Болезни, вызываемые ДНК-содержащими вирусами

Герпесвирусы

Вирусы семейства Herpesviridae — самые распространенные вирусные патогены среди людей и животных. Вирионы герпесвирусов состоят из капсида икосаэдрической формы диаметром 120−150 нм, окруженного внутренним тегументом и наружной оболочкой, имеющей многочисленные шипы до 8 нм в длину. Капсид окружает ядро вириона, состоящее из линейной 2-нитчатой ДНК с молекулярной массой 92−102 кД и окруженной белком. Вирионы имеют сложную организацию, включающую нуклеотид, суперкапсидную структуру и оболочку. В составе вириона определено до 32 белков.

Герпесвирусные частицы неоднократно наблюдали в тканях как здоровых, так и больных рептилий. Некоторые среди большого количества изолированных штаммов вируса способны вызывать вполне самостоятельные заболевания:

GPD — серопятнистая болезнь панциря морских черепах (Rebell, et al, 1975; Heines, et al, 1977);

Фибропапилломатоз морских черепах (Jacobson, et al, 1991);

LETD (Lung, eye, trachea disease) зеленых морских черепах (Curry, et al, 2000);

• (THV) Герпесвироз (комплекс «стоматит/ринит/конъюктивит») сухопутных черепах (Harper, et al, 1982; и многие другие);
• (LPD) Лимфопролиферативная болезнь сухопутных черепах (Mc. Arthur, 1998, 2000);

HHWE (Hemolytic-hemorrhagic-wasting episode) пантеровых черепах (Mc Arthur, 2000);

Вирусный папилломатоз лацертид (Raynaud, Adrian, 1976);

Стоматит ящериц (Wellehan, et al, 2003);

Некротический гепатит чаквалл (Wellehan, et al, 2003);

Заболевание ядовитых желез змей (Jacobson, 2000);

Лимфофолликулярный клоацит мисиссипских аллигаторов (Johnson, et al, 2005).

THV (герпесвироз сухопутных черепах) Характеристика возбудителя Болезнь сухопутных черепах, связанная с поражением верхних отделов респираторного и пищеварительного тракта, известна с начала 80-х годов ХХ века (Harper, et al, 1982). Впервые герпесвирус от заболевших в неволе черепах выделили Biermann, Blahak (1993). Затем антитела к вирусу герпеса у диких черепах впервые обнаружили две независимые рабочие группы: Marschang и Schneider (2002) от средиземноморской черепахи T. graeca в Турции и Origgi с соавторами (2002) от гоферовой черепахи G. agassizii в США. С конца 90-х годов вирусные эпизоотии отмечали среди многочисленных коллекций черепах Европы, США, ЮАР, Японии и Австралии. К настоящему времени вирус был выделен почти от 50 видов черепах. Наиболее чувствительны к вирусу герпеса черепахи рода Testudo, однако предполагается, что любые виды черепах, включая пресноводных, потенциально восприимчивы к этому заболеванию.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения Патогномоничным симптомом считается наличие дифтеритических пленок на слизистой языка, ротовой полости, носоглотки, трахеи и пищевода. Кроме этого характерны ринит, конъюктивит, отек вентральной стороны шеи, птиализм (наиболее ранний симптом), пневмония и эмфизема легких, неврологические расстройства, лимфопролиферация, изредка диарея. Дифтеритические бляшки при экспериментальной инфекции сохраняются до 3-х недель, а затем спонтанно исчезают. Инкубационный период варьирует от нескольких дней до года. В типичном случае клинические симптомы возникают в течение 3−4 недель после покупки животного или после зимовки. Переболевшие особи остаются латентными носителями на неопределенно долгий срок (до 25 лет). У видов, не вырабатывающих высоких титров антител, смертность составляет 80−100%. Среди средиземноморских черепах смертность достигает 60%; у взрослых черепах болезнь чаще всего принимает хроническое течение.

Вирус имеет повышенный тропизм к тканям ЦНС, однако макроскопически выявляется катаральный или дифтероидно-некротический стоматит, глоссит и фарингит. В меньшей степени подобные изменения выражены в пищеводе, трахее и легких. Реже встречается гиперплазия селезенки, гепатомегалия, катаральный энтерит. Характерна инфильтрация преимущественно мононуклеарами, гетерофилы появляются при вторичной бактериальной инфекции. Вирусные эозинофильные включения можно наблюдать в ядрах клеток головного мозга (особенно продолговатого) наряду с периваскулярными лейкоцитарными «манжетами». Чаще всего включения обнаруживают в эпителии языка, выстилке ротовой полости и трахеи, в ЖКТ (от пищевода до двенадцатиперстной кишки), легких, печени, реже в почках и мочевом пузыре, селезенке. Лучше всего они видны на стыках между некротизированными и нормальными клетками.

Антигенная вариабельность и родство В настоящее время выделено более 100 изолятов вируса. Между штаммами существуют достоверные различия по антигенным и генетическим свойствам. Marschang, et al (2004) выделяет два независимых серотипа вируса среди штаммов, выделенных у черепах рода Testudo и некоторых африканских видов. Blahak, Tornede (2004) говорят о существовании 3-х серотипов вируса, причем серотип III характерен в основном для среднеазиатских черепах A.horsfieldi. Идентичность по секвенированному гену вирус-специфической рибонуклеотид-редуктазы у штаммов вируса, выделенных от американских гоферовых черепах и балканской черепахи, составила только 72%.

Существуют несомненные различия по вирулентности, патогенности и напряженности вирус-индуцированного иммунитета между различными штаммами вируса. До сих пор остается неизученным антигенное и генетическое родство между вирусами, вызывающими THV и другие заболевания сухопутных и морских черепах герпесвирусной этиологии. Данные о секвенировании генов герпесвирусов, изолированных от рептилий, позволяют отнести их всех к подсемейству Alphaherpesvirinae.

Вирусоносительство и выделение вируса При первичном контакте восприимчивых животных с вирусом развивается остро протекающее заболевание, имеющее тенденцию к подострому или хроническому течению у взрослых черепах. Заболевание протекает в течение 2−20 дней и заканчивается 60−100% гибелью животных в зависимости от их возраста и вида. Переболевшие черепахи вырабатывают антитела; максимальный титр отмечают приблизительно через 6 недель после начала заболевания, однако его величина различается у разных видов черепах. Из черепах рода Testudo наименьший титр характерен для T. hermanni, и менно этот вид тяжелее всего переносит THV.

При первичном заражении вероятно существование латентного периода, так как при экспериментальной инфекции через 40 дней после заражения в тканях обнаруживают только не реплицирующуюся вирусную ДНК. Переболевшие черепахи могут оставаться латентными вирусоносителями в течение всей жизни. При экспериментальной инфекции выделить вирус от переболевших животных пока не удалось. Однако при провоцирующих эпизодах (зимовка, стресс, транспортировка, гормональные факторы, сопутствующие заболевания) вирус может активизироваться и вызывать рецидивы, напоминающие первичное остро протекающее заболевание.

Введение

латентных носителей в группы неиммунных животных в любой момент способно вызвать у них манифестное заболевание.

Эпизоотологические особенности.

THV стал привлекать пристальное внимание после массовой гибели черепах в коллекциях Великобритании, Италии, Франции, Испании, Германии, Австрии и Швейцарии. Возможно, вирус был интродуцирован при импорте средиземноморских черепах T. graeca из Турции. «Лимфопролиферативная болезнь» герпесвирусной этиологии, по-видимому, была ввезена в Европу с пантеровыми черепахами G. pardalis из Западной Африки (Mc Arthur, 2001). Большинство европейских изолятов герпесвируса относятся к серотипу I. К этому же серотипу относят вирус, вызывающий THV у американских гоферовых черепах. По некоторым данным в коллекциях Германии около 15% черепах оказываются позитивными по антителам к вирусу герпеса (ELISA и PH). В природных популяциях Франции, Марокко, Турции и США также зафиксированы иммунокомпетентные к вирусу черепахи; порядка 11−37% из исследованных образцов плазмы крови оказались позитивными по PH и ELISA.

Экспериментальная инфекция Частично постулаты Коха были выполнены Origgi с соавторами в 2004 г. Черепахам орально или внутримышечно вводили по 150 000 TCID50 суспензии культуры вируса. Через 4 недели черепахи были серопозитивны по PH и ELISA. С помощью ПЦР вирусную ДНК обнаружили во многих тканях, но в основном — в головном мозге. У 75% черепах развилось манифестное заболевание. При этом отмечали все характерные симптомы, за исключением ринита.

Диагностика Диагностику проводят, исходя из анамнеза и по клиническим симптомам. Предварительный диагноз ставят при обнаружении характерных эозинофильных включений в ядрах клеток эпителиального типа и нейтронов головного мозга. Диагноз уточняют с помощью НЭМ. Включения лучше видны в гистологических средах, окрашенных гематоксилин-эозином. В цитологических препаратах, окрашенных модификациями Романовского, включения встречаются реже и окрашиваются амфофильно. Используют соскобы со слизистой языка, окрашенные Diff-Quick. Изоляцию вируса проводят на культуре клеток сердца коробчатой черепахи (TH-1), а также инокулируя вирус в полость аллантоиса яиц черепах. ЦПД в культуре можно наблюдать в течение 4−5 дней. Значительно облегчает дифференциацию вируса иммунопероксидазный тест (Origgi, Jacobson, 1999). В Европе более распространена серологическая диагностика на основе реакции нейтрализации сыворотки (РН), разработанной Biermann (1995). Тест должен учитывать антигенный полиморфизм среди штаммов вируса. Например, сыворотка крови среднеазиатских черепах не нейтрализуется антигеном вируса I и II серотипа. Во время активной инфекции РН не эффективна. В некоторых случаях применяют метод парных сывороток. Удвоение титра в течение 60 дней свидетельствует об активной инфекции. Для получения данных с помощью РН требуется до 10−14 дней. Положительным считают титр не менее 8. Непрямая ELISA была разработана Origgi, Jacobson в 1999 г. на основании двух штаммов вируса, изолированных в США от гоферовой и балканской черепах.

Тест гораздо дешевле, специфичнее и чувствительнее РН, однако имеет те же ограничения: малоэффективен при низкотитровых реакциях антител и должен учитывать антигенные различия между штаммами вируса. Для обнаружения вирус-специфической ДНК используют 3 различных протокола ПЦР. Nested-PCR (по методу Van Devanter, 1996) оказалась наиболее универсальной и определяет вирусную ДНК всех 3-х серотипов вируса. Два других более специфичных протокола RT-PCR (по Origgi, 2000 и Teifke, et al, 2000) в основном применимы для определения серотипа I. Для ПЦР лучше брать мазки из ротовой полости сухим стерильным тампоном. Для выявления ДНК в различных тканях обычно применяют гибридизацию in situ, особенно при экспериментальной инфекции (Teifke, et al, 2000).

Дифференциальная диагностика Клинически THV нужно дифференцировать от иридовироза, заболевания, связанного с вирусом «Х», микоплазмоза, а также гиповитаминоза А, локального раздражения слизистых оболочек, химической интоксикации, сезонного ринита неясной этиологии, паразитарных болезней и т. п. При обнаружении вирусных включений их базофильная окраска свидетельствует скорее о наличии иридовируса.

Терапия Требуется строгая изоляция больных животных. Ацикловир назначают системно, внутрь через зонд. Суммарная суточная доза составляет 80 мг/кг; считается, что лучше разделять ее на 2−3 приема. Ноздри промывают противовирусными препаратами (Офтан Иду) или каплями ципромед, после чего проводят тщательный туалет ротовой полости и местно наносят крем с ацикловиром на все видимые очаги поражения. Для профилактики вторичной инфекции назначают курс инъекций энрофлоксацина (10 мг/кг каждые 48 часов) или цефтазидима (20 мг/кг каждые 72 часа). В качестве превентивной терапии отдельные авторы рекомендуют байпамун внутримышечно по 0,1−1мл в зависимости от размеров черепахи 3−4-кратно с интервалами по 48 часов (McArthur, et al, 2001). Обсуждалась и перспектива применения интерферонов и биофлавоноидов, но никаких данных о фармакокинетике этих препаратов у рептилий не опубликовано. Профилактически лучше назначать их в предзимовочный период. Этиотропная терапия ацикловиром более успешна при лечении первичной инфекции, в отличие от рецидивов заболевания.

Большое значение при THV имеет поддерживающая терапия, включающая введение полиионных растворов с глюкозой через зонд или интрацеломически (1−3% от м.т. в сутки), витаминов (катозал, беплекс) и питательных смесей.

Карантин для вновь поступающих животных должен составлять от 6 недель до 6 месяцев. Для черепах из групп, перенесших вспышку заболевания, требуется изоляция не менее 12−18 месяцев. Необходима текущая и заключительная дезинфекция мощными вирулицидными дезинфектантами, такими как виркон или септабик.