Материал и методы

Цитологически определена чувствительность Т-лимфоцитов шахтеров больных антракозом к водным вытяжкам из образцов угля, контролем служили Т-лимфоциты шахтеров не страдающих этим заболеванием. Эксперименты проведены в условиях in vitro на культурах Т-лимфоцитов, полученных от 36 шахтеров, со стажем работы в шахтах 15−25 лет, при этом 18 из них страдали антракозом, а 18 шахтеров этого заболевания не имели. Забор крови и его культивирование не отличались от общепринятой методики (Moorhead et al., 1961). Через сутки после начала культивирования в культуры лимфоцитов добавляли по 0,1 мл на 1 мл культуры вытяжки из образцов угля, полученных с шахты «Распадская». Фиксирование культуры на хромосомный анализ проводили через 2 суток после введения в культуральные флаконы анализируемых вытяжек. Для получения вытяжек уголь дробили ультразвуковым аппаратом «Saks-mobil» до частиц размером 10 микрон. Навеска пылеобразного угля (100 мг) заливалась физиологическим раствором. Через 1 сутки отстой пропускали через бактериальный фильтр и подвергали автоклавированию. Вытяжку добавляли к культуре из расчета 0,1 мл на 1 мл культуральной среды. В культурах определено определение числа клеток с патологическими изменениями ядра Т-лимфоцитов. При анализе хромсом учитывали как изменения в числе хромосом, так и структурные нарушения хромосом. В каждом случае анализировали не менее 100 клеток.

Поиск наличия генетических маркеров проведен при обследовании 126 шахтеров, работающих на шахте «Распадская» г. Междуреченска Кемеровской области.

В настоящем исследовании, при формировании группы для обследования учитывались следующие характеристики: стаж работы на конкретном предприятии, состояние здоровья, пол, место рождения и национальная принадлежность рабочих Учитывая, что этническая компонента может оказывать влияние на особенность распределения генетических признаков, в группу рабочих, отобранных для исследования, включали только русских. Вид профессиональной деятельности, стаж работы и национальную принадлежность устанавливался при помощи генеалогических карт.

Для изучения структуры и спектра общей заболеваемости использовались данные устного опроса, амбулаторные карты и больничные листы. Диагностику антракоза у шахтеров осуществляли врачи-профпатологи г. Междуреченска.

Для реализации цели исследования были сформированы две группы:

• · Группа «Больные «, в которую вошли рабочие с установленным диагнозом антракоз I и II степени.
• · Группа «Сравнение» — сформированная из рабочих, со стажем работы в шахтах 10 и более лет, в анамнезе которых отсутствовал антракоз или силикоз и заболевания сопутствующего симптомокомплекса — пневмокониоз.

Эритроцитарные антигены определяли серологическими методами с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток и цоликлонов. Группы крови АВО и MN определяли методом агглютинации на плоскости, систему Rhesus — в пробирках без подогрева, антигены P1 и Lewis — в иммунологических планшетах (Томилин В.В., Гладких А. С., 1981). Определение групповой принадлежности проводили непосредственно в день забора образцов крови.

Лейкоцитарные антигены системы HLA (I класса) типировали методом комплементзависимой цитотоксичности (Terasaki P., McClelland I., 1964). Результаты реакции оценивали по «исключению красителя», который не окрашивает живые клетки, но проникает в цитоплазму погибших лимфоцитов. Учет результатов типирования проводили по системе «четырех крестов». Панель для типирования была представлена АО «Гисанс» (г. Санкт-Петербург). Типирование на антигенный состав проводили в день обследования через 1−2 часа после забора крови.

Типирование сывороточных протеинов осуществляли методом вертикального электрофореза в полиакриламидном геле с последующим гистохимическим окрашиванием электрофореграмм по методу H. Harris и соавт. (1976).

Гаптоглобин Hp и группоспецифический компонент Gc разделяли в 7.5% полиакриламидном геле, в трис-ЭДТА-боратной системе, рН — 8.6 [Peackok et. al. 1965] с модификациями. Состав электродного и гелевого буфера: трис-0.115 М; Н3ВО4−0.12 М; ЭДТА-0.005.

Вертикальный электрофорэз проводили в камерах системы Трувеллера и Нефедова (1974). Гаптоглобин выявлялся бензидиновой пробой, для определения группоспецифического компонента применялся краситель бриллиантовый синий Coomasee R-250.

Математическая обработка первичных данных проводилась с использованием статистического пакета программ Statistica for Windows 5.5,.