Каллусы можно получать из разных частей растения, в том числе из кончиков корней. Образование каллуса происходит в области первичных и вторичных меристем. Процесс каллусообразования зависит от размера экспланта. Оптимальная величина экспланта 5—10 мм3 и масса 20—100 мг. Многие ткани имеют физиологическую полярность. Поэтому каллус лучше образуется на той стороне экспланта, которая ближе к апикальным меристемам корня. Кончики корней легко образуют каллус, если они помещены на среду горизонтально, тогда как сегменты стебля лучше формируют каллус, если их поместить вертикально. Для культивирования на питательных средах лучше использовать стерильные корешки, полученные при проращивании семян в стерильных условиях.
Цель работы: получить каллус из корешков фасоли.
Оборудование и материалы: 6% раствор хлорамина, пинцеты, скальпели, препаровальные иглы, чашки Петри с питательными средами для индукции каллусогенеза, стерильные чашки Петри, флаконы со спиртом и стерильной дистиллированной водой.
Объект исследования: семена фасоли.
Ход работы: семена фасоли поместить в чашки Петри (по 15 штук в чашку), залить раствором хлорамина до полного погружения семян в жидкость и оставить на 20 мин. Промыть семена стерильной дистиллированной водой 3 раза. Стерильные семена залить стерильной водой и оставить для набухания на 24 ч.
Семена с разрушенной кожурой удалить, а жизнеспособные семена простерилизовать повторно 6% хлорамином 20 мин. Промыть семена стерильной дистиллированной водой 3 раза. Семена перенести в стерильные чашки Петри (по 5 штук в чашку). Стерильным пинцетом придерживать семя, а стерильным скальпелем надрезать оболочку. Стерильным скальпелем и препаровальной иглой изолировать корешки (2—3 мм) и перенести в чашки Петри со стерильной дистиллированной водой (по 15 штук в чашку).
Корешки стерильной препаровальной иглой поместить на поверхность агаризованной среды и слегка вдавить в агар для обеспечения хорошего контакта со средой (среда МС + 20 г/л сахароза + 100 мг/л мезоинозит + 2 мг/л 2,4Д + 0,2 мг/л кинетина). Культивируют в светлой культуральной комнате при 25 °C или в термостате.
Задание: через 3 недели рассматривают и зарисовывают сформировавшийся каллус.
