Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Разработка комплекса методов молекулярной диагностики парвовирусной инфекции свиней

Диссертация: Разработка комплекса методов молекулярной диагностики парвовирусной инфекции свиней
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Парвовирусная инфекция свиней (ПВИС) — контагиозное вирусное заболевание, которое характеризуется нарушением воспроизводительной функции свиноматок: малочисленными помётами, гибелью эмбрионов и плодов с рассасыванием и мумификацией, рождением мёртвых плодов, бесплодием, повторным приходом в охоту, гибелью новорожденных поросят и реже абортами. Свиньи, инфицированные в постнатальный период… Читать ещё >

Разработка комплекса методов молекулярной диагностики парвовирусной инфекции свиней (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • Список сокращений

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 12 1.1 Классификация и общая характеристика семейства Рагуоушс1ае

1.2. Парвовирусная инфекция свиней

1.2.1. Характеристика возбудителя

1.2.2. Эпизоотологические особенности

1.2.3. Патогенез

1.2.4. Клинические признаки

1.2.5. Патологоанатомические изменения

1.3. Диагностика

1.3.1. Реакция торможения гемагглютинации

1.3.2. Реакция нейтрализации

1.3.3. Реакция диффузионной преципитации

1.3.4. Иммуноферментный анализ

1.3.5. Реакция гемагглютинации

1.3.6. Метод флуоресцирующих антител

1.3.7. Выделение

1.3.8. Молекулярные методы диагностики

1.3.8.1. Полимеразная цепная реакция

1.3.8.2. Полимеразная цепная реакция в реальном времени

1.4. Иммунитет, профилактика и меры борьбы

Парвовирусная инфекция свиней (ПВИС) — контагиозное вирусное заболевание, которое характеризуется нарушением воспроизводительной функции свиноматок: малочисленными помётами, гибелью эмбрионов и плодов с рассасыванием и мумификацией, рождением мёртвых плодов, бесплодием, повторным приходом в охоту, гибелью новорожденных поросят и реже абортами. Свиньи, инфицированные в постнатальный период, не проявляют клинических признаков заболевания, хотя в течение 7−14 дней выделяют вирус с мочой, фекалиями и слюной, после чего сохраняют иммунитет пожизненно. Трансплацентарная передача вируса плодам и эмбрионам происходит во время виремии у неиммунных матерей после первичного инфицирования [10, 15, 71].

Эмбрионы, инфицированные в возрасте до 36 дней, погибают и рассасываются. Заражение плодов между 36−70 днями супоросности ведёт к их гибели и мумификации, иногда у них развивается иммунотолерантность с пожизненным выделением вируса без продукции антител [12].

У животных других возрастных групп заболевание обычно протекает в латентной форме. Однако имеются сообщения, что парвовирус свиней (ПВС) вызывает кожные поражения у поросят, интерстициальный нефрит у свиней убойного возраста и негнойный миокардит у поросят-сосунов [73, 89, 116, 120, 121].

По последним данным установлено, что ПВС может усиливать проявление клинических признаков синдрома послеотъёмного мультисистемного истощения (СПМИ), одним из основных возбудителей которого является цирковирус свиней 2-го типа (ЦВС-2), и приводит к значительному усугублению болезни, вплоть до тяжёлого системного заболевания с летальным исходом [54, 55, 154].

В России впервые ПВС был выделен профессором Орлянкиным Б. Г. в 1982 году в Нижегородской области.

Парвовирус свиней — вирус, относящийся к семейству РапюгтсЯае. Это мелкий безоболочечный вирус, геном которого представлен однонитевой молекулой ДНК (приблизительно 5 тыс. нуклеотидов), и имеет две основные открытые рамки считывания. Открытая рамка считывания, расположенная на 3' конце генома, кодирует неструктурные белки (N8). Открытая рамка считывания, расположенная на 5' конце генома, кодирует структурные белки (УР). Каждая из рамок кодирует минимум по два белка. В последнее время выявлены новые антигенные варианты (типы) ЛВС, выделенные из полевых изолятов. Их генетическая вариабельность обусловлена изменениями в структурном белке УР2 [58].

Диагноз на наличие в хозяйстве ПВИС ставится на основании результатов клинических, эпизоотологических, патологоанатомических и лабораторных исследований. Лабораторные методы для выявления антигена основаны на выделении вируса, реакции гемагглютинации (РГА) и иммунофлуоресценции. На исследование в лабораторию направляют мумифицированные плоды, паренхиматозные органы мертворожденных поросят, кровь и сыворотку крови свиноматок с нарушениями репродуктивной функции. Однако мумифицированные плоды старше 70-дневного возраста и мёртворожденные поросята не пригодны для выделения вируса, поскольку содержат вирусный антиген, связанный с антителами [9, 142].

В последние годы развитие исследований в области молекулярной биологии и клеточной инженерии привело к широкому использованию в ветеринарной практике новых методов диагностики, которые являются более чувствительными, специфичными, простыми в исполнении. Одним из таких методов является полимеразная цепная реакция (ПЦР), основанная на ферментативной амплификации специфических участков генома. Метод ПЦР позволяет выявлять вирус, несмотря на его связанность с антителами.

В настоящее время широкое распространение также получает современная модификация метода ПЦР — ПЦР с детекцией специфического продукта амплификации в режиме реального времени. Данный метод обладает рядом преимуществ по сравнению с обычной ПЦР и позволяет уменьшить время проведения анализа, снижает риск контаминации. Кроме того, ПЦР в реальном времени позволяет проводить не только качественный, но и количественный анализ [1].

Таким образом, разработка новых методов молекулярной диагностики ПВИС на основе ПЦР и ПЦР в реальном времени, а так же разработка теста, позволяющего одновременно выявлять и дифференцировать ПВС и ЦВС-2, являются актуальными направлениями для ветеринарной диагностики.

Цель и задачи исследований.

Цель работы: разработка комплекса методов молекулярной диагностики ПВИС и дифференцирования ПВС и ЦВС-2.

В соответствии с поставленной целью необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать диагностическую ПЦР тест-систему для выявления ПВС на основе анализа нуклеотидных последовательностей гена неструктурного белка NS1.

2. Разработать диагностическую ПЦР тест-систему в реальном времени для выявления ПВС на основе анализа нуклеотидных последовательностей гена неструктурного белка NS1.

3. Провести сравнительный анализ диагностических тест-систем на основе ПЦР, ПЦР в реальном времени и метода РГА.

4. Разработать тест-систему на основе множественной ПЦР в реальном времени для одновременного обнаружения и дифференцирования ПВС и ЦВС-2.

5. Разработать рекомбинантные положительные контроли для использования в качественном и количественном анализе.

6. С помощью разработанных тест-систем провести исследование образцов от животных.

Научная новизна работы.

Проведен сравнительный анализ последовательностей геномов различных штаммов ПВС. Разработаны специфические праймеры и зонды на консервативный участок генома данного вируса.

Впервые в РФ предложен способ диагностики ПВИС на основе молекулярных методов ПЦР и ПЦР в реальном времени.

Впервые в РФ разработана методика количественного определения ПВС в образцах от животных на основе ПЦР в реальном времени.

Впервые в РФ разработан множественный вариант ПЦР в реальном времени, позволяющий одновременно выявлять ПВС и ЦВС-2.

Практическая значимость работы Разработан комплекс методов молекулярной диагностики ПВИС и дифференцирования ПВС и ЦВС-2.

Разработанная «Тест-система для обнаружения парвовируса методом полимеразной цепной реакции» сертифицирована во Всероссийском Государственном Центре качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГБУ «ВГНКИ»). Инструкция по применению от 21.05.2009, СТО 42 418 073−002−2007. Данная тест-система широко применяется на территории РФ с 2007 г.

Тест — система для обнаружения парвовируса свиней методом ПЦР в реальном времени" успешно прошла доклинические исследования и клинические испытания с использованием образцов от животных. Подготовлена необходимая нормативная документация для регистрации в РФ.

По результатам доклинических исследований «Тест — система для обнаружения и дифференцирования ПВС и ЦВС-2 методом множественной ПЦР в реальном времени» показала высокую чувствительность и специфичность и может быть представлена для широких клинических испытаний с использованием образцов от животных.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Возможность выявления ПВС с помощью диагностической ПЦР тест-системы на основе анализа нуклеотидных последовательностей гена неструктурного белка N81.

2. Возможность выявления ПВС с помощью диагностической ПЦР тест-системы в реальном времени на основе анализа нуклеотидных последовательностей гена неструктурного белка N81.

3. Высокая диагностическая чувствительность разработанных тест-систем на основе ПЦР, ПЦР в реальном времени при сравнении с методом РГА.

4. Возможность одновременного выявления ПВС и ЦВС-2 с помощью диагностической тест-системы на основе множественной ПЦР в реальном времени.

5. Возможность применения рекомбинантных положительных контролей для качественного и количественного обнаружения ПВС и ЦВС-2 в разработанных тестсистемах на основе ПЦР и ПЦР в реальном времени.

6. Возможность использования разработанных тестсистем на основе ПЦР и ПЦР в реальном времени для диагностики ПВИС.

Апробация работы Основные положения диссертационной работы отражены в итоговых отчётах ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздравсоцразвития России за 2005;2011 гг. Материалы доложены и обсуждены на заседаниях учёного совета ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздравсоцразвития России за 2005;2011 гг., а также на заседании отдела прикладной вирусологии ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского» Минздравсоцразвития России 28 марта 2012 г.

Публикации.

По результатам диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 3 статьи в журналах, входящих в перечень ВАК.

Объём и структура диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждений результатов, выводов и списка литературы (18 отечественных и 143 зарубежных авторов). Объём работы составляет 115 страниц машинописного текста, иллюстрированного 16 таблицами и 11 рисунками.

4. ВЫВОДЫ.

1. Разработана диагностическая «Тест-система для обнаружения парвовируса свиней методом полимеразной цепной реакции» на основе консервативной последовательности гена неструктурного белка NS1. Специфичность данной тест-системы, исследованная на панели контрольных образцов, составила 100%. Чувствительность тест-системы составила 2,3×103 молекул/мкл.

2. Разработана диагностическая «Тест-система для обнаружения парвовируса свиней методом полимеразной цепной реакции в реальном времени» на основе консервативной последовательности гена неструктурного белка NS1. Специфичность данной тест-системы составила 100%. Чувствительность тест-системы составила 3,7×101 молекул/мкл.

3. Сравнительный анализ разработанных тест-систем на основе ПЦР, ПЦР в реальном времени и РГА показал, что чувствительность уменьшается на порядок в ряду ПЦР в реальном времени > ПЦР > РГА.

4. Показана возможность одновременного выявления и дифференцирования ПВС и ЦВС-2 методом множественной ПЦР в реальном времени. Чувствительность данного метода составила 102 молекул/мкл для ПВС и 103 молекул/мкл для ЦВС-2.

5. Применение высокоспецифичных рекомбинантных положительных контролей повышает надёжность результатов диагностики ПВС. Показана возможность их использования для качественного и количественного анализа образцов.

6. Показана возможность применения разработанного комплекса методов молекулярной диагностики для исследования ПВИС в пробах от животных любого возраста, а так же там, где диагностика методом РГА не применяется.

Показать весь текст

Список литературы

  1. «Медицинская вирусология». Руководство под редакцией Д. К. Львова. -М.: МИА, 2008.
  2. Вирусные болезни животных / В. Н. Сюрин, А .Я. Самуйленко, Б. В. Соловьев, Н. В. Фомина. Москва, ВНИТИБП, 928 е., ил.
  3. Вирусы животных / Н. В. Фомина и др. MB А, 1991.
  4. . Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. / Б. Глик., Дж. Пастернак. // Пер. с англ. -М.: Мир, 2002. 589 с.
  5. Диагностика вирусных болезней животных / В. Н. Сюрин и др.: М. Агропромиздат, 1991. — 500 с.
  6. Инфекционныеболезни животных: Учеб. Пособие для студ. высш. учеб. зав. / Б. Ф. Бессарабов, A.A. Ватутин, Е. С. Воронин, и др.- Под. Ред. A.A. Сидорчука. М.: КолоС, 2007. — 671 с.
  7. Молекулярная микробиология: Учебник для вузов. / А. Л. Брюханов, К. В. Рыбак, А.И. Нетрусов- Под ред. А. И. Нетрусова. Изд. МГУ, — 2012. — 480 с.
  8. Определение парвовируса свиней методом ДНК-ДНК гибридизации / Г. Ф. Коромыслов, А. Д. Забережный, С. К. Артюшин, Б. Г. Орлянкин. Доклады ВАСХНИЛ, 1988, № 11. С. 29−32.
  9. . Г. Обнаружение антител к парвовирусу свиней в реакции диффузионной преципитации / Б. Г. Орлянкин, JI.B. Кошелева, В. К. Сологуб. // Бюл. ВИЭВ. М.: 1985. — № 59. — С. 41 -43.
  10. .Г. Биология парвовирусов животных. // Б. Г. Орлянкин. -Сельско-хозяйственная биология, 1986- № 11. 104 с.
  11. .Г. Выделение и изучение некоторых биологических свойств парвовируса свиней / Б. Г. Орлянкин, Л. В. Кошелева,, О. М. Савич. Бюл. ВИЭВ. -1984.-№ 55.-С. 98−100.
  12. Парвовирусные инфекции и их влияние на продуктивность животных / Б. Г Орлянкин и др. — М.: ВНИИТЭИСХ, 1985.
  13. ПЦР в реальном времени / Д. В. Ребриков, Г. А. Саматов, Д. Ю. Трофимов, П. А. Семёнов и др. М.: Бином — 2009. — 215 с.
  14. Д.В. ПЦР в реальном времени: подходы к анализу данных / Д. В
  15. , Д.Ю. Трофимов.: Прикладная биохимия и микробиология, 2006. -№ 42. С. 520−528.
  16. В.А. Вирусы и вирусные вакцины. / В. А Сергеев. — М.: Библионика, 2007.
  17. А.И. Парвовирусная инфекция / А. И. Собко. // Справочник по болезням свиней. Киев: 1981, Урожай. — С. 58−60.
  18. , Д.Ю. Метод повышения точности ПЦР в реальном времени / Д. Ю. Трофимов, Д. В. Ребриков, Г. А. Саматов, П. А. Семенов, А. Б. Балуев. // Докл. акад. наук, 2008, № 419, С. 421−424.
  19. Частная ветеринарная вирусология/В.Н.Сюрин и др.-М. :Колос, 1979.
  20. Adsorptive membrane chromatogramphy for purification of plasmid DNA / Teeters, M.A., et al. // J. Chromatogr. A. 2003. — Vol.989. — P.165−173.
  21. Allan, G.M. Porcine circoviruses: a review. 2000 / Allan, G.M., Ellis, J.A. // J.Vet. diagn. Invest. Vol.12. — P.3−14.
  22. Assotiation of a parvovirus with an outbreak of foetal death and mummification in pigs / Forman, A.J., et al. // Austral. Vet. J. 1977. — Vol.53. -N.7. — P.326−329.
  23. A-Z of quantitative PCR / ed. Bustin, S.A., La Jolla, C. A: International University Line. 2004. — P.882.
  24. Bernard, P. S. Color multiplexing hybridization probes using the apolipoprotein E locus as a model system for genotyping. / Bernard, P. S., Pritham, G.H., Wittwer, C.T. // Analytycal Biochemistry. 1999. — Vol.273. — P.221−228
  25. Berns, K.I. Parvoviridae: the viruses and their replication / Berns, K.I., Parrish C.R., Knipe, P.M. // In: Fields virology. Philadelphia: Lippincott-Raven. — 2006.1. Vol.2.-P.2437−2465.
  26. Bican, J. Porcine parvovirus infection in boars in the Czech Republic Svoboda / Bican, J.M., Drabek, J. // Acta Vet. Brno. 2002. — Vol.71. — P.45−49.a
  27. Biological and physicochemical properties of porsine parvovirus recovered from stillborn piglets / Morimoto, T, et al. // Nat. Inst. Anim. Health. Quart. 1972. -Vol.12.-N.3.-P.137−144.
  28. Biront, P. Porcine parvovirus (P.P.V.): Infection in Boars. I. Possibility of Genital localization in the boar after oronasal infection. / Biront, P., Bonte, P. // Zbl. Vet. Med. 1983. — Vol.30. — N7. -P.541−545.
  29. Bonnet, G. Thermodynamic basis of the enhanced specificity of structured DNA probes / Bonnet, G., Tyagi, S., Libchaber, A., et al. // Proc. Natl. Asad Sei USA. 1999. — Vol.96. -P.6171−6176.
  30. Boom, R. Rapid and simple method for purification of nucleic acids / Boom,
  31. R., Sol, C.J., Salimans, M.M., et al. // J. Clin. Microbiol. 1990. — Vol.28. — P.495−503.
  32. Breadmore, M.C. Microchip-based purification of DNA from biological samples / Breadmore, M.C., Wolfe, K.A., Arcibal, I.G., et al. // Anal. Chem. 2003. -Vol.75.-P.1880−1886.
  33. Brown, T.T.Jr. Response of conventionally raised weaning pigs to experimental infection with a virulent staine of porcine parvovirus / Brown, T.T.Jr., Paul, P. S., Mengeling, W.L. // Amer. J. Vet. Res. 1980. — Vol.41. — P. 1221−1225.
  34. Cartwright S.F. Virus isolated in association with herd infertility, abortions and stillbirths in pigs / Cartwright S.F., Huck R.A. // Vet. Ree. 1967. — Vol.81. — N.8. -P.196−197.
  35. Cartwright, S.F. A small haemagglutinating porsine DNA virus. I. Isolation and properties / Cartwright, S.F., Lucas, M., Huck, R.A. // J. Comp. Pathology -1969. Vol.79. — N.3. — P.371−377.
  36. Cartwright, S.F. A small haemagglutinating porsine DNA virus. II. / Cartwright, S.F., Lucas, M., Huck R.A. // Biological and serological studies. J. Comp. Pathology-1971.- Vol.81.-N1.-P.145−155.
  37. Characterization of a small porcine DNA virus / Mayr, A, et al. // Arch. Ges. Virusforsch. 1968. — Vol.25. — N. 1. — 3−51.
  38. Choi, C. Porcine postweaning multisystemic wasting syndrome in Korean pig- detection of porcine circovirus 2 infection by immunohistochemistry and polymerase chain reaction / Choi, C., Chae, C., Clark, E.G. // J. Vet. Diagn. Invest. Vol.2. -151−153.
  39. Cloning of a human parvovirus by molecular screening of respiratory tract samples / Allander, T., et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. — Vol.102. -P. 1232−1246.
  40. Comparative analysis reveals frequent recombination in the parvoviruses / Shackelton, L.A., et al. // J. Gen. Virology. 2007. — Vol.88. — P.3294−3301.
  41. Cooper, J.P. Analysis of fluorescence energy transfer in duplex and branched DNA molecules / Cooper, J.P., Hagerman, P.J. // Biochemistry 1990 — Vol.29. -P.9261−9268.
  42. Croghan, D.L. Isolation of pocine parvovirus from commercial trypsin / Croghan, D.L., Matchett, A., Koski, T.A. // Appl. Microbiology 1983. — Vol.26. -N.3-P.431−433.
  43. Cutler R.S. Diagnosis of reproductive failure in sows manifested as abortion, mummified fetuses, stillbirths and weak neonates // Current therapy in theriogenology 1986. — P.957−961.
  44. Cutlip, R.C. Experimentally induced infection of neonatal swine with porcine parvovirus / Cutlip, R.C., Mengeling, W.L. // Amer. J. Vet. Res. 1975. — Vol.36. -N.8.-P.1179−1182.
  45. Cutlip, R.C. Pathogenesis of in utero infection: experimental infection of eight and ten-week-old porcine fetuses with porcine parovirus / Cutlip, R.C., Mengeling, W.L. //Amer. J. Vet. Res. — 1975. — Vol.36. -N. 12. — P. 1751−1754.
  46. Dea, S. Vaillancourt J. Parvovirus-like particles assotiated with diairea in unweaned piglets / Dea, S., Elazhary, M.A.S.Y., Martineau, G.P. // Can. J. Comp. Med. 1985. — Vol.49. — N.3. — P.343−345.
  47. Detection of nucleic acid hybridization by nonradiative fluorescence resonance energy transfer / Cardullo, R.A., et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. -Vol.85. -P.8790−8794.
  48. Detection of porcine parvovirus using a taqman-based real-time PCR with primers and probe designed for the NS1 gene / Song, C., et al. // J. Virology. 2010. — Vol.7.-P.353−356.
  49. Detection of specific polymerase chain reaction product by utilizing the 5 ' 3 ' exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA polymerase / Holland, P.M., et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1991. — Vol.84. -P.7276−7280.
  50. Dick, J. Tests, exposure controls parvovirus // Nat. Hog Farmer 1984. -Vol.29.-N.3.-P.84−88.
  51. Didenko, V.V. DNA probes using fluorescence resonance energy transfer (FRET): designs and applications // Biotechniques 2001. — Vol.31 — P. 1106−1116, 1118, 1120−1121.
  52. Efficacy of an inactivated virus vaccine for prevention of porcine parvovirus-induced reproductive failure / Mengeling, W.L., et al. // Amer. J. Vet. Res. 1979. -Vol.40. -N.2. -P.204−207.
  53. Evaluation of a blocking Elisa for screening of antibodies against porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus / Smedegaard, E., et al. // Vet. Microbiology. 1997. — Vol.56. — P. 1−8.
  54. Evalution of a gel diffusion precipitin test for porcine parvovirus on / Too, H.L., et al. // J. Austral. Vet. 1983. — Vol.60. — N.6. — P. 161−165.
  55. Experimental infection of pigs with porcine parvovirus / Fujisaki, Y., et al. // Nat. Inst. Anim. Health Quart. 1975. — Vol.15. — N.4. — P.205 — 206.
  56. Experimental reproduction of severe wasting disease by co-infection of pigs with porcine circovirus and porcine parvovirus / Allan, G.M., et al. // J Comp. Pathology 1999. — Vol. 121. — P. 1 -11.
  57. Experimental reproduction of severe wasting disease by co-infection of pigs with porcine circovirus and porcine parvovirus / Kennedy, S., et al. // J. Comp. Pathol. 2000. — Vol.122. — P.9−24.
  58. Fetal mummification associated with porcine parvovirus infection / Mengeling, W.L., et al. // Amer. J. Vet. Med. Assoc. 1975. — Vol. 166. — N.10. — P.993−995.
  59. Florent, G. Immunogenicity of a bivalent porcine parvovirus and Aujeczkys disease vims vaccine / Florent, G., Charlier, P., Zygraich, N. // Proc. Inter. Pig Vet. Soc. Congr. Barselona, Spain. — 1986. — P.89.
  60. Genetic variability of porcine parvovirus isolates revealed by analysis of partial sequences of the structural coding gene VP2 / Martins, S.R., et al. // J. Gen. Virology. 2003. — Vol.84. — P. 1505−1515.
  61. Genomic organization and mapping of transcription and translation products of the NADL-2 Strain of Porcine parvovirus / Bergeron, J. et al. // Virology. 1993. -Vol.197.-P.86−98.
  62. Graham, D.E. The isolation of high molecular weight DNA from whole organisms or large tissue masses // Anal. Biochem. 1978. — Vol.85. — N.2. — P.609−613.
  63. Hafez, S.M. B. Isolation of parvovirus from kidney cell cultures of gnotobiotic piglets / Hafez, S.M., Liess. // Zbl. Vet. 1979. — Vol.26. — N.10. — P.820 — 827.
  64. Hallauer, C. Parvoviruses as contaminants of permanent human cell lines. I. Virus isolations from 1960−1970 / Hallauer, C, Kronauer, G., Siegl, G. // Arch. Ges. Virusforsch. 1971. — Vol.35. -N.l. -P.80−90.
  65. Happich, D. Application of the TaqMan PCR for genotyping of the prothrombin G20210A mutation and of the thermolabile methylenetrahydrofolate reductase mutation / Happich, D., Madlener, K., Schwaab, R. // Thromb. Haemost. -2000.-Vol.84.-P. 144−145.
  66. Heid, C.A. Real-time quantitative PCR. // Genome Res. 1996. — N6. — P.986−994.
  67. Higuchi, R. Kinetic PCR Analysis: Real-time monitoring of DNA amplification reactions // Biotechnology. 1992. — N11. — P.1026−1030.
  68. Histopathological changes of the brain in swine fetuses naturally infected with porcine parvovirus / Narita, M., et al. // Nat. Inst. Anim. Health Quart. 1975. -Vol.15.-N.l.-P.24−28.
  69. Hogg, G.G. Experimental porcine parvovirus infection of foetal pigs resulting in abortion, histological lesions and antibody formation / Hogg, G.G., Lenghaus, C., Forman A.J. // J.Comp. Pathology 1977. — Vol.87. — N.47. — P.539−549.
  70. Howell, W.M. iFREET: an improved fluorescence system for DNA-melting analisis / Howell, W.M., Jobs, M., Brookes, A.J. // Genome Res. 2002. — N.12. -P.1401−1407.
  71. Human bocavirus: prevalence and clinical spectrum at a children’s hospital / Arnold, J.C., et al. // Clin. Infect. Dis. 2006. — Vol.43. — P.283−288.
  72. Huygelen, C. Isolation of a hemagglutinating picornavirus from primary swine kidney cell culture / Huygelen, C., Peetermans, J. // Arch. Ges. Virusforsch. 1967. -Vol.20. -N.2.-P.260−262.
  73. Identification of viral pathogens in aborted fetuses and stillborn piglets from cases of swine reproductive falure in Spain / Maldonado, J. et all. // Vet. J. 2005. -Vol.169.-P.454−456.
  74. Immunoglobulins in blood serum of foetal pigs / Chaniago, T.D., et al. // Austral. Vet. J. 1978. — Vol.54. -N.l. — P. 30−33.
  75. Infectious agents identified in pigs with multifocal interstitial nephritis at slaughter / Drolet, R., et al. // Vet. Record 2002. — Vol.150 (5). — P. 139−143.
  76. International Committee on Taxonomy of viruses. Virus index database (ICTVdB).00.050. Parvoviridae // In: The Universal Virus Database, version 4/ C. Buchen-Osmond (ed.). Columbia University. — 2006.
  77. Isolation of porcine parvovirus (PPV) from swine herds affected by reproductive failure, and serologic evidence of infection in Hungarian large swine herds / Mocsari, E., et al. // Acta Vet. Hung. 1983. — V.31. -N.l-3. — P.5−15.
  78. Johnson, R.H. A search for parvoviridae (Picondaviridae) // Vet. Rec. 1969. -Vol.84.-N.l.-P. 19−20.
  79. Johnson, R.H. Experimental infection of piglets and pregnant gilts with a parvovirus / Johnson, R.H., Collings, D.F. // Vet. Rec. 1969. — Vol.85. — N.16. -P.446−447.
  80. Johnson, R.H. Isolation of swine parvovirus in Queensland // Austr. Vet. J. -1973. Vol.49. -N.3. — P.157−159.
  81. Johnson, R.H. Transplacental infection of piglets with a porcine parvovirus / Johnson, R.H., Collings, D. F //Res. Vet. Sci. 1971. — Vol.12. -N.6. -P.570−572.
  82. Joo, H.S. A microneutralization test for the assay of porcine parvovirus antibody / Joo, H.S., Donaldson-Wood, C.R., Johnson, R.H. // Arch. Virology.1975. Vol.47. -N.4. -P.337−341.
  83. Joo, H.S. A standardized haemagglutination inhibition test for porcine parvovirus antibody / Joo, H.S., Donaldson-Wood, C.R., Johnson, R.H. // Austr. Vet. J. 1976. — Vol.52. -N.9. — P.422−424.
  84. Joo, H.S. Porcine parvovirus: a review / Joo, H.S., Johnson, R.H. // Vet. Buii.1976. Vol.46. — N.9. — P.653−660.
  85. Joo, H.S. Rapid diagnostic techniques for detection of porcine parvovirus infection in mummified foetus / Joo, H.S., Donaldson-Wood, C.R., Johnson, R.H., // Austr. Vet. J. 1976. — Vol. — 52. — N. 1. — P.51 -52.
  86. Joo, H.S. Serogical procedure to determine time of infection of pigs with porcine parvovirus / Joo, H.S., Johnson, R.H., Watson, D.L. // Austr. Vet. J. 1978. -Vol.54.-N.3.-P.125−127.
  87. Joo, H.S. Serogical response in pigs vaccinated with inactivated porcine parvovirus / Joo, H.S., Johnson, R.H. // Austr. Vet. J. 1977. — Vol.53. — N.ll. -P.550−552.
  88. Karlsen, F. SYBR Green I DNA staining increases the detection sensitivity of viruses by polymerase chain reaction / Karlsen, F., Steen, H.B., Nesland, J.M. // J. Virology Methods. 1995 — Vol.55. -P.153−156.
  89. Kim, J. Simultaneous detection and differentiation between porcine circovirus and porcine parvovirus in boar semen by multiplex seminested polymerase chain reaction / Kim, J, Han, D.U., Choi, C., // J. Vet. Med. Sci. 2003. — Vol. 65 (6). -P.741−744.
  90. Koromyslov, G.F. Development of hybridization probes on the basis of recombinant DNA to identify porcine parvovirus and rotavirus / Koromyslov, G.F.,
  91. Artjushin, S.K., Zaberezhny, A.D. // Arch. Exp. Vet. 1990. — Vol.44. — N.6. -P.897−900.
  92. Lager, K.L. Porcine parvovirus associated with cutaneous lesions in piglets / Lager, K.L., Mengeling, W.L. // J. Vet. Diagn. Invest. 1994. — Vol.6. — P.357−359.
  93. Lenghaus, C. Experimental infection of 35, 50, and 60 day old pig fetuses with porcine parvovirus / Lenghaus, C., Forman, A. J, Hale, C.J. // Austral. Vet. J. 1978. — Vol.54. — N.9. — P.418−422.
  94. Long, G.G. Comparative analysis of various procedure used in diagnosis of porcine abortion and fetal death / Long, G. G, Armstrong, C. H, Kanitz, C.L. // Amer. Assn. Vet. Lab. Diagnost. 1981. — P. 157−160.
  95. Luckow, V. A, Summers, M.D. // Virology 1989. — Vol.70. — P.31−39.
  96. Mackay, I.M. Real-time PCR in virology / Mackay, I. M, Arden, K. E, Nitsche, A. // Nucleic Acids Res. 2002. — Vol.30. — P. 1292−1305.
  97. Marras, S.A. Efficiencies of fluorescence resonance energy transfer and contact-mediated quenching in oligonucleotide probes / Marras, S. A, Kramer, F. R, Tyagy, S. // Nucleic Acids Res. 2002. — Vol.30. — P. 122.
  98. Mengeling, L. Diseases of swine // USA. 1994. — P.3 52.
  99. Mengeling, W.L. Antibody response of pigs to inactivated monovalent andbivalent vaccines for porcine parvovirus and pseudorabies virus / Mengeling, W. L,
  100. Gutekunst, D. E, Pirtle, E.C. // Amer. J. Vet. Res. 1980. — Vol.41. — N.10. — P. 15 691 571.
  101. Mengeling, W.L. Elimination of porcine parvovirus from infected cell cultures by inclusion of homologous antiserum in the nutrient medium // Amer. J. Vet. Res. -1978. Vol.39. — N.2. — P.323−324.
  102. Mengeling, W.L. Interepizootic survival of porcine parvovirus / Mengeling,
  103. W.L., Paul, P. S. // J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1986. — Vol.188. — N. l 1. — P.1293−1295.
  104. Mengeling, W.L. Pathogenesis of in utero infection: experimental infection of 5- week-old porcine fetuses with porcine parvovirus / Mengeling, W.L., Cutlip, R.C. // Amer. J. Vet. Res. 1975. — Vol.36. — N.8. — P. 1173−1177.
  105. Mengeling, W.L. Porcine parvovirus // Disease of swine, Iowa Start Univ. Press. 1975. — P.432−446.
  106. Mengeling, W.L. Porcine parvovirus infection // Disease of swine, Iowa Start Univ. Press. 1981. -P.352−365.
  107. Mengeling, W.L. Porcine parvovirus: properties and prevalence of a strain isolated in the United States // Amer. J. Vet. Res. 1972. — Vol.33. — N. l 1. — P.2239−2248.
  108. Mengeling, W.L. Prenatal infection following maternal exposure to porcine parvovirus on either the seventh or fourteenth day of gestation // Can. J. Comp. Med. 1979. — Vol.43. — N. 1. — P. 106−109.
  109. Mengeling, W.L. Prevalence of porcine parvovirus induced reproductive failure: an abattoir study // J. Amer. Vet. Med. Assoc. — 1978. — V.172. — N.ll. -P.1291−1294.
  110. Mengeling, W.L. Reproductive disease experimentally induced by exposing pregnant gilts to porcine parvovirus / Mengeling, W.L., Cutlip, R.C. // Amer. J. Vet. Res. 1976. — Vol.37. — N.12. — P.1393−1400.
  111. Mengeling, W.L. Transplacental infection and embryonic death following maternal exposure to porcine parvovirus near the time of conception / Mengeling, W.L., Paul, P. S., Brown, T.T. // Arch. Virol. 1980. — Vol.65. — N.l. — P.55−62.
  112. Molecular beacon real-time PCR detection of swine viruses / McKillen, J., et al. //J. Virol. Methods 2007. — V.140. — P. 155−165.
  113. Molitor, T. Porcine parvovirus update: strain differences // Proc. Amer. Assoc. swine Pract. 1986. -P.593−601.
  114. Molitor, W.T. Porcine parvovirus: Virus purification and structural and antigenic properties of virion polypeptide / Molitor, W.T., Joo, J.S., Collet, M.S. // J. Virology. 1983. — Vol.45. -P.842−854.
  115. Morrison, R.B. Acute reproductive losses due to porcine parvovirus infection in a swine herd: herd observations and economic analysis of the losses / Morrison, R.B., Joo, H.S. // Prev. Vet. Med. 1984. — V.2. — N.5. — P.699−706.
  116. Morrison, T.B. Quaintification of low-copy transcripts by continuous SYBR Green I monitoring during amplification / Morrison, T.B., Weis, J .J., Wittwer, C.T. // Biotechniques. 1998. — Vol.24. -P.954−958, 960, 962.
  117. Mullah, B. Efficient automated synthesis of molecular beacons / Mullah, B., Livak, K. // Nucleot. 1999. — Vol.18. — P. 1311−1312.
  118. Multiplex PCR for detection of pseudorabies virus, porcine parvovirus and porcine circovirus / Huang, C, et al. // Vet. Microbiology. 2004. — Vol. 101. -P.209−214.
  119. Multiplex PCR for rapid detection of pseudorabies virus, porcine parvovirus and porcine circoviruses / Chienjin, H., et al. // Vet. Microbiology. 2004. — Vol.101. -P. 209−214.
  120. Non-suppurative myocarditis in piglets associated with porcine parvovirusinfection / Bolt, D.M., et al. // J. Comp. Pathology. 1997. — Vol.117 (2). -P.107−118.
  121. Observations on the epidemiology of porcine parvovirus / Johnson, R.H., et al. //Austr. Vet. J. 1976. — Vol.52. -N.2. -P.80−84.
  122. Oravainen, J. High porcine parvovirus antibodies in sow herds: prevalence and associated factors / Oravainen, J., Heinonen, M., Virolainen, J.V. // Reprod. Dom. Anim. 2005. — Vol.40. — P.57−61.
  123. Ortiz, E. PNA molecular beacons for rapid detection of PCR amplicons / Ortiz, E., Estrada, G., Lizardi, P.M. // Mol. Cell Probes. 1998. — Vol.12. — P.219−226.
  124. Parvovirus Infection in Pigs with Exudative Skin Disease / Whitaker, H.K., et al. // J. Vet. Diag. Investigation. 1990. — Vol.2. -P.244−246.
  125. Parvovirus infection in pigs with necrotic and vesicle-like lesions / Kresse, J.I. et al. // Vet. Microbiology 1985. — Vol.10. — 525−531.
  126. Parvovirus infection in pigs with vecicular-like lesions / Kresse, J.I., et al. // Proc. Inter. Pig Vet. Soc. Congr., Mexico. 1982. — P. 194.
  127. Pathogenesis of porcine parvovirus infection: pathology and immunofluorescence in the foetus / Joo, H.S., et al. // J. Comp. Pathology. 1977. -Vol.87.-P.383−391.
  128. Patogenicity of a skin isolate of porcine parvovirus in swine fetuses / Choi, C., et al. // Vet. Microbiol. 1987. — Vol.15. — N. l/2. — P. 19−29.
  129. Paul, P. S. Effect of vaccinal and passive immunity on experimental infection with porcine parvovirus / Paul, P. S., Mengeling, W.L., Brown, T.T. // Amer. J. Vet. Res. 1980. — Vol.41. -N.9. -P.1368−1371.
  130. Paul, P. S. Evaluation of a modified live virus vaccine for the prevention of porcine parvovirus-induced reproductive disease in swine / Paul, P. S., Mengeling, W.L. // Amer. J. Vet. Res. 1980. — Vol.41. — N.12. — P.2007−2011.
  131. Paul, P. S. Vaccination of swine with an inactivated porcine parvovirus vaccine in the presence of passive immunity / Paul, P. S., Mengeling, W.L. // Amer. J. Vet. Med. Assoc. 1986. — Vol.188. -N.4. — P.410−413.
  132. Peterson, D.A. Experimental in utero infection of pig foetuses with porcine parvovirus (PPV) / Peterson, D.A., Froesner, G.G., Deinhardt, F.W. // Vet. Microbiol. 1973.-Vol.28.-P.l-11.
  133. Porcine parvovirus infection in boars: II. Influence on fertility / Bonte, P., et al. // Zbl. Vet. Med. B. 1984. — Vol.31.(5). — P.391−5.
  134. Preparation of a porcine parvovirus vaccine / Lei, J.C., et al. // Proc. Inter. Pig Vet. Soc. Congr., Copengagen, Denmark. 1980. — P.64.
  135. Production of porcine parvovirus empty capsids with high immunogenic activity / Martinez, C., et al. // Vaccine. 1992. — Vol.10. — P.684−690.
  136. Real-time PCR protocol for the detection of porcine parvovirus in field samples / Wilhelm, S., et al. // J. of Virological Methods. 2006. — Vol.134. — P.257−260.
  137. Results of challenge in gilts vaccinated with a porcine parvovirus and Aujeszky disease / Plana, J., et al. // Proc. Inter. Pig Vet. Soc. Congr. Ghent, Belgium. 1984. -P.ll.
  138. Saunders, N.A. Quantitative real-time PCR / In: Real-Time PCR, An Essential Guide. Horizon Bioscence, Wymondham 2004.
  139. Siegl, G. Biology and pathogenicity of autonomus parvoviruses // Parvoviruses. New York. London. 1984. — P.297−362.
  140. Siegl, G. The parvoviruses // Virology. Monogr. 1976. — Vol.15. — P.109.
  141. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences / Higuchi, R., et al. // Biotechnology. 1992. — N10. — P.413−417.
  142. Soares, R.M. Detection of porcine parvovirus DNA by the polymerase chain reaction assay using primers to the conserved nonstructural protein gene NS1 / Soares, R.M., Durigon, E.L., Bersano, J.G. // J. Virology. Methods. 1999. — Vol.7. -P.191−198.
  143. Sorensen, K.J. Porcine parvovirus: virus excretion and antibody development after experimental infection and natural transmission / Sorensen, K.J., Nielsen, J. // Proc. Inter. Pig Vet. Soc. Congr. Mexico. 1982. — P. 191.
  144. Spectral genotyping of human alleles / Kostrikis, L.G., et al. // Since 1998. -Vol.279.-P.1228−1229.
  145. Stein, T.E. Epidemiology and economic analysis of reproductive failure in swine caused by parvovirus / Stein, T.E., Leman, A.D. // Inter. Symp. Vet. Epidem. Econom. 1983. — P.225−232.
  146. Straw, B.E. Differential diagnosis of swine diseases / Straw, B.E., Dewey, C.E., Wilson, M.R. // In: Straw, B.E., DAllaire, S., Mengeling, W.L., Taylor, D.J. (Eds.). Diseases of Swine, eighth ed. Iowa State University Press, Ames, Iowa. -1999.-P.41−89.
  147. Studies on polynucleotides. XCVI. Repair replications of short synthetic DNA’s as catalyzed by DNA polymerases / Kleppe, K., et al. // J. Mol. Biol. 1971. -Vol.56.-P.341−361.
  148. Study of the virulence and crossneutralization capability of recent porcine parvovirus field isolates and vaccine viruses in experimentally infected pregnant gilts // Zeeuw, E. J, et al. // J. Gen. Virology. 2007. — Vol.88. — P.420−427.
  149. Summers, M.D. A manual of methods for baculovirus vectors and insect cell culture procedures / Summers, M. D, Smith, G.E. // Tex. Agri. Exp. Stn. Bull. Coil. Stn.- 1987.-P.1555.
  150. Suzuki, H. Immunizing effects of inactivated porcine parvovirus vaccine on piglets / Suzuki, H, Fujisaki, Y. // Nat. Inst. Anim. Health Q. 1976. — Vol.16. -N.2.-P.81.
  151. Swine diseases transmissible with artificial insemination / Tracker, B. J, et al. // J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1984. — Vol.185. -N.5. -P.511−516.
  152. The Classifications and Nomenclature of Viruses. // 6th Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses / Murphy, F. A, et al. // SpringerVerlag. Vienna. — 1995.
  153. Too, H.L. Some epidemiological features and effect on reproductive performance of endemic porcine parvovirus infection / Too, H. L, Love, R.J. // J. Austral. Vet. 1986. — Vol.63. — N.2. — P.50−53.
  154. Tracker, B.J. Comparison of antibody titres to porcine parvovirus in serum and ovarian follicular fluid / Tracker, B. J, Leman, A. D, Sauber T.E. // J. Amer. Vet. Res. -1981.- Vol.42. N.3. — P.532.
  155. Tyagi, S. Molecular beacons: probes that fluoresce upon hybridization / Tyagi, S, Kramer, F.R. // Nat. Biotechnol. 1996. -N.14. — P.303−308.
  156. Tyagi, S. Multicolor molecular beacons for allele discrimination / Tyagi, S, Bratu, D. P, Kramer, F. R. // Nat. Biotechnol. 1998. — N.16. — P.49−53.
  157. Ursache, R. L’infection a parvovirus chez le pore. Note 1. Rappel de connaissances // Rev. Med. Vet. 1983. — Vol.134. -N.11.- P.643−652.
  158. Virus Taxonomy / Van Regenmortel M.H.V., Fauquet C.M., Bishop D.H.L. et all (eds.). // Seventh Report of the International Committee on Taxonomy of viruses. San Diego. — Academic press. — 1999.
  159. Walter, N.G. Real-time monitoring of hairpin ribozyme kinetics through base-specific quenching of fluorescein-labeled substrates / Walter, N.G., Burke, J.M. // RNA. 1997. — Vol.3. — P.392−404.
  160. Walton, J.R. Porcine parvovirus does not affect all fetuses // Pigs. 1987. -Vol.3.-N.4.-P.ll-13.
  161. Wilcockson, J. Use of sodium perchlorate in deproteinization during the preparation of nucleic acids // Biochem. 1973. — Vol.135. — P.559−561.
  162. Wolf, V.H.G. Molecular basis for porcine parvovirus detection in dead fetuses / Wolf, V.H.G., Menossi, M., Mourao, G.B., Gatti, M.S.V. // Genet. Mol. Res. -2008. Vol.7 (2). -P.509−517.
  163. Wrathall, A.E. Effect of porcine parvovirus on development of fertilized pig eggs in vitro / Wrathall, A.E., Mengeling, W.L. // Brit. Vet. J. 1979. — Vol.135. -N.3. -P.249−254.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!