Информативность лабораторных методов диагностики трихомониаза

Актуальность проблемы. В последнее время отмечается рост заболеваемости инфекциями, передающимися преимущественно половым путем (ИПППП). В 1999 году ежегодная заболеваемость трихомониазом в мире превысила 174 миллиона человек (Gerbase A.C. et al, 1998, Soper D., 2004). В России в 2003 году на 100 тыс. населения зарегистрирован 261 случай заболевания трихомониазом- 101 случай сифилиса- 95 случаев хламидиоза- 82,3 случая гонореи (Тихонова Л.И., 2004). Значимость трихомонадной инфекции обусловлена не только ее широкой распространенностью, но и способностью вызывать ряд таких тяжелых осложнений, как: бесплодиевоспалительные заболевания органов малого таза у женщинпростатиты, эпидидимиты, стриктуры уретры у мужчинпреждевременный разрыв околоплодных оболочекрождение детей с пониженной массой телаповышать риск возникновения рака шейки матки и передачи ВИЧинфекции (Laga М. et al., 1994; Petrin D. et al., 1998; Sutton M. Y. et al., 1999; Moodley P. et al., 2002; Sayed-el-Ahl et al., 2002). Необходимо также учитывать тот факт, что трихомонады могут фагоцитировать и резервировать различные патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, способствуя распространению других ИПППП (Овчинников Н.М. и соавт., 1986; Клименко Б. В. и соавт., 2001; Rapelli Р. et al., 1998). Клиническая картина заболевания, по мнению ряда исследователей, претерпевает патоморфоз, характеризуясь обилием стертых и малосимптомных форм (Молочков В.А., 2000; Боуден Ф. Д., 2001; Fouts A.C., 1980; Passey М., 1998). В этой связи существующие методы микробиологической диагностики трихомониаза (микроскопический, культуральный, молекулярно-биологический и серологический) нередко являются ведущими в постановке диагноза. При этом их диагностические свойства варьируют в широких пределах и существенно зависят от целого ряда факторов (длительности заболевания, локализации воспалительного процесса, выраженности местной воспалительной реакции, правильности подготовки больного к исследованию, соблюдения методик забора и транспортировки биоматериала в лабораторию и пр.).

Нормативные документы, регламентирующие диагностику мочеполового трихомониаза, датированы серединой 80-х годов прошлого столетия. За последнее время появились новые диагностические подходы, требующие определения показаний для их использования и рекомендаций по интерпретации полученных результатов.

В этой связи весьма актуальным является обоснование алгоритмов диагностики мочеполового трихомониаза с учетом комплексного использования различных диагностических методов и особенностей клинического течения заболевания.

Цель работы: установить значение лабораторных методов исследования при диагностике мочеполового трихомониаза в современных условиях. Задачи исследования:

1. Изучить особенности современного клинического течения мочеполового трихомониаза.

2. Оценить информативность лабораторных методов прямого обнаружения T.vaginalis.

3. Оценить значение ИФА в диагностике мочеполового трихомониаза и изучить субизотипическую структуру специфических ^в-антител.

4. На основании полученных результатов обосновать алгоритмы диагностики мочеполового трихомониаза.

Научная новизна. Предложен новый способ микроскопической диагностики урогенитального трихомониаза у женщин. Разработана питательная среда для культуральной диагностики трихомониаза. Установлено, что серологическая диагностика мочеполового трихомониаза имеет вспомогательное значение в постановке диагноза заболевания.

Впервые изучены субизотипы специфических^{О-антител} при трихомо-ниазе, что позволило констатировать наличие у пациентов противотрихомонад-ных антител как к липосахаридным, так и белковым антигенам простейшего.

Впервые проведена комплексная оценка современных методов лабораторной диагностики мочеполового трихомониаза, на основании которой обоснованы диагностические алгоритмы.

Практическая значимость. Новый способ микроскопической диагностики урогенитального трихомониаза у женщин характеризуется высокой диагностической эффективностью и простотой применения. Разработанная питательная среда для культуральной диагностики трихомониаза сочетает высокие ростовые свойства и низкую себестоимость. Установлено, что результаты ПЦР носят предварительный характер и не могут быть использованы для достоверной диагностики трихомониаза. ИФА может использоваться в дополнение к существующим диагностическим подходам. Обнаружение специфических антител к антигенам белковой природы в перспективе делает возможным получение их искусственных аналогов с целью стандартизации серодиагностики трихомониаза. Предложенные диагностические алгоритмы позволяют повысить эффективность диагностики мочеполового трихомониаза при снижении временных и финансовых затрат.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. При диагностике мочеполового трихомониаза у мужчин решающее значение имеет культуральное исследование.

2. Микроскопия подкрашенного нативного препарата отделяемого из урогенитального тракта у женщин позволяет диагностировать мочеполовой трихо-мониаз в большинстве случаев.

3. Серологическая диагностика мочеполового трихомониаза (ИФА) имеет вспомогательное диагностическое значение, не позволяя исключить заболевание.

Реализация и внедрение полученных результатов работы. Полученные в настоящем исследовании результаты внедрены и используются в научно-педагогической и лечебно-диагностической работе кафедр кожных и венерических болезней и микробиологии Военно-медицинской академии им. С. М. Кирова, а также в работе Ленинградского Областного КВД.

Апробация и публикация материалов исследования. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на VI Всероссийском съезде врачей-инфекционистов (г.С-Петербург, 2003) — на Всероссийской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией» (г.С-Петербург, 2004) — Российско-Шведской конференции «Контроль и профилактика инфекций, передающихся половым путем» (г.С-Петербург, 2004) — Научной конференции с международным участием «Современные средства иммунодиагностики, имму-нои экстренной профилактики актуальных инфекций» (г.С-Петербург, 2004) — VII Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении» (г.С-Петербург, 2005) — Российской научно-практической конференции дерматовенерологов «Санкт-Петербургские дерматовенерологические чтения» (г.С-Петербург, 2005) — на заседании городского общества дерматовенерологов им. В. М. Тарновского (г.С-Петербург, 2004) — Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 135-летию кафедры кожных и венерических болезней ВМедА (г.С-Петербург, 2004) — Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 80-летию иркутского областного кожно-венерологического диспансера (г.Иркутск, 2004) — 40-ой научно-практической конференции дерматовенерологов и врачей смежных специальностей Санкт-Петербурга «Актуальные проблемы дерматологии. Контроль и профилактика инфекций, передающихся половым путем» (г.С-Петербург, 2005).

По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ, внедрены в практику 2 рационализаторских предложения.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, пяти глав, заключения, выводов и практических рекомендаций. Текст диссертации изложен на 191 странице, включает 25 таблиц и 27 рисунков. Библиографический указатель содержит 143 наименования, включая 49 отечественных и 94 зарубежных источника.

ВЫВОДЫ.

1. Клиническая картина как свежего, так и хронического мочеполового трихомониаза у мужчин и женщин характеризуется преобладанием манифестных форм заболевания (98,2% и 92,5% соответственно). К особенностям современного клинического течения трихомониаза у женщин следует отнести преобладание слизисто-гнойных выделений из влагалища над пенистыми (р<0,05). У мужчин патоморфоза заболевания не выявлено.

2. Микроскопия ПНП отделяемого из урогенитального тракта у женщин, обладает наибольшей чувствительностью (96,2%) и специфичностью (94,4%). Применение данного диагностического метода у мужчин неинформативно.

Микроскопия ФОМ отделяемого из уретры у мужчин характеризуется низкой чувствительностью (47,4%) и специфичностью (22,2%), отражая при этом выраженность местной воспалительной реакции и качество забора биоматериала.

3. Культуральный метод диагностики урогенитального трихомониаза у женщин, имеет чувствительность 88,7% и специфичность 94,4%. У мужчин наибольшей чувствительностью (87,7%) и специфичностью (100%) обладает культуральное исследование (посев отделяемого из уретры), что позволяет рассматривать его в качестве ведущего метода лабораторной диагностики мочеполового трихомониаза.

ПДР отделяемого из урогенитального тракта у мужчин и женщин характеризуется невысокой чувствительностью (63,2% и 86,81% соответственно) и специфичностью (27,8% и 33,3% соответственно) и может использоваться в качестве вспомогательного метода диагностики мочеполового трихомониаза: отрицательный результат данного диагностического теста не исключает заболевание, а положительный носит вероятностный характер.

4. ИФА сыворотки крови на наличие противотрихомонадных^{в-антител} ввиду недостаточной чувствительности (31,5%) может применяться в качестве вспомогательного диагностического теста, при этом положительные результаты носят вероятностный характер, а отрицательные не исключают заболевание. При анализе подклассов специфических^{в-антител} у мужчин и женщин выявлено отсутствие достоверных различий по частоте встречаемости^вЗ и 1§ 04. С учетом общебиологических особенностей формирования иммунного ответа можно констатировать наличие у них противотрихомонадных антител как к липосахаридным, так и к белковым антигенам простейшего.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. У женщин для диагностики мочеполового трихомониаза рекомендуется использовать подкрашенный нативный препарат, приготавливаемый по методике «раздавленная капля», для подкрашивания которого капля 1% водного раствора метиленового синего наносится рядом с краем покровного стекла.

2. При диагностике урогенитального трихомониаза у мужчин посев отделяемого из уретры рекомендуется выполнять при любой локализации воспалительного процесса независимо от длительности заболевания и выраженности местной воспалительной реакции.

3. Наличие менее 5 эпителиальных клеток в п/зр (при подсчете в 5 полях зрения с их максимальным скоплением, увеличение х900, объектив 90) в фиксированном окрашенном мазке отделяемого из уретры у мужчин может свидетельствовать о низком качестве забора биоматериала, указывая на необходимость проведения повторного культурального исследования при его отрицательном однократном результате.

4. У мужчин при однократном отрицательном результате посева на T. vaginalis положительный результат ИФА сыворотки крови на наличие проти-вотрихомонадных антител и/или ПЦР отделяемого из уретры свидетельствуют о необходимости повторного культурального исследования.