Некоторые особенности параметров клеточной и внеклеточной ДНК у новорожденных различного гестационного возраста

Актуальность темы

.

Многие патологические процессы периода новорожденное&tradeоставляют глубокийслед и могут проявиться на любом возрастном этапе всей последующей жизни, несмотря на высокие репаративные возможности организма в раннем постнатальном онтогенезе (Н.Н.Володин, 2008; Г. Н. Чистякова, 2005; Е. В. Аронскинд и др., 2004; Н. П:Шабалов, 2004; Ю. И. Барашнев, 2001; Е. В. Шниткова и др., 2000; М.С.МсСогшс с1а1, 1992). Воздействие патогенных факторов связано с патологией и осложнениями беременности и обусловливает, в свою очередь, неудовлетворительное клиническое состояние, новорожденных детей. Неблагоприятное течение беременности отрицательно влияет на развитие плода, обусловливает быструю, истощаемость. и неадекватность реакции адаптации в неонатальном периоде (В.В.Деревцов, 2010; Н. Н. Володин, 2008; Н. О. Туаева, 2007; Н. П. Шабалов, 2004):

В связи с этим, актуально определить наиболее раннее звено в цепи патологических событий, приводящих к серьезным осложнениям течения неонатального периода, которое могло бы явиться доманифестным критерием состояния здоровья новорожденного ребенка.

Известно, что характер адаптационных реакций определяется состоянием нуклеиновых кислота: РНК отвечает за кратковременную адаптацию, а ДНК — за долгосрочную (Д.С.Саркисов, 1987, 1993). С учётомданного-положения~оценка~параметров клеточной и внеклеточной ДНК позволяет разработать методы долговременного прогнозирования исходов срыва адаптации у новорожденного ребенка в раннем неонатальном периоде.

Работ, посвященных изучению ядерной ДНК лимфоцитов и внеклеточной ДНК в педиатрической науке и практике, к сожалению, крайне мало. Имеются лишь единичные литературные источники, посвященные исследованию ядерной ДНК у новорожденных (В.Ю.Талаев, 1997, 1998, 1999; В. В. Софронов, 1999; Н. Е. Громада, 2008). Но информация, содержащаяся в них, разноречива в силу различных методических подходов с использованием рутинных (качественных и полуколичественных) методов определения нуклеиновой кислоты. Данные, представленные в источниках литературы, немногочисленны, нуждаются в дополнениях и систематизации.

Научная новизна.

Получены новые научные данные о параметрах ядерной и внеклеточной у новорожденных различного гестационного возраста с различными осложнениями периода адаптации.

Научно доказано клиническое значение роли количества гиподиплоидных и гиперплоидных лимфоцитов в формировании адаптационных процессов у новорожденных различного гестационного возраста.

Установлены повышенные уровни гиподиплоидных и гиперплоидных лимфоцитов и концентрации внеклеточной ДНК у новорожденных различного гестационного возраста с различной перинатальной патологией.

С помощью комплексных исследований получены новые данные, которые существенно расширяют возможности раннего прогнозирования осложнений—периода адаптации у новорожденных различного гестационного возраста.

Объект исследования.

Дети в возрасте 0−28 суток жизни.

Предмет исследования.

Кровь новорожденных детей.

Методы исследования.

• Клинические (сбор анамнеза, осмотр, перкуссия, аускультация);

• параклинические (общий анализ крови, биохимический анализ крови, УЗИ головного мозга и органов брюшной полости, рентгенография);

• специальные методы исследования (метод проточной цитофлуометрии с использованием пропидиума йодида, флуоресцентная спектрофотометрия с использованием флуоресцентного зонда Hoechst);

• статистические (корреляционный анализ, метод регрессии, описательной статистики, параметрический анализ, математический анализ с использованием нескольких статистических критериев — Краскела-Уоллиса, Манна-Уитни и Ван-дер-Вардена).

Цель работы.

Разработка метода прогнозирования течения периода ранней неонатальной адаптации у новорожденных различного гестационного возраста на основании результатов изучения особенностей параметров ядерной и внеклеточной ДНК.

Задачи исследования.

1. Исследовать и сравнить цитофлуометрические характеристики ядерной ДНК лимфоцитов у новорожденных различного гестационного возраста;

2. Исследовать особенности цитофлуометрических характеристик ядерной ДНК лимфоцитов у новорожденных с осложнениями периода адаптации;

3. Определить концентрацию внеклеточной ДНК у новорожденных различного срока гестации с различными клиническими вариантами течения периода ранней неонатальной адаптации;

4. На основании полученных результатов разработать методы прогнозирования течения периода ранней неонатальной адаптации новорожденных.

Научные положения, выносимые на защиту.

1. Параметры ядерной ДНК лимфоцитов определяются сроком гестации и наличием перинатальной патологии новорожденных;

2. Параметры внеклеточной ДНК у новорожденных детей определяются гестационным возрастом и наличием перинатальной патологии;

3. Оценка параметров ядерной и внеклеточной ДНК в раннем неонатальном периоде позволяют прогнозировать осложнения периода адаптации у новорожденного ребенка.

Научно-практическая значимость.

1. Получены новые знания о процессах апоптоза и пролиферации лимфоцитов периферической крови новорожденных с различными вариантами течения периода ранней адаптации и различными сроками гестации. Результаты исследования могут быть использованы для понимания процесса формирования и становления адаптационных систем у новорожденных и разработки нового теоретического и методологического подхода к раннему прогнозированию осложнений неонатального периода.

2—Установлены значения гиподиплоидных й гиперплоидных лимфоцитов и концентрации внеклеточной ДНК для условно здоровых доношенных новорожденных с неосложненным течением периода ранней неонатальной адаптации.

3. Рекомендовано применение показателя процентного содержания лимфоцитов с гиподиплоидным и гиперплоидным количеством ядерной ДНК при оценке зрелости новорожденных.

4. Доказана прогностическая значимость увеличения содержания гиперплоидных лимфоцитов при наличии гнойно-воспалительных заболеваний у доношенных новорожденных и детей со сроками гестации 32−34 недели и 31 неделя и менее, а также при перинатальном поражении центральной нервной системы у детей со сроком гестации 35−37 недель.

5. Разработана теоретическая и методологическая база для нового подхода в прогнозировании осложнений раннего неонатального периода на основе анализа параметров клеточной и внеклеточной ДНК у новорожденных детей.

Область применения результатов.

Результаты работы в дальнейшем могут быть использованы в учебном процессе медицинских ВУЗов и в практической медицине (педиатрии, в частности, неонатологии) для оценки состояния новорожденных и прогнозирования осложнений периода ранней неонатальной адаптации, а также прогнозирования развития осложнений в раннем детском возрасте, в том числе неврологических, иммунных, эндокринных.

Список публикаций.

По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, в том числе 9 тезисов и 3 статьи в центральных изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией. Общий объем публикаций 1,7 у.п.л., в том числе личный вклад автора составляет 0,7 у.п.л.

Апробация и внедрение результатов.

Основные результаты исследований докладывались на ежегодной научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» Казанского государственного медицинского университета- (2008 г.), на V.

Научно-практической конференции «Педиатрия и детская хирургия в Приволжском федеральном округе» (2008), «Bioscience 2006 — bioscience for the 21st century», (23 — 27 July, Glasgow, UK, 2006).

Результаты исследования внедрены в практику работы отделения реанимации и интенсивной терапии новорожденных МУЗ «Детская городская больница № 1» г. Казани. Материалы диссертации используются в учебном процессе кафедры пропедевтики детских болезней и факультетской педиатрии с курсом детских болезней лечебного факультета, кафедры госпитальной педиатрии с курсами поликлинической педиатрии и ПДО ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Структура и объем диссертации

.

ВЫВОДЫ.

1. В группе условно здоровых новорожденных детей установлены нормативы содержания гиподиплоидных лимфоцитов — 2,1 ±0,4%, или 57,8± 11,2 клеток/нл, гиперплоидных лимфоцитов. — 1,7±0,5%, или 57,9±19,2 клеток/нл, концентрации внеклеточной ДНК 22,5 нг/мл (от 9,2 до 55,5 нг/мл).

2. У новорожденных с гестационным возрастом 31 неделя и менее преобладают гиперплоидные лимфоциты (2,3±0,4%, или 89,2± 19,0 кл/нл) — С увеличениемгестационного возраста уровень гиперплоидных лимфоцитов снижается, достигая минимальных значений к 35−37 неделям гестации (1,2±0,3%, или 22,2±4,0 кл/нл), а содержание гиподиплоидных лимфоцитов к 35−37 неделям гестации возрастает до максимума (9,0±0,8%, или 259,0±47,1 кл/нл).

3. При наличии клинико-лабораторных признаков осложнений периода адаптации в раннем неонаталыюм периоде, наблюдается однонаправленная динамика изменения уровня гиподиплоидных лимфоцитов в сторону увеличения независимо от вида перинатальной патологии. Максимальные значения гиперплоидных лимфоцитов у новорожденных с гестационным возрастом менее 35 недель и у доношенных новорожденных отмечаются при гнойно-воспалительных заболеванияхв группе новорожденных, с гестационным возрастом 35−37 недель — при перинатальном поражении ЦНС.

4. У новорожденных с клиническими проявлениями срыва адаптации в раннем неонатальном периоде независимо от гестационного возраста наблюдается статистически значимое повышение концентрации внеклеточной ДНК. Наиболее значимые отличия от группы.