P. 225 — 232.
  138. Kirschke H. Lysosomal cysteine peptidases and malignant tumours // Adv. Exp. Med. Biol. 1997. — V. 421. — P. 253 — 257.
  139. Kirschke H, Schmidt I, Wiederanders B. Cathepsin S. The cysteine proteinase from bovine lymphoid tissue is distinct from cathepsin L (EC 3.4.22.15) // Biochem. J. 1986. -V. 240, N. 2. — P. 455−459.
  140. KooistraT., Duursma A. M., Bouma J. M. W., Gruber M. // Biochim. Biophys. Acta. 1980.-V.631, № 3.-P. 439−450.
  141. Kress L. F., Catanese J., Hirayama T. Analysis of the effects of snake venom proteinases on the activity of human plasma CI esterase inhibitor, 1-antichymotrypsin, and 2 antiplasmin // Biochim. Biophys. Acta. — 1983. -V. 745.-P. 113−120.
  142. Lisosomal cysteine proteinases / Kirschke H., Langner J., Rieman S. et al. In: Protein degradation in Health and Disease. Amsterdam, 1980. -P. 73 — 93.
  143. Localization of cysteine proteinases and an endogenous cysteine proteinase inhibitor in cultured muscle cells / Bird J. W., Wood L., Sohar I., et al. // Biochem. Soc. Trans. 1985. — V. 13, N6.-P. 1018−1021.
  144. Maack Т., Johnson V., Kau S. et al. // Kidney Int. 1979. -V. 16, № 3.-P. 251 -270.
  145. Mason R. W., Green G. D., Barrett A. J. Human liver cathepsin L // Biochem. J. 1985. — V. 226, N 1. — P. 233 — 241.
  146. Membrane permeable fluorogenic rhodamine substrates for selective determination of cathepsin L / Assfalg Machleidt I., Rothe G., Klingel S. et al. // Biol. Chem. Hoppe — Seyler. — 1992. — V. 373, N 7. — P. 433 -440.
  147. Molecular cloning of human с DNA for cathepsin K: novel cysteine proteinase predominantly expressed in bone / Ionaka Т., Bilbe G., Ishibashi O. et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1995.- V. 206. -P. 89−96.
  148. Lepow I. H., Ratnoff O. D., Levy L. R. Studies on the activation of a proesterase associated with partially purified first component of human complement // J. Exp. Med. 1958. — V. 107. — P. 451 — 474.
  149. Lowry J. H., Rosebrough N. J., Farr., Randell R. J. Protein measuriment with the Folin reagent // J. Biol. Chem. 1951. — V. 193. — N. 1.- P. 265−275.
  150. MacGregor R. R., Hamilton J. W., Shofstall R. E., Gohn D. V. Isolation and characterization of porcine parathyroid cathepsin В // J. Biol. Chem. 1979a. — V. 254, № 11. — P. 4423 — 4427.
  151. Medicus R., Chapius R. The physiological mechanism of CI -activation // Hoppe Seyler’s Z. Physiol. Chem. — 1981. — V. 362, N. 1. — P. 30−35.
  152. Nishimura Y., Kawabata Т., Yano S., Kato K. Intracellular processinh and activation of lysosomal cathepsins In.: Soc. Histochem. and Citochem. — Kyoto. — 1989. — P. 53 — 64.
  153. Novel physiological functions of cathepsins В and L on antigen processing and osteoclastic bone resorption / Katunuma N., Matsunaga Y., Matsui A. et al. // Adv. Enzyme. Regul. 1998. — V. 38. — P. 235 — 251.
  154. Nurnberger W., Heying R., Burdach S., Gobel U. CI esterase inhibitor concentrate for capillary leakage syndrome following bone marrow transplantation // Ann. Hematol. 1997. — V. 75. — N 3. — P. 95 -101.
  155. Okada К., Ueshima S., Fukao H., Matsuo O. Analysis of complex formation between plasmin (ogen) and staphylokinase or streptokinase // Arch. Biochem. Biophys. 2001. — V. 393, N. 2. — P. 339 — 341.
  156. Okitani A., Matsukura U., Kato H. Purification and some properties of a myofibrillar protein degrading protease, cathepsin L, from rabbit skeletal muscle // J. Biochem. — 1980. — V. 87, N 4. — P. 1133 — 1143.
  157. Otto K, Riesenkonig H. Improved purification of cathepsin B1 and cathepsin B2 // Biochim. Biophys. Acta. 1975. — V. 379, N 2. — P. 462 -475.
  158. Patston P. A, Hauert J., Michaud M., Schapira M. Formation and properties of CI inhibitor polymers // FEBS Lett. — 1995. — V. 368, N. 3. -P. 401 -404.
  159. Pensky J., Levy L. R., Lepow I. H. Partial purification of a serum inhibitor of CI esterase // J. Biol. Chemistry. — 1961. — V. 236, N 6. — P. 1674- 1679.
  160. Pike R. N., Coetzer Т. H, Dennison C. Proteolytically active complexes of cathepsin L and a cysteine proteinase inhibitor- purification and demonstration of their formation in vitro // Arch. Biochem. Biophys. -1992. V. 294, N. 2. — P. 623 — 629.
  161. Popovic Т., Puizdar V., Ritonja A., Brzin J. Simultaneous isolation of human kidney cathepsins В, H, L and С and their characterisation // J. Chromatogr. Biomed. Appl. 1996. — V. 681, N. 2. — P. 251 — 262.
  162. Porter R. R. The proteolytic enzymes of complement system // Meth. Enzymol. 1981. — V. 80. — P. 3 — 5.
  163. Prandini M. H., Reboul A., Colomb М. G. Biosynthesis of complement CI inhibitor by HepG2 cells. Reactivity of different glycosylated forms of the inhibitor with Cls // Biochem. J. 1986. — V. 237. — P. 93 — 98.
  164. Preparation of novel streptokinase mutant with improved stability / Shi G. Y., Chang В. I., Su S. W. et al. // Thromb. Haemost. 1998. — V. 79, N 5. — P. 990 — 997.
  165. Protease Inhibitors / Barrett A. J., Rawlings N. D., Davies M. E. et al. // Elsever Science Publicher BV (Biomedical Division). 1986. — P. 515 -560.
  166. Proteolytic activity of human osteoklast cathepsin K. Expressio, purification, activation and substrate indefication / Bossard M. J., Tomaszek T. A., Thompson S. K. et al. // J. Biol. Chem. 1996. — V. 271.- P. 12 517- 12 524.
  167. Purification and some properties of cathepsin В from rabbit skeletal muscle / Okitani A., Matsuishi M., Matsumoto T. et al. // Eur. J. Biochem.- 1988.-V. 171, N. 1−2.-P. 377−381.
  168. Putter J., Otto K. Inaktivierung der L Asparaginase durch Kathepsin // Arzneimittel — Forch. — 1972.- V.22,№ 10.-S. 1743−1746.
  169. Quantification of complement factor D in human cerum by a solid-fase radioimmunoassay / Barnum S. R., Niemann M. A., Kearney J. F. et al // J. Immunol. 1984. — V. 67, № 2. — P. 303 — 309.
  170. Quinn P. S., Judach J. B. Calcium dependet Golgi — vesicle fusion and cathepsin В in the conversion of proalbumin to albumin in rat liver // Biochem. J. — 1978. — V. 172. — P. 301 — 309.
  171. Rawlings N. D., Barret A. J. Evolutionary families of peptidases // Biochem. J. 1993.- V. 290. -P. 205 — 218.
  172. Reboul A., Arlaud G. J., Sim R. В., Colomb M. G. A simplified procedure for the purification of CI inactivator from human plasma. Interaction with complement subcomponents Clr and Cls // FEBS Lett. -1977.-V. 79.-P. 45−50.
  173. Reboul A., Prandini M., Bensa J., Colomb M. G. Characterisation of Clq, Cls and CI inhibitor synthesized by stimulated human monocytes in vitro // FEBS Lett. 1985. — V. 190. N 1. — P. 65 — 68.
  174. Reed G. L., Lin L. F., Parhami Seven В., Kussie P. Identification of a Plasminogen Binding Region in Streptokinase — Plasminogen Activator Complex //Biochemistry.- 1995.-34.-P. 10 266- 10 271.
  175. К. В. M., Porter R. R. The protheolytic activation systems of complement // Annu. Rev. Biochem. 1981. — V. 50. — P. 433 — 464.
  176. Salvatierra A., Velasco F. CI esterase inhibitor prevents early pulmonary dysfunction after lung transplantation in the dog // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. — 1997. — V. 155, N. 3. — P. 1147 — 1154.
  177. Sawicki G., Warwas M. Cathepsin H from human placenta I I Acta. Biochim.- 1989. V. 36, № 3 — 4. -P. 343 -351.
  178. M. Т., Kirschke H. Degradation of proteoglicans by cathepsin L and H In: Proteinases and their Inhibitors: Regul Cell. Metabol. — Rabko, Yugoslavia — 1990. — № 19. — P. 117 — 126.
  179. Schnellman O. A studi of the reaciviti of the thiol group of cathepsin B. In: Tissue Proteinases. — Amsterdam.- London.- N — Y.- North — Holland Publishing Company // American Elsevier Publishing Co. Inc. — 1971. — P. 29 — 44.
  180. Schwartz W. N, Barrett A. J. Human cathepsin H // Biochem. J. -1980. V. 191, N 2. — P. 487 — 497.
  181. Shaw E., Kettner C. The specifity of cathepsin В // Acta. Biol. Med. Germ. — 1981. V. 40, № 10−11.- P. 1503 — 1511.
  182. Sloane B. F. Cathepsin В and cystatins: evidence for a role in cancer progression //Semin. Cancer. Biol. 1990.-V. 1, № 2. -P. 137- 152.
  183. Sloane B. F., Honn К. V. Cysteine proteinases and metastasis // Cancer and Metastasis Rev. 1984. — V. 3, № 3. — P. 249 — 263.
  184. Sloane B. F., Moin K., Krepela E., Rozhin J. Cathepsin В and its endogenous inhibitors: the role in tumor malignancy // Cancer and Metastasis Rev. 1990. — V. 9, № 4. p. 333. 352.
  185. Study of the functional share of lysosomal cathepsins by the development of specific inhibitors / Katunuma N., Matsui A., Kakegawa T. et al. // Adv. Enzyme. Regul. 1999. — V. 39. — P. 247 — 260.
  186. Sturfelt G. Complement factor D concentration in normal sera: comparition of inmmunochemical and functional determinatiuon // Acta Pathol. Microbiol. Immunol. Scand. 1983. — V. 91, № 6. — P. 383 — 384.
  187. Takahashi K., Isemura M., Ikenaka T. Isolation and characterization of three forms of cathepsin В from porcine liver // J. Biochem. 1979. — V. 85, N 4. — P. 1053 — 1060.
  188. Takahashi S., Murakami K., Miyake Y. Purification and characterization or porcine kidney cathepsin В // J. Biochem. 1981. — V. 90, N. 6. — P. 1677 — 1684.
  189. Takahashi Т., Yonezawa S., Dehdarani A. H., Tang J. Comparative studies of two cathepsin В isozymes from porcine spleen. Isolation, polypeptide chain arrangements, and enzyme specificity // J. Biol. Chem. -1986. V. 261, N. 20. — P. 9368 — 9374.
  190. The alternative patway C3 / C5 convertase: chemical basis of factor В activation / Lesavre P. H., Hugli Т. E., Esser A. F. et al. // J. Immunol. -1979. — V. 123, № 2. — P. 529 — 534.
  191. The amidolytic activity of the SK plasminogen complex is enhanced by a potentiator which is generated in the presence of vascular plasminogen activator — role of fibrin degradation products / Soria J., Soria C., Bertrand
  192. О. et al. // Thromb. Haemost. 1982. — V. 47, N. 3. — P. 193 — 196.
  193. The degradation of proparathormone by parathyroid and liver cathepsin В / Mac Gregor R. R., Hamilton J. W., Kent G. N. et al. // J. Biol. Chem. 1979. — V. 254, № 11. — P. 4428 — 4433.
  194. The domain organization of streptokinase: nuclear magnetic resonance, circular dichroism, and functional characterization of proteolytic fragments / Parrado J., Conejero Lara F., Smith R. A. et al. // Protein Sci.- 1996. V. 5, № 4. — P. 693 — 704.
  195. The limited proteolysis of rabbi muscle aldolase by cathepsin Bj / Nakai N., Wada K., Kobashi K. et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1978. V. 83, № 3.-P. 881 -885.
  196. The proteolytic fragments of streptokinase / Yong K. S., Shi G. Y., Chang Y. F., et al. // J. Biol. Chem. 1995. — V. 270. — P. 29 601 -29 609.
  197. The role of the kininogens as cysteine proteinase inhibitors in local and systemic inflammation / Assfalg-Machleidt I., Billing A., Frohlich et al. // Agents. Actions. Suppl. 1992. — V. 38 (Pt 1). — P. 312 — 321.
  198. The structure of cistatins and their interaction with cognate cysteine proteinases / Bode W., Stubbs M., Musil D. et al. // J. Cell. Biochem -1994.-Suppl. 18 d.-P. 123.
  199. Tolleshaug H. Receptor-mediated endocytosis and degradation of asialo glicoproteins in isolated hepatocytes // Thesis. University of Oslo.- Oslo.- 1980. -52p.
  200. Towatari Т., Kawabata Y., Katunuma N. Crystallization and properties of cathepsin В from rat liver // Eur. J. Biochem. 1979. — V. 102, N. 1.-P. 279−289.
  201. Towatari Т., Tanaka K., Yoshikawa D., Katunuma N. Purification and properties of a new cathepsin from rat liver // J. Biochem. 1978. — V. 84, N. 3. — P. 659 — 672.
  202. Tosi M., Duponchel C., Bourgarel P., Colomb M., Meo T. Molecular cloning of human CI inhibitor: sequence homologies with alpha 1-antitrypsin and other members of the serpins superfamily // Gene. 1986. -V. 42, N. 3. — P. 265 — 272.
  203. Villers C. L., Arlaud G. J., Colomb M. G. Doman structure and associated functions of subcomponents Clr and Cls of the first component of human complement // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1985.-V. 82, № 13.-P. 4477−4481.
  204. Wuillemin W. A., Minnema M., Meijers J. C. et al. Inactivation of factor XIa in human plasma assessea by measuring factor XIa protease inhibitor complexes: major role for CI-inhibitor // Blood. — 1995. — V. 85, N. 6. — P. 1517- 1526.
  205. Wuthrich В., Devay J., Spath P. Hereditary or acquired andioedema caused by functional defeciency of CI inhibitor a still unfamiliar disease picture // Schweiz. Med. Wochenschr. — 1999. — V. 129, N. 7. — P. 285 -291.
  206. Yamaguchi H., Weidenbach H., Luhrs H., Lerch M.M., Dickneite G., Adler G. Combined treatment with CI esterase inhibitor and antithrombin III improves survival in severe acute experimental pancreatitis // Gut. -1997. V.40, N.4. — P. 531 — 535.
  207. Yamamoto К., Takeda M., Kato Y. Characteristics of activation of cathepsin В by sodium salicylate and comparison of catalytic site properties of cathepsins В and H // J. Pharmacol. 1985. — V. 39, N. 2. -P. 207−215.
  208. Yamashita M., Konagaya S. Purification and characterization of cathepsin L from the white muscle of chum salmon // Compar. Biochem. and Physiol. B. 1990. — V. 96 B, № 2. — P. 247 — 253.
  209. Yeung Laiwah A. C., Jones L., Hamilton A. O., Whaley K. Complement subcomponent CI inhibitor synthesis by human monocytes // Biochem. J. — 1985. — V. 226. — P. 199 — 205.
  210. Zhai P., Wakeham N., Loy J. A., Zhang X. C. Functional roles of streptokinase С terminal flexible Peptide in active site formation and substrate recognition in plasminogen activation // Biochemistry. — 2003. -V. 42, N. 1.- P. 114−120.
  211. Zuraw B. L., Curd J. G. Demonstration of modified inactive first component of complement (CI) inhibitor in the plasmas of CI inhibitor-deficient patients // J. Clin. Invest. 1986. — V. 78, N 2. — P. 567 — 575.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!