Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Выделение и свойства альфа-фетопротеина человека

Диссертация: Выделение и свойства альфа-фетопротеина человека
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

В результате проведенных исследований была разработана оригинальная схема высокоэффективной очистки данного белка. Определены границы стабильности АФП по отношению к внешним воздействиям. Обнаружено не описанное ранее свойство АФП специфически связывать сахарозу. Установлено, что удаление природных лигандов приводит к необратимой потере белком уникальной третичной структуры и переходом… Читать ещё >

Выделение и свойства альфа-фетопротеина человека (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • Раздел 1. ОБЗОР Литературы
    • 1. 1. Открытие АФП и его свойства
  • Иммунорегуляторные свойства АФП
    • 1. 2. Взаимодействие АФП с различными типами клеток
    • 1. 3. Стурктура и физико-химические свойства
    • 1. 4. Схемы выделения альфа-фетопротеина
  • Раздел 2. Материалы и методы
    • 2. 1. Материалы
    • 2. 2. Методы исследования
      • 2. 2. 1. Синтез аффиных сорбентов
      • 2. 2. 2. Очистка альфа-фетопротеина
      • 2. 2. 3. Электрофорез белков
      • 2. 2. 4. Определение концентрации белков
      • 2. 2. 5. Обработка модифицированного сахарозой АФП инвертазой
      • 2. 2. 6. Удаление гидрофобных лигандов
      • 2. 2. 7. Калориметрические измерения
      • 2. 2. 8. Исследования флуоресценции
      • 2. 2. 9. Спектры кругового дихроизма
    • 3. Основные физико-химические методы
      • 3. 1. Круговой дихро изм
      • 3. 2. Сканирующая калориметрия
      • 3. 3. Флуоресцентная спектроскопия
      • 3. 4. Определение степени кооперативности переходов
  • Результаты и обсуждение
  • Глава 1. Схема очистки высоко гомогенного АФП
  • Глава 2. Исследование стабильности молекулы альфа-фетопротеина по отношению к внешним воздействиям
  • Глава 3. Сравнение физико-химических характеристик АФП, выделенного различными способами
  • Глава 4. а -фетопротеин связывает сахарозу специфически
  • Глава 5. Сравнение свойств гомологичных белков сывороточного альбумина и АФП

Данная работа посвящена разработке метода выделения и изучению некоторых физико-химических свойств апьфа-фетопротеина человека. Исследование свойств данного белка представляет собой актуальную задачу, лежащую на стыке различных областей биологической науки, поскольку понимание механизма функционирования исследуемого белка может стать ключом к решению ряда проблем современной иммунологии, эмбриологии и онкологии. АФПвыполняет в организме ряд важных функций, основными из которых, являются транспортная и иммуннорегуляторная. АФП единственный известный на сегодняшний день специфический переносчик ненасыщенных жирных кислот, в частности арахидоновой, которая является основным соединением при синтезе простагладнинов и лейкотриенов. В норме максимальная концентрация АФП (5−7мг/мл) обнаруживается в сыворотке плода. В сыворотке взрослого организма обычная концентрация АФП менее 5 нг/мл. Однако его уровень возрастает до 1−3 мг/мл при развитии различных патологий в частности гепатом, тератокарцином.

Как видно из выше изложенного, роль АФП в организме существенна. В связи с этим данный белок интенсивно изучается с момента его обнаружения по настоящее время. Однако по ряду объективных причин (сложность очистки, выраженная микрогетерогенность) структурные, физико-химические свойства и молекулярный механизм его функционирования в организме до конце не изучены.

Целью данной работы являлось разработка высоэффективной схемы очистки АФП и изучение ряда его физико-химических свойств. Для решения данной задачи применялся ряд современных физико-химических методов, позволяющих получать сведения о структуре белковой молекулы, таких как круговой дихроизм, флуоресцентная спектроскопия, сканирующая микрокалориметрия и другие.

В результате проведенных исследований была разработана оригинальная схема высокоэффективной очистки данного белка. Определены границы стабильности АФП по отношению к внешним воздействиям. Обнаружено не описанное ранее свойство АФП специфически связывать сахарозу. Установлено, что удаление природных лигандов приводит к необратимой потере белком уникальной третичной структуры и переходом в состояние расплавленной глобулы.

Следует отметить что, кроме возможного прикладного значения, исследование физико-химических свойств сложного по своей структуре белка а-гликоггротеина, несущего на себе разнообразные лиганды — является с нашей точки зрения, само по себе интересной задачей в области физико-химии белка и дополняет наши знания о структуре и возможных свойствах белковых молекул.

Диссертационная работа состоит из введения, обзора.

ВЫВОДЫ.

1. Разработана крупномасштабная схема высокоэффективной очистки а-фетопротеина человека из пуповинной сыворотки. По сравнению с традиционными подходами, данная схема позволяет на порядок повысить выход целевого продукта и дает моноизоформный препарат АФП.

2. Установлено, что молекула АФП сохраняет жесткую третичную структуру в широком диапазоне экспериментальных условий: по температуре — от 0 до 70 °C (при нейтральных значениях рН) — по изменению рН среды — от рН 4.0 до 10.4- по концентрации мочевины — до 7 Мпо концентрации гуанидин-гидрохлорида — до 2.5 М. Показано также, что как денатурация, так и разворачивание данного белка являются необратимыми процессами.

3. Проведено сравнительное исследование структурных свойств АФП, выделенного различными методами из разных источников. Показано, что препарат, полученный по разработанной в диссертационной работе схеме выделения, по своим структурным свойствам практически полностью идентичен белкам, выделенным по традиционным схемам.

4. Проведено сравнительное исследование структурных свойств и конформационной стабильности гомологичных белков АФП и СА. Показано, что данные белки существенно отличаются друг от друга по физико-химическим свойствам. Установлено, — что в отличие от АФП, процесс разворачивания СА мочевиной и его тепловая денатурация являются полностью обратимыми. Выдвинуто предположение, что такое отличие может определяться разным характером взаимодействия данных белков с природными лигандами. 5. Показано, что АФП способен специфически связывать сахарозу. При этом белковая молекула претерпевает существенные структурные изменения и превращается из однодоменного образования в двухдоменное.

Приношу свою глубокую благодарность моему научному руководителю и соавтору Владимиру Николаевичу Уверскому, без энергии и настойчивости которого данная работа не смогла бы состояться.

Моим коллегам и соавторам Наташе Нарижневой, Татьяне Мельник, Марине Киркидазе, Татьяне Ивановой за соместные усилия по проведения данной работы.

Александру Ариповскому за проведения анализа лигандов.

Гари Израевичу Абелеву за предоставление препарата АФП и обсуждение полученных результатов.

Всем сотрудникам отдела молекулярной биологии за ИБФМ РАН я моральную поддержку.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Приведенные выше данные можно суммировать следующим образом. Молекула а-фетопротеина, содержащая природные лиганды, обладает уникальной третичной структурой. При нейтральных значениях рН раствора она достаточно устойчива по отношению к воздействию сильных денатурантов — как показывают данные триптофановой флуоресценции, вплоть до 7 М мочевины и 2 М ОиНС1 ее структура не претерпевает никаких заметных изменений. Однако, важно отметить тот факт, что индуцированное сильными денатурантами разворачивание белка является необратимым процессом и при переходе в нативные условия полная ренатурация развернутой молекулы а-фетопротеина не происходит. При нагревании до 70 С наблюдается кооперативное разрушение уникальной третичной структуры молекулы а-фетопротеина, что отражается в избыточном поглощении тепла при этой температуре, фиксируемом методом микрокалориметрии. Процесс теплового разрушения жесткой третичной структуры а-фетопротеина также носит необратимый характер. Вторичная структура этого белка при нагревании также частично разрушается, однако полностью восстанавливается при охлаждении. Повышение рН раствора приводит ¡-с некоторой дестабилизации молекулы а-фетопротеина, что отражается в понижении ее устойчивости по отношению к сильным денатурантам. Однако никаких кардинальных изменений структуры белка при этом, по-видимому, не происходит. Напротив, понижение рН раствора приводит к денатурации молекулы ос-фетопротеина. При рН раствора 3.1 молекула этого белка находится в состоянии расплавленной глобулы. (Отсутствие у молекулы ос-фетопротеина уникальной третичной структуры в этих условиях было показано при помощи метода микрокалориметрии, нативоподобное содержание вторичной структуры — при помощи метода КД в пептидной области. Компактность этого денатурированного состояния демонстрируется данными вискозиметрии и триптофановой флуоресценции. Кроме того, при рН 3.1 молекула а-фетопротеина обладает заметно большим сродством к гидрофобному зонду АНС по сравнению с нативной молекулой.) а-фетопротеин человека обладает высоким сродством к сахарозе). Связывание с сахарозой приводит к заметным изменениям структурных характеристик молекулы а-фетопротеина. Действительно, если как тепловая денатурация, так и разворачивание мочевиной свежевыделенного белка происходят в одну стадию, то для белка, подвергшегося предварительно лиофильному высушиванию из 0.2% сахарозы, эти процессы носят двухстадийный характер. Обработка такого препарата а-фетопротеина инвертазой — ферментом, расщепляющим сахарозу на моносахариды, приводит к существенному изменению, но не восстановлению структурных характеристик белка. Воздействие сахарозы на молекулу а-фетопротеина не удаляется в течении 8-дневного диализа против буфера без сахарозы.

Поведение а-фетопротеина в ответ на его разворачивание мочевиной и нагревание отличается от поведения его гомолога — сывороточного альбумина.

Денатурация а-фетопротеина, как уже было сказано выше, — в наших условиях in vitro носит необратимый характер, в то время как для сывороточного альбумина этот процесс полностью обратим. Можно предположить, что необратимость денатурации а-фетопротеина связана с необратимостью выхода из него лигандов.

Показать весь текст

Список литературы

  1. «Белки и Пептиды» под редакцией Иванова В. Т. и Липкина В. М. (Москва, «Наука», 1995).
  2. , В.Е. и Птицын, О.Б. Состояние Расплавленной Глобулы Белковых Молекул Становится Скорее Правилом, Чем Исключением. Биофизика (1993) 38 N1, 58−65.
  3. , М.В. «Биофизика» (Москва, «Наука», 1988).
  4. , А.Е., Бычкова, В.В., Фантуцци, А., Росси, Дж.-Л., Птицын, О. Б. Освобождение гидрофобного лиганда из ретинол-связывающего белка в условиях, моделирующих поле мембраны. Молекулярная Биология (1997)
  5. , Ч. и Шиммел, П. «Биофизическая Химия» т.2. (Москва, «Мир», 1984).
  6. , Л.Д., Лифшиц, Е.М. «Теоретическая физика. Электродинамика постоянных сред», т.8, (Наука, Москва, 1982), с. 60.
  7. , Ю.А. «Биоорганическая Химия» (Москва, «Просвещение», 1987).
  8. , Е.А., Калиниченко, Л.П., Морозова, Л.А., Ярмоленко, В.В. и Бурштейн, ЭА. Исследование связывания ионов Mg а-лактоалъбумином мепюдол / флуоресцентной спектроскопии. Биофизика (1982) 27 N4, 578−582.
  9. Ю.Птицын, О. Б. Стадийный Механизм Сворачивния белковых Молекул ДАН СССР (1973) 210 N5, 1213−1215.
  10. , Г. В. Исследование равновесных и кинетических промежуточных состояний на пути самооргаииза1{ии глобулярных белков. Реферат диссертационной работы д. ф.-м. н., Пущино, 1994.
  11. , Е.И., Привалов, ПЛ., Борисенко, С.Н., Троицкий, Г. В. Микрокалориметрическое Исследование Доменной Организации Сывороточного Альбумина. Молекулярная Биология (1985) 19, 1072−1078.
  12. , В.Н. Разворачивание «Расплавленной Глобулы» как фазовый переход первого рода. Диссерт. работа к. ф.-м. н. б, Пущино, 1991.
  13. , В.Н. Разнообразие денатурированных форм глобулярных белков: I. Индуцированное анионами сворачиваниестафилококковой нуклеазы. Молекулярная Биология (1998), в печати.
  14. , В.Н. Разнообразие денатурированных форм глобулярных белков: 11. Структурные характеристики А-форм. Молекулярная Биология (! 998), в печати.
  15. , В.Н. и Птицын, О.Б. Трехстадийное Равновесное Развораччивание Небольших Глобулярных Белков Сильными Денатурантами. I. Карбон гидраза В. Молек, Биол. (1996а) 30 N5, 1124−1134.
  16. , В.Н. и Птицын, О.Б. Трехстадийное Равновесное Развораччивание Небольших Глобулярных Белков Сильными Денатурантами. 2./3-Лактамаза и Общая Модель. Молек, Биол. (1996-) 30 N5, 1135−1143 .
  17. Abelev, G.I. Adv. Cancer Res. (1971) 14, 295−358.
  18. Abramsky, O., Brenner, Т., Mizrachi, R. & Soffer, D. J. Neuroimmunol. (1982) 2, 1−7.
  19. , M.N. & Gratzen, W.B. Interection of Skeletal Myosyn Light Chains with Calcium Ions. Biochemistry (1978) 17, 2319−2325.
  20. Anfinsen, C.B. Haber, E., Sela, M. & White, F.N. Kinetics of Formation of Native Ribonuclease During Oxidation of the Reduced
  21. Polypeptide-Chain. Proc. Natl. Acad. Sei. USA (1961) 47 N6, 13 091 314.
  22. , C. & Masseuff, R. Biochera. Biophys. Res. Commun. (1984) 119,1122−1127.
  23. , B.H. & Carber, J.P. Can. J. Biochem. (1975) 53, 371−379.
  24. Bloom Biochemistry 17 (1978) 4430−4438.
  25. Braig, K., Otwinowski, Z., Hegde, R., Boisvert, D.C., Joachimiak, A., Horwich, A.L. & Sigler, P.B. The crystal structure of the bacterial chaperonin GroEL at 2.8A. Nature (1994) 371,578−586.
  26. Breslow, E., Beychok, S., Hardman, K.D. &Gurd, F.R.N. Relative Conformaton of Sperm Whale Metmyoglobin and Apomyoglobin in Solution. J.B.C. (1965) 240, 304−309.
  27. Brooks, C.L. Ill Characterization of «Native» Apomyoglobin by Molecular Dynamics Simulation. J.M.B. (1992) 227, 375−380.
  28. Buchner, J., Renner, M., Lilie, H., Hinz, H.-J. & Jaenicke, R. Alternative Folded States of an Immunoglobulin. Biochemistry (1991) 30, 6922−6929.
  29. Buck, M., Radford, S.E., Dobson, C.M. Biochemistry (1993) 32, 669 678.
  30. Bychkova, V.E., Berni, R., Rossi, G-L., Kutushenko, V.P. & Ptitsyn, O.B. Retinol-Binding Protein Is in the Molten Globule State at Low pH. Biochemistry (1992) 31, 7566−7571.
  31. Bychkova, V.E.&Ptitsyn, O.B. The Molten Globide in Vitro and in Vivo. Chemtracts Biochem. and Molec. Biol. (1993) 4, 133−163.
  32. Bychkova, V.E., Dujsekina, A.E., Klenin, S.I., Tiktopulo, E.I., Uversky, V.N. & Ptitsyn, O.B. Molten Globule-Like State of Cytochrome C under Conditions Simulating Those Near the Membrane Surface. Biochemistry (1996) 35 N19, 6058−6063.
  33. Caldwell, J.L., Severson, C.D., Thompson, J.S. Human Alphafetoprotein: embryonic alpha-globulin with in vitra immunosupressive activity. Fed. Proc. Fed. Am. Soc. Exp. Biol. (1973) 32, 979.
  34. , J.F. & Crowe, J.H. Cryobiology (1988) 25, 244−255.
  35. , J.F. & Crowe, J.H. Biochemistry (1989) 28, 3916−3922.
  36. Ceve, A.& Morin, Ph. Biochemie (1979) 61, 607−613.
  37. Chen, Sh., Roseman, A.M., Hunter, A.S., Wood, S.P., Burston, S.G., Raiison, N.A., Clarke, A.G. & Saibil, H.R. Location of a folding protein and shape chages in GroEL-GroES complexes imaged by cryo-electrom microscopy. Nature (1994) 371, 261−264.
  38. Closset, J & Gerday, Cli. BBA (1975) 405, 228−235.
  39. , M.J. & Lecomte, J.T.J. Characterization of Hydriphobic Cores in Apomyoglobin: a proton NMR spectroscopy study. Biochemistry (1990)29,11 067−11 072.
  40. Cohen, J.S. Spectroscopic Studies on the Conformation of Cytochrome C andApocytochrome C. J. Biol. Chem. (1974) 249 N4, 1113−1118.
  41. Delmas, P.D., Stenner, D.D., Romberg, R.W., Riggs, B.L. & Mann, K.G. Immunichemical Studies of Conformational Alteration in Bone g-Car boxy glutamic Acid Containing Protein. Biochemistry 23 (1984) 4720−4725.
  42. Desormeaux et al. Biochem. Biophys. Acta (1992) 1121, 137−152.
  43. Deutsch, H.F. Chemistry and Biology of a-fetoprotein Advances in Cancer46. research (1991) 56, 253−312.
  44. Dobson, C.M., Curr. Opin. Struct. Biol. (1994) 4, 636−640.
  45. Dolgikli, D.A., Gilmanshin, R.I., Brazhnikov, E.I., Bychkova, V.E., Semisotnov, G.V., Venyaminov, S. Yu & Ptitsyn, O.B. cc-Lactoalbumin:
  46. Compact State with Fluctuating Tertiary Structure?. FEBS Lett. (1981) 136 N2,311−315.
  47. Dolgikh, D.A., Kolomiets, A.P., Bolotina, LA., & Ptitsyn, O.B. Molten Globule State Accumulates in Carbonic Anhydrase Folding FEBS Lett. (1984) 165, 88−92.
  48. Dorrington, K. Can J. of Biochem (1978) 56, 492−499.51 .Dufonr, E., Haertle, T. Protein Engng (1990) 4, 185−190.
  49. Dufour, E., Bertrand-Harb, C., ITaertle, T. Biopolymers (1993) 33, 589 598.
  50. , D. &. Wright, P.E. Is Apomyoglobin a Molten Globule? Structural Characterization by NMR. J MB (1996) 263, 531−538.
  51. Endo, T., Schatz, G. EMBO J. (1988) 7, 1153−1158.
  52. Eisenberg, M.A., Gresalfi, T., Riccio, T., McLaughlin, S Biochemistry (1979) 18, 5213−5223.
  53. Filimonov, V.V., Pfeie, W., Tsalkova, T.N.& Privalov, P.L. Termodynamic Investigation of Proteins. IV. Calcium Binding Protein Paralbumin. Biophys. Chem. (1978) 8, 117−122.
  54. Fulmer, C.S., Wasserman, R.H., Huang, J.W. & Colin D.V. B.B.A. (1975)412, 256−261.
  55. Furie, B & Furie, B.C. Conformation-Specific Antibodies as Probes of the g-Carboxyglutamic Acid-Rich Region of Bovine Prothrombin. J. Biol. Chem. (1979) 254, 9766−9771.
  56. Georgopoulos, C.P., Hendrix, R.W., Casjens, S.R. & Kaiser, A.D. Host participation in bacieriopfage lambda head assembly. J. Mol. Biol.(1973) 76, 45−60.
  57. R.I. & Ptitsyn, O.B. An Early Intermediate of Refolding a-Lactoalbumin forms within 20 ms. FEBS Lett. (1987) 223 N2, 327−329.
  58. Goloubinoff, P., Gatenby, A.A. & Lorimer, G.H. GroE heat-shok proteins promote assembly of foreign prokaryotic ribulosebisphoshpate carboxylase oligomers in Escherichia coli. Nature (1989) 337, 44−47.
  59. , Y. & Fink, A.L. Acid-Induced Folding of heme proteins. Methods Enzymol. (1994) 232, 3−15.
  60. Griko, Y.V., Privalov. P.L., Venyaminov, S.Y. & Kutyshenko, V.P. Termodynamic stydy of apomyoglobin structure. J.M.B. (1988) 202,127.138.
  61. Y.V. & Privalov, P.L. Termodynamic puzzle of apomyoglobin unfolding. J.M.B. (1994) 235, 1318−1325.
  62. Hamada, D., Segawa, S., Goto, Y. Nature Struct. Biol. (1995) 3, 868 873.
  63. , J.E. & Gafni, A. Fluorescence detection of conformational changes in GroEL induced by thermal switching and nucleotide binding. J. Biol. Chem.(1994) 269, 6286−6289.
  64. Hauschka Biochemistry 21 (1982) 2538−2547.
  65. He, X.M. & Carter, D.C. Atomic structure and chemistry of human serum albumin Nature (1992) 358 N6383, 209−214.69 .Hill, T. «Thermodynamics of Small Sistems» (New York, Wiley, 1968).
  66. Kamatari, Y.O., Konno, T., Kataoka M., Akasaka, K. J. Mol. Biol. (1996)259,512−523.
  67. Klee Biochemistry (1977) 16, 1017−1024.
  68. Kuo, I.C.Y. & Coffee, C.L. 3. Biol. Chem. (1976) 251, 6315−6319.
  69. Kuwajima, K, Nitta, K., Yoneyama, M. & Sugai, S. Three-state denaturation of a-Lactaalbumin by Huanidine Hydrochloride. J. Mol. Biol. (1976) 106 N2,359−373.
  70. Kuwajima, K., Harushima Y., Sugai Sh. Influence of Ca2+ Binding on the Stability of Bovine a-Lactalbumin Studied by Circular Dichroism and Nuclear Magnetic Resonance Spectra. Int. J. Peptide Protein Res. (1986)27,18−27.
  71. Kuwajima, K., Yamaya, H., Miva, S., Sugai Sh. & Nagamura, T. Rapid Formation of Secondary Structure Framework in Protein Folding studed by Stopped -Flow Circular Dichroism. FEBS Lett. (1987) 221 N1,115−118.
  72. LaLonde, M.J., Levenson, M.A., Roe, J.J. & Bernlohr D.A. Adipocyte Lipid-Binding Protein Complexed with Arachidonic Acid J. Biol. Chem. (1994) 269 N 41, 25 339−25 347.
  73. Levinthal, C. Are the Pathway for Protein Folding? J. Chem. Phys. (1968)65,44−45.
  74. Liu Biochemistry 32 (1993) 11 390−11 396.
  75. Liu, Y.P. & ReungW.K. J. Biol.Chem. (1976) 251, 4193−4198.
  76. J., Horwich A.L. & Hard F.U. Prevention of protein denaturation under heat stress by the chaperonin Hsp60. Science (1992)258,995−998.
  77. Morinaga, T., Sakai, M., Wegmann, T.G. & Tamaoki, T. Primary structure of Human a-fetoprotein and mRNA. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1983) 80,4604−4608.
  78. , R.A. & Tomasi, JT.T.B. Suppressionof imune responce by a-fetoprotein. II. The effect of mouse a-fetoproteinon mixed lymphocyte reactivity and mitogen-indused. lymphocyte transformation. J. Exp. Med. (1975) 141 N2, 440−452.
  79. , A.S. & Kay, C.M. Biochem (1972) 11, 2622−2627.
  80. Naval, J., Calvo, M., Laborda, J. Dubouch, P. Frain, M., Sala-Trepat, J.M. & Uriel, J. Expression of mllNAs for a-Fetoprotein (AFP) and Albumin and Incorporation of AFP and Docosahexaenoic Acid in Boboon Fetuses. J. Biochem. (1992) 111, 649−654.
  81. Nelsesyuen JBC 18 (1976) 5648−5656.
  82. Nishii, I., Kataoka, M., Tokunaga, F. & Goto, Y. Cold Denaturation of the Molten Globule State of Apomyoglobin and a profile for protein folding. Biochemistry (1994) 33, 4903−4909.
  83. Nunez, E.A. Biological Role of Alpha-fetoprotein in Endocrinological Field: Data and Hypotheses. Tumor Biology (1994) 15 N2, 63−72.92.0stvald, T.V. & MacLennon, D.H. JBC (1974) 249, 5867−5871.
  84. Parmelee, D.C., Evenson, M.A. &Deutsch, H.F. The Presence of Fatty Acids in Human a-fetoprotein. J. Biol. Chem. (1978) 253, 2114−2119.
  85. Perrier Biochemistry 33 (1994) 9960−9967.
  86. Perutz, M.F. Nature (1970) 228, 726.
  87. Poulos, T.L., Finzel, B.C. & Howard, A.J. Crystal Structure of Substrate-Free Pseudomonas Putida Cytochrome P-540. Biochemistry (1986)25,5314−5322.
  88. Prats, M., Teissie, J., Tocanne, J.-F. Nature (1986) 322, 756−758.
  89. Privalov, P.L. FEBS Lett (1974) 40S, S140-S150
  90. Privalov, P.L. Stability of Proteins. Small Globular Proteins. Adv. Protein Chem. (1979) 33, 167−241.
  91. Ptitsyn, O.B. Molten Globule and Protein Folding. Advances in Protein Chemistry (1995) 47, 83−229.
  92. , O.B. & Uversky, V.N. The Molten Globule is a Third Thermodynamical Stale of Protein Molecules. FEBS Lett. (1994) 341, 15−18.
  93. Ptitsyn, O.B., Bychkova, V.E. & Uversky, V.N. Kinetic and Equilibrium Folding Intermediates. Phil. Trans. R. Soc. Lond. B 348 (1995), 35−41.
  94. Purves, L.R., Bersohn, I., Geddes, E.W., Cancer (1978) 25, 12 611 270.
  95. , E. & Seppada, M. Adv. Cancer Res. (1979) 29, 275−346.
  96. T. & Sugai S. J Biochem. 93 (1983) 1321−1328. Interactionof Divalent Metal Ions with Bovine, Human and Goat a-lactalbumins.
  97. Semenkova, L.N., Dudich, E.I., Dudich, I.V., Shingarova, L.N. & Korobko, V.G. Alpha-Fetoprotein as a TNF Resistance Factor for the Human Hepatocarcinoma Cell Line HepG2. Tumor Biol. (1996) 398 10−21.
  98. Schmidt, M., Rutkat, K., Rachel, R., Pfeifer, G" Jaenicke, R., Vitanen, P., Lorimer, G. & Buchner J. Symmetric complex of GroE chaperonins as part of the functional cycle. Science (1994) 265, 656 659.
  99. , K. & Yamasaki, I. Nature (1961) 190, 83−84.llO.Shiraki, K., Nishikawa K" Goto, Y. J. Mol. Biol. (1995) 245, 180 194.lll.Soloff, M.S., Swartz, S.K., Pearlmutter, F. &Kithier, K. Biochim. Biophys. Acta (1976) 427, 644−651.
  100. Sternberg, N. Properties of a mutant of Escherichia coli defective in bacteriopfage lambda head formation (groE). J. Mol. Biol. (1973) 76, 25−44.
  101. Stryer. L. The Interaction of Naphthalene Dye with Apomyoglobin and Apohemoglobyn. A Fluorescen t Probe of Non-Polar Binding Sites. J. Mol. Biol. (1965) 13, 482−495.
  102. Surin A. K, Kashparov, I.A., Kihara, PI., Kotova, N.V., Marchenkov, V.D., Marchenkova, S.Yu., Melnik, B.S.,
  103. Tatarinov, Y.S. Vopr. Med. Khim.(1964) 10, 90−91.
  104. , S.N. «Biophysics of Water» (Eds. F. Frank & S. Mathias, N. Y.: Wiley, 1982) 70−72.
  105. Tirado-Rives, J. & Jorgensen, W.L. Molecular Dynamics Simulations of Unfolding of Apomyoglobin in Water. Biochemistry (1993) 32, 41 754 184.
  106. Torres, J.M., Auel, A. & Uriel, J. Alpha-Fetoprotein Mediated Uptake of Fatty Acids by Human T Lymphocytes. J Cell. Physiol. (1992) 150 456−462.
  107. , T.V. & Privalov, P.L. BBA (1980) 624, 196−204.
  108. Uriel, J., Laborda, J. Naval, J. & Geuskens, M. AFP Receptors in Malignany Cells. An overview in «Biological Activities of Alpha-Fetoprotein» (Mizejewski, G.I. & Jacobson, H.I. eds., CRC Press Inc., Boca Raton, Florida, 1989) v.2, 103−117.
  109. Uversky, V.N. Use of East Protein Size-Exclusion Liquid Chromatography To Study the Unfolding of Proteins Wich Denaturate through the Molten Globule. Biochemistry (1993) 32, 13 288−13 298.
  110. , V.N. & Ptutsyn, O.B 'PartlyFolded" State, a New Equilibrium State of Protein Molecules: Four-State Guanidinium Chloride Induced Unfolding of ?-Lactamase at Low Temperature. Biochemistry (1994) 33 N10, 2782−2791.
  111. , V.N. & Ptutsyn, O.B. All-or-Non Solvent-Indused Transition Between Native, Molten Globule and Unfolded States in Globular Proteins. Folding & Design (1996s) I, 117−122.
  112. , V.N. & Ptutsyn, O.B. Futher Evidence on the Equilibrium «Pre-molten Globule Stale»: Four-Stale Guanidinium Chloride -Induced Unfolding of Carbonic Anhydrase B at Low Temperature J. Mol. Biol. (1996-) 255, 215−228.
  113. Vallette, G., Vranckx, R., Martin, M.-E., Benassayag, C. & Nunez,
  114. E.A. Conformational Changes in Rodent and Human a-fetoprotein: influence of fatty acids. Biochim. Biophys. Acta (1989) 997, 302−312.
  115. Van Ceunebroeck, J-C., Hanssens, I., Joniau, M. & Van Cauwelaert,
  116. F. JBC (1985) 20, 10 944−10 947.
  117. Van Dael, P. Haezebrouck, L. Morozova, C. Arico-muendel & C.M. Dobson. Partially Folded States of Equine Lysozyme. Structural Characterization ans Significance for Protein Folding. Biochemistry1993)32, 11 886−11 894.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!