Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Вирусные и невирусные методы введения в организм рекомбинантных нуклеиновых кислот

Диссертация: Вирусные и невирусные методы введения в организм рекомбинантных нуклеиновых кислот
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Научная новизна. Впервые создан видоспецифичный вектор на основе цитомегаловируса из Peromyscus maniculatus для экспрессии рекомбинантных белков с целью исследования иммунного ответа в организме хомячков на хантавирусные антигены. Впервые исследован эффект делеции гена рЗЗ цитомегаловируса на вирусную инфекцию in vitro и in vivo. Впервые получены данные о взаимодействии гликопротеинов вирусной… Читать ещё >

Вирусные и невирусные методы введения в организм рекомбинантных нуклеиновых кислот (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
  • 1. Биология цитомегаловирусов
  • 2. Использование цитомегаловируса в качестве экспрессионного вектора
  • 3. Биология хантавирусов
  • 4. Нейродегенеративные заболевания человека
  • 5. Генная и клеточная терапия нейродегенеративных заболеваний
  • 6. РНК-интерференция
  • ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТ
  • ГЛАВА 1. Новый вектор на основе цитомегаловируса из Peromyscus maniculatus для видоспецифичной экспрессии рекомбинантных белков хантавирусов.75 '
    • 1. 1. Выделение и филогенетический анализ цитомегаловируса из
  • Peromyscus maniculatus (PCMV)
    • 1. 2. Создание рекомбинантного цитомегаловируса Peromyscus maniculatus (PCMV AP33: G1EGFP)
    • 1. 3. Анализ вирусной инфекции рекомбинантным цитомегаловирусом Peromyscus maniculatus (PCMV AP33: G1EGFP) in vitro
    • 1. 4. Анализ инфицирования хомячков Peromyscus maniculatus рекомбинантным цитомегаловирусом (PCMV AP33: G1EGFP)
    • 1. 5. Обсуждение
  • ГЛАВА 2. Особенности локализации и взаимодействия рекомбинантных гликопротеинов хантавирусов
    • 2. 1. Разработка и получение препаратов для иммунологического исследования гликопротеинов хантавирусов
    • 2. 2. Исследование локализации хантавирусных гликопротеинов при экспрессии in vitro
    • 2. 3. Обсуждение
  • ГЛАВА 3. Клеточная терапия бокового амиотрофического склероза с помощью генетически модифицированных мононуклеарных клеток крови пуповины человека
    • 3. 1. Выделение и анализ жизнеспособности мононуклеарных клеток из крови пуповины человека
    • 3. 2. Создание рекомбинантных генетических конструкций
    • 3. 3. Получение генетически модифицированных клеток мононуклеарной фракции крови пуповины человека
    • 3. 4. Трансплантация генетически модифицированных мононуклеарных клеток крови пуповины человека мышам, экспрессирующим фенотип бокового амиотрофического склероза
    • 3. 5. Трансфекция siRNA в аксоны седалищного нерва трансгенных мышей G93A
    • 3. 6. Обсуждение

Одна из актуальных задач современной биологии — направленный контроль экспрессии генов с изменением отдельных признаков организма. Перспективным направлением для решения этой задачи считают генную терапию, т. е.

введение

в организм рекомбинантных генов с заданными свойствами. Актуальность генной терапии для практического применения очевидна, но существующие на сегодняшний день методы генетической модификации клеток имеют ряд существенных недостатков, связанных с биобезопасностью и малой эффективностью классических технологий.

Принцип генной терапии состоит во введении рекомбинантного генетического материала для коррекции генетического дефекта (мутации) или для влияния на отдельные свойства клетки, такие как синтез биомолекул. Методы генной терапии позволяют экспрессировать рекомбинантные гены, кодирующие терапевтические белки для лечения различных заболеваний либо с целью иммунизации организма, снижать уровень экспрессии или полностью подавлять экспрессию генов (нокдаун и нокаут, соответственно от «knokdown» и «knockout») при генетических или соматических заболеваниях, таких как онкологические, нейродегенеративные и инфекционные (Seow and Wood 2009). Первые клинические исследования по генной терапии были проведены в девяностые годы прошлого столетия (Anderson 1990). С тех пор в мире зарегистрировано более 1537 клинических исследований с применением методов генной терапии (http://www. wiley.co.uk/genmed/clinical/).

Существует два основных методических подхода для введения генетического материала в клетку-мишень— вирусный и невирусный. Вирусный подход основан на способности вирусов взаимодействовать с клетками организма, что приводит к введению вирусной генетической информации внутрь клеток и экспрессии вирусных генов. Миллионы лет эволюции привели к тому, что процесс вирусного инфицирования стал чрезвычайно эффективным. Главный недостаток данного подхода — высокая биологическая опасность вирусной инфекции. Опасность может быть связана с особенностями жизненного цикла вирусов. Например, интеграция ретровирусов в геном клетки-хозяина несёт риск вставочного мутагенеза и изменения экспрессии клеточных протоонкогенов, что может привести к опухолевой трансформации клетки. Кроме того, многие вирусные белки обладают сильным иммуногенным действием, что может привести к нежелательным побочным эффектам и снизить эффективность применения подобных генетических векторов. Более того, многие вирусы не обладают выраженной видоспецифичностью, что может привести к попаданию рекомбинантных генов в биосистему с неконтролируемыми последствиями для экологии и здоровья.

Невирусные методы доставки генетического материала основаны на введении рекомбинантных генов в клетку-мишень с помощью различных физических (электропорация, соникация, баллистика и т. д.) или химических (липофекция, катионные наночастицы и полимеры и т. д.) методов. Общий недостаток, присущий данным методам, — относительно низкие специфичность и эффективность введения генетической информации.

Цель работы: разработка биологически безопасных систем доставки нуклеиновых кислот для использования в генной терапии.

В соответствии с целью работы определены следующие экспериментальные задачи:

1.Разработка нового видоспецифичного вирусного вектора на основе цитомегаловируса для введения генетического материала в клетки оленьих хомячков Peromyscus maniculatus.

2.Анализ экспрессии рекомбинантных белков с помощью цитомегаловируса P. maniculatus in vitro и анализ иммунного ответа у хомячков P. maniculatus при инфицировании рекомбинантным вирусом.

3. Анализ репликативной активности рекомбинантного цитомегаловируса in vitro и особенностей вирусной инфекции in vivo у хомячков P. maniculatus.

4.Анализ внутриклеточного взаимодействия и созревания гликопротеинов хантавирусов с помощью невирусных методов генной доставки.

5.Разработка плазмидных генетических конструкций, экспрессирующих различные терапевтические гены и их комбинации.

6.Разработка методов комбинированной генно-клеточной терапии на основе трансфицированния мононуклеарных клеток пуповинной крови человека плазмидными векторами для лечения бокового амиотрофического склероза.

7.Разработка методов доставки короткой интерферирующей РНК (siRNA) для терапии бокового амиотрофического склероза и оценка эффективности подавления экспрессии мутантного гена с помощью РНК-интерференции у трансгенных мышей G93A.

Научная новизна. Впервые создан видоспецифичный вектор на основе цитомегаловируса из Peromyscus maniculatus для экспрессии рекомбинантных белков с целью исследования иммунного ответа в организме хомячков на хантавирусные антигены. Впервые исследован эффект делеции гена рЗЗ цитомегаловируса на вирусную инфекцию in vitro и in vivo. Впервые получены данные о взаимодействии гликопротеинов вирусной оболочки различных хантавирусов Южной и Северной Америки. Получены данные о внутриклеточном созревании хантавирусных белков. Впервые получены генетические конструкции, одновременно и независимо экспрессирующие нейропротекторные терапевтические белки VEGF и L1CAM. Показано, что клетки мононуклеарной фракции пуповинной крови человека (ядросодержащие клетки пуповинной крови, включая стволовые кроветворные клетки), генетически модифицированные нейропротекторными генами, способны к миграции в очаги нейродегенерации у трансгенных мышей С93А (модель бокового амиотрофического склероза) и дифференцировке в эндотелиальные клетки, участвующие в формировании новых кровеносных капилляров. Впервые показано, что аппликация короткой интерферерирующей РНК (специфичной к мутантной форме гена супероксиддисмутазы 1 человека) на центральный отрезок перерезанного седалищного нерва у трансгенных мышей С93А, экспрессирующих данный мутантный ген, приводит к снижению количества мРНК супероксиддисмутазы 1 в поясничном отделе спинного мозга мышей.

Положения, выносимые на защиту:

1. Цитомегаловирус хомячков Р его ту 5 сиз татси1аНможет служить эффективным вектором для создания генетических вакцин.

2. Внутриклеточная локализация и модификация гликопротеинов С1 и 02 хантавирусов зависит от характера экспрессии вирусных белков.

3. Невирусные методы генной и клеточной терапии эффективны для лечения бокового амиотрофического склероза.

Теоретическая и научная значимость. Создание видоспецифичного генетического вектора на основе цитомегаловируса из Реготуясш татси1аЫ8 позволяет исследовать механизмы иммунного ответа организма хозяина на компоненты вируса. Полученные данные создают основу для создания биологически безопасных вакцин против хантавирусной инфекции как для человека, так и для видоспецифичной иммунизации естественного носителя вируса. Исследование взаимодействия и внутриклеточной модификации хантавирусных гликопротеинов вирусной оболочки позволяет глубже понять биологию данного семейства вирусов и оценить возможность межвидового генетического обмена в природе, что может привести к появлению вирусов с новыми инфекционными свойствами. Создание невирусных генетических векторов и разработка методов их применения для генетической модификации клеток пуповипной крови человека позволяет получить новый класс биологически безопасных генно-клеточных препаратов для лечения широкого спектра заболеваний человека, в том числе нейродегенеративных. Демонстрация активирования механизмов РНК-интерференции при периферической аппликации siRNA на центральный отрезок перерезанного седалищного нерва у трансгенных мышей демонстрирует возможность ретроградного транспорта siRNA и открывает новые возможности в использовании генной терапии на основе siRNA для лечения наследственных форм нейродегенеративных заболеваний.

Связь работы с базовыми научными программами. Исследования по теме работы проведены в период с 1996 по 2009 г. в соответствии с НИР Казанского государственного университета 1 200 850 995 и 1 200 952 944. Работа поддерживалась грантами Национального Института Здоровья AI36418, HL63470, AI45059 и HLBI 63 470. Работа поддерживалась грантами: молодёжный грант Академии Наук Республики Татарстан, № 11−9/2009(Г) «Разработка современных биомедицинских методов лечения хронической артериальной недостаточности нижних конечностей с использованием клеточных, генно-клеточных и генных технологий" — грант НАТО NR.RIG.983 007 «Combination gene and stem cell therapy for treating neurodegenerative diseases" — грант РФФИ 07−04−746-a «Стимулирование регенерации аксонов в центральной и периферической нервной системе с помощью гелевых носителей для стволовых клеток, супрамолекулярных систем с самосборкой, сосудистого эндотелиального фактора роста и ксимедона" — грант Правительства Республики Татарстан по подготовке и переподготовке кадров в зарубежных научных центрахгосударственный контракт ФЦП Федерального Агентства по Науке и Инновациям 02.512.11.2052 «Клеточная терапия генетически модифицированными стволовыми клетками пуповинной крови трансгенных мышей G93A, экспрессирующих фенотип бокового амиотрофического склероза" — грант РФФИ 06−04−49 396-а «Состояние аксонного транспорта и внутриаксонного синтеза белка в условиях гравитационной разгрузки" — молодёжный грант Академии Наук Республики Татарстан, № 11−9/2009(Г) «Разработка современных биомедицинских методов лечения хронической артериальной недостаточности нижних конечностей с использованием клеточных, генно-клеточных и генных технологий" — государственный контракт ФЦП Федерального Агентства по Науке и Инновациям 02.740.11.0302 «Исследование фундаментальных механизмов патогенеза нейродегенеративных заболеваний и разработка современных технологий для их лечения" — грант РФФИ 09−04−5 079−6 «Развитие МТБ для проведения исследований по области знаний 04" — государственный контракт ФЦП Федерального Агентства по Науке и Инновациям 02.552.11.7088 «Проведение поисковых научно-исследовательских работ в области физико-химии наноматериалов и молекулярных систем, включая биологические, в центре коллективного пользования научным оборудованием «Федеральный центр коллективного пользования физико-химических исследований веществ и материалов»». В 2009 году работа на тему «Вирусные и невирусные методы генетической терапии» отмечена премией Правительства Республики Татарстан для государственной поддержки молодых учёных.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены на American Society for Virology, 17th Annual Meeting (Ванкувер, Канада, 1998), на ежегодных естественно-научных конференциях Университета Штата Невада, г. Рено (Лейк Тахо, США, 1999, 2000, 2002, 2006), Keystone Symposia (Cellular and Molecular Biology— Genetics, Pathogenesis and Ecology of Emerging Viral Diseases) (Taoc, США, 2000), 8th International Cytomegalovirus Conference (Monterey, США, 2001), American Society for Virology, 20th Annual Meeting (Мэдисон, США, 2001), 27th Internationsl.

Herpesvirus Workshop (Cairns Convention Centre, Австралия, 2002), American Society for Virology, 22nd Annual Meeting, (Дэвис, США, 2003), American Society for Virology, 23rd Annual Meeting, (Монреаль, Канада, 2004), 6th International Conference on HFRS, HPS and Hantaviruses (Сеул, Южная Корея, 2004), American Society for Microbiology Meeting: Viral Immune Evasion (Акапулько, Мексика, 2005), Всероссийской научно-практической конференции «Молодые учёные в медицине» (Казань, 2007, 2008, 2009), Международной конференции «Фундаментальные науки — медицине» (Новосибирск, 2007), Gene Therapy Symposium (Стамбул, Турция, 2007), итоговой конференции по результатам выполнения мероприятий за 2007 год в рамках приоритетного направления «Живые системы» ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007—2012 годы» (Москва, 2007), 14th International Biomedical Science and Technology Symposium (Мугла, Турция, 2008), IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, 2008), II Международной научно-практической конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казань, 2008), 3rd International Congress of Molecular Medicine (Стамбул, Турция, 2009), 13th Annual Symposium for Biology Students of Europe «SymBioSE 2009» (пленарная лекция, секционный доклад, ведущий круглого стола) (Казань, 2009), International conference on nanomaterials and nanosystems (NanoMats 2009) (Стамбул, Турция, 2009), Международной научной конференции по биоорганической химии, биотехнологии и бионанотехнологии, посвященной 75-летию со дня рождения академика Юрия Анатольевича Овчинникова (Москва, 2009), Пятом съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Москва, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 48 печатных работ, в том числе 16 отечественных и зарубежных работ в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК для защиты докторских диссертаций, 32 тезисов докладов на Международных и Всероссийских конференциях и конгрессах.

Место выполнения работы. Основные экспериментальные данные получены автором за время работы в лабораториях профессора Стива Ст. Джоура в Университете штата Невада, г. Рено, США (1996;2006), на кафедре генетики биолого-почвенного факультета Казанского государственного университета (2006;2010) и в Казанском государственном медицинском университете (2006—2010).

Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 3 глав, заключения, выводов, приложения и списка литературы (302 ссылки). Работа содержит 62 рисунка и 23 таблицы.

выводы.

1. Впервые на основе цитомегаловируса Peromyscus maniculatus (PCMV) создан видоспецифичный вектор для доставки генетического материала в клетки хомячков in vivo.

2. Экспрессия рекомбинантных белков (гликопротеина G1 хантавируса Sin nombre и зелёного флуоресцентного белка EGFP) вызывает иммунный ответ у хомячков Peromyscus maniculatus. При этом существующий естественный иммунный ответ против цитомегаловируса Р. maniculatus (PCMV) дикого типа не препятствует инфицированию рекомбинантным вирусом.

3. Делеция гена рЗЗ приводит к снижению репликативной активности. цитомегаловируса Peromyscus maniculatus (PCMV), но не влияет на способность рекомбинантного вируса инфицировать иммунокомпетентных животных и устанавливать латентную инфекцию.

4. Созданы генетические конструкции для экспрессии гликопротеинов хантавирусов ANDV и SNV в эукариотических клетках. Установлено, что раздельная экспрессии гликопротеинов приводит к их нехарактерной локализации в эндоплазматическом ретикулуме. В тоже время коэкспрессия гликопротеинов G1 и G2 вирусов ANDV или SNV приводила к их концентрации в аппарате Гольджи — естественном месте локализации при хантавирусной инфекции, а коэкспрессия гликопротеинов G1 и G2 разных хантавирусов в одной клетке приводит к функциональному взаимодействию гликопротеинов с образованием гетеродуплекса, обладающего способностью к естественному процессированию и локализации в аппарате Гольджи.

5. Впервые создана невирусная генетическая конструкция, одновременно и независимо экспрессирующая нейральную молекулу адгезии (ЫСАМ) и сосудистый эндотелиальный фактор роста (УЕОБ).

6. Клетки мононуклеарной фракции пуповинной крови человека, генетически модифицированные плазмидными векторами, экспрессирующими гены нейральной молекулы адгезии (ЫСАМ) и сосудистого эндотелиальногой фактора роста (УЕОР), после трансплантации трансгенным мышам С93А дифференцируются в эндотелиальные клетки и участвуют в формировании новых кровеносных сосудов.

7. Впервые проведена операция по прямой аппликации препаратов 31ТША на центральный участок перерезанного седалищного нерва трансгенных мышей, экспрессирующих фенотип бокового амиотрофического склероза, и показано, что б^КЫА приводит к специфическому снижению количества мРНК мутантного гена sodl человека в поясничном отделе спинного мозга трансгенных мышей в93А.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

В современном арсенале генной терапии есть различные способы доставки генетического материала в клетки-мишени. Существующие подходы можно условно классифицировать на вирусные и невирусные. В основе такого подразделения лежит способ доставки генетического материала. Вирусные методы основаны на применении естественного механизма доставки генетического материала в клетки-мишени, доведённого в процессе эволюции до весьма высокой эффективности. Вирусы — эффективные конструкции, способные к инфицированию различных клеточных типов, но существенным недостатком вирусных векторов для доставки генетического материала в клетки служит их низкая биологическая безопасность. В зависимости от вируса, на основе которого созданы генетические конструкции, возникают проблемы, связанные с мутационной и онкологической активностью вирусов, а также патологическими иммунологическими процессами. В связи с этим остро встаёт вопрос о разработке новых биобезопасных вирусных векторов.

Ключевые параметры «идеального» вирусного вектора— отсутствие интеграции в геном клетки-хозяина, низкая иммуногенность, продолжительная экспрессия рекомбинантных генов. Один из перспективных вирусов, удовлетворяющий всем этим требованиям — цитомегаловирус. В данной работе проведено исследование ранее неохарактеризованного вируса СМУ из Р. татсиШш. С применением разнообразных вирусологических и молекулярно-генетических методов показана его видовая принадлежность и филогенетическое родство с другими известными цитомегаловирусами.

Рекомбинантный вирус РСМУ получен нами путём вставки в ген рЗЗ экспрессионной кассеты, содержащей химерный ген из генов бпу^! и е^р, в котором сохранён нативный сайт расщепления 01−02 между рекомбинантными белками. Подобный подход позволил экспрессировать в его нативной форме, а также осуществить анализ экспрессии рекомбинантных белков по флуоресценции белка ЕОРР. Анализ экспрессии рекомбинантных белков проведён методами флуоресцентной микроскопии, иммуногистохимии и вестерн-блотингом.

Полученный рекомбинантный вирус РСМУ (АРЗЗ:С1ЕСРР) способен инфицировать хомячков Р. татсиШт даже в низких концентрациях (порядка 10 РРи вируса на животное). У инфицированных животных наблюдали иммунный гуморальный ответ на рекомбинантные белки SNV-01 и ЕОРР. Отмечено, что существующий иммунный ответ против vtPCMV не мешает индукции иммунного ответа против рекомбинантных белков, экспрессируемых рекомбинантным вирусом. Это свойство разработанной векторной системы позволяет проводить вакцинацию организма-хозяина рекомбинантными вирусами (несмотря на наличие естественной инфекции и иммунного ответа на неё на момент вакцинации).

Показано, что инфицирование животных рекомбинантным РСМУ не приводит к выраженной патологии и, по всей видимости, не влияет на продолжительность их жизни, так как животные, инфицированные vtPCMV или рекомбинантным РСМУ, выживали более 12 месяцев. Несмотря на инфекционность рекомбинантного вируса, у хомячков, инфицированных рекомбинантным вирусом, отмечен менее выраженный иммунный ответ по сравнению с вирусом дикого типа. Предположительно это связано с инактивацией гена рЗЗ, приводящей к аттенуированному фенотипу цитомегаловируса. Делеция гена рЗЗ может вызвать нарушение межклеточного распространения РСМГУ, приводя в конечном итоге к более медленно прогрессирующей инфекции. Дополнительный фактор, оказывающий негативное влияние на вирусную репликацию, — присутствие конститутивно активной экспрессионной кассеты 8>ГУ-01-ЕОРР.

Анализ вирусной инфекции т мИго показал, что накопление внутриклеточной ДНК РСМУ, выброс инфекционных вирусных частиц и аккумуляция ДНК рекомбинантного РСМУ в культуральной среде происходит с задержкой по сравнению с vtPCMV. Это доказывает, что рекомбинантный РСМУ имеет замедленный репликационный цикл по сравнению с vtPCMV. Однако, несмотря на более медленную репликацию рекомбинантного РСМУ, он достигал приблизительно одинакового уровня по количеству внутриклеточной вирусной ДЬЖ на поздних стадиях инфекции.

В работе изучен иммунный ответ хомячков Р. татсиШш против вирусных и рекомбинантных антигенов. Животные, инфицированныеРСМУ или рекомбинантным РСМУ, показывали иммунный ответ против антигенов РСМУ уже на второй неделе после первоначального инфицирования. Титр АТ к vtPCMV и рекомбинантному РСМУ продолжал расти по мере протекания инфекции. Реинфицирование мышей соответствующим вирусом вызывало увеличение титра АТ к антигенам РСМУ у животных, инфицированных рекомбинантным РСМУ, но не приводило к повышению титра АТ к РСМУ-антигенам у хомячков, инфицированных ytPCMV. Этот факт может свидетельствовать о том, что высокий титр АТ к РСМУ-антигенам у инфицированных vtPCMV хомячков предотвращал дополнительную вирусную репликацию. Хотя после реинфицирования мы наблюдали статистически значимое увеличение титра АТ к РСМУ-антигенам у хомячков, инфицированных рекомбинантным РСМУ, это может быть продолжением развития иммунного ответа на первоначальную инфекцию vtPCMV. Поскольку рекомбинантный РСМУ имеет аттенуированный фенотип, то он может приводить к менее выраженному иммунному ответу против РСМУантигенов. Разницу в иммунном ответе между EGFP и SNV-G1 можно объяснить различной иммуногенностью этих белков и разницей во внутриклеточном количестве рекомбинантных белков.

В работе проведён анализ распределения цитомегаловируса в различных тканях хомячков P. maniculatus на разных стадиях инфекции. Показано, что wtPCMV и рекомбинантный PCMV присутствуют в относительно малых количествах во всех исследованных органах за исключением крови и мозга. Наибольшие отличия в количестве wtPCMV от рекомбинантного PCMV выявлены в сердце (повышенный уровень рекомбинантного PCMV), в почках и селезёнке (повышенный уровень wtPCMV). Только следовые количества геномов PCMV были обнаружены в слюнных железах. Предварительные результаты, полученные на мышах (3 и 4 недели после инфицирования wtPCMV) показывают присутствие большого количества ДНК вируса PCMV в слюнных железах, в то время как вирус не обнаруживался спустя 3 месяца после инфицирования рекомбинантным PCMV.

Основная задача латентной инфекции у вирусов — сохранение функционального вирусного генома в хозяине после завершения стадии первичной инфекции. Определённые сигнальные события могут вызвать реактивацию вируса. Генотоксичный стресс в результате гамма-облучения — один из методов исследования латентности MCMV у мышей (Balthesen, Messerle and Reddehase, 1993). Гамма-облучение (4,12 Gy) привело к значительному увеличению количества вируса в крови хомячков P. maniculatus, инфицированных рекомбинантным PCMV. Это показывает, что латентная инфекция PCMV хомячков P. maniculatus похожа на латеную инфекцию MCMV мышей, и что делеция гена рЗЗ не влияет на способность устанавливать латентную инфекцию с последующей реактивацией после генотоксичного стресса организма хозяина в ответ на гамма-облучение.

Методы генетического переноса, используемые в генной терапии, могут быть применены и в фундаментальных исследованиях. Изменение уровня экспрессии отдельно взятого гена или комбинации генов позволяет исследовать их биологическую роль в организме. Например, экспрессия рекомбинантных вирусных белков может быть применена для исследования их взаимодействия с белками клетки-хозяина и друг с другом.

В работе проведено исследование процессинга и транспорта гликопротеинов хантавирусов Нового Света. Большинство (если не все) вирусов семейства Bunyaviridae созревает в аппарае Гольджи (АГ). Однако до сих пор нет консенсуса по типу сигнала локализации в АГ у данного семейства вирусов, хотя достигнут значительный прогресс в картировании сигнальной последовательности для некоторых представителей семейства.

Созданы плазмидные векторы, экспрессирующие гликопротеины G1 и G2 хантавирусов Andes и Sin Nombre. Иммунофлуоресцентный анализ с применением специфичных AT к антигенам хантавирусов и AT к ЭР и АГ показал, что локализация обоих гликопротеинов (G1 и G2) хантавирусов ANDV и SNV происходит в ЭР клеток и что при их независимой экспрессии не происходит дальнейшего транспорта гликопротеинов в АГ. При экспрессии двух гликопротеинов в результате ко-трансфекции двух экспрессионных плазмид (для вирусов ANDV и SNV) или в результате экспрессии полного предшественника гликопротеинов GPC, содержащего оба гликопротеина (для вируса ANDV), характер внутриклеточного транспорта гликопротеинов напоминал их естественную локализацию в АГ.

Одна из перспективных задач вирусологии — предсказание возникновения новых штаммов вирусов вследствие естественных процессов обмена генетического материала. Возможные штаммы-реассортанты могут обладать новыми биологическими свойствами, в том числе повышенной патогенностью или способностью инфицировать виды, отличные от первоначальных естественных организмов-хозяев. Для оценки потенциальной возможности генетического реассортмента двух патогенных штаммов хантавирусов в работе проведён анализ взаимодействия гликопротеинов разных хантавирусов (АКГОУ и 8МУ). Показано, что гликопротеины и хантавирусов могут взаимодействовать в любых комбинациях с образованием транспортируемых в АГ комплексов. Полученные данные свидетельствуют о том, что именно конформация образуемого комплекса 01/02 скорее всего отвечает за правильную транспортировку и удержание комплекса в АГ. Транспорт и локализация гликопротеинов и 02 при экспрессии с различных плазм ид соответствует локализации гликопротеинов А№)У и 81ЧУ в инфицированных клетках Уего-Е6 и первичной культуре клеток эндотелия лёгких человека.

Нейротравма, ишемические инсульты, нейродегенеративные заболевания сопровождаются гибелью нейронов, дегенерацией аксонов, нарушением коммуникаций в нейронных сетях и контролируемых ими функций. Для предотвращения вторичной дегенерации и поддержания роста нервных волокон возможно применение молекулярно-генетических и клеточных технологий. Молекулярно-генетические методы направлены на подавление или усиление экспрессии гена-мишени. Ранее плазмидные и вирусные векторы применяли преимущественно для экспрессии клонированных генов, продукт которых может оказать положительный терапевтический эффект при конкретном заболевании. В настоящее время для повышения эффективности доставки в область повреждения нервной ткани факторов, поддерживающих выживание нейронов и рост нервных волокон, активно исследуют возможность применения генетически модифицированных клеток, трансфицированных генами нейротрофических факторов. Стволовые клетки, экспрессирующие клонированный ген, могут значительно усилить терапевтический эффект трансплантированных клеток и регенераторный потенциал органа-мишени. Основанием для трансплантации стволовых клеток пуповинной крови для стимуляции регенерации нервной ткани служит их пригодность как для аллотрансплантации, так и для аутотрансплантации у человека, их низкая иммуногенность, доступность, простота получения и хранения.

Данная работа связана с получением генетически модифицированных мононуклеарных клеток пуповинной крови для лечения трансгенных B6SJL-Tg (SODl-G93A)dllGur/J мышей с фенотипом бокового амиотрофического склероза человека. Созданы плазмидные конструкции, экспрессирующие гены зелёного флуоресцентного белка EGFP, нейрональной молекулы адгезии L1 и сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF. Мононуклеарные клетки крови пуповины были подвергнуты генной модификации путём трансфекции полученными плазмидными векторами.

Трансплантация клеток крови пуповины, трансфицированных плазмидами, экспрессирующими EGFP, показала, что трансплантированные клетки мигрируют в нервную ткань спинного и головного мозга и сохраняют способность к экспрессии клонированного гена. Оценка клинической эффективности введения мононуклеарной фракции клеток, трансфицированных плазмидными векторами, экспрессирующими клонированные нейральную молекулу адгезии L1 и сосудистый эндотелиальный фактор роста VEGF, подтвердила правильность предположений о возможной эффективности предлагаемого метода в лечении бокового амиотрофического склероза на модели трансгенных мышей. Установлено, что генетически модифицированные мононуклеарные клетки пуповинной крови человека, экспрессирующие сосудистый эндотелиальный фактор роста VEGF человека и нейрональную молекулу адгезии L1 мыши, мигрируют в места нейродегенерации, пролиферируют и дифференцируются в эндотелиальные клетки с образованием новых кровеносных сосудов. Остальные HN-позитивные, но при этом CD34негативные клетки, по-видимому, могут дифференцироваться в других направлениях или существовать на стадии прогениторных клеток среди эндотелиальных клеток стенки кровеносных сосудов.

Лечение нейродегенеративных заболеваний, чей патогенез обусловлен мутациями конкретных генов, требует вмешательства в организм больного на генетическом уровне. Методы генной терапии позволяют снизить уровень экспрессии мутантного гена-мишени, что в теории должно привести к ремиссии. В настоящее время для коррекции экспрессии гена-мишени существует ряд подходов, таких как антисмысловые олигонуклеотиды и РНК-интерференция.

Нами впервые была выполнена трансфекция в аксоны мотонейронов поясничного отдела спинного мозга мышей С93А путём аппликации комплементарной мРНК мутантного гена человека 8ос11, на центральный отрезок перерезанного седалищного нерва. Аппликация зоб/У-специфичной б1ККА приводила к значительному снижению количества мРНК $ой1 в соответствующей части спинного мозга. Таким образом, з11ША путём интернализации попадает в аксоны мотонейронов, ретроградно транспортируется в перикарионы и блокирует трансляцию аберрантного БСЮ1.

Таким образом, нами разработаны различные вирусные и невирусные методы доставки в организм рекомбинантных нуклеиновых кислот. Методы генной терапии (в том числе предложенные нами подходы) позволяют решать широкий спектр задач, таких как иммунизация организма против вирусных инфекций, исследование молекулярных механизмов внутриклеточного цикла патогенных вирусов, регуляция экспрессии рекомбинантных белков, повышающих терапевтический потенциал генетически модифицированных клеток, и коррекцию наследственных заболеваний с помощью РНК-интерференции.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Adler, S.P. Safety and immunogenicity of the Towne strain cytomegalovirus vaccine Journal. / S.P. Adler, S.H. Hempfling, S.E. Starr et al. // Pediatr Infect Dis J. 1998. — V. 17, № 3. — P. 200−6.
  2. Anderson, W.F. September 14, 1990: the beginning Journal. / W.F. Anderson // Hum Gene Ther. 1990. — V. 1, № 4. — P. 371−2.
  3. Andersson, A.M. Processing and membrane topology of the spike proteins G1 and G2 of Uukuniemi virus Journal. / A.M. Andersson, L. Melin, R. Persson et al. // J Virol. 1997. — V. 71, № 1. — p. 218−25.
  4. Antic, D. Maturation of Hantaan virus glycoproteins G1 and G2 Journal. / D. Antic, K.E. Wright and C.Y. Kang // Virology. 1992. — V. 189, № 1. — P. 324−8.
  5. Antonenas, V. Infusion of unwashed umbilical cord blood stem cells after thawing for allogeneic transplantation Journal. / V. Antonenas, P.J. Shaw and K.F. Bradstock // Bone Marrow Transplant. 2004. — V. 34, № 8. — P. 739.
  6. Arikawa, J. Characterization of Hantaan virus envelope glycoprotein antigenic determinants defined by monoclonal antibodies Journal. / J. Arikawa, A.L. Schmaljohn, J.M. Dalrymple and C.S. Schmaljohn // J Gen Virol. 1989. -V. 70(Pt3).-P. 615−24.
  7. Azzouz, M. VEGF delivery with retrogradely transported lentivector prolongs survival in a mouse ALS model Journal. / M. Azzouz, G.S. Ralph, E. Storkebaum et al. //Nature. 2004. — V. 429, № 6990. — P. 413−7.
  8. Bailen, K. Current status of cord blood banking and transplantation in the United States and Europe Journal. / K. Bailen, H.E. Broxmeyer, J. McCullough et al. // Biol Blood Marrow Transplant. 2001. — V. 7, № 12. — P. 635−45.
  9. Balthesen, M. Lungs are a major organ site of cytomegalovirus latency and recurrence Journal. / M. Balthesen, M. Messerle and M.J. Reddehase // J Virol. 1993. — V. 67, № 9. — P. 5360−6.
  10. Baum, C. Improved retroviral vectors for hematopoietic stem cell protection and in vivo selection Journal. / C. Baum, H.G. Eckert, M. Stockschlader et al. // J Hematother. 1996. — V. 5, № 4. — P. 323−9.
  11. Beisser, P. S. The R33 G protein-coupled receptor gene of rat cytomegalovirus plays an essential role in the pathogenesis of viral infection Journal. / P. S. Beisser, C. Vink, J.G. Van Dam et al. // J Virol. 1998. — V. 72, № 3. — p. 2352−63.
  12. Berezesky, I.K. Ultrastructure of a rat cytomegalovirus Journal. / I.K. Berezesky, P.M. Grimley, S.A. Tyrrell and A.S. Rabson // Exp Mol Pathol. -1971.-V. 14, № 3.-P. 337−49.
  13. Bemshtein, A.D. Dynamics of Puumala hantavirus infection in naturally infected bank voles (Clethrinomys glareolus) Journal. / A.D. Bernshtein, N.S. Apekina, T.V. Mikhailova et al. // Arch Virol. 1999. — V. 144, № 12. — P. 241 528.
  14. Bertolini, F. Placental blood collection: effects on newborns Journal. / F. Bertolini, M. Battaglia, C. De Iulio et al. // Blood. 1995. — V. 85, № 11. — P. 3361−2.
  15. Bjorklund, L.M. Embryonic stem cells develop into functional dopaminergic neurons after transplantation in a Parkinson rat model Journal. / L.M. Bjorklund, R. Sanchez-Pernaute, S. Chung et al. // Proc Natl Acad Sci USA.- 2002. V. 99, № 4. — P. 2344−9.
  16. Borchelt, D.R. Axonal transport of mutant superoxide dismutase 1 and focal axonal abnormalities in the proximal axons of transgenic mice Journal. / D.R. Borchelt, P.C. Wong, M.W. Becher et al. // Neurobiol Dis. 1998. — V. 5, № 1. -P. 27−35.
  17. Boris-Lawrie, K. Retroviral RNA elements integrate components of post-transcriptional gene expression Journal. / K. Boris-Lawrie, T.M. Roberts and S. Hull // Life Sci. 2001. — V. 69, № 23. — P. 2697−709.
  18. Borst, E. Development of a cytomegalovirus vector for somatic gene therapy Journal. / E. Borst and M. Messerle // Bone Marrow Transplant. 2000. — V. 25 Suppl 2. — P. S80−2.
  19. Borucki, M.K. Role of maternal antibody in natural infection of Peromyscus maniculatus with Sin Nombre virus Journal. / M.K. Borucki, J.D. Boone, J.E. Rowe et al. // J Virol. 2000. — V. 74, № 5. — P. 2426−9.
  20. Boulis, N.M. Characterization of adenoviral gene expression in spinal cord after remote vector delivery Journal. / N.M. Boulis, D.E. Turner, J.A. Dice et al. //Neurosurgery. 1999. — V. 45, № 1. — P. 131−7- discussion 137−8.
  21. Boulis, N.M. Neuronal survival following remote adenovirus gene delivery Journal. / N.M. Boulis, D.E. Turner, M.J. Imperiale and E.L. Feldman // J Neurosurg. 2002. — V. 96, № 2 Suppl. — P. 212−9.
  22. Brazelton, T.R. From marrow to brain: expression of neuronal phenotypes in adult mice Journal. / T.R. Brazelton, F.M. Rossi, G.I. Keshet and H.M. Blau // Science. 2000. — V. 290, № 5497. — P. 1775−9.
  23. Brennecke, J. Bantam encodes a developmentally regulated microRNA that controls cell proliferation and regulates the proapoptotic gene hid in Drosophila Journal. / J. Brennecke, D.R. Hipfner, A. Stark et al. // Cell. 2003. — V. 113, № l.-P. 25−36.
  24. Brown, A. Axonal transport of membranous and nonmembranous cargoes: a unified perspective Journal. / A. Brown // J Cell Biol. 2003. — V. 160, № 6. — P. 817−21.
  25. Broxmeyer, H.E. Human umbilical cord blood as a potential source of transplantable hematopoietic stem/progenitor cells Journal. / H.E. Broxmeyer,
  26. G.W. Douglas, G. Hangoc et al. // Proc Natl Acad Sci USA.- 1989. V. 86, № 10.-P. 3828−32.
  27. Broxmeyer, H.E. Growth characteristics and expansion of human umbilical cord blood and estimation of its potential for transplantation in adults Journal. /
  28. H.E. Broxmeyer, G. Hangoc, S. Cooper et al. // Proc Natl Acad Sci U S A. -1992.-V. 89, № 9. -P. 4109−13.
  29. Broxmeyer, H.E. Umbilical cord blood hematopoietic stem and repopulating cells in human clinical transplantation Journal. / H.E. Broxmeyer, J. Kurtzberg, E. Gluckman et al. //Blood Cells. 1991. — V. 17, № 2. — P. 313−29.
  30. Bruns, C.K. Impaired post-translational folding of familial ALS-linked Cu, Zn superoxide dismutase mutants Journal. / C.K. Bruns and R.R. Kopito // EMBO J. 2007. — V. 26, № 3. — P. 855−66.
  31. Burger, C. Recombinant adeno-associated viral vectors in the nervous system Journal. / C. Burger, K. Nash and R.J. Mandel // Hum Gene Ther. -2005. -V. 16, № 7.-P. 781−91.
  32. Cajal, S.R. Degeneration and regeneration of the nervous system (translated and edited by Raoul M. May) Book. / S.R. Cajal. Oxford University Press. -London. — 1928.
  33. Cajal, S.R. Histology of the Nervous System of Man and Vertebrates (translated N. Swanson and L. W. Swanson) Book. / S.R. Cajal. Oxford University Press. — New York. — 1995.
  34. Capps, G.G. A double-labeling method for measuring induction of protein phosphorylation Journal. / G.G. Capps and M.C. Zuniga // Biotechniques. -1990. -V. 8, № 1. P. 62−9.
  35. Cardoso, A.A. Release from quiescence of CD34+ CD38- human umbilical cord blood cells reveals their potentiality to engraft adults Journal. / A.A. Cardoso, M.L. Li, P. Batard et al. // Proc Natl Acad Sci U S A. 1993. — V. 90, № 18.-P. 8707−11.
  36. Carow, C.E. Human multipotential progenitor cells (CFU-GEMM) have extensive replating capacity for secondary CFU-GEMM: an effect enhanced by cord blood plasma Journal. / C.E. Carow, G. Hangoc and H.E. Broxmeyer // Blood. 1993. — V. 81, № 4. — P. 942−9.
  37. Carrier, N. Hematopoietic stem ceil gene therapy with a lentiviral vector in X-linked adrenoleukodystrophy Journal. / N. Cartier, S. Hacein-Bey-Abina, C.C. Bartholomae et al. // Science. 2009. — V. 326, № 5954. — P. 818−23.
  38. Chadwick, E.G. Enzymatic amplification of the human immunodeficiency virus in peripheral blood mononuclear cells from pediatric patients Journal. / E.G. Chadwick, R. Yogev, S. Kwok et al. // J Infect Dis. 1989. — V. 160, № 6. -P. 954−9.
  39. Chang, D.C. Changes in membrane structure induced by electroporation as revealed by rapid-freezing electron microscopy Journal. / D.C. Chang and T.S. Reese // Biophys J. 1990. — V. 58, № 1. — P. 1−12.
  40. Chee, M.S. Analysis of the protein-coding content of the sequence of human cytomegalovirus strain AD169 Journal. / M.S. Chee, A.T. Bankier, S. Beck et al. // Curr Top Microbiol Immunol. 1990. — V. 154. — P. 125−69.
  41. Chen, B.-Y. PCR Cloning Protocols Book. / B.-Y. Chen and H.W. Janes. -Humana Press. 2002.
  42. Chen, J. Intravenous administration of human umbilical cord blood reduces behavioral deficits after stroke in rats Journal. / J. Chen, P.R. Sanberg, Y. Li et al. // Stroke. 2001. — V. 32, № 11. — P. 2682−8.
  43. Chen, R. The potential for the use of mononuclear cells from human umbilical cord blood in the treatment of amyotrophic lateral sclerosis in SOD1mice Journal. / R. Chen and N. Ende // J Med. 2000. — V. 31, № 1−2. — P. 2130.
  44. Chen, S.Y. Assembly of G1 and G2 glycoprotein oligomers in Punta Toro virus-infected cells Journal. / S.Y. Chen, Y. Matsuoka and R.W. Compans // Virus Res. 1992. — V. 22, № 3. p. 215−25.
  45. Cheung, K.S. Detection of latent cytomegalovirus in murine salivary and prostate explant cultures and cells Journal. / K.S. Cheung and D.J. Lang // Infect Immun. 1977. — V. 15, № 2. — P. 568−75.
  46. Chu, Y.K. A vaccinia virus-vectored Hantaan virus vaccine protects hamsters from challenge with Hantaan and Seoul viruses but not Puumala virus Journal. / Y.K. Chu, G.B. Jennings and C.S. Schmaljohn // J Virol. 1995. — V. 69, № 10. — P. 6417−23.
  47. Chun, J.T. Differential compartmentalization of mRNAs in squid giant axon Journal. / J.T. Chun, A.E. Gioio, M. Crispino et al. // J Neurochem. 1996. — V. 67, № 5. — P. 1806−12.
  48. Collard, J.F. Defective axonal transport in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis Journal. / J.F. Collard, F. Cote and J.P. Julien // Nature. 1995. — V. 375, № 6526. — P. 61−4.
  49. Corrias, M.V. Growth factors increase retroviral transduction but decrease clonogenic potential of umbilical cord blood CD34+ cells Journal. / M.V.
  50. Corrias, F. Scuderi, M. Pasino et al. // Haematologica. 1998. — V. 83, № 7. — P. 580−6.
  51. Cote, F. Progressive neuronopathy in transgenic mice expressing the human neurofilament heavy gene: a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis Journal. / F. Cote, J.F. Collard and J.P. Julien // Cell. 1993. — V. 73, № 1. — P. 35−46.
  52. Crispino, M. Neurofilament proteins are synthesized in nerve endings from squid brain Journal. / M. Crispino, C.P. Capano, B.B. Kaplan and A. Giuditta // J Neurochem. 1993. — V. 61, № 3. — P. 1144−6.
  53. Dantas, J.R. Characterization of glycoproteins of viruses causing hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) using monoclonal antibodies Journal. / J.R. Dantas, Jr., Y. Okuno, H. Asada et al. // Virology. 1986. — V. 151, № 2. -P. 379−84.
  54. Davis-Poynter, N.J. Identification and characterization of a G proteincoupled receptor homolog encoded by murine cytomegalovirus Journal. / N, J. Davis-Poynter, D.M. Lynch, H. Vally et al. // J Virol. 1997. — V. 71, № 2. — P. 1521−9.
  55. Dawbarn, D. Neurotrophins and neurodegeneration Journal. / D. Dawbam and S.J. Allen //Neuropathol Appl Neurobiol. 2003. — V. 29, № 3. — P. 211−30.
  56. DeMarchi, J.M. Size and complexity of human cytomegalovirus DNA Journal. / J.M. DeMarchi, M.L. Blankenship, G.D. Brown and A.S. Kaplan // Virology. 1978. — V. 89, № 2. — P. 643−6.
  57. Dezawa, M. Insights into autotransplantation: the unexpected discovery of specific induction systems in bone marrow stromal cells Journal. / M. Dezawa // Cell Mol Life Sci. 2006. — V. 63, № 23. — P. 2764−72.
  58. Dobbelstein, M. Viruses in therapy—royal road or dead end? Journal. / M. Dobbelstein // Virus Res. 2003. — V. 92, № 2. — P. 219−21.
  59. Duchin, J.S. Hantavirus pulmonary syndrome: a clinical description of 17 patients with a newly recognized disease. The Hantavirus Study Group Journal. /
  60. J.S. Duchin, F.T. Koster, C.J. Peters et al. // N Engl J Med. 1994. — V. 330, № 14. p. 949−55.
  61. Dunn, E.F. Transcription of a recombinant bunyavirus RNA template by transiently expressed bunyavirus proteins Journal. / E.F. Dunn, D.C. Pritlove, FI. Jin and R.M. Elliott // Virology. 1995. — V. 211, № 1. — P. 133−43.
  62. Dupuis, L. Mitochondria in amyotrophic lateral sclerosis: a trigger and a target Journal. / L. Dupuis, J.L. Gonzalez de Aguilar, H. Oudart et al. // Neurodegener Dis. 2004. — V. 1, № 6. — P. 245−54.
  63. Duxbury, M.S. RNA interference: a practical approach Journal. / M.S. Duxbury and E.E. Whang // J Surg Res. 2004. — V. 117, № 2. — P. 339−44.
  64. Elbashir, S.M. Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells Journal. / S.M. Elbashir, J. Harborth, W. Lendeckel et al. // Nature. 2001. — V. 411, № 6836. — P. 494−8.
  65. Ende, N. Human umbilical cord blood effect on sod mice (amyotrophic lateral sclerosis) Journal. / N. Ende, F. Weinstein, R. Chen and M. Ende // Life Sei. 2000. — V. 67, № 1. — P. 53−9.
  66. Engelhardt, J.F. Prolonged transgene expression in cotton rat lung with recombinant adenoviruses defective in E2a Journal. / J.F. Engelhardt, L. Litzky and J.M. Wilson // Hum Gene Ther. 1994. — V. 5, № 10. — P. 1217−29.
  67. Enria, D.A. Clinical manifestations of New World hantaviruses Journal. / D.A. Enria, A.M. Briggiler, N. Pini and S. Levis // Curr Top Microbiol Immunol. 2001. — V. 256. — P. 117−34.
  68. Evans, J.T. Human cord blood CD34+CD38- cell transduction via lentivirus-based gene transfer vectors Journal. / J.T. Evans, P.F. Kelly, E. O’Neill and J.V. Garcia // Hum Gene Ther. 1999. — V. 10, № 9. — P. 1479−89.k
  69. Everett, R.D. Trans activation of plasmid-borne promoters by adenovirus and several herpes group viruses Journal. / R.D. Everett and M. Dunlop // Nucleic Acids Res. 1984. — V. 12, № 15. — P. 5969−78.
  70. Feldmann, H. Emerging and re-emerging infectious diseases Journal. / H. Feldmann, M. Czub, S. Jones et al. // Med Microbiol Immunol. 2002. — V. 191, № 2.- P. 63−74.
  71. Feigner, P.L. Cationic liposome mediated transfection Journal. / P.L. Feigner, M. Holm and H. Chan // Proc West Pharmacol Soc. 1989. — V. 32. — P. 115−21.
  72. Feigner, P.L. Cationic liposome-mediated transfection Journal. / P.L. Feigner and G.M. Ringold //Nature. 1989. — V. 337, № 6205. — P. 387−8.
  73. Fire, A. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans Journal. / A. Fire, S. Xu, M.K. Montgomery et al. // Nature. 1998. — V. 391, № 6669. — P. 806−11.
  74. Fodor, E. The influenza virus panhandle is involved in the initiation of transcription Journal. / E. Fodor, D.C. Pritlove and G.G. Brownlee // J Virol. -1994. V. 68, № 6. — P. 4092−6.
  75. Frey, B.M. High-efficiency gene transfer into ex vivo expanded human hematopoietic progenitors and precursor cells by adenovirus vectors Journal. / B.M. Frey, N.R. Hackett, J.M. Bergelson et al. // Blood. 1998. — V. 91, № 8. -P. 2781−92.
  76. Gamier, L. Recent advances and remaining problems in HIV assembly Journal. / L. Gamier, J.B. Bowzard and J.W. Wills // AIDS. 1998. — V. 12 Suppl A.-P. S5−16.
  77. Gavrilovskaya, I.N. Beta3 Integrins mediate the cellular entry of hantaviruses that cause respiratory failure Journal. / I.N. Gavrilovskaya, M. Shepley, R. Shaw et al. // Proc Natl Acad Sci USA.- 1998. V. 95, № 12. — P. 7074−9.
  78. Gaytant, M.A. Congenital cytomegalovirus infection: review of the epidemiology and outcome Journal. / M.A. Gaytant, E.A. Steegers, B.A. Semmekrot et al. // Obstet Gynecol Surv. 2002. — V. 57, № 4. — P. 245−56.
  79. Geginat, G. IFN-gamma is a prerequisite for optimal antigen processing of viral peptides in vivo Journal. / G. Geginat, T. Ruppert, H. Hengel et al. //J Immunol. 1997.-V. 158, № 7.-P. 3303−10.
  80. Gentry, T. Retroviral vector-mediated gene transfer into umbilical cord blood CD34brCD38-CD33- cells Journal. / T. Gentry and C. Smith // Exp Hematol. 1999. — V. 27, № 8. — P. 1244−54.
  81. Giasson, B.I. Neuronal alpha-synucleinopathy with severe movement disorder in mice expressing A53T human alpha-synuclein Journal. / B.I. Giasson, J.E. Duda, S.M. Quinn et al. // Neuron. 2002. — V. 34, № 4. — P. 52 133.
  82. Gioio, A.E. Kinesin mRNA is present in the squid giant axon Journal. / A.E. Gioio, J.T. Chun, M. Crispino et al. // J Neurochem. 1994. — V. 63, № 1. -P. 13−8.
  83. Glorioso, J.C. Herpes vector-mediated gene transfer in treatment of diseases of the nervous system Journal. / J.C. Glorioso and D.J. Fink // Annu Rev Microbiol. 2004. — V. 58. — P. 253−71.
  84. Gluckman, E. Current status of umbilical cord blood hematopoietic stem cell transplantation Journal. / E. Gluckman // Exp Hematol. 2000. — V. 28, № 11. -P. 1197−205.
  85. Gluckman, E. Hematopoietic stem-cell transplants using umbilical-cord blood Journal. / E. Gluckman // N Engl J Med. 2001. — V. 344, № 24. — P. 1860−1.
  86. Gluckman, E. Hematopoietic reconstitution in a patient with Fanconi’s anemia by means of umbilical-cord blood from an HLA-identical sibling Journal. / E. Gluckman, H.A. Broxmeyer, A.D. Auerbach et al. // N Engl J Med. 1989. — V. 321, № 17. — P. 1174−8.
  87. Gluckman, E. Umbilical cord blood transplants Journal. / E. Gluckman and F. Locatelli // Curr Opin Hematol. 2000. — V. 7, № 6. — P. 353−7.
  88. Gluckman, E. Cord blood banking for human hematopoietic cell transplantation Journal. / E. Gluckman, D. Thierry, S. Lesage et al. // Prog Clin Biol Res. 1992. — V. 377. — P. 591−8- discussion 599−602.
  89. Gluckman, E.G. Use of Cord Blood Cells for Banking and Transplant Journal. / E.G. Gluckman, V.V. Roch and C. Chastang // Oncologist. 1997. -V. 2, № 5. — p. 340−343.
  90. Godbey, W.T. Poly (ethylenimine) and its role in gene delivery Journal. / W.T. Godbey, K.K. Wu and A.G. Mikos // J Control Release. 1999. — V. 60, № 2−3. — P. 149−60.
  91. Goldsmith, C.S. Ultrastructural characteristics of Sin Nombre virus, causative agent of hantavirus pulmonary syndrome Journal. / C.S. Goldsmith, L.H. Elliott, C.J. Peters and S.R. Zaki // Arch Virol. 1995. — V. 140, № 12. — P. 2107−22.
  92. Gott, P. RNA binding of recombinant nucleocapsid proteins of hantaviruses Journal. / P. Gott, R. Stohwasser, P. Schnitzler et al. // Virology. 1993. — V. 194, № 1,-P. 332−7.
  93. Gurney, M.E. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu, Zn superoxide dismutase mutation Journal. / M.E. Gurney, H. Pu, A.Y. Chiu et al. // Science. 1994. — V. 264, № 5166. — P. 1772−5.
  94. Hao, H.N. Fetal human hematopoietic stem cells can differentiate sequentially into neural stem cells and then astrocytes in vitro Journal. / H.N. Hao, J. Zhao, R.L. Thomas et al. // J Hematother Stem Cell Res. 2003. — V. 12, № 1. — P. 23−32.
  95. Hartwell, L.H. Checkpoints: controls that ensure the order of cell cycle events Journal. / L.H. Hartwell and T.A. Weinert // Science. 1989. — V. 246, № 4930. — P. 629−34.
  96. Hawley, T.S. Flow Cytometry Protocols Book. / T.S. Hawley, R.G. Hawley and N.J. Totowa // Humana Press. 2004.
  97. He, Y. Role of cytoplasmic dynein in the axonal transport of microtubules and neurofilaments Journal. / Y. Fie, F. Francis, K.A. Myers et al. // J Cell Biol. 2005. — V. 168, № 5. — P. 697−703.
  98. Heiskanen, T. Phage-displayed peptides mimicking the discontinuous neutralization sites of puumala Hantavirus envelope glycoproteins Journal. / T. Heiskanen, A. Lundkvist, R. Soliymani et al. // Virology. 1999. — V. 262, № 2. -P. 321−32.
  99. Hendricks, W.A. Predifferentiated embryonic stem cells prevent chronic pain behaviors and restore sensory function following spinal cord injury in mice Journal. / W.A. Hendricks, E.S. Pak, J.P. Owensby et al. // Mol Med. 2006. -V. 12, № 1−3. — P. 34−46.
  100. Hewlett, M.J. Circular forms of Uukuniemi virion RNA: an electron microscopic study Journal. / M.J. Hewlett, R.F. Pettersson and D. Baltimore // J Virol. 1977. — V. 21, № 3. — P. 1085−93.
  101. Honda, A. RNA polymerase of influenza virus: role of NP in RNA chain elongation Journal. / A. Honda, K. Ueda, K. Nagata and A. Ishihama // J Biochem. 1988. — V. 104, № 6. — P. 1021−6.
  102. Hows, J.M. Growth of human umbilical-cord blood in longterm haemopoietic cultures Journal. / J.M. Hows, B.A. Bradley, J.C. Marsh et al. // Lancet. 1992. — V. 340, № 8811. — P. 73−6.
  103. Hung, T. Identification of Hantaan virus-related structures in kidneys of cadavers with haemorrhagic fever with renal syndrome Journal. / T. Hung, J.Y. Zhou, Y.M. Tang et al. // Arch Virol. 1992. — V. 122, № 1−2. — P. 187−99.
  104. Hutchinson, K.L. Sin Nombre virus mRNA synthesis Journal. / K.L. Hutchinson, C.J. Peters and S.T. Nichol // Virology. 1996. — V. 224, № 1. — P. 139−49.
  105. Jankowsky, J.L. Persistent amyloidosis following suppression of Abeta production in a transgenic model of Alzheimer disease Journal. / J.L. Jankowsky, H.H. Slunt, V. Gonzales et al. // PLoS Med. 2005. — V. 2, № 12. -P. e355.
  106. Jantti, J. Immunocytochemical analysis of Uukuniemi virus budding compartments: role of the intermediate compartment and the Golgi stack in vims maturation Journal. / J. Jantti, P. Hilden, H. Ronka et al. // J Virol. 1997. — V. 71, № 2. — P. 1162−72.
  107. Jezierski, M.K. Estrogen enhances retrograde transport of brain-derived neurotrophic factor in the rodent forebrain Journal. / M.K. Jezierski and F. Sohrabji // Endocrinology. 2003. — V. 144, № 11. — P. 5022−9.
  108. Jiang, Y. Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow Journal. / Y. Jiang, B.N. Jahagirdar, R.L. Reinhardt et al. // Nature. -2002. V. 418, № 6893. — P. 41−9.
  109. Johnson, A.M. Laguna Negra virus associated with HPS in western Paraguay and Bolivia Journal. / A.M. Johnson, M.D. Bowen, T.G. Ksiazek et al. //Virology. 1997.-V. 238, № l.-P. 115−27.
  110. Jonsson, C.B. Replication of hantaviruses Journal. / C.B. Jonsson and C.S. Schmaljohn // Curr Top Microbiol Immunol. 2001. — V. 256. — P. 15−32.
  111. Jurga, M. Neurogenic potential of human umbilical cord blood: neural-like stem cells depend on previous long-term culture conditions Journal. / M. Jurga, I. Markiewicz, A. Sarnowska et al. // J Neurosci Res. 2006. — V. 83, № 4. — P. 627−37.
  112. Karagiannis, T.C. RNA interference and potential therapeutic applications of short interfering RNAs Journal. / T.C. Karagiannis and A. El-Osta // Cancer Gene Ther. 2005. — V. 12, № 10. — P. 787−95.
  113. Karlin, S. Molecular evolution of herpesviruses: genomic and protein sequence comparisons Journal. / S. Karlin, E.S. Mocarski and G.A. Schachtel // J Virol. 1994. — V. 68, № 3. — P. 1886−902.
  114. Kaspar, B.K. Retrograde viral delivery of IGF-1 prolongs survival in a mouse ALS model Journal. / B.K. Kaspar, J. Llado, N. Sherkat et al. // Science. 2003. — V. 301, № 5634. — P. 839−42.
  115. Kennerdell, J.R. Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway Journal. / J.R. Kennerdell and R.W. Carthew // Cell. 1998. — V. 95, № 7. — P. 1017−26.
  116. Kerr, D.A. Human embryonic germ cell derivatives facilitate motor recovery of rats with diffuse motor neuron injury Journal. / D.A. Kerr, J. Llado, M.J. Shamblott et al. //J Neurosci. 2003. — V. 23, № 12. — P. 5131−40.
  117. Khaiboullina, S.F. Hantavirus immunology Journal. / S.F. Khaiboullina and S.C. St Jeor // Viral Immunol. 2002. — V. 15, № 4. — P. 609−25.
  118. Khan, A.S. Hantavirus pulmonary syndrome Journal. / A.S. Khan, T.G. Ksiazek and C.J. Peters // Lancet. 1996. — V. 347, № 9003. — P. 739−41.
  119. Khan, A.S. Fatal illness associated with a new hantavirus in Louisiana Journal. / A.S. Khan, C.F. Spiropoulou, S. Morzunov et al. // J Med Virol. -1995.-V. 46, № 3,-P. 281−6.
  120. Kim, Y.J. Unsaturated fatty acids induce cytotoxic aggregate formation of amyotrophic lateral sclerosis-linked superoxide dismutase 1 mutants Journal. / Y.J. Kim, R. Nakatomi, T. Akagi et al. // J Biol Chem. 2005. — V. 280, № 22. -P. 21 515−21.
  121. Kim, Y.S. Hemorrhagic fever with renal syndrome caused by the Seoul virus Journal. / Y.S. Kim, C. Ahn, J.S. Han et al. // Nephron. 1995. — V. 71, № 4.-P. 419−27.
  122. Kong, J. Massive mitochondrial degeneration in motor neurons triggers the onset of amyotrophic lateral sclerosis in mice expressing a mutant SOD1 Journal. / J. Kong and Z. Xu // J Neurosci. 1998. — V. 18, № 9. — P. 3241−50.
  123. Duc, J.W. Global survey of antibody to Hantaan-related viruses among peridomestic rodents Journal. / J.W. LeDuc, G.A. Smith, J.E. Childs et al. // Bull World Health Organ. 1986. — V. 64, № 1. — P. 139−44.
  124. Maciejewski, J.P. Infection of hematopoietic progenitor cells by human cytomegalovirus Journal. / J.P. Maciejewski, E.E. Bruening, R.E. Donahue et al. // Blood. 1992. — V. 80, № 1. — P. 170−8.
  125. Mandel, R.J. Recombinant adeno-associated viral vectors as therapeutic agents to treat neurological disorders Journal. / R.J. Mandel, F.P. Manfredsson, K.D. Foust et al. // Mol Ther. 2006. — V. 13, № 3. — P. 463−83.
  126. Mangiarini, L. Exon 1 of the HD gene with an expanded CAG repeat is sufficient to cause a progressive neurological phenotype in transgenic mice Journal. / L. Mangiarini, K. Sathasivam, M. Seller et al. // Cell. 1996. — V. 87, № 3. — P. 493−506.
  127. Matsuoka, Y. A signal for Golgi retention in the bunyavirus G1 glycoprotein Journal. / Y. Matsuoka, S.Y. Chen and R.W. Compans // J Biol Chem. 1994. -V. 269, № 36.-P. 22 565−73.
  128. Matz, M.V. Family of the green fluorescent protein: journey to the end of the rainbow Journal. / M.V. Matz, K.A. Lukyanov and S.A. Lukyanov // Bioessays. 2002. — V. 24, № 10. — P. 953−9.
  129. Mayani, H. Kinetics of hematopoiesis in Dexter-type long-term cultures established from human umbilical cord blood cells Journal. / H. Mayani, M. Gutierrez-Rodriguez, L. Espinoza et al. // Stem Cells. 1998. — V. 16, № 2. — P. 127−35.
  130. Mayani, H. Biology of human umbilical cord blood-derived hematopoietic stem/progenitor cells Journal. / H. Mayani and P.M. Lansdorp // Stem Cells. -1998. -V. 16, № 3.-P. 153−65.
  131. Mazzini, L. Stem cell therapy in amyotrophic lateral sclerosis: a methodological approach in humans Journal. / L. Mazzini, F. Fagioli, R. Boccaletti et al. // Amyotroph Lateral Scler Other Motor Neuron Disord. 2003. -V. 4, № 3. — P. 158−61.
  132. McAllister, R.M. Human cytomegalovirus. Studies on the mechanism of viral cytopathology and inclusion body formation Journal. / R.M. McAllister,
  133. J.E. Filbert and C.R. Goodheart // Proc Soc Exp Biol Med. 1967. — V. 124, № 3. — P. 932−7.
  134. McCaffrey, A.P. A story of mice and men Journal. / A.P. McCaffrey and M.A. Kay // Gene Ther. 2002. — V. 9, № 23. — P. 1563.
  135. McCown, T.J. Adeno-associated vims (AAV) vectors in the CNS Journal. / T.J. McCown // Curr Gene Ther. 2005. — V. 5, № 3. — P. 333−8.
  136. Mebatsion, T. Budding of rabies virus particles in the absence of the spike glycoprotein Journal. / T. Mebatsion, M. Konig and K.K. Conzelmann // Cell. -1996.-V. 84, № 6.-P. 941−51.
  137. Meyer, B.J. Persistent hantavirus infections: characteristics and mechanisms Journal. / B.J. Meyer and C.S. Schmaljohn // Trends Microbiol. 2000. — V. 8, № 2.-P. 61−7.
  138. Mezey, E. Bone marrow: a possible alternative source of cells in the adult nervous system Journal. / E. Mezey and K.J. Chandross // Eur J Pharmacol. -2000. V. 405, № 1−3. — P. 297−302.
  139. Mezey, E. Turning blood into brain: cells bearing neuronal antigens generated in vivo from bone marrow Journal. / E. Mezey, K.J. Chandross, G. Plarta et al. // Science. 2000. — V. 290, № 5497. — P. 1779−82.
  140. Miagkov, A. Gene transfer of baculoviral p35 by adenoviral vector protects human cerebral neurons from apoptosis Journal. / A. Miagkov, J. Turchan, A. Nath and D.B. Drachman // DNA Cell Biol. 2004. — V. 23, № 8. — P. 496−501.
  141. Miana-Mena, F.J. Fragment C tetanus toxin: a putative activity-dependent neuroanatomical tracer Journal. / F.J. Miana-Mena, M.J. Munoz, J. Ciriza et al. // ActaNeurobiol Exp (Wars). 2003. — V. 63, № 3. — P. 211−8.
  142. Mims, C.A. Infection of salivary glands, kidneys, adrenals, ovaries and epithelia by murine cytomegalovirus Journal. / C.A. Mims and J. Gould // J Med Microbiol. 1979. — V. 12, № 1. — P. 113−22.
  143. Montgomery, M.K. RNA as a target of double-stranded RNA-mediated genetic interference in Caenorhabditis elegans Journal. / M.K. Montgomery, S. Xu and A. Fire // Proc Natl Acad Sci USA.- 1998. V. 95, № 26. — P. 15 502−7.
  144. Moremen, K.W. Novel purification of the catalytic domain of Golgi alpha-mannosidase II. Characterization and comparison with the intact enzyme Journal. / K.W. Moremen, O. Touster and P.W. Robbins // J Biol Chem. 1991. -V. 266, № 25.-P. 16 876−85.
  145. Moro, D. Murine viruses in an island population of introduced house mice and endemic short-tailed mice in Western Australia Journal. / D. Moro, M.L. Lloyd, A.L. Smith et al. // J Wildl Dis. 1999. — V. 35, № 2. — P. 301−10.
  146. Munoz-Elias, G. Marrow stromal cells, mitosis, and neuronal differentiation: stem cell and precursor functions Journal. / G. Munoz-Elias, D. Woodbury and LB. Black // Stem Cells. 2003. — V. 21, № 4. — P. 437−48.
  147. Murashov, A.K. RNAi pathway is functional in peripheral nerve axons Journal. / A.K. Murashov, V. Chintalgattu, R.R. Islamov et al. // Faseb J. -2007. V. 21, № 3. — P. 656−70.
  148. Muzyczka, N. Parvoviridae: the viruses and their replication Book Section. / N. Muzyczka, and Berns, K. I. Fields Virology. — New York: Lippincott, Williams & Wilkins, 2001.
  149. Nakahata, T. Hemopoietic colony-forming cells in umbilical cord blood with extensive capability to generate mono- and multipotential hemopoietic progenitors Journal. / T. Nakahata and M. Ogawa // J Clin Invest. 1982. — V. 70, № 6. — P. 1324−8.
  150. Naldini, L. In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector Journal. / L. Naldini, U. Blomer, P. Gallay et al. // Science. 1996. — V. 272, № 5259. — P. 263−7.
  151. Napoli, C. Introduction of a Chimeric Chalcone Synthase Gene into Petunia Results in Reversible Co-Suppression of Homologous Genes in trans Journal. / C. Napoli, C. Lemieux and R. Jorgensen // Plant Cell. 1990. — V. 2, № 4. — P. 279−289.
  152. Neering, S.J. Transduction of primitive human hematopoietic cells with recombinant adenovirus vectors Journal. / S.J. Neering, S.F. Hardy, D. Minamoto et al. // Blood. 1996. — V. 88, № 4. — P. 1147−55.
  153. Netski, D. Sin Nombre virus pathogenesis in Peromyscus maniculatus Journal. / D. Netski, B.H. Thran and S.C. St Jeor // J Virol. 1999. — V. 73, № 1.-P. 585−91.
  154. Nichol, S.T. Emerging viral diseases Journal. / S.T. Nichol, J. Arikawa and Y. Kawaoka // Proc Natl Acad Sci USA.- 2000. V. 97, № 23. — P. 12 411−2.
  155. Nichol, S.T. Genetic identification of a hantavirus associated with an outbreak of acute respiratory illness Journal. / S.T. Nichol, C.F. Spiropoulou, S. Morzunov et al. // Science. 1993. — V. 262, № 5135. — P. 914−7.
  156. Obijeski, J.F. Segmented genome and nucleocapsid of La Crosse virus Journal. / J.F. Obijeski, D.H. Bishop, E.L. Palmer and F.A. Murphy // J Virol. -1976. V. 20, № 3. — P. 664−75.
  157. Oldak, T. Optimisation of transfection conditions of CD34+ hematopoietic cells derived from human umbilical cord blood Journal. / T. Oldak, M. Kruszewski, E.K. Machaj et al. // Acta Biochim Pol. 2002. — V. 49, № 3. — P. 625−32.
  158. Olsen, P.H. The lin-4 regulatory RNA controls developmental timing in Caenorhabditis elegans by blocking LIN-14 protein synthesis after the initiation of translation Journal. / P.H. Olsen and V. Ambros // Dev Biol. 1999. — V. 216, № 2.-P. 671−80.
  159. Orazi, A. Commentary: Immunohistochemistry represents a useful tool to study human cell engraftment in SCID mice transplantation models Journal. / A. Orazi, S.E. Braun and H.E. Broxmeyer // Blood Cells. 1994. — V. 20, № 2−3. -P. 323−30.
  160. Paddison, P.J. Short hairpin RNAs (shRNAs) induce sequence-specific silencing in mammalian cells Journal. / P.J. Paddison, A.A. Caudy, E. Bernstein et al. // Genes Dev. 2002. — V. 16, № 8. — P. 948−58.
  161. Pai, R.K. Absence of infection in a neonate after possible exposure to sin nombre hantavirus in breast milk Journal. / R.K. Pai, M. Bharadwaj, II. Levy et al. // Clin Infect Dis. 1999. — V. 29, № 6. — P. 1577−9.
  162. Pardee, A.B. G1 events and regulation of cell proliferation Journal. / A.B. Pardee // Science. 1989. — V. 246, № 4930. — P. 603−8.
  163. Patton, J.T. N protein alone satisfies the requirement for protein synthesis during RNA replication of vesicular stomatitis virus Journal. / J.T. Patton, N.L. Davis and G.W. Wertz // J Virol. 1984. — V. 49, № 2. — P. 303−9.
  164. Peckham, C.S. Cytomegalovirus infection: congenital and neonatal disease Journal. / C.S. Peckham // Scand J Infect Dis Suppl. 1991. — V. 80. — P. 82−7.
  165. Pensiero, M.N. The Hantaan virus M-segment glycoproteins G1 and G2 can be expressed independently Journal. / M.N. Pensiero and J. Play // J Virol. -1992. V. 66, № 4. — P. 1907−14.
  166. Pensiero, M.N. Expression of the Hantaan virus M genome segment by using a vaccinia virus recombinant Journal. / M.N. Pensiero, G.B. Jennings, C.S. Schmaljohn and J. Hay // J Virol. 1988. — V. 62, № 3. — P. 696−702.
  167. Perreau, M. The conundrum between immunological memory to adenovirus and their use as vectors in clinical gene therapy Journal. / M. Perreau and E.J. Kremer // Mol Biotechnol. 2006. — V. 34, № 2. — P. 247−56.
  168. Persson, R. Formation and intracellular transport of a heterodimeric viral spike protein complex Journal. / R. Persson and R.F. Pettersson // J Cell Biol. -1991.-V. 112, № 2.-P. 257−66.
  169. Pfeifer, K. Adult neural progenitor cells provide a permissive guiding substrate for corticospinal axon growth following spinal cord injury Journal. / K. Pfeifer, M. Vroemen, A. Blesch and N. Weidner // Eur J Neurosci. 2004. — V. 20, № 7.-P. 1695−704.
  170. Pleskoff, O. The cytomegalovirus-encoded chemokine receptor US28 can enhance cell-cell fusion mediated by different viral proteins Journal. / O. Pleskoff, C. Treboute and M. Alizon // J Virol. 1998. — V. 72, № 8. — P. 638 997.
  171. Plotkin, S.A. Cytomegalovirus vaccine Journal. / S.A. Plotkin // Am Heart J. 1999. — V. 138, № 5 Pt 2. — P. S484−7.
  172. Plotkin, S.A. Vaccination against cytomegalovirus, the changeling demon Journal. / S.A. Plotkin // Pediatr Infect Dis J. 1999. — V. 18, № 4. — P. 313−25- quiz 326.
  173. Plyusnin, A. Unique and conserved features of Tula hantavirus M gene encoding envelope glycoproteins G1 and G2 Journal. / A. Plyusnin, Y. Cheng, H. Lehvaslaiho and A. Vaheri // Virus Genes. 1996. — V. 12, № 3. — P. 257−63.
  174. Price, D.L. Amyotrophic lateral sclerosis and Alzheimer disease. Lessons from model systems Journal. / D.L. Price, P.C. Wong, D.R. Borchelt et al. // Rev Neurol (Paris). 1997. — V. 153, № 8−9. — P. 484−95.
  175. Rakhit, R. Oxidation-induced misfolding and aggregation of superoxide dismutase and its implications for amyotrophic lateral sclerosis Journal. / R. Rakhit, P. Cunningham, A. Furtos-Matei et al. // J Biol Chem. 2002. — V. 277, № 49.-P. 47 551−6.
  176. Ralph, G.S. Gene therapy for neurodegenerative and ocular diseases using lentiviral vectors Journal. / G.S. Ralph, K. Binley, L.F. Wong et al. // Clin Sci (Lond). 2006. — V. 110, № 1. — P. 37−46.
  177. Ralph, G.S. Silencing mutant SOD1 using RNAi protects against neurodegeneration and extends survival in an ALS model Journal. / G.S. Ralph, P.A. Radcliffe, D.M. Day et al. // Nat Med. 2005. — V. 11, № 4. — P. 429−33.
  178. Raoul, C. Lentiviral-mediated silencing of SOD1 through RNA interference retards disease onset and progression in a mouse model of ALS Journal. / C. Raoul, T. Abbas-Terki, J.C. Bensadoun et al. // Nat Med. 2005. — V. 11, № 4. -P. 423−8.
  179. Rasmussen, L. Molecular pathogenesis of human cytomegalovirus infection Journal. / L. Rasmussen // Transpl Infect Dis. 1999. — V. 1, № 2. — P. 127−34.
  180. Ravkov, E.V. Polarized entry and release in epithelial cells of Black Creek Canal virus, a New World hantavirus Journal. / E.V. Ravkov, S.T. Nichol and R.W. Compans //J Virol. 1997. — V. 71, № 2. — P. 1147−54.
  181. Reddehase, M.J. Mouse models of cytomegalovirus latency: overview Journal. / M.J. Reddehase, J. Podlech and N.K. Grzimek // J Clin Virol. 2002. — V. 25 Suppl 2. — P. S23−36.
  182. Reinhart, B.J. The 21-nucleotide let-7 RNA regulates developmental timing in Caenorhabditis elegans Journal. / B.J. Reinhart, F.J. Slack, M. Basson et al. // Nature. 2000. — V. 403, № 6772. — P. 901−6.
  183. Rizvanov, A.A. Generation of a recombinant cytomegalovirus for expression of a hantavirus glycoprotein Journal. / A.A. Rizvanov, A.G. van Geelen, S. Morzunov et al. // J Virol. 2003. — V. 77, № 22. — P. 12 203−10.
  184. Rocha, V. Comparison of outcomes of unrelated bone marrow and umbilical cord blood transplants in children with acute leukemia Journal. / V. Rocha, J. Cornish, E.L. Sievers et al. // Blood. 2001. — V. 97, № 10. — P. 2962−71.
  185. Romano, N. Quelling: transient inactivation of gene expression in Neurospora crassa by transformation with homologous sequences Journal. / N. Romano and G. Macino // Mol Microbiol. 1992. — V. 6, № 22. — P. 3343−53.
  186. Rosen, D.R. Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis Journal. / D.R. Rosen, T. Siddique, D. Patterson et al. // Nature. 1993. — V. 362, Jvfe 6415. — P. 59−62.
  187. Rowe, J.E. Coexistence of several novel hantaviruses in rodents indigenous to North America Journal. / J.E. Rowe, S.C. St Jeor, J. Riolo et al. // Virology. -1995. V. 213, № 1. — P. 122−30.
  188. Rubinstein, P. Processing and cryopreservation of placental/umbilical cord blood for unrelated bone marrow reconstitution Journal. / P. Rubinstein, L. Dobrila, R.E. Rosenfield et al. // Proc Natl Acad Sci USA.- 1995. V. 92, Jvf" 22. — P. 10 119−22.
  189. Ruusala, A. Coexpression of the membrane glycoproteins G1 and G2 of Hantaan virus is required for targeting to the Golgi complex Journal. / A. Ruusala, R. Persson, C.S. Schmaljohn and R.F. Pettersson // Virology. 1992. -V. 186, № l.-P. 53−64.
  190. Sagot, Y. Differential effects of neurotrophic factors on motoneuron retrograde labeling in a murine model of motoneuron disease Journal. / Y. Sagot, T. Rosse, R. Vejsada et al. // J Neurosci. 1998. — V. 18, № 3. — P. 113 241.
  191. Saito, Y. Transgenic small interfering RNA halts amyotrophic lateral sclerosis in a mouse model Journal. / Y. Saito, T. Yokota, T. Mitani et al. //J Biol Chem. 2005. — V. 280, № 52. — P. 42 826−30.
  192. Sambrook, J. Molecular Cloning: A Laboratory Manual Book. / J. Sambrook and D.W. Russell. Cold Spring Harbor Laboratory Press. — 2001.
  193. Schagen, F.H. Immune responses against adenoviral vectors and their transgene products: a review of strategies for evasion Journal. / F.H. Schagen, M. Ossevoort, R.E. Toes and R.C. Hoeben // Crit Rev Oncol Hematol. 2004. -V. 50, № 1,-P. 51−70.
  194. Schmaljohn, C. Hantaviruses: a global disease problem Journal. / C. Schmaljohn and B. Hjelle // Emerg Infect Dis. 1997. — V. 3, № 2. — P. 95−104.
  195. Schmaljohn, C.S. Antigenic subunits of Hantaan virus expressed by baculovirus and vaccinia virus recombinants Journal. / C.S. Schmaljohn, Y.K. Chu, A.L. Schmaljohn and J.M. Dalrymple // J Virol. 1990. — V. 64, № 7. — P. 3162−70.
  196. Schmaljohn,.C.S. Analysis of Hantaan virus RNA: evidence for a new genus of bunyaviridae Journal. / C.S. Schmaljohn and J.M. Dalrymple // Virology. -1983. -V. 131, № 2. P. 482−91.
  197. Schmaljohn, C.S. Preparation of candidate vaccinia-vectored vaccines for haemorrhagic fever with renal syndrome Journal. / C.S. Schmaljohn, S.E. Hasty and J.M. Dalrymple // Vaccine. 1992. — V. 10, № 1. — P. 10−3.
  198. Schmaljohn, C.S. Hantaan virus replication: effects of monensin, tunicamycin and endoglycosidases on the structural glycoproteins Journal. /C.S. Schmaljohn, S.E. Hasty, L. Rasmussen and J.M. Dalrymple // J Gen Virol. -1986. V. 67 (Pt 4). — P. 707−17.
  199. Schmaljohn, C.S. Hantaan virus M RNA: coding strategy, nucleotide sequence, and gene order Journal. / C.S. Schmaljohn, A.L. Schmaljohn and J.M. Dalrymple //Virology. 1987. — V. 157, № 1. — P. 31−9.
  200. Schneider, L.G. Rabies virus vaccines Journal. / L.G. Schneider // Dev Biol Stand. 1995. — V. 84. — P. 49−54.
  201. Schwarz, E.J. Multipotential marrow stromal cells transduced to produce L-DOPA: engraftment in a rat model of Parkinson disease Journal. / E.J. Schwarz, G.M. Alexander, D.J. Prockop and S.A. Azizi // Hum Gene Ther. 1999. — V. 10, № 15. — P. 2539−49.
  202. Seow, Y. Biological gene delivery vehicles: beyond viral vectors Journal. / Y. Seow and M.J. Wood // Mol Ther. 2009. — V. 17, № 5. — P. 767−77.
  203. Severson, W. Characterization of the Hantaan nucleocapsid protein-ribonucleic acid interaction Journal. / W. Severson, L. Partin, C.S. Schmaljohn and C.B. Jonsson // J Biol Chem. 1999. — V. 274, № 47. — P. 33 732−9.
  204. Shapiro, G.I. Influenza virus RNA replication in vitro: synthesis of viral template RNAs and virion RNAs in the absence of an added primer Journal. / G.I. Shapiro and R.M. Krug // J Virol. 1988. — V. 62, № 7. — P. 2285−90.
  205. Shi, X. Golgi localization of Hantaan virus glycoproteins requires coexpression of G1 and G2 Journal. / X. Shi and R.M. Elliott // Virology. -2002. -V. 300, № 1. P. 31−8.
  206. Shigekawa, K. Electroporation of eukaryotes and prokaryotes: a general approach to the introduction of macromolecules into cells Journal. / K. Shigekawa and W.J. Dower // Biotechniques. 1988. — V. 6, № 8. — P. 742−51.
  207. Shin, J.Y. Low molecular weight polyethylenimine for efficient transfection of human hematopoietic and umbilical cord blood-derived CD34+ cells Journal. / J.Y. Shin, D. Suh, J.M. Kim et al. // Biochim Biophys Acta. 2005. — V. 1725, № 3. — P. 377−84.
  208. Simeoni, F. Insight into the mechanism of the peptide-based gene delivery system MPG: implications for delivery of siRNA into mammalian cells Journal.
  209. F. Simeoni, M.C. Morris, F. Heitz and G. Divita // Nucleic Acids Res. 2003. -V. 31, № 11.-P. 2717−24.
  210. Smith, R.A. Antisense oligonucleotide therapy for neurodegenerative disease Journal. / R.A. Smith, T.M. Miller, K. Yamanaka et al. // J Clin Invest. -2006. V. 116, № 8. — P. 2290−6.
  211. Smith, T.A. Transient immunosuppression permits successful repetitive intravenous administration of an adenovirus vector Journal. / T.A. Smith, B.D. White, J.M. Gardner et al. // Gene Ther. 1996. — V. 3, № 6. — P. 496−502.
  212. Spaete, R.R. Insertion and deletion mutagenesis of the human cytomegalovirus genome Journal. / R.R. Spaete and E.S. Mocarski // Proc Natl Acad Sci USA.- 1987. V. 84, № 20. — P. 7213−7.
  213. Spiropoulou, C.F. Hantavirus maturation Journal. / C.F. Spiropoulou // Curr Top Microbiol Immunol. 2001. — V. 256. — P. 33−46.
  214. Spiropoulou, C.F. Sin Nombre virus glycoprotein trafficking Journal. / C.F. Spiropoulou, C.S. Goldsmith, T.R. Shoemaker et al. // Virology. 2003. — V. 308, № 1. — P. 48−63.
  215. St George, J.A. Gene therapy progress and prospects: adenoviral vectors Journal. / J.A. St George // Gene Ther. 2003. — V. 10, № 14. — P. 1135−41.
  216. Sutter, G. Vaccinia vectors as candidate vaccines: the development of modified vaccinia virus Ankara for antigen delivery Journal. / G. Sutter and C. Staib // Curr Drug Targets Infect Disord. 2003. — V. 3, № 3. — P. 263−71.
  217. Szyda, A. Optimization of a retroviral vector for transduction of human CD34 positive cells Journal. / A. Szyda, M. Paprocka, A. Krawczenko et al. // ActaBiochim Pol. 2006. — V. 53, № 4. — P. 815−23.
  218. Takekoshi, M. Inducible expression of a foreign gene inserted into the human cytomegalovirus genome Journal. / M. Takekoshi, F. Maeda-Takekoshi, S. Ihara et al. // J Gen Virol. 1993. — V. 74 (Pt 8). — P. 1649−52.
  219. Taylor, G.R. Rapid screening for delta F508 deletion in cystic fibrosis Journal. / G.R. Taylor, J. S. Noble, J. L. Hall, P. Quirke, A. D. Stewart, R. F. Mueller // Lancet. 1989. — V. 2, № 8675. — P. 1345−6.
  220. Terpe, K. Overview of tag protein fusions: from molecular and biochemical fundamentals to commercial systems Journal. / K. Terpe // Appl Microbiol Biotechnol. 2003. — V. 60, № 5. — P. 523−33.
  221. Tsukita, S. ERM proteins: head-to-tail regulation of actin-plasma membrane interaction Journal. / S. Tsukita and S. Yonemura // Trends Biochem Sci. -1997.-V. 22, № 2.-P. 53−8.
  222. Valentine, J.S. Misfolded CuZnSOD and amyotrophic lateral sclerosis Journal. / J.S. Valentine and P.J. Hart // Proc Natl Acad Sci USA.- 2003. V. 100, № 7.-P. 3617−22.
  223. Vaziri, H. Evidence for a mitotic clock in human hematopoietic stem cells: loss of telomeric DNA with age Journal. / H. Vaziri, W. Dragowska, R.C. Allsopp et al. // Proc Natl Acad Sci USA.- 1994. V. 91, № 21. — P. 9857−60.
  224. Von Levetzow, G. Nucleofection, an efficient nonviral method to transfer genes into human hematopoietic stem and progenitor cells Journal. / G. von Levetzow, J. Spanholtz, J. Beckmann et al. // Stem Cells Dev. 2006. — V. 15, № 2.-P. 278−85.
  225. Vormoor, J. Immature human cord blood progenitors engraft and proliferate to high levels in severe combined immunodeficient mice Journal. / J. Vormoor, T. Lapidot, F. Pflumio et al. // Blood. 1994. — V. 83, № 9. — P. 2489−97.
  226. Vroemen, M. Adult neural progenitor cell grafts survive after acute spinal cord injury and integrate along axonal pathways Journal. / M. Vroemen, L. Aigner, J. Winkler and N. Weidner // Eur J Neurosci. 2003. — V. 18, № 4. — P. 743−51.
  227. Wagner, J.E. Allogeneic sibling umbilical-cord-blood transplantation in children with malignant and non-malignant disease Journal. / J.E. Wagner, N.A. Kernan, M. Steinbuch et al. // Lancet. 1995. — V. 346, № 8969. — P. 214−9.
  228. Waldhoer, M. Murine cytomegalovirus (CMV) M33 and human CMV US28 receptors exhibit similar constitutive signaling activities Journal. / M. Waldhoer, T.N. Kledal, H. Farrell and T.W. Schwartz // J Virol. 2002. — V. 76, № 16. — P. 8161−8.
  229. Watts, D. Automated fluorescent DNA sequencing on the ABI PRISM 310 Genetic Analyzer Journal. / D. Watts and J.R. MacBeath // Methods Mol Biol. -2001. -V. 167. P. 153−70.
  230. Weissenbacher, M.C. Serological evidence of human Hantavirus infection in Argentina, Bolivia and Uruguay Journal. / M.C. Weissenbacher, E. Cura, E.L. Segura et al. // Medicina (B Aires). 1996. — V. 56, № 1. — P. 17−22.
  231. Weissenbacher, M.C. Hantavirus infection in laboratory and wild rodents in Argentina Journal. / M.C. Weissenbacher, M.S. Merani, V.L. Hodara et al. // Medicina (B Aires). 1990. — V. 50, № 1. — P. 43−6.
  232. Weydt, P. Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS Journal. / P. Weydt, S.Y. Hong, M. Kliot and T. Moller // Neuroreport. 2003. — V. 14, № 7. — P. 1051−4.
  233. Williamson, T.L. Slowing of axonal transport is a very early event in the toxicity of ALS-linked SOD1 mutants to motor neurons Journal. / T.L. Williamson and D.W. Cleveland //Nat Neurosci. 1999. — V. 2, № 1. — P. 50−6.
  234. Willis, D. Differential transport and local translation of cytoskeletal, injury-response, and neurodegeneration protein mRNAs in axons Journal. / D. Willis, K.W. Li, J.Q. Zheng et al. // J Neurosci. 2005. — V. 25, № 4. — P. 778−91.
  235. Wu, M.H. High efficiency electroporation of human umbilical cord blood CD34+ hematopoietic precursor cells Journal. / M.H. Wu, S.L. Smith and M.E. Dolan // Stem Cells. 2001. — V. 19, № 6. — P. 492−9.
  236. Xia, H. RNAi suppresses polyglutamine-induced neurodegeneration in a model of spinocerebellar ataxia Journal. / H. Xia, Q. Mao, S.L. Eliason et al. // Nat Med. 2004. — V. 10, № 8. — P. 816−20.
  237. Xia, X. Allele-specific RNAi selectively silences mutant SOD1 and achieves significant therapeutic benefit in vivo Journal. / X. Xia, H. Zhou, V. Huang and Z. Xu //Neurobiol Dis. 2006. — V. 23, № 3. — P. 578−86.
  238. Xu, P. The Drosophila microRNA Mir-14 suppresses cell death and is required for normal fat metabolism Journal. / P. Xu, S.Y. Vernooy, M. Guo and B.A. Hay // Curr Biol. 2003. — V. 13, № 9. — P. 790−5.
  239. Xuan, X. Biological and immunogenic properties of rabies virus glycoprotein expressed by canine herpesvirus vector Journal. / X. Xuan, K. Tuchiya, I. Sato et al. // Vaccine. 1998. — V. 16, № 9−10. — P. 969−76.
  240. Yanagihara, R. Experimental infection with Puumala virus, the etiologic agent of nephropathia epidemica, in bank voles (Clethrionomys glareolus) Journal. / R. Yanagihara, H.L. Amyx and D.C. Gajdusek // J Virol. 1985. — V. 55, № 1. — P. 34−8.
  241. Yokota, T. Increase of disease duration of amyotrophic lateral sclerosis in a mouse model by transgenic small interfering RNA Journal. / T. Yokota, H. Sasaguri, Y. Saito et al. // Arch Neurol. 2007. — V. 64, № 1. — P. 145−6.
  242. Yu, J.Y. RNA interference by expression of short-interfering RNAs and hairpin RNAs in mammalian cells Journal. / J.Y. Yu, S.L. DeRuiter and D.L. Turner // Proc Natl Acad Sci USA.- 2002. V. 99, № 9. — P. 6047−52.
  243. Zaki, S.R. Hantavirus pulmonary syndrome. Pathogenesis of an emerging infectious disease Journal. / S.R. Zaki, P.W. Greer, L.M. Coffield et al. // Am J Pathol. 1995. — V. 146, № 3. — P. 552−79.
  244. Zang, W.Q. Distinct export pathway utilized by the hepatitis В virus posttranscriptional regulatory element Journal. / W.Q. Zang and T.S. Yen // Virology. 1999. — V. 259, № 2. — P. 299−304.
  245. Zhang, S.C. In vitro differentiation of transplantable neural precursors from human embryonic stem cells Journal. / S.C. Zhang, M. Wernig, I.D. Duncan et al. // Nat Biotechnol. 2001. — V. 19,№ 12.-P. 1129−33.
  246. Zuccato, C. Loss of huntingtin-mediated BDNF gene transcription in Huntington’s disease Journal. / C. Zuccato, A. Ciammola, D. Rigamonti et al. // Science. 2001. — V. 293, № 5529. — P. 493−8.
  247. , P.P. Синтез белка в аксоне Journal. / Исламов P.P., Мурашов А. К. and Ч. Ю.А. // Морфология. 2005. — V. 128. — Р. 70−77.
  248. Khaiboullina, S.F. Regulation of cellular gene expression in endothelial cells by sin nombre and prospect hill viruses / S.F. Khaiboullina, A.A. Rizvanov, E. Otteson, A. Miyazato, J. Maciejewski, S. St Jeor // Viral Immunology. — 2004. V.17. -P.234−251.
  249. Rizvanov, A.A. Development of reassortant viruses between pathogenic hantavirus strains / A.A. Rizvanov, S.F. Khaiboullina, S. St Jeor // Virology. -2004. V.327. — P.225−232.
  250. Khaiboullina, S.F. Andes virus stimulates interferon-inducible MxA protein expression in endothelial cells / S.F. Khaiboullina, A.A. Rizvanov, V.M. Deyde, S.C.St Jeor // Journal of Medical Virology. 2005. — V.75. — P.267−275.
  251. Deyde V.M., Interactions and trafficking of Andes and Sin Nombre Hantavirus glycoproteins Gl and G2 / V.M. Deyde, A.A. Rizvanov, J. Chase, E.W. Otteson, S.C.St Jeor // Virology. 2005. — V.331. — P.307−315.
  252. , P.P. РНК-интерференция в регуляции аксонного транспорта / P.P. Исламов, A.A. Ризванов, Ю. А. Челышев, А. К. Мурашов // Успехи физиологических наук. 2007. — Т.38, № 3. — С.47−56.
  253. , P.P. Генная и клеточная терапия нейродегенеративных заболеваний / P.P. Исламов, A.A. Ризванов, Д. С. Гусева, А. П. Киясов // Клеточная Трансплантология и Тканевая Инженерия. 2007. — Т.2, № 3. -С.21−37.
  254. , P.P. Боковой амиотрофический склероз: стратегия генно-клеточной терапии / P.P. Исламов, A.A. Ризванов, А. П. Киясов // Неврологический вестник. 2008. — Т.40, № 4. — С.91−101.
  255. Rizvanov, A.A. Retrogradely transported siRNA silences human mutant SOD (l) in spinal cord motor neurons / A.A. Rizvanov, M.A. Mukhamedyarov, A. Palotas, R.R. Islamov // Experimental Brain Research. 2009. — V. 195. — P. 14.
  256. Yalvac, M.E. Potential role of dental stem cells in the cellular therapy of cerebral ischemia / M.E. Yalvac, A.A. Rizvanov, E. Kilic, F. Sahin, M.A. Mukhamedyarov, R.R. Islamov, A. Palotas // Current Pharmaceutical Design. — 2009. V.15. -P.3908−3916.
  257. , А. Адипоциты костного мозга являются ингибиторами гемопоэтического микроокружения / А. Ризванов // Клеточная Трансплантология и Тканевая Инженерия. 2009. — Т.4, № 3. — С.31−32.
  258. Rizvanov, A. Cloning Of Sin Nombre Hantavirus Glycoproteins / A. Rizvanov, S. Morzunov, S. St. Jeor //The University of Nevada, Reno, Life Sciences Research Retreat. Granlibakken, Lake Tahoe, California. 1999. — P.7.
  259. St Jeor, S.C. Cytomegalovirus as a vector for expression and immunization against hantavirus glycoproteins / S.C. St Jeor, A. Rizvanov and A. vanGeelen // 27th Internationsl Herpesvirus Workshop. Cairns Convention Centre, Australia, 2002. — P.65.
  260. Deyde, V.M. Expression and localization of Andes and Sin Nombre viruses' glycoproteins Gl and G2 / V.M. Deyde, E. Otteson, A. Rizvanov, and S. St. Jeor //American Society for Virology, 22nd Annual Meeting. UC Davis, Davis, California, 2003. — P.79.
  261. Rizvanov, A.A. Cell type dependent differences in hantavirus replication /A.A. Rizvanov, S.F. Khaiboullina, and S. St. Jeor // American Society for Virology, 22nd Annual Meeting. UC Davis, Davis, California, 2003. — P.87.
  262. Khaiboullina, S.F. Andes virus stimulated MxA protein expression in endothelial cells / S.F. Khaiboullina, V.M. Deyde, A.A. Rizvanov, and S St Jeor // In Abstracts of the ASM Meeting. Viral Immune Evasion. Acapulco, Mexico, 2005.-P.52.
  263. Bego, M. Study of human cytomegalovirus latency in hematopoietic cells / M. Bego, J. Maciejewski, S. Khaiboullina, A. Rizvanov, and S. St Jeor // 30th International Herpesvirus Workshop -Turku, Finland, 2005. P.46.
  264. R.I. Zhdanov, S.L. Kiselev, A. Palotas, A.P. Kiyasov, R.R. Islamov // 14th International Biomedical Science and Technology Symposium. — Mugla, Turkey, 2008. P.122−124.
  265. , Т.С. Йылмаз, M.C. Калигин, A.K. Шафигуллина, Н. И. Ланник, Д. И. Андреева // Инновационные технологии в трансплантации органов, тканей и клеток. Самара, 2008. — С. 232−234.
  266. Rizvanov A.A. Current trends in Gene and Stem Cell Therapy applications / A.A. Rizvanov, A.P. Kiyasov // The 13th annual Symposium for Biology Students of Europe «SymBioSE 2009» «Biology: Expansion of Borders». Kazan, 2009. — P.41.
  267. Ю.А. Клеточные технологии стимулирования посттравматической регенерации спинного мозга / Ю. А. Челышев, Г. Ф. Шаймарданова, Р. Ф. Масгутов, Г. А. Масгутова, A.A. Ризванов, Я.О.
  268. Рубашкина // РАМН Международная ассоциация морфологов. VI съезд анатомов гистологов и эмбриологов России Морфология. — Саратов, 23−25 сентября 2009 г. — Т. 136, № 4. — С. 150−151.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!