ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅ ΠΈ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ ΠΈΠ· Π³Π΅Π»Ρ
ΠΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΡΡΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅. ΠΠ»Ρ ΡΠ΄ΠΎΠ±ΡΡΠ²Π° Π½Π°Π½Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π½Π° Π³Π΅Π»Ρ ΠΊ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΡΡ 4-Ρ ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ «ΠΊΡΠ°ΡΠΊΠΈ», ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠΉ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ Π±ΡΠΎΠΌΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΠΈΠ½ΠΈΠΉ ΠΈ 40% Π³Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠΈΠ½Π°. ΠΠ²ΡΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ ΠΏΡΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΠΌ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΌ Π±ΡΠΎΠΌΠΈΡΡΡΠΌ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΠ΅ΠΌ, ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΠΈΡΡΡΡ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ Π°Π·ΠΎΡΠΈΡΡΡΠΌΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΠΌΠΈ ΠΠΠ. ΠΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΡ… Π§ΠΈΡΠ°ΡΡ Π΅ΡΡ >
ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅ ΠΈ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ ΠΈΠ· Π³Π΅Π»Ρ (ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ°Ρ, ΠΊΡΡΡΠΎΠ²Π°Ρ, Π΄ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½Π°Ρ)
ΠΡΠΈΠ³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ² ΠΠΠ Π΄Π»Ρ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π°.
ΠΠΠ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΠΌΠ°Ρ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΡΠΌ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±ΠΎΠΌ, ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°Π΅Ρ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ Ρ ΠΎΡΠΎΡΠΈΠΌ ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠΌ Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π°ΠΊΡΠΈΠ»ΠΎΡΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ. ΠΠ°ΠΈΠ»ΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡ, Π΅ΡΠ»ΠΈ Π½Π° Π΄ΠΎΡΠΎΠΆΠΊΡ ΠΏΡΠΈΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ 1−5 ΠΌΠΊΠ³ ΠΠΠ. ΠΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π½Π΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅, Π½ΠΎ ΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΡΡ, Π²Π°ΠΆΠ½ΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠΈΡΡ ΡΠ°Π²Π½ΠΎΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΡΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Π° ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ Π²ΡΠ΅ΠΌΠΈ Π΄ΠΎΡΠΎΠΆΠΊΠ°ΠΌΠΈ Π³Π΅Π»Ρ. Π₯ΠΎΡΠΎΡΠΎ ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΎΠΏΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΏΠ»ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΎΠ² ΠΠΠ Π΄Π°ΡΡ Π½Π΅Π½Π°Π΄Π΅ΠΆΠ½ΡΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΉ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΡΠ°ΡΡΠΌΠ°ΡΡΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΊΠ°ΠΊ Π³ΡΡΠ±ΡΠ΅ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΊΠΈ. ΠΠ»Ρ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΠΊΠΈ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ ΠΈ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π½Π°Π½Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ ΠΏΠΎΡΡΠ°Π²ΠΈΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠΎΡΠ΅Π· Ρ Π°Π»ΠΈΠΊΠ²ΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·Π°ΡΠ° ΠΠΠ ΠΈ Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΡ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π½Π°Π½ΠΎΡΠΈΠΌΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠ±Ρ.
ΠΠ½ΠΎΠ³Π΄Π° Π΄Π»Ρ ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π½Π°Π½ΠΎΡΠΈΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ° Π±ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π½ΡΠΆΠ½ΠΎ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΈΡΡ ΠΠΠ ΠΈΠ· ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ, Π½ΠΎ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ Π² ΡΡΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π΄ΡΡΠ΅ Π²ΡΠ΅ ΠΆΠ΅ Π½Π΅Ρ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ: Ρ ΠΎΡΠΎΡΠΈΠ΅ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΈ Π±Π΅Π· ΡΡΠ°ΠΏΠ° ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΠΈ. ΠΡΠ»ΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·Π΅Ρ Π±ΡΠ» ΠΎΡΠ°ΠΆΠ΄Π΅Π½, ΠΎΡΠ΅Π½Ρ Π²Π°ΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΎΠΌΡΡΡ Π΅Π³ΠΎ 70%-Π½ΡΠΌ ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ»ΠΎΠΌ Π΄Π»Ρ ΡΠ΄Π°Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΈΠ·Π±ΡΡΠΊΠ° ΡΠΎΠ»ΠΈ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ Π½Π°ΡΡΡΠ°Π΅Ρ ΠΏΠΎΠ΄Π²ΠΈΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΠΠ; Π²Π°ΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π²ΡΡΡΡΠΈΡΡ ΠΎΡΠ°Π΄ΠΎΠΊ ΠΏΠΎΠ΄ Π²Π°ΠΊΡΡΠΌΠΎΠΌ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ" ΠΈΠ½Π°ΡΠ΅ ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ² ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ»Π° Π²ΡΠ·ΠΎΠ²Π΅Ρ ΡΠ»ΠΎΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Π° ΠΈΠ· Π»ΡΠ½ΠΎΠΊ ΠΏΡΠΈ Π½Π°Π½Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ.
ΠΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½ΠΈΡΡΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅. ΠΠ»Ρ ΡΠ΄ΠΎΠ±ΡΡΠ²Π° Π½Π°Π½Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π½Π° Π³Π΅Π»Ρ ΠΊ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΡΡ 4-Ρ ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ «ΠΊΡΠ°ΡΠΊΠΈ», ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠΉ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ Π±ΡΠΎΠΌΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΠΈΠ½ΠΈΠΉ ΠΈ 40% Π³Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠΈΠ½Π°. ΠΠ²ΡΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ ΠΏΡΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΠΌ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΌ Π±ΡΠΎΠΌΠΈΡΡΡΠΌ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΠ΅ΠΌ, ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΠΈΡΡΡΡ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ Π°Π·ΠΎΡΠΈΡΡΡΠΌΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΠΌΠΈ ΠΠΠ. ΠΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΡ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΏΡΠΈ ΠΎΠ±Π»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ Π³Π΅Π»Ρ Π£Π€ ΡΠ²Π΅ΡΠΎΠΌ (ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½Π° Π΄Π»ΠΈΠ½Π° Π²ΠΎΠ»Π½Ρ 305−320 Π½ΠΌ). Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠ°ΡΠΊΠ΅ΡΠ° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ Π½Π°Π±ΠΎΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ Ρ ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ (Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΠΌΠ°ΡΠΊΠ΅Ρ /PstI ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ·Π° ΠΠΠ ΡΠ°Π³Π° Π»ΡΠΌΠ±Π΄Π° ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠ°Π·ΠΎΠΉ PstI).
ΠΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° Π΄Π»Ρ Π³Π΅Π»Ρ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ Π΄Π°ΠΊΡΠΈΠ»ΠΎΡΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ, ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΡΡΡΡ ΡΡΠ΅Π±ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΠΌΠΈ ΠΊ ΠΈΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΠΌΡΡ ΠΎΡΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ² ΠΠΠ. ΠΡΠ»ΠΈ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡ Π΄Π»Ρ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ²Π΅ΡΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ ΡΠΎΠ΄ΠΎΡΠ»ΠΎΠ²Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ Π΄Π»Ρ ΠΎΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΎΡΠ½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠ°ΡΡΠΈΠ½Ρ Π² ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ Π½Π΅ΡΠ΄Π°ΡΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π΄ΡΠ΅ΠΉ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ, ΠΈΠ»ΠΈ Π΄Π»Ρ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ² ΠΠΠ ΠΈΠ· ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΡΠΊΠ°Π½Π΅ΠΉ ΠΈΠ½Π΄ΠΈΠ²ΠΈΠ΄Π°, ΡΠΎ ΠΆΠ΅Π»Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΡΡ ΠΈΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΡ ΠΎ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ΠΌ ΡΠΈΡΠ»Π΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΡ, ΠΏΠΎΠ΄Π΄Π°ΡΡΠΈΡ ΡΡ ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ. ΠΠ»Ρ ΡΡΠΈΡ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅Π² Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ΄ΠΎΠ±Π½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ 1%-Π½ΡΠΉ Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΡΠΉ Π³Π΅Π»Ρ ΠΈ Π²Π΅ΡΡΠΈ ΡΠΎΡΠ΅Π· ΠΏΡΠΈ 2 Π/ΡΠΌ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 48 Ρ Ρ Π΄Π²ΡΠΌΡ ΡΠΌΠ΅Π½Π°ΠΌΠΈ ΡΠΎΡΠ΅Π·Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π±ΡΡΠ΅ΡΠ°. Π’Π°ΠΊΠΈΠ΅ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡ ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΡ Π² Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π΅ 2−25 Ρ. ΠΏ.Π½. ΠΠ»Ρ ΡΠ΅Π³ΡΠ΅Π³Π°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π²Π°ΠΆΠ½ΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠΈΡΡ Ρ ΠΎΡΠΎΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΡ Π³ΠΈΠΏΠ΅ΡΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠΎΡΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ². Π ΡΡΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ Π²Π΅ΡΡΠΈ ΡΠΎΡΠ΅Π· Π² 0,8%-Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅ ΠΏΡΠΈ 1,5 Π/ΡΠΌ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 72 Ρ Ρ ΠΏΡΡΡΡ ΡΠΌΠ΅Π½Π°ΠΌΠΈ ΡΠΎΡΠ΅Π·Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π±ΡΡΠ΅ΡΠ°. ΠΡΠΈ ΡΡΠΈΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ Π²ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ΅ 3 Ρ. ΠΏ.Π½. Π²ΡΡ ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΈΠ· Π³Π΅Π»Ρ, ΠΈ Π² Π½Π΅ΠΌ ΠΎΡΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΈΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΠ²Π½ΡΠ΅ Π΄Π»ΠΈΠ½Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ, ΠΏΠΎ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΌ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΠ°Ρ ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Ρ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΠ°ΠΈΠ³ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ.
ΠΠΈΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΎΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π»ΡΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΠΠ-Π»ΠΈΠ³Π°Π·Ρ ΡΠ°Π³Π° Π’4. ΠΡΡΠ΅Ρ Π΄Π»Ρ Π»ΠΈΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠΉ ΡΠΎΡΡΠ°Π²: 66 ΠΌΠ Tris-HCl (pH 7.6), 5 mM MgCl2, 5 mM DTT. ATP (0.5 mM) Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΠΎ. ΠΡΠΈ Π»ΠΈΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ (ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ 10 ΠΌΠΊΠ³/ΠΌΠ»), ΠΏΡΠΈΡΠ΅ΠΌ ΠΌΠΎΠ»ΡΡΠ½Π°Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π²ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Π° Π±ΡΡΡ Π² 5−10 ΡΠ°Π· Π²ΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡΠ°.
ΠΡΠΈΠΌΠ΅Ρ:
Π Π΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΡ. ΠΠ΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡΠ΅ ΡΠ΅Π°Π³Π΅Π½ΡΡ: ΠΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ pQE60, pSL1180/EGFP; 10 Ρ Y Π±ΡΡΠ΅Ρ; Π Π΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠ°Π·Ρ NcoI BglII; Π²ΠΎΠ΄Π° mQ (Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π²ΡΠ΅Ρ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΎΠ² ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π½Π½Π°Ρ Π²ΠΎΠ΄Π° mQ). ΠΡΠ΅ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡ ΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ Π΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΡ Π²ΠΎ Π»ΡΠ΄Ρ. ΠΠ»Ρ Π»ΠΈΠ½Π΅Π°ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡΠ° Π² ΡΠΏ. ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠ΅ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡ Π² ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅ΠΌ ΠΏΠΎΡΡΠ΄ΠΊΠ΅: ΠΠ΅ΠΊΡΠΎΡ pQE60 — 1 ΠΌΠΊΠ³ Π² 14 ΠΌΠΊΠ» Π²ΠΎΠ΄Ρ 10 x Y Π±ΡΡΠ΅Ρ — 4 ΠΌΠΊΠ» NcoI — 1 ΠΌΠΊΠ» BglII -1 ΠΌΠΊΠ». ΠΡΠΎΠ³ΠΎ — 20 ΠΌΠΊΠ» ΠΠ»Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π²ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ: pSL1180/EGFP — 5 ΠΌΠΊΠ³ Π² 14 ΠΌΠΊΠ» Π²ΠΎΠ΄Ρ 10 x Y Π±ΡΡΠ΅Ρ — 4 ΠΌΠΊΠ» NcoI — 1 ΠΌΠΊΠ» BglII -1 ΠΌΠΊΠ». ΠΡΠΎΠ³ΠΎ — 20 ΠΌΠΊΠ» Π Π΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠ΅ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΏΡΠΈ 37 ΠΎΠ‘ 2 ΡΠ°ΡΠ°. ΠΠΎΡΠ»Π΅ 1 ΡΠ°ΡΠ° ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±Π°ΡΠΈΠΈ Π°Π»ΠΈΠΊΠ²ΠΎΡΡ ΠΏΡΠΎΠ°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ Π³Π΅Π»Ρ-ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π°.
ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· Π² Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅. ΠΠ΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡΠ΅ ΡΠ΅Π°Π³Π΅Π½ΡΡ: ΠΠ³Π°ΡΠΎΠ·Π°; ΠΡΡΠ΅Ρ Π’ΠΠ; ΠΡΠΎΠΌΠΈΡΡΡΠΉ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΠΉ (10 ΠΌΠ³/ΠΌΠ»); 4 Ρ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ Π΄Π»Ρ Π½Π°Π½Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π½Π° Π³Π΅Π»Ρ («ΠΊΡΠ°ΡΠΊΠ°»); ΠΠ°ΡΠΊΠ΅Ρ /PstI.
ΠΠ° Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ Π·Π°Π»ΠΈΡΡ 0.8% Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΡΠΉ Π³Π΅Π»Ρ. ΠΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ Π² ΡΡΠ΅ΠΊΠ»ΡΠ½Π½ΠΎΠΌ ΡΡΠ°ΠΊΠ°Π½Π΅ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ 400 ΠΌΠ³ Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Ρ Ρ 50 ΠΌΠ» Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° TBE, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠ΅Π³ΠΎ 1 ΠΌΠΊΠ³/ΠΌΠ» Π±ΡΠΎΠΌΠΈΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΡ (ΠΎΡΡΠΎΡΠΎΠΆΠ½ΠΎ — ΠΊΠ°Π½ΡΠ΅ΡΠΎΠ³Π΅Π½) ΠΈ ΠΏΠ»Π°Π²ΡΡ Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠ²ΠΎΠ»Π½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠ΅ΡΠΈ 3−5 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ Π΄ΠΎ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Ρ (ΡΠ»Π΅Π΄ΠΈΡΡ, ΡΡΠΎΠ±Ρ Π½Π΅ Π±ΡΠ»ΠΎ Π±ΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠΈΠΏΠ΅Π½ΠΈΡ). Π Π°ΡΡΠ²ΠΎΡ ΠΎΡΡΡΠΆΠ°ΡΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ Π΄ΠΎ 50 ΠΎΠ‘ ΠΈ Π·Π°Π»ΠΈΠ²Π°ΡΡ Π² ΠΏΡΠ΅Π΄Π²Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠΎΠ±ΡΠ°Π½Π½ΡΡ ΠΊΠ°ΡΡΠ΅ΡΡ. ΠΠ°ΡΡ Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π΅ Π·Π°ΡΡΡΡΡ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 15−30 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ, Π²ΡΠ½ΠΈΠΌΠ°ΡΡ Π³ΡΠ΅Π±Π΅Π½ΠΊΡ ΠΈ ΠΏΠΎΠΌΠ΅ΡΠ°ΡΡ Π³Π΅Π»Ρ Π² ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ Ρ ΠΎΠ»Π΄Π΅Ρ ΡΠ°ΠΊ, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ½ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ Π±ΡΠ» Π·Π°Π»ΠΈΡ Π±ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΌ TBE, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠΌ 1 ΠΌΠΊΠ³/ΠΌΠ» Π±ΡΠΎΠΌΠΈΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΡ.
ΠΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΈΠΈ 1 ΡΠ°ΡΠ° ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠΈ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠ°Π·Π°ΠΌΠΈ Π°Π»ΠΈΠΊΠ²ΠΎΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΠ΅ΠΉ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π°. ΠΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ Π² ΠΏΡΠ΅Π΄Π²Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠ°Ρ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ 3 ΠΌΠΊΠ» ΠΈΠ· ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Ρ 6 ΠΌΠΊΠ» Π²ΠΎΠ΄Ρ ΠΈ 3 ΠΌΠΊΠ» 4-ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ° Π΄Π»Ρ Π½Π°Π½Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π½Π° Π³Π΅Π»Ρ («ΠΊΡΠ°ΡΠΊΠΈ»). Π Π΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠ΅ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π²ΠΎΠ·Π²ΡΠ°ΡΠ°ΡΡ Π² ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΡΡΠ°Ρ. Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»Π΅ΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ 0.3−0.5 ΠΌΠΊΠ³ ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΡΡ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄ Ρ 6 ΠΌΠΊΠ» Π²ΠΎΠ΄Ρ ΠΈ 3 ΠΌΠΊΠ» «ΠΊΡΠ°ΡΠΊΠΈ». ΠΠ°Π½ΠΎΡΡΡ Π² ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΡΠ»ΠΎΡ Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π³Π΅Π»Ρ ΠΏΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ, ΡΡΠ΄ΠΎΠΌ Π½Π°Π½ΠΎΡΡΡ ΠΌΠ°ΡΠΊΠ΅Ρ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π²Π΅ΡΠ° /PstI (8 ΠΌΠΊΠ»). ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΏΡΠΈ ΡΠΎΠΊΠ΅ 40 mA (Π½Π°ΠΏΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 60 — 120 Π) Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 30−60 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ. ΠΠ° ΡΡΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ Π·Π°Π»ΠΈΡΡ 0.8% ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΈΠ²Π½ΡΠΉ Π³Π΅Π»Ρ.
ΠΠ°Π»Π΅Π΅ Π°Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ Π³Π΅Π»Ρ ΠΈΠ·ΡΡΠ°ΡΡ Π² Π£Π€-ΠΈΠ·Π»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ. ΠΠ΅ΠΊΡΠΎΡ ΠΏΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΏΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ»ΠΈΠ½ΠΊΠ΅ΡΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΈΠ· ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π²ΠΎΠΉ ΡΠΎΡΠΌΡ Π² Π»ΠΈΠ½Π΅ΠΉΠ½ΡΡ. ΠΠ€ ΠΏΠΎΠ΄Π²ΠΈΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π²ΠΎΠΉ ΡΠΎΡΠΌΡ ΡΠ»Π΅Π³ΠΊΠ° ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠ°Π΅ΡΡΡ ΠΎΡ ΠΏΠΎΠ΄Π²ΠΈΠΆΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π²ΠΎΠΉ ΡΡΠΏΠ΅ΡΡΠΊΡΡΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΈ ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π²ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π»Π°ΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΎΡΠΌΡ. ΠΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠΉ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ (ΠΏΡΠΈΠ±Π». 10 ΠΏ.ΠΎ.), Π²ΡΡΠ΅Π·Π°Π½Π½ΡΠΉ ΠΈΠ· ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ»ΠΈΠ½ΠΊΠ΅ΡΠ°, Π½Π° Π³Π΅Π»Π΅ Π½Π΅ Π²ΠΈΠ΄Π΅Π½. ΠΡΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ΅ pSL1180/EGFP ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠ°Π·Π°ΠΌΠΈ NcoI ΠΈ BglII ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΡΡΡ Π²ΡΡΠ°Π²ΠΊΠ° 720 ΠΏ.ΠΎ., ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡΠ°Ρ GFP, ΠΈ Π»ΠΈΠ½Π΅ΠΉΠ½Π°Ρ ΡΠΎΡΠΌΠ° Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡΠ°. ΠΠ»ΠΈΠ½Ρ Π²ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΌΠ°ΡΠΊΠ΅ΡΠ° /PstI. Π‘ΡΠΎΡΠΎΠ³ΡΠ°ΡΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ Π³Π΅Π»Ρ. ΠΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ Π²ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ, ΡΠ±Π΅Π΄ΠΈΡΠ΅ΡΡ, ΡΡΠΎ Π·Π° 1 ΡΠ°Ρ Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ»ΠΈΠ· ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π» Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎ.
ΠΠΎ ΠΎΠΊΠΎΠ½ΡΠ°Π½ΠΈΠΈ 2 ΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±Π°ΡΠΈΠΈ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²ΡΡΠ΅ Π² ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΡ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ ΠΏΠΎ 4 ΠΌΠΊΠ» «ΠΊΡΠ°ΡΠΊΠΈ» ΠΈ Π½Π°Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ Π½Π° ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΈΠ²Π½ΡΠΉ Π³Π΅Π»Ρ. ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΏΡΠΈ ΡΠΎΠΊΠ΅ 30−40 mA (Π½Π°ΠΏΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 60−120 Π) Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 40−60 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ. ΠΠ°ΡΠ΅ΠΌ Π² Π£Π€ ΡΠ²Π΅ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠΊΠ°Π»Π΅Π½Π½ΡΠΌ ΡΠΈΡΡΡΠΌ ΡΠΊΠ°Π»ΡΠΏΠ΅Π»Π΅ΠΌ Π²ΡΡΠ΅Π·Π°ΡΡ Π½ΡΠΆΠ½ΡΠ΅ Π·ΠΎΠ½Ρ (Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡ ΠΈ Π²ΡΡΠ°Π²ΠΊΡ) ΠΈ ΠΏΠΎΠΌΠ΅ΡΠ°ΡΡ Π² ΠΏΡΠ΅Π΄Π²Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π²Π·Π²Π΅ΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠΏ. ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠΈ. ΠΠ°Π΄ΠΎ ΡΡΠ°ΡΠ°ΡΡΡΡ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡ Π±ΡΡΡΡΠΎ, ΡΡΠΎΠ±Ρ Π½Π΅ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°ΡΡ ΠΠΠ Π΄Π»ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΌΡ ΠΎΠ±Π»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ. ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΠΉ Π΄Π°ΠΊΡΠΈΠ»ΠΎΡΠΊΠΎΠΏΠΈΡ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Π° ΠΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ ΠΈΠ· Π³Π΅Π»Ρ. ΠΠ΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡΠ΅ ΡΠ΅Π°Π³Π΅Π½ΡΡ: ΠΡΡΠ΅Ρ 1 (ΡΠΎΡΠ±ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΉ Π±ΡΡΠ΅Ρ); ΠΡΡΠ΅Ρ 2 (ΠΏΡΠΎΠΌΡΠ²ΠΎΡΠ½ΡΠΉ Π±ΡΡΠ΅Ρ); ΠΡΡΠ΅Ρ 3 (Π±ΡΡΠ΅Ρ ΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ);
ΠΠΈΠΊΡΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΊΠΈ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠ΅ Π±ΠΎΡΠΎΡΠΈΠ»ΠΈΠΊΠ°ΡΠ½ΡΡ ΠΌΠ΅ΠΌΠ±ΡΠ°Π½Ρ.
- 1. ΠΠΎΠ±Π°Π²ΡΡΠ΅ ΠΊ Π³Π΅Π»Ρ Π±ΡΡΠ΅Ρ 1 ΠΈΠ· ΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΠ° 100−150 ΠΌΠΊΠ» Π½Π° 100 ΠΌΠ³ Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π³Π΅Π»Ρ ΠΈ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ 60−65 0Π‘ Π΄ΠΎ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π³Π΅Π»Ρ (10−15 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ). Π ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±Π°ΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ΅Π½Π΄ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠ΅Π· ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΠ΅ 2 ΠΌΠΈΠ½ΡΡΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΠΌΠΎΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠΈ Π½Π° Π²ΠΎΡΡΠ΅ΠΊΡΠ΅.
- 2. ΠΠΎΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ΅ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΊΡ Π² ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠΆΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌ 2 ΠΌΠ». ΠΠ΅ΡΠ΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ ΡΠΌΠ΅ΡΡ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΡΡ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ΅Π½Π½ΡΠΉ Π³Π΅Π»Ρ, Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΊΡ ΠΈ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ 1−2 ΠΌΠΈΠ½ΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠ½Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅. Π¦Π΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ 12 000 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½. Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 10 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ.
- 3. Π£Π΄Π°Π»ΠΈΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΡΠΊΠΎΠΊ ΠΈΠ· ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠΆΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠΈ. ΠΠΎΠ±Π°Π²ΡΡΠ΅ Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΊΡ 700 ΠΌΠΊΠ» Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° 2 ΠΈ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ 12 000 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½. Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 1 ΠΌΠΈΠ½ΡΡΡ.
- 4. ΠΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΈΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠΌΡΠ²ΠΊΡ. Π£Π΄Π°Π»ΠΈΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΡΠΊΠΎΠΊ ΠΈΠ· ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠΆΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠΈ. ΠΠΎΠ±Π°Π²ΡΡΠ΅ Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΊΡ 700 ΠΌΠΊΠ» Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° 2 ΠΈ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ 12 000 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½. Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 1 ΠΌΠΈΠ½ΡΡΡ.
- 5. Π£Π΄Π°Π»ΠΈΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΡΠΊΠΎΠΊ ΠΈΠ· ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠΆΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠΈ. Π¦Π΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ 12 000 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½. Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 3 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ.
- 6. ΠΠ΅ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ΅ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΊΡ Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠΆΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌ 1.5 ΠΌΠ» ΠΈ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²ΡΡΠ΅ Π² Π½Π΅Π΅ 50 ΠΌΠΊΠ» Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° 3. ΠΡΠΎΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ 2 ΠΌΠΈΠ½ΡΡΡ, Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡΠ³ΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ 12 000 ΠΎΠ±/ΠΌΠΈΠ½. Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ 1 ΠΌΠΈΠ½ΡΡΡ.
- 7. ΠΠ»ΠΈΠΊΠ²ΠΎΡΡ (10 ΠΌΠΊΠ») Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΈΠ· Π³Π΅Π»Ρ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·ΠΎΠΌ Π² 0.8% Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π΅. ΠΠΎΠΏΡΠΎΡΠΈΡΠ΅ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π°ΡΠ΅Π»Ρ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡΠ° ΠΈ Π²ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ. Π‘ΡΠΎΡΠΎΠ³ΡΠ°ΡΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ Π³Π΅Π»Ρ. ΠΠΈΠ³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅. ΠΠ΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡΠ΅ ΡΠ΅Π°Π³Π΅Π½ΡΡ: 10 Ρ Π»ΠΈΠ³Π°Π·Π½ΡΠΉ Π±ΡΡΠ΅Ρ; 10 ΠΌΠ ΠΠ’P; ΠΠΠ-Π»ΠΈΠ³Π°Π·Π° Π’4; Π‘ΠΎΡΡΠ°Π²ΡΡΠ΅ Π»ΠΈΠ³Π°Π·Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ (Π²ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΡ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Ρ Ρ ΡΠ°Π½ΠΈΡΡΡΡ Π²ΠΎ Π»ΡΠ΄Ρ): ΠΠ΅ΠΊΡΠΎΡ — 30−100 Π½Π³ ΠΡΡΠ°Π²ΠΊΠ° — 50−300 Π½Π³ Π2Π — Π΄ΠΎ 16 ΠΌΠΊΠ» 10 Ρ Π»ΠΈΠ³Π°Π·Π½ΡΠΉ Π±ΡΡΠ΅Ρ — 2 ΠΌΠΊΠ» 10 ΠΌΠ ΠΠ’P — 1 ΠΌΠΊΠ» ΠΠΠ-Π»ΠΈΠ³Π°Π·Π° Π’4 (5 Π΅Π΄./ΠΌΠΊΠ») — 1 ΠΌΠΊΠ» ΠΠ’ΠΠΠ — 20 ΠΌΠΊΠ»
ΠΠ΅ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΠ°ΠΉΡΠ΅ ΠΈ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΡΠΉΡΠ΅ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠ½Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ 2 ΡΠ°ΡΠ°.