Результаты исследований и их обсуждение

Проведенными исследованиями выявлено, что успех введения в культуру тканей определяется эффективностью стерилизации. Как показал сравнительный анализ действия различных стерилизующих агентов, использование хлорсодержащих веществ обеспечивало достаточную стерильность материала.

Среди изученных агентов пергидроль 10—12% обладал наименьшим стерилизующим эффектом, в основном грибная инфицированность эксплантов составляла 98%. Количество стерильных проростков не превышало 2%.

Применение раствора пергидроля с концентрацией примерно 20% обеспечивало больший стерилизующий эффект материала — 60%.

30%-ый раствор дезэфекта показывает лучший результат при стерилизации объектов в течение 30 минут — 35%. После воздействия дезэфекта в течение 60 минут экспланты имели обширные площади повреждения.

Высокий стерилизующий эффект наблюдался так же после обработки материала 0,1%-ым раствором хлоргексидина — 90%. При его применении общая зараженность растений составляла 10%. Использование раствора оказывало положительное действие на жизнеспособность проростков.

Важным фактором, имеющим значение для успешного микроразмножения, является гормональный состав питательной среды и вид экспланта. Решающую роль в этом играют концентрации и сочетание фитогормонов.

Наблюдения показали, что асептические проростки земляники садовой через 7—10 дней после посадки на ростовые питательные среды начинали активно расти. На среде без гормонов растения были слаборазвитые, при этом формировался один развитый побег высотой 2,0—4,0 см, коэффициент размножения не превышал 1 (табл. 3).

Таблица 3.

Влияние гормонального состава питательной среды на рост и развитие растений земляники.

*б/г (к) — безгормональная среда (контроль) На средах № 1—4, дополненных БАП, гиббереллином, кинетином и НУК в различных сочетаниях и концентрациях наблюдался активный рост растений, их высота варьировала от 2 до 6 см. Количество побегов на 1 растение достигало трех, экспланты были сильно вытянутыми, поэтому коэффициент размножения был равен 2—4.

Отличительной особенностью было то, что на 4 среде с БАП и ГК растения характеризовались более высокой степенью развития, побеги были утолщенные, кустистые. Именно на этой среде коэффициент размножения равнялся 4.

На средах № 5, 6 содержащих БАП, ИМК/ИУК наблюдался интенсивный рост растений не только в высоту, но и хорошее развитие боковых побегов. При этом средняя высота растений составляла 2—6 см. Количество побегов на 1 растение составляло 3—6 штук, коэффициент размножения равнялся 5.

Следовательно, с одного введенного на питательную среду проростка можно получить до пяти хорошо развитых растений.

На основе полученных данных можно сделать вывод, что добавление в питательную среду БАП 0,5 мг/л и ИМК (ИУК) 0,1 мг/л обеспечивает наиболее высокий выход хорошо развитых растений с одного введенного экспланта. Соответственно наиболее продуктивно использовать среды № 5, 6 для ускоренного микроразмножения земляники в культуре in vitro.

Полученный и размноженный в культуре in vitro селекционный материал необходимо укоренить для дальнейшего его использования в селекционном процессе. Укоренение образовавшихся в культуре in vitro растений связано с индуцированием адвентивных корней, которое достигается изменением гормонального состава питательной среды.

Проведенные исследования на землянике показали, что стимулирующее влияние на корнеобразование оказывала нафтилуксуская кислота в концентрации 0,5 мг/л. Количество укоренившихся эксплантов составляло 30%. Среднее число корней было равно 1—2 штук, размер составлял 1—2 см. Высота растений колебалась от 2 до 4 см. Было отмечено, что увеличение концентрации НУК до 1,0 мг/л в питательной среде активизирует рост надземной части растений после образования корней, однако выход укоренившихся проростков равнялся 15%. Максимальное образование корней (42%) вызывала НУК в количестве 1,5 мг/л, среднее число корней было равно 2—3 штук, размер составлял 2—3 см. Высота растений колебалась от 3 до 5 см (табл. 4).

Таблица 4.

Влияние физиологически активных веществ на ризогенез клонов земляники.

*б/г (к) — безгормональная среда (контроль) Однако еще большее увеличение содержания гормона в среде (НУК 2,0 мг/л) оказывало негативное влияние на рост и развитие эксплантов, образования корней снизилось до 2%. Добавление в питательную среду других гормонов и их сочетаний желаемых результатов не оказало. На контроле укорененных регенерантов не наблюдалось.