Сорбционные свойства печени у интактных и иммунизированных животных

СОРБЦИОННЫЕ СВОЙСТВА ПЕЧЕНИ У ИНТАКТНЫХ И ИММУНИЗИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ

Газиев З.М.

Магомедов А.М.

Магомедов А.М.

Алкадарский М.А.

Гусейнов Г. А.

Исмаилов И.А.

Печень — полифункциональный орган, играет важную роль в обмене веществ (белков, жиров и углеродов), участвует в регуляции постоянства условий внутренней среды организма. В печени происходят основные энергетические процессы: гликолиз, тканевое дыхание, биоситез белков, ферментов и нуклеиновых кислот, она служит основным депо для отложения запаса питательных веществ (), витаминов и органических кислот. Более того, печень имеет прямое отношение к иммунитету и иммунокомпетентным органам. По данным литературы (2,3,11) в печени находится ряд клеток, возможно, выполняющих функции лимфоидных органов. По нашим и литературным данным напряженность иммунитета зависит от условий среды в различные сезоны года. В частности, показателем активности процесса иммуногенеза является изменение сорбционных свойств ткани печени по отношению к прижизненным красителям (3). В связи с этим, мы исследовали сорбционные свойства печени у интактных и иммунизированных животных в различные сезоны года.

Методика прижизненной окраски разработана отечественными цитофизиологами (8) еще в 40−60 годах прошлого столетия;.к настоящему времени усовершенствована другими цитологами (1,6,8) Она позволяет с достаточной точностью установить обратимые изменения функционального состояния органов и тканей, возникающие под влиянием повреждающих факторов среды. Более пристальные исследования показали, что сорбционные свойства изменяются и при действии физиологических раздражителей на ткань: видимый свет, слышимый звук, тироксин, ацетилхолин, условный рефлекс, атмосферное давление, сезонный фактор и др. Представляет интерес изучение характера колебания сезонного фактора на сорбционные свойства клеток. По последним данным литературы в основе изменения сорбции и десорбции тканей лежат количественное содержание и конформационные изменения макромолекул белков и нуклеиновых кислот (1,8) Следовательно, изменение сорбционных свойств представляет собой интегральный показатель не только функционального, но и микроструктурного состояния тканей и клеток, лежащих в основе жизнедеятельности органов, в том числе иммунных и целого организма. Другими словами, по сорбционным свойствам можно судить об общем уровне функциональной активности иммунокомпетентных органов, напряженности иммуногенеза в различные сезоны года.

Вначале мы исследовали сорбционные свойства печени у интактных животных в различные сезоны года; затем показатели сорбции исследовали и на иммунизированных животных. Опыты ставили на крысах Wistar, в качестве прижизненных красителей использовали нейтральный краситель (основной краситель) и феноловый красный (кислотный). Красители представляют собой полимеры органических соединений, связывающие кислые и щелочные радикалы белков при изменении структуры молекул под влиянием иммунизации. Иммунизацию животных производили введением 0,2 мл эритроцитов барана с сывороткой под ладонный апоневроз левой лапки крысы вместе со стимулятором Фрейнда. Забой животных производили щадящим методом — чрезбрюшным паресечением сердечных сосудов под легким тиопиталовым наркозом (0,01 мг на 1000 мг веса тела) через различные сроки после иммунизации: 1,4−5,7−8, 14−15, 28−30 суток. Извлеченный орган окрашивали в 0,025% растворе нейтрального красного и в 0,5% растворе фенилового красного в течение одного часа (до достижения диффузионного равновесия). Окрашенный орган после очистки взвешивали и помещали в подкисленный спирт (0,2% H2SO4) на 20 часов.

Оптическую плотность извлеченного красителя измеряли на фотометре (ФЭК.-М), выражили в условных единицах по формуле C=E*1000/p, где C — сорбция, E — оптическая плотность раствора, красителя (в экстинкциях), p — вес ткани в мг. Точно также исследовали орган с помощью фенолового красного. Всего поставили 70 опытов на 70 животных, которые содержались в условиях вилария; кормили одинаковым рационом (хлеб, зерно, овощи, комбикорм) два раза в день, чтобы всегда оставались остатки пищи. Пред опытом животных адаптировали к условиям лаборатории (24 часа). Использовались животные одного пола (самцы) веса (150−200 гр.) и возраста (2,5−3 месяца). Результаты обработали методом вариацимонной статистики с определением средней арифметической не мене чем из 10 опытов в каждой экспозиции и средней ошибки. Полученные результаты представлены в таблице и на графике № 1.

печень животное раздражитель иммуногенез Таблица № 1 Сорбционные свойства печени интактных и иммунизированных крыс.

Условия окраски, красители.	Сроки иммунизации в сутках.	Примечания. P, ед. измер.
	4−5.	7−8.	14−15.	28−30.
Mm.	Mm.	Mm.	Mm.	Mm.
Нейтралрот in vitro.	5,170,14 1266%	4,910,6 115,%	6,350,2 749%	4,230,14 100,4%	3,450,5 81%	Время окрашивания — 60 мин. экстинкции (E) на ед. сырого веса ткани.
Фенолрот in vitro.	1,290,07 172%	1,420,13 192%	1580,2 213%	1,350,2 182%	1,120,13 151%
Нейтралрот. in situ.	17,750,18 146%	17,670,23 145%	18,90,24 155%	16,460,37 135%	12,140,3 100%	Расчетпо ормуле: Р 001.
Фенолрот in situ.	6,240,1 134%	6,360,24 137%	7,470,25 160%	7,360,2 158%	5,790,13 123%
Контроль.	нейтралрот.	4,250,3 100%.	фенолрот.	0,740,12 100%.	In vitro сыр. вес.
Контроль.	нейтралрот.	12,150,32 100%.	фенолрот.	4,650,15 100%.	In vitro сух. вес.

Условные обозначения. В таблице сорбция дана в абсолютных цифрах и в процентах по отношению к зимней величине, принятой за 100%.

У интактных животных сорбционные свойства печени при окраске ткани: нейтральным красным равны 4,25 +/- 0,3 на единицу сырого веса и 12,15 +/- 0,32 на сухой весь ткани, а в случае окраски фениловым красным — 0,74 +/- 0,13 и 4,65 +/- 0,15 соответственно. Величины сорбций печени интактных животных принято за 100%. При иммунизации животных уже через 24 часа во всех случаях достоверно усиливаются сорбционные свойства печени. Так при окраске нейтральным красным сорбция печени равна 5,17 +/- 0,14 ед. экстинкции при расчете красителя на сырой вес и 17,75 +/- 0,18 — при расчете на сухой вес, что составляют 126,6 и 146% соответственно по отношению к величине сорбции печени у интактных животных. Такая же картина наблюдается при окраске печени иммунизированных животных феноловым красным: 1,29 +/- 0,07 при расчете красителя на сырой вес ткани и 6,24 +/- 0,1 — на сухой вес, что составляют 172 и 134% соответственно по отношению к норме, принятой за 100%.

Максимальное увеличение сорбционных свойств печени всех иммунизированных животных наблюдается на 7−8 день после иммунизации. Так при окраске печени нейтральным красным сорбция ткани на 7−8 день иммунизации равна 6,35 +/- 0,2 ед. экстинкции при расчете красителя на сырой вес ткани и 18,9 +/- 0,23 при расчете красителя на сухой вес, что составляют 149 и 155% соответственно по сравнению с нормой принятой за 100%. А при окраске фениловым красным 1,58 +/- 0,2 при расчете красителя на сырой вес и 7,47 +/- 0,25 при расчете красителя на сухой вес, что составляют 213 и 160% соответственно по отношению к величине сорбции печени у интактных животных, принятой за 100%.

На 14−15 сутки после иммунизации животных сорбционные свойства животных снижаются. Так при окраске нейтральным красным сорбция печени на 15 день после иммунизации равна 423 +/- 0,14 при расчете красителя на сырой вес ткани и 16,46 +/- 0,37 при расчете красителя на сухой вес ткани, что составляют 100,4 и 135% соответственно по сравнению с величиной сорбции у интактных животных, принятой за 100%. При окраске органа феноловым красным сорбция печени при том же сроке после иммунизации животных равна 1,35 +/- 0,2 при расчете красителя на сырой вес и 7,36 +/- 0,2 при расчете красителя на сухой вес, что составляют 182% и 158% по отношению к величине сорбции у неиммунизированных животных, принятой за 100%. Через 28−30 суток после иммунизации животных сорбционные свойства печени снижаются резко и в некоторых сериях опытов, выравнивается с величиной сорбции у интактных животных. Так при окраске печени нейтральным красным на 28 день после иммунизации сорбция ткани равна 3,45 +/- 0,5 ед. экстинкции при расчете красителя на сухой вес, что составляет 81% и 100% соответственно по отношению к величине сорбции интактных животных, принятой за 100%.При окраске органа фениловым красным сорбционные свойства клеток снижается к этому сроку менее резко. При окраске печени в течении 24 часов после иммунизации сорбция равна 1,29 +/- 0,07 при расчете красителя на сырой вес ткани и 6,24 +/- 0,1 при расчете красителя на сухой вес, что составляют 172% и 134%, соответственно по отношению к величине сорбции печени интактных животных, принятой за 100%. Анализ приведенных данных показывает, что сорбционные свойства печени у иммунизированных животных усиливаются. Максимум сорбции достигается во всех четырех сериях опытов на 7−8 день после иммунизации. В последующие сроки уровень сорбции постепенно снижается и достигает нормы при окраске печени нейтральным красным. Уровень сорбции печени при окраске фениловым красным на 30-й день после иммунизации остается еще более высоким по сравнению с величиной сорбции печени интактных животных.

По литературным данным сорбционные свойства отражают интенсивность физиологических процессов, протекающих в клетке под влиянием специфических для данных клеток раздражителей. Для клеток иммунокомпетентных органов специфическими раздражителями являются антигены или чужеродные белки, которые стимулируют процессы иммуногенеза в них. Цитофизиологической основой иммуногенеза или синтеза антител является усиление синтеза белка и изменение пространственных структур (конформации) молекул белков и РНК. Естественно, это приводит и к увеличению поверхности молекул и числа реакционных групп (SH, S-S, NH2, NH3,OH, PO4 и др.), которые вступают в взаимодействие с органическими красителями и т.о. обуславливают усиление сорбционных свойств клеток и ткани .

Почему печень реагирует на иммунизацию животных так же, как имунокомпонентные органами? Мы допускаем следущую спекуляцию: печень, как полифункциональный орган, возможно содержит клетки, синтезирующие иммуноглобны, реагирующие на действие антигенов и таким образом имеет прямое отношение к иммуной функции организма. Или же печень и ее клетки как гамеостатическая система организма реагирует на действие антигенов, как на не специфически раздражитель и при этом возбуждается общие цитофизиологические процессы синтеза РНК, белков, сопроваждающиеся изменением конфармационной структуры их молекул что ведет к провышению неспецифической резистетности организма. По литературным данным оба процесса специфического и неспецифического реагирования клеток на действие различных раздражителей, тем более у такого полифункционального органа как печень, как правило, протекает совместно и идут к повышению общей устойчивости организма.

В заключении, необходимо указать что полученные нами эксперементальные данные показывают, что сообционные свойства клеток и тканей организма являются ценным цитофизиологическим критерием, отражающим динамику фундаментальных процессов протекающих на клеточном и молекулярном уровнях и лежащих в основе возбуждения, обратимого повреждения, репарации, специфической и общей (неспецифической) резистетности организма, возникающих в естественных и эксперментальных условиях. .

• 1. Александров В. реактивность клеток и белков.

  Литература

  изд. «наука» 1985 стр.77−89

• 2. Бородин Ю. А. Труфакин В. А. И др. и циркадные биоритмы иммуной системы. новосибирск 1992.
• 3. Газиев З. М. Сезонные ритмы цитофизиологических показателей лимфоузлов животных. Материал Яйгидун.конф. Ставрапаль 20
• 4. Газиев З. М. сорбционные и десорбционые свойства гепатоцитов в различные сезоны года. Материал 11 конф. Ставрапаль 2004 стр
• 5. Насонов Д. Н. Местная реакция протоплазменые и распространяющиеся возбуждения 1962 г. 6. Труфакин В. А. А. В. Шурлыгина и др. хромобиология иммуном системы Тр. Ин-т клинические и экспериментальные лимфологии СОРАМН. Новосибирск 1999 стр 40
• 7. Шурлыгин А. В. хронобиологические аспекты структорнофункциональной организации иммуной системы. Успех совр-й биологии том 104 1987г. стр 268−280