Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Разработка метода верификации диагноза бластоцистоза при диарее неясной этиологии

Диссертация: Разработка метода верификации диагноза бластоцистоза при диарее неясной этиологии
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Развитие большинства современных научных дисциплин напрямую связано с развитием применяемых исследователями методов. Это особенно актуально в области медицины, где правильная диагностика играет ключевую роль в выборе стратегии и тактики лечения, а впоследствии определяет его успешность. В последние десятилетия именно новые методические подходы определяли прорыв в области биохимии и молекулярной… Читать ещё >

Разработка метода верификации диагноза бластоцистоза при диарее неясной этиологии (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
  • Глава 1. АНАЛИЗ ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Проблема бластоцитоза в мире
    • 1. 2. Молекулярно-биологические основы и методологические принципы полимеразной цепной реакции
    • 1. 3. Преимущества метода ПЦР в диагностике паразитозов
  • Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
    • 2. 1. Общая характеристика обследованных пациентов
    • 2. 2. Микроскопическое исследование клинического материала
    • 2. 3. Метод полимеразной цепной реакции
    • 2. 4. Статистические методы исследования
  • Глава 3. ПОДБОР ПРАЙМЕРОВ И ОПТИМИЗАЦИЯ ПАРАМЕТРОВ РЕАКЦИИ АМПЛИФИКАЦИИ
    • 3. 1. Анализ нуклеотидных последовательностей и конструирование видоспецифических праймеров
    • 3. 2. Экспериментальное определение оптимальных условий проведения полимеразной цепной реакции для детекции нуклеиновых кислот В1азШсузШ Брр
  • Глава 4. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ БЛАСТОЦИСТ В КЛИНИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ
    • 4. 1. Выбор оптимального метода выделения ДНК Ыаз^суБйх Брр. для проведения ПЦ Р из клинических образцов
    • 4. 2. Сравнительная характеристика микроскопического и молекулярно-биологического методов детекции бластоцист в клиническом материале
  • Глава 5. ОСОБЕННОСТИ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ БЛАСТОЦИСТНОЙ ИНВАЗИИ
    • 5. 1. Результаты клинического обследования пациентов с диарейным синдромом
    • 5. 2. Результаты клинического обследования носителей бластоцист, у которых отсутствовал диарейный синдром

Большинство паразитозов выявляется и учитывается значительно хуже, чем острые инфекционные болезни [74]. Известно, что кишечные паразиты оказывают выраженное действие на макроорганизм, в частности снижают и угнетают формирование и сохранение иммунитета [31, 73]. Доказана роль некоторых простейших (лямблий, криптоспоридий) в развитии нарушений биоценотических взаимоотношений между патогенными бактериями и нормальной кишечной микрофлорой, что влияет на развитие многих заболеваний, особенно, имеющих хроническое течение.

В последние годы выявлены высокие показатели зараженности Blastocystis hominis у различных групп населения [6]. На протяжении последних лет ведется изучение биологии паразита [125, 160, 167]. Показано, что В. hominis обладают способностью продуцировать токсические продукты метаболизма, которые всасываются в кишечнике, поступают в кровоток и способны оказывать цитотоксический эффект [110]. Установлено, что бластоцистная инвазия на фоне иммунодефицита сопровождается нарушениями микробиоценоза кишечника. Это проявляется увеличением частоты встречаемости транзиторной микрофлоры на фоне снижения доминирования основных симбионтов, повышением показателей плотности колонизации патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, повышением их вирулентности [38].

В связи с этим, актуальной является проблема диагностики широко распространенной протозойной инвазии, обусловленной паразитированием в толстом кишечнике простейших В. hominis. Получены эпидемиологические, клинические и лабораторные данные, подтверждающие этиологическую роль В. hominis в патологии, развивающейся на фоне снижения резистентности организма [31]. Бластоцисты существенно чаще, чем у практически здоровых людей обнаруживаются при хронических дерматозах [52], гастроэнтерологической патологии, диарейном синдроме [99]. Особенно актуальной проблема бластоцистоза становится в связи с резким увеличением ВИЧ-инфицированных, т.к. у иммунокомпрометированных лиц В. hominis могут вызывать хронические поражения пищеварительной системы [135].

В постановке диагноза бластоцистоза ведущую роль играет обнаружение бластоцист в кале микроскопическим и культуральным методом. Однако диагностика бластоцистоза затруднена обилием различных морфологических форм бластоцист [32, 96]. В качестве альтернативных и наиболее перспективных методов обнаружения В. hominis рассматриваются амплификационные методы, в частности, полимеразная цепная реакция (ПТ TP) [112, 115].

Развитие большинства современных научных дисциплин напрямую связано с развитием применяемых исследователями методов. Это особенно актуально в области медицины, где правильная диагностика играет ключевую роль в выборе стратегии и тактики лечения, а впоследствии определяет его успешность. В последние десятилетия именно новые методические подходы определяли прорыв в области биохимии и молекулярной генетики [66]. Одним из таких способов стала ПЦР, являющаяся высокочувствительным диагностическим методом, позволяющим обнаружить ДНК паразита даже при ее очень низком содержании в данном материале [26, 47, 119, 158]. Это достигается подбором праймеров, комплементарных специфическому участку ДНК возбудителя [47, 91].

Для детекции возбудителей таких паразитарных болезней как малярия, лейшманиозы, токсоплазмоз, дирофиляриоз активно применяют ПЦР, однако, для определения бластоцист в клиническом материале (фекалии) отечественных тест-систем на территории РФ не существует.

Приведенные литературные данные свидетельствуют о том, что изучение проблемы бластоцистоза и разработки методов лечения этой инвазии в значительной степени сдерживается отсутствием эффективных стандартизованных методов лабораторной диагностики этой нозоформы [53].

Цель нашей работы — разработка оригинальных праймеров для верификации ШаяЮсуяНя Брр. в клиническом материале на основе метода ПНР и их апробация, а также изучение клинических особенностей диарейного синдрома у лиц с бластоцистной инвазией.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1) провести анализ данных международного интернет-банка генов, подобрать и синтезировать праймеры, оценить их лабораторную перспективность для использования при детекции ярр. методом классической ПЦР;

2) определить оптимальный для проведения ПЦР метод выделения ДНК из биологического материала (кал), апробировать работу выбранных праймеров и оптимизировать временные и температурные режимы реакции;

3) провести сравнение эффективности идентификации бластоцист в клиническом материале (кал) микроскопическим методом и методом ПЦР;

4) определить частоту встречаемости бластоцист у больных с диарейным синдромом и клинически здоровых, жителей Москвы, а также выявить особенности клинического течения диарейного синдрома, ассоциированного с В^^суБШ ярр.

Научная новизна результатов исследования:

Впервые в России разработаны и апробированы праймеры, перспективные для разработки отечественной тест-системы с целью идентификации ДНК бластоцист в клиническом материале (фекалии), в том числе оптимизированы температурные режимы амплификации, определены параметры применения метода ПЦР, подобрана методика выделения ДНК бластоцист.

Уточнена частота встречаемости бластоцист у больных с диарейным синдромом и у лиц из группы «декретированные контингенты», жителей Москвы и Московской области, определен симптомокомплекс для проведения целенаправленного паразитологического обследования больных с диарейным синдромом.

Установлено, что обнаружение генома бластоцист молекулярно-биологическим методом в испражнениях больных с диарейным синдромом не уступает микроскопическим методам исследования. В случаях низкой численности бластоцист в исследуемом материале, он может служить дополнительным методом исследования.

Практическая значимость:

Впервые в России разработаны и апробированы праймеры, перспективные для разработки отечественной тест-системы для идентификации ДНК бластоцист в клиническом материале (фекалии).

Подобрана и оптимизирована методика выделения ДНК бластоцист как из культурального материала, так и из фекалий человека.

Показано, что молекулярно-биологический метод подтверждения бластоцистной инвазии может быть рекомендован при популяционных обследованиях, в том числе при обследовании групп организованных мигрантов, при расследовании вспышек ОКИ на предприятиях общественного питания, благодаря высокой чувствительности, специфичности и быстроте получения результата.

Личное участие автора в получении результатов. Автор принимал непосредственное участие в клиническом обследовании 414 пациентов, лично проводил лабораторную подготовку 231 пробы и исследовал их методом ПЦР, организовал проведение лабораторных и инструментальных исследований. Диссертантом выполнена статистическая обработка и обобщение полученных результатов.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1) Амплификационный метод для идентификации генома бластоцист, сконструированный на основе специфических праймеров №Ь2 и гВЬ2 для выявления рода ЫаБЮсузНз ярр. обладает чувствительностью 94,4% при анализе клинического материала. Экстракция ДНК бластоцист сорбентным методом является наиболее эффективным способом подготовки проб при исследовании клинического материала методом ПЦР.

2) Повышение эффективности лабораторной диагностики бластоцистной инвазии при использовании комплексного подхода диктует необходимость применения как амплификационного, так и микроскопического методов, что наиболее целесообразно при проведении обследования больших групп населения, в том числе профилактических осмотрах декретированных лиц.

Внедрение результатов исследования в практику.

Полученные результаты внедрены в диагностических целях при консультации пациентов в отделении медицинской паразитологии КДЦ ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченоваиспользуются в научно-педагогической работе на кафедре тропической медицины и паразитарных болезней МПФ Первый МГМУ им. И. М. Сеченова для подготовки студентов лечебного и медико-профилактического факультетовв работе специализированной клинико-диагностической лаборатории по паразитарным болезням КЦ Первый МГМУ им. И. М. Сеченова.

Апробация работы.

Работа выполнена на базе Научно-исследовательского Института медицинской паразитологии и тропической медицины имени Е. И. Марциновского Первый МГМУ им. И. М. Сеченова.

Тема диссертационной работы является частью комплексной темы кафедры тропической медицины и паразитарных болезней МПФ Первый МГМУ им. И. М. Сеченова «Совершенствование образовательных технологий додипломного и постдипломного медицинского и фармацевтического образования» 1 201 168 237.

Основные положения диссертации опубликованы в 5 научных работах в журналах, 2 из них включены в перечень ВАК.

Материалы диссертационной работы были доложены на X съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов «Инфекция и иммунитет» (Москва, апрель 2012 г.) и на заседании кафедры тропической медицины и паразитарных болезней МПФ Первый МГМУ им И. М. Сеченова.

Диссертация была представлена и обсуждена на заседании апробационного совета по экспертизе кандидатских и докторских диссертаций в Научно-исследовательском Институте медицинской паразитологии и тропической медицины имени Е. И. Марциновского Первый МГМУ им. И. М. Сеченова (протокол № 2 от 19 марта 2013).

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 109 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, приложения и списка литературы. Последний содержит 167 публикаций, из которых 94 отечественных и 73 зарубежных. Работа иллюстрирована 17 рисунками и 15 таблицами, приведено 2 клинических примера.

ВЫВОДЫ.

1. Подобранные и сконструированные праймеры ВЫ и ВЪ2 перспективны при использовании в отечественных тест-системах на основе метода ПЦР для идентификации Л/о^осу^/я ярр. в клиническом материале (кал).

2. Оптимизированные параметры временных и температурных режимов амплификации при проведении ПЦР с оригинальными праймерами обеспечивают синтез специфичных фрагментов и позволяют с высокой чувствительностью и специфичностью верифицировать бластоцисты в клиническом материале.

3. Доказана более высокая чувствительность разработанного амплификационного метода при исследовании клинического материала на основе праймеров ВЪ2 (94,4%) по сравнению с праймерами ВЫ (88,8%) и показана возможность выявления ДНК В^^суБШ эрр. в микроскопически отрицательных пробах при использовании праймеров В1т2 (21,9%), что является детекцией субмикроскопического присутствия бластоцист.

4. Применение ПЦР для верификации Я/ги^осу^м: Брр. с использованием сконструированных праймеров ВЫ и ВЬ2, позволяющих выявлять возбудителя на субмикроскопическом уровне, расширяет диагностические возможности для обследования больных с диарейным синдромом.

5. Использование микроскопического и молекулярно-биологического методов обследования позволило установить, что у больных с диарейным синдромом ВШШсуБНз эрр. обнаруживались у каждого второго (58,4%), в группе здоровых лиц бластоцисты встречались только в 9,2% случаев, что указывает на возможную этиологическую роль бластоцист в развитии диарейного синдрома при отсутствии других инфекционных и паразитарных факторов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Для повышения качества лабораторной идентификации бластоцист в клиническом материале рекомендуется использовать полимеразную цепную реакцию с праймерами ffih2 (5 -GGAGGTAGTGACААТАААТС-3 ') и rBh2 (5'-TAAGACTACGAGGGTATCTA-3'), комплементарными к участку гена 18S рРНК.

2. При верификации бластоцист методом ПЦР для выделения ДНК бластоцист в клиническом материале рекомендуется использовать метод аффинной сорбции на силикагеле с предшествующим лизированием пробы в гуанидинтиоционате.

3. Больных с диарейным синдромом, эозинофилией, наличием полиморфных высыпаний на коже туловища и конечностей необходимо обследовать паразитологическими методами с целью поиска кишечных простейших, в том числе — Blastocystis spp.

4. С целью увеличения диагностической эффективности в комплексном обследовании больных с диарейным синдромом при анализе фекалий рекомендуется сочетать микроскопический метод с молекулярно-биологическим (ПЦР), что наиболее целесообразно при массовых профилактических осмотрах декретированных лиц, детей в организованных коллективах, при расследовании вспышек ОКИ на предприятиях общественного питания.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Анализ простых межмикробных взаимоотношений в микробиоценозе толстой кишки человека / Ю. В. Несвижский, A.A. Воробьев, С. С. Белоносов и др. // Вестн. РАМН. 2002. — № 3. — С. 23−25.
  2. О.В. Дисбактериоз у детей с заболеваниями желудочно-кишечного тракта // Педиатрия. 1999. — № 9. — С. 73−77.
  3. Бактериальная колонизация и сукцессия у новорожденных детей в аспекте проблемы госпитальных инфекций / B.C. Костюк, Т. М. Меронов, К. Е. Самсонова и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1998. — № 10. — С. 19−22.
  4. А.Ю., Кондрашин Э. А. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника. СПб: Питер, 2000. — 209 с.
  5. О.В. Комплексы видов кровососущих комаров рода Anopheles (.Diptera, Culicidae) России и ближнего зарубежья: Автореф. дис.. канд. биол. наук. М., 2011. — 22 с.
  6. Бластоцисты у людей в Тульской области / Т. Ю. Державина, В. В. Болдырева, E.H. Говорова и др. // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. М.: «Династия», 2011. — С. 101.
  7. В.М., Грачева Н. М., Мацулевич Т. В. Дисбактериозы кишечника у взрослых. М.: КМК, 2003. — 224 с.
  8. Н.В. Ассоциации простейших Blastocystis hominis с некоторыми условно-патогенными микроорганизмами при дисбиозе кишечника у пациентов разных возрастных групп // Сборник научных трудов «Фундаментальные науки и практика». Томск, 2010. — С. 25.
  9. Н.Д. Дисбактериоз кишечника в клинике соматических заболеваний // Врач. 1996. — № 11. — С. 18−19.
  10. Генетические варианты риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки из различных эпидемически активных очагов / Т. П. Микрюкова,
  11. М.Ю. Карташов, E.B. Протопопова и др. // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. М.: «Династия», 2012.-С. 249.
  12. Генодиагностика глубоких микозов / В. А. Антонов, В. В. Алексеев, A.B. Липницкий и др. // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. М.: Медицина для всех, 2004. — Т. 2. — С. 157−158.
  13. Геномика Bacillus antracis / Е. И. Еременко, А. Г. Рязанова, О. И. Цыганкова и др. // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. М.: Медицина для всех, 2004. — Т. 2. — С. 172−175.
  14. Генотипирование Yersinia pestis: вариабельность локуса (СФФФ)п у природных штаммов, выделенных на территории бывшего СССР / И. Ю. Сучков, Б. Н. Мишанькин, С. О. Водопьянов и др. // Молекулярная генетика. -2002.-№ 4.-С. 18−21.
  15. О.О., Азова М. М., Гигани О. Б. Основные вопросы биологии. М.: ООО «ПЦК Альтекс», 2010.- 103 с.
  16. А.Л., Романова Ю. М. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и ее применение в бактериологии: Учебно-методическое пособие для врачей-бактериологов. М., 2006. — 142 с.
  17. Н. С. Особенности микробиоценозов кожи и кишечника при экземе на фоне Blastocystis hominis: Автореф. дис.. канд. биол. наук. — Ульяновск, 2007. 24 с.
  18. ., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. — М.: Мир, 2002. 589 с.
  19. Дирофиляриозы в Московском регионе зоне низкого риска передачи инвазии / В. Г. Супряга, H.H. Дарченкова, A.M. Бронштейн и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни — 2011. — № 1. — С. 3−7.
  20. Дисбактериоз: современ. возможности профилактики и лечения / Бондаренко В. М., Учайкин В. Ф., Мурашева А. О. и др. М.: АО «Партнер», 1997.-22 с.
  21. Дисбактериозы у детей: Учебное пособие для врачей и студентов. / A.A. Воробьев, С. Г. Пак, К. И. Савицкая и др. М.: «КМК Лтд.», 1999. — 64 с.
  22. ДНК-диагностика микст-инвазий Opistorchis felineus и Metorchis bilis с помощью метода ПЦР / И. И. Брусенцов, А. В. Катохин, З. В. Сахаровская и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2010.- № 2. — С. 10−13.
  23. Г. И. Современная методология диагностики и терапии аллергических и аллергопаразитарных заболеваний: Автореф. Дис.. д-ра мед.наук. М., 2010. — 45 с.
  24. И.Г. Использование метода ПЦР в клинико-диагностических лабораториях // Лаборатория. 1996. — № 4. — С. 3−6.
  25. Идентификация генов патогенности условно-патогенных Enterobacteriaceae методом ПЦР / Б. Р. Кулуев, Д. Н. Дубровская, Д. Я. Хайдарова и др. // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. М.: «Династия», 2011. — С. 201.
  26. Изучение популяций возбудителя трехдневной малярии и возможность ее укоренения на территории Кыргызстана / Н. Т. Усенбаев, A.M. Баранова, М. И. Гордеева и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2010. — № 1. — С. 36−39.
  27. H.A. Микробиоценоз кишечника человека при бластоцистной инвазии и воздействие Blastocystis hominis на макроорганизм: Автореф. дис.. д-ра биол. наук. Ульяновск, 2005. — 37 с.
  28. Инфекция В. hominis у грудного ребенка с пищевой аллергией / М. О. Смирнова, Е. А. Ружицкая, А. Н. Пампура и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2010. — № 3. — С. 11−15.
  29. Е.Ю., Бренева Н. В. Лабораторный скрининг лептоспирозов у людей // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. М.: «Династия», 2011. — С. 167.
  30. Клинико-этиологическая характеристика острых вирусных диарей у детей / Т. Г. Филатова, JI.A. Калиниченко, А. И. Коваленко и др. // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. М.: «Династия», 2012. — С. 402.
  31. A.C., Севастьянова Г. А. Молекулярная биология. М.: Издательский центр «Академия», 2003. — 400с.
  32. Ю.Ю., Симонова A.A. Ассоциации простейших Blastocystis hominis с микроорганизмами при дисбиозе кишечника // Вестник ОГУ. 2010. — № 1. — С. 103−105.
  33. A.A. // Определитель паразитических простейших. М. -2004.-150 с.
  34. Т.Ю., Лапин A.A., Мокриевич А. Н. Разработка генодиагностических тест-систем и характеристики штаммов возбудителя туляремии // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. М.: «Династия», 2012. — С. 205.
  35. Г. В., Пелевина Е. П. Полимеразная цепная реакция в диагностике коклюша // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. М.: Медицина для всех, 2004. — Т. 2. — С. 57−59.
  36. В.З. Применение методов статистического анализа для изучения общественного здоровья и здравоохранения: Учебное пособие для вузов. М.: «Гэотар-Медиа», 2007. — 192 с.
  37. Лабораторная характеристика бластоцистной инвазии у больных с хроническими вирусными гепатитами / A.C. Сигитаев, B.C. Сукачев, М. В. Куртуков и др. // Журнал инфектологии. 2011. — Том 3. — №. 4. — С. 62−66.
  38. A.B. Клинико-лабораторные особенности течения острых кишечных диарейных инфекций, ассоциированных с Blastocystis hominis: Автореф. дис.. канд. мед. наук. СПб., 2006. — 19 с.
  39. Г. И. Идентификация штамма Echinococcus granulosus и генетические факторы риска гидатидозного эхинококкоза на южном Урале: Автореф. дис.. .докт. мед. наук. М., 2008. — 42 с.
  40. Методики клинических лабораторных исследований: Справочное пособие. Том 3 / Под редакцией В. В. Меньшикова. М.: Лабора, 2009. — 880 с.
  41. Молекулярные методы клинической диагностики / Под редакцией С. Херрингтона и Дж. Макги. М.: Мир, 1999. — 558 с.
  42. МУ 1.3.2569−09. Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2009. — 53 с.
  43. МУК 4.2.735−99. Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999. — 72 с.
  44. МУК 3.2.987−00. Паразитологическая диагностика малярии: Методические указания. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2001. — 36 с.
  45. A.C. Особенности патогенеза и терапии хронических дерматозов при бластоцистной инвазии: Автореф. дис.. д-ра мед.наук. -СПб., 2009.-41 с.
  46. Письмо Руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 30 июня 2006 г. N 0100/7174−06−32 «О заболеваемости редкими гельминтозами в российской федерации в 2005 году»
  47. Особенности микрофлоры толстого кишечника при инфекционном эндокардите / A.A. Воробьев, JT.O. Иноземцева, Ю. В. Несвижский и др. // Микробиология, эпидемиология и иммунология. 1996. — № 1. — С. 70−74.
  48. Паразитарные болезни человека (протозоозы и гельминтозы): Руководство для врачей / под ред. В. П. Сергиев, Ю. В. Лобзин, С. С. Козлов. -СПб: Изд-во «Фолиант», 2008. 586 с.
  49. Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов: Методические указания. 2-е изд. — М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2003. — 72 с.
  50. Перспективы метода «Molecular because» для генной диагностики возбудителей особо опасных инфекций / A.C. Водопьянов, Н. В. Павлович, С. О. Водопьянов и др. // Мол. генетика, микробиология, вирусология. 2004. -№ 2. — С. 24−28.
  51. Применение RAPD-анализа для выявления видов различных микромицетов / С. М. Игнатьева, Д. Т. Маркозашвили, К. В. Богданов и др. // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. М.: «Династия», 2011. — С. 148−149.
  52. Т.В., Федянина JI.B., Волкова И. В. Медицинское значение инфекции Blastocystis spp. II Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2012. — № 3. — С. 59−62.
  53. ПЦР «в реальном времени» / Д. В. Ребриков, Г. А. Саматов, Д. Ю. Трофимов и др. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2009. — 223 с.
  54. В.М. Возвращающиеся зоонозы: дирофиляриозы Средиземноморья // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -2012. -№ 1.- С. 55−59.
  55. H.A. Современные задачи санитарной паразитологии // Мед. паразитология и паразитарные болезни. 2001. — № 4. — С. 25−29.
  56. JI.B. Разработка лабораторной диагностики лепры с помощью полимеразной цепной реакции // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. М.: «Династия», 2012.-С. 336.
  57. Т.В., Гордеева JIM., Сергиев В. П. Изучение морфологии бластоцист низших обезьян с помощью световой микроскопии // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1997. — № 2. — С. 24−27.
  58. Ю.О., Егорова И. Ю. ПЦР в диагностике Сибирской язвы: преимущества и недостатки // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. М.: «Династия», 2011.-С. 339.
  59. В.П., Лебедева М. Н. Распространение паразитарных болезней и их профилактика в России // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1997. — № 3. — С. 5−9.
  60. В.П., Филатов H.H. Инфекционные болезни на рубеже веков. М.: Наука, 2006. — 572 с.
  61. Современные методы диагностики коклюша у детей / Л. М. Коноплина, И. Г. Чурикова, Ю. Н. Анохина и др. // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. М.: «Династия», 2011.-С. 179.
  62. Д.Ю. Создание отечественной инновационной технологической платформы для решения актуальных фундаментальных и прикладных задач современной иммунологии на основе ПЦР в реальном времени: Автореф. дис.. д-ра биол. наук. М., 2009 — 44 с.
  63. И.П. Токсоплазмоз: Учебное пособие. М.: РМАПО, 2008.-20 с.
  64. И.П. Микоплазменная инфекция: Учебное пособие. М.: РМАПО, 2008. — 20 с.
  65. К. А. Значение определения генов инвазивности шигаподобных и энтеротоксинов методом ПЦР для клиники и диагностики острой дизентерии: Автореф. дис.. канд. мед. наук М., 2003 — 24 с.
  66. A.B. ПЦР-диагностика криптоспоридиоза кур: Автореф. дис.. канд. биол. наук М., 2008 — 23 с.
  67. O.E. Особенности микрофлоры кишечника при псориазе на фоне инвазии Blastocystis hominis: Автореф. дис.. канд. биол. наук. -Ульяновск, 2004. 23 с.
  68. Ю.П. Микрофлора кишечника при неспецифическом язвенном колите // Казанский медицинский журнал. 1997. — № 3. — С. 202−204.
  69. JI.B., Продеус Т. В., Волкова И.В. Blastocystis hominis, Brumpt 1912 загадочный организм, относящийся к простейшим кишечника // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. — 2011. — № 2. — С. 47−52.
  70. H.A. Бластоцистоз и СПИД // Медицинская паразитология. -1992. -№ 4, — С.48−51.
  71. В.П., Карасева Н. В. Материалы лекций по разделу «Молекулярная генетика». М.: ООО «ПИК Альтекс», 2010. — 52 с.
  72. В., Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология. М.: МАИК «Наука Интерпиреодика», 2002. — 445 с.
  73. Blastocystis hominis и непатогенные простейшие кишечника у больных туберкулезом легких и ВИЧ-инфицированных / H.A. Давис, Ж. И. Исламова, Х. З. Гиясов и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни 2010. — № 3. — С. 8−11.
  74. A case-control study of Blastocystis hominis among Iranian population / M. Rostami Nejad, E. Nazemalhosseini Mojarad, H. Dabiriet et al. // East African Journalof Public Health. 2010. — Vol. 7. — № 1. — P. 101−104.
  75. A multiple fission-like mode of asexual reproduction in Blastocystis hominis / M. Suresh, J. Howe, G.C. Ng et al. // Parasitology Research. 1994. -Vol.80. -№ 6. -P. 523−527.
  76. An improved PCR method for detection of HIV-1 proviral DNA of a wide range of subtypecs and recombinant forms circulating globally/ J. Weidner, U. Cassens, W. Gohde et al. // Journal of Virological Methods. 2011. — Vol. 172. -№ 1. — P. 22−26.
  77. Blastocystis hominis and Dientamoeba fragilis in patients fulfilling irritable bowel syndrome criteria / J. Yakoob, W. Jafri, M.A. Beg et al. // Parasitology Research. 2010. — Vol. 107. — № 3. — P. 679−684.
  78. Blastocystis hominis infection: a real pathohen? / de Silva, D.G. Harendra, L.N. Mendis et al. // Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 1997. — Vol. 27. — № 2. — P. 243.
  79. Blastocystis hominis: phylogenetic affinities determined by rRNA sequence comparison / A.M. Johnson, A.A. Thanou, P.F. Boreham et al. // Exp. Parasitol.- 1989.- V.68.- P.283−289.
  80. Blastocystis: a new disease in patients with leikemia / P. Garavelli, L. Scaglione, M. Rossi et al. // Haematologica. 1991. — V.76. — P.76−80.
  81. Blastocystosis in patients with gastrointestinal symptoms: a case-control study / A.H. Cekin, Y. Cekin, Y. Adakan et al. // BMC gastroenterology. 2012. -Vol. 12.-P. 122.
  82. Characterisation of small double stranded RNA molecule in Cryptosporidium hominis, Cryptosporidium felis and Cryptosporidium meleagridis / F. Leoni, Ch. Gallimore, J. Green et al. // Parasitology International 2006. — Vol. 55.-№ 4. -P. 299−306.
  83. Chen T.L., Chan C.C., Chen H.P. Clinical characteristics and endoscopic findings associated with Blastocystis hominis in healthy adults // American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 2003. — V.69. — № 2. — P. 213−216.
  84. Clark C. G., Diamond L. S. Methods for Cultivation of Luminal Parasitic Protists of Clinical Importance // Clinical Microbiology Reviews. 2002. — V.15. -№. 3. — P.329−341.
  85. Clinical significance of Blastocystis hominis: experience from a medical center in northern Taiwan / Han-Yueh Kuo, Dung-Hund Chiang, Chien-Chun Wang et al. // Journal of Microbiol. Immunol. Infect. 2008. — V. 41. — P. 222−226.
  86. Conventional and molecular methods to detect bacterial pathogens in mussels / C. Gugliandolo, V. Lentini, A. Spano et al. // Lett Appl Microbiol. 2011. -Vol. 52.-№ l.-P. 15−21.
  87. Cytopathic effect of Blastocysts hominis after intramuscular inoculation into laboratory mice / K. T. Moe, M. Singh, P. Gopalakrishnakone et al. // Parasitology research. 1998. — V.84. №. 6. — P.450−454.
  88. Detection of Blastocysts from stool samples using real-time PCR / M.S. Jones, R.D. Ganac, G. Hiseretal // Parasitology Research. 2008. — Vol. 103. — № 3. -P. 551−557.
  89. Detection of Blastocysts hominis in unpreserved stool specimens by using polymerase chain reaction / R. Stensvold, A. Brillowska-Dabrowska, H.V. Nielsen et al. // The journal of parasitology. 2006. — Vol. 92. — № 5. — P. 10 811 087.
  90. Direct characterization of Blastocysts from faeces by PCR and evidence of zoonotic potential / U. Parkar, R.J. Traub, S. Kumaret et al. // Parasitology. -2007. Vol. 134. — № 3. — P. 359−367.
  91. Effect of trimethoprim-sulfamethaxazole in Blastocysts hominis infection / U.Z. Ok, N. Girginkardesler, C. Balciogluet. et al. it The American Journal of Gastroenterology. 1999. — Vol. 94. — № 11. — P. 3245−3247.
  92. Elwakil H.S., Talaat R.M. Genetic analysis of Blastocysts hominis isolated from symptomatic and asymptomatic human hosts in Egypt // Journal of the Egyptian society Parasitology. 2009. — Vol. 39. — №. 1. — P. 99−109.
  93. Emerging Microsporidia Infections in Russian HIV-infected Patients /
  94. Sokolova, A.V. Demyanov, L.C. Bowers et al. // Journal of Clinical microbiology. 2011. — Vol. 49. — P. 2102−2108.
  95. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia / R.K. Saiki, S. Scharf, F. Faloona et al. // Science. 1985. — Vol. 230. — P. 1350−1354.
  96. Epidemiology, clinical, immune, and molecular profiles of microsporidiosis and cryptosporidiosis among HIV/AIDS patients / R. Wumba, B. Longo-Mbenza, J. Menotti et al. // International Journal of General Medicine — 2012.-Vol. 5.-P. 603−611.
  97. Eroglu F., Koltas I.S. Evaluation of the transmission mode of Blastocystis hominis by using PCR method // Parasitology Research. 2010. — Vol. 107.-№ 4.-P. 841−845.
  98. Evaluation and improvement of two PCR targets in molecular typing of clinical samples of Leishmania patients / J.H. Roelfsema, N. Nozari, T. Herremans et al. // Experimental Parasitology.- 2011. Vol. 127. — № 1. — P. 36−41.
  99. Experimental Blastocystis hominis infection in laboratory mice / K.T. Moe, M. Singh, J. Howe et al. // Parasitology Research. 1997. — Vol. 83. — № 4. -P. 267−268.
  100. Garavelli P.L. Blastocystis-. a new disease in the acquired immundeficiency syndrom // International journal of STD and AIDS. 1990. Vol.1. № 2. — P. 134−135.
  101. Garavelli P.L. Blastocystosis or Zierdt-Garavelli disease // Presse medicale. 1996. — V.25. — № 16. — P. 777.
  102. Garcia L.S., Shimizu R.Y. Evaluation of intestinal protozoan morphology in human fecal specimens preserved in EcoFix: comparison of Wheatley’s trichrome stain and EcoStain // Clin. Microbiol. 1998. — Vol. 36. -№.7.-P. 1974−1976.
  103. Genetic variability of Blastocystis hominis isolates in China / Y. Yan, S. Su, R. Lai et al. // Parasitology Research. 2006. — Vol.99. — № 5. — P.597−601.
  104. Gupta R., Parsi K. Chronic urticarial due to Blastocystis homihis II Australas J. Dermatol. 2006. — Vol.47. — № 2. — P. 117−119.
  105. Hameed D.M., Hassanin O.M., Zuel-Fakaar N.M. Association of Blastocystis homihis genetic subtypes with urticarial // Parasitology Research. -2011.-Vol. 108. -№ 3. -P. 553−560.
  106. Identification and characterization of variable-number tandem repeats in the Yersinia pestis genome / A.M. Klevytska, L.B. Price, J.M. Schupp et al. // J. Clin. Microbiol. -2001. Vol. 39. — № 9.-P. 3179−3185.
  107. Identification of Blastocystis hominis isolates from asymptomatic and symptomatic patients by PCR // F. Eroglu, A. Genc, G. Elgunetal// Parasitology Research.-2009.-Vol. 105.-№ 6.-P. 1589−1592.
  108. Identification of Blastocystis subtype 1 variants in the Home for Girls, Bangkok, Thailand / U. Thathaisong, S. Siripattanapipong, M. Mungthin et al. // American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 2013. Vol. 88.- № 2. — P. 352−358.
  109. Infective etiology of diarrhea in adults with HIV infection in Dakar: a case-control study on 594 patients / A. Gassama, B. Thiaw, N.M.Diaet. et al. // Dakar medical.- 2001. Vol. 46. — № 1. — P. 46−50.
  110. Intestinal microsporidiosis in diarrheal patients infected with human immunodeficiency virus-1 in Addis Ababa, Ethiopia / T. Endeshaw, A. Kebede, J.J. Verweij et al. // Japanese Journal of Infectious Diseases 2006. — Vol. 59. — № 5. -P. 306−310.
  111. Intestinal parasites infections in hospitalized AIDS patients in Kinshasa, Democratic Republic of Congo / R. Wumba, B. Longo-Mbenza, M. Mandina et. al. // Parasite. 2010. — Vol. 17. — № 4. — P. 321−328.
  112. Intestinal parasites in immigrants in the city of Naples (southern Italy) / L. Gualdieri, L. Rinaldi, L. Petrullo et al. // Acta Tropica.- 2011. Vol. 117. — № 3. -P. 196−201.
  113. Intestinal parasitic infections: prevalences in HIV/AIDS patients in a Thai AIDS-care centre / W. Saksirisampant, J. Prownebon, P. Saksirisampant et al. // Annals of tropical medicine and parasitology. 2009. — Vol. 103. — № 7. — P. 573 581.
  114. Irritable bowel syndrome: in search of an etiology: role of Blastocysts hominis / J. Yakoob, W. Jafri, N. Jafri et al. //Am. J. Trop. Med. Hyg. 2004. — Vol. 70.-№ 4.-P. 383−385.
  115. Jarra W., Snounou G. Only viable parasites are detected by PCR following clearance of rodent malarial infections by drug treatment or immune responses // Infect. Immun. 1998. — V.66. — №.8. — P. 3783−3787.
  116. Jula G. M, Sattari M, Banihashemi R. The phenotypic and genotypic characterization of Bacillus anthracis isolates from Iran // Trop. Anim. Health. Prod. -2011.- Vol. 43. -№ 3.- P. 699−704.
  117. Leishmania (Viannia) braziliensis identification by PCR in the state of Para, Brazil / H. A. Bacha, F.F. Tuon, R.A.Zampieri et al. // Transactions of the Royal Society Tropical Medicine and Hygiene 2011. — Vol. 105. — № 3. — P. 173 178.
  118. MacPherson D.W., MacQueen W.M. Morphological diversity of Blastocystis hominis in sodium acetate-acetic acid-formalin-preserved stool samples stained with iron hematoxylin // Journal of Clinical Microbiology. 1994. — V.32. №. 1. — P.267−268.
  119. Pathogenicity of Blastocystis hominis, a clinical reevaluation / S. Kaya, E.S. Cetin, B.C. Aridogan et al. // Turkiye Parazitolojii Dergisi. 2007. — Vol. 31. -№ 3.- P. 184−187.
  120. PCR detection of Dirofilaria immitis in Aedes aegypti and Culex pipiens from urban temperate Argentina / D. Vezzani, M. Mesplet, D.F. Eiras et al. II Parasitology Research. 2011. — Vol. 108. — № 4. — P. 985−989.
  121. PCR detection of pathogenic Leptospira genomospecies targeting putative transcriptional regulator genes / D. Liu, M.L. Lawrence, F. W. Austin et al. // Canadian Journal Microbiology. 2006. — Vol. 52. — № 3. — P. 272−277.
  122. PCR fingerprinting of Blastocystis isolated from symptomatic and asymptomatic human hosts / T.C. Tan, K.G. Suresh, K.L. Thong, H.V. Smith et al. // Parasitology Research. 2006. — Vol. 99. — № 4. — P. 459−456.
  123. Phillips B.P., Zierdt C.H. Blastocystis hominis', pathogenic potential in human patients and in gnotobiotes // Experimental Parasitology. 1976. — Vol. 39. -№ 3. -P. 358−364.
  124. Prevalence and clinical relevance of Blastocystis hominis in diverse patient cohorts / O. Cirioni, A. Giacometti, D. Drenaggi et al. II Eur. J. Epidemiol. -1999.-V.15.-P.389−393.
  125. Protozoon infections and intestinal permeability / H. Dagci, S. Ustun, M.S. Taneretal. // Acta Tropica. 2002. — Vol. 81. — №. l. — p. 1−5.
  126. Reinthaler F.F., Mascher F., Marth E. Blastocysts hominis-'mtQstmal parasite or commensal? // Wiener medizinische wochenschrift. 1988. — VI5. -P.545−552.
  127. Seroprevalence of toxoplasmosis in Korean pregnant women / K.J. Song, J.C. Shin, H.J. Shin et al. // Korean Journal of Parasitology 2005. — Vol. 43. — № 2. -P. 69−71.
  128. Snounou G. Detection and identification of the four malaria parasite species infecting humans by PCR amplification // Methods Mol. Biol. 1996. -V.50.-P. 263−291.
  129. Stenzel D.J., Boreham P. F. L. Blastocysts hominis Revisited // Clinical Microbiol. Reviews. 1996. — Vol.9. — №.4. — P. 563 — 583.
  130. Studies on polynucleotides. XCVI. Repair replications of short synthetic DNA’s as catalyzed by DNA polymerases / K. Kleppe, R. Ohtsuka, I. Molineux et al. //Journal of Molecular Biology. 1971. — Vol. 1071. — № 56. — P. 341−361.
  131. Study on the biological characteristic of Blastocysts hominis'. morphology, mode of reproduction and the relation to bacteria / J.Y. Qiao, X. Zhang, Z.C. Wei et al. // Journal of Hygiene Research. 2006. — Vol. 35. — № 6. — P. 739−742.
  132. Tan K.S.W., Singh M., Yap E.H. Recent advances in Blastocysts hominis research: hot spots in terra incognita // International journal of Parasitology.- 2002. Vol. 32. — № 7. — P. 789−804.
  133. Tan K.S.W., Suresh K.G. Predominance of amoeboid forms of Blastocysts hominis in isolates from symptomatic patients II Parasitology Research.- 2006. Vol. 98. — JVb 3. — P. 189−193.
  134. Watson J.D., Crick F.H. Molecular structure of nucleic acids. A structure for deoxyribose nucleic acid. 1953 // Annals of internal medicine. 2003. — V.138. №. 7. — P.581−582.
  135. Zierdt C.H., Rude W.S., Bull B.S. Protozoan characteristics of Blastocystis hominis II American journal of clinical pathology.- 1967. V.48.- № 5. -P.495−501.
  136. Zierdt C.H. Studies of Blastocystis hominis 11 Journal of protozoology. -1973.-Vol. 20.-№ l.-P. 114−121.
  137. Zierdt C.H., Swan J.C. Generation time and growth rate of the human intestinal parasite Blastocystis hominis II Journal of protozoology. 1981. — Vol. 28.- № 4. P. 483−485.
  138. Zierdt C.H. Blastocystis hominis, a long-misunderstood intestinal pathogen // Parasitol. Taday.-1988. V.4. — P. 15−19.
  139. Zierdt C.H. Blastocystis hominis: Past and future // Clin. Microbiol. Rev.- 1991.-V.4.-P. 61−79.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!