Приготовление маточной культуры

Приготовленные на операции производственные штаммы отсеивают на питательную среду Громыко, предварительно приготовленное в бактериологических матрасах. Для приготовления «матрацев» взвесь микроорганизмов на 1 серию препарата, которая состоит из 15 000 единиц сеют 6−7 матрасов. Матрасы со штаммами выращивают при +37 (в течение 20 часов в термальной камере. По истечении времени инкубации микробиологические штаммы контролируют на чистоту посевов.

Маточное взвесь каждого штамма для последующего рассева Bacillus subtilis 3 и Bacillus licheniformis 31 на агаризованных пивное сусло готовят порознь. С этой целью с поверхности питательной среды Громыко делают соскоб шпателем микробной пленки, эмульгируют ее в 0,85% растворе NaCl с таким расчетом, чтобы в 1 мл взвесь помещалось 7 млрд. бактерий по оптическому стандарту мутности. При смыве микробной пленки с 1 матраса получается 450 мл «маточной» взвесь, приготовленной в 1 бутылке объемом 450 мл. Штаммы контролируют на чистоту посевов.

Получение бактериальной массы

Для получения одной серии препарата, которая содержит преимущественно 15 000 ампул, использующих биомассу, которую засевают на 250 матрасов с производственной питательной средой (агаризованное пивное сусло). Для того, чтобы засеять вышеуказанное количество матрасов необходимо на стадии приготовить 6−7 бутылок «маточной» взвеси, так как 450 мл микробной взвесь из одной бутылки используется для посева 45−50 матрасов. Перед выполнением всех этих операций на этой стадии матрасы с производственной средой проверяют на Прорист посторонней микрофлоры и при наличии роста посторонней микрофлоры их отбраковывают с последующим обеззараживанием в камере Крупин. Посев «маточной» взвеси на матрасы делается врозь, при этом следует соблюдать соотношение Bacillus subtilis 3 и Bacillus licheniformis 31 соответственно 9:1. В каждый матрас в стерильных условиях вносят 7−10 мл посевного материала, который равномерно распределяется по всей поверхности питательной среды. Матрасы помещают в термическую камеру. Bacillus subtilis 3 инкубируют 10−12 суток при +37. Bacillus licheniformis 31 — 8−10 суток при +37. По окончании срока инкубации матрасы с посевами просматривают в Прорист посторонней микрофлоры: визуально, микроскопией, посевом на чашки Петри с МПА. Из бактериальной массы делают мазки по Граму и микроскопируют их. Слив из матрасов делают только в том случае, если в мазках оказывается не менее 60−80% микроорганизмов в споровой форме.