Фармацевтический анализ эстрогенов

Нижний предел измерения содержания эстрона в хроматографируемом объеме раствора — 0,0025 мкг.

Нижний предел измерения концентрации эстрона в воздухе — 0,001

мг/куб. м (при отборе 2400 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций в воздухе от 0,001 до 0,1

мг/куб. м.

Определению эстрона не мешают тестостерон и этинилэстрадиол.

Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 20%.

Время выполнения измерения, включая отбор проб, — 1 час.

Приборы, аппаратура и посуда

Газовый хроматограф «Агат» с электронно-захватным детектором.

Колонка хроматографическая стеклянная длиной 1,5 м и внутренним диаметром 2 мм.

Микрошприц вместимостью 10 мкл МШ-10, ГОСТ 8043–74.

Пробирки колориметрические, ГОСТ 25 336–82Е.

Колбы мерные вместимостью 25 и 100 мл, ГОСТ 1770–74Е.

Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 29 227–91.

Ротационный испаритель ИР-1М с набором колб, ТУ 25−11−917−76.

Аппарат для встряхивания пробирок АВ-30С, ТУ 64−1-2451−785.

Аспирационное устройство ЭА-2С-М1, ТУ 2.

840.

016.

Посуда лабораторная мерная, ГОСТ 1770–74Е.

Реактивы, растворы и материалы

Эстрон, содержание основного вещества не менее 99%.

Тетрагидрофуран, хч, ТУ 6−09−3686−77 (свежеперегнанный).

Трифторуксусный ангидрид, хч, ТУ 6−09−4135−75, 10%-ный раствор в тетрагидрофуране (раствор хранят не более 7 дней).

Пиридин, хч, ГОСТ 13 647–78.

Фильтр АФА-ВП-20, ТУ 95−743−80.

Азот газообразный в баллонах, осч, ГОСТ 9293–74.

Хроматон N-AW с 5% SE-30 — сорбент для хроматографической колонки с дисперсностью 0,16 — 0,20 мм.

Основной стандартный раствор эстрона с концентрацией 0,1 мг/мл готовят растворением 10 мг эстрона в мерной колбе вместимостью 100

мл в тетрагидрофуране.

Градуировочные растворы эстрона с концентрацией от 0,5 мкг/мл до 50 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением основного стандартного раствора тетрагидрофураном.

Срок хранения растворов в холодильнике — 2 недели.

Отбор пробы воздуха

Воздух объемным расходом 200 л/мин. аспирируют через фильтр, закрепленный в фильтродержателе, снабженном металлической сеткой.

Для определения эстрона на уровне 0,001 мг/куб. м следует отобрать

2400 л воздуха. Экспонированный фильтр складывают в 4 раза и помещают в бюкс с притертой крышкой. Фильтр хранят в холодильнике не более недели.

Подготовка к измерению

Хроматографическую колонку заполняют сорбентом и кондиционируют в токе газа-носителя (скорость газа-носителя — 50

мл/мин.) при отключенном детекторе, постепенно повышая температуру от 50 до 280 -C со скоростью 2 град./мин., и выдерживают при 280

— C в течение 24 часов. После этого колонку присоединяют к детектору, снижают температуру до рабочей.

В пробирки с притертыми пробками отбирают по 7 мл градуировочных растворов, добавляют 1 мл 10%-ного раствора трифторуксусного ангидрида в тетрагидрофуране и 2 — 3 капли пиридина. В результате реакции ацилирования образуется трифторацетат эстрона с выходом 100%.

Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 5 минут, затем переносят в грушевидную колбу вместимостью 10 — 15 куб. см и отгоняют растворитель на роторном испарителе при комнатной температуре.

Сухой остаток растворяют в 0,5 мл свежеперегнанного тетрагидрофурана и вводят по 5 мкл каждого градуировочного раствора в испаритель хроматографа через самоуплотняющуюся мембрану.

На основании полученных данных строят градуировочную кривую, выражающую зависимость высоты пика (мм) от содержания вещества в градуировочном растворе (мкг).

Построение градуировочного графика необходимо проводить по 6

точкам, проводя 5 параллельных определений для каждой концентрации.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

Температура колонки — 250 -C.

Температура испарителя — 300 -C.

Скорость потока газа-носителя (азота) — 50 мл/мин.

— 12

Шкала чувствительности прибора — 4×10 А.

Скорость движения диаграммной ленты — 6 мм/мин.

Время удерживания производного эстрона — трифторацетата эстрона — 4 мин. 40 сек.

Объем вводимой пробы — 5 мкл.

Проведение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку, заливают 3 мл свежеперегнанного тетрагидрофурана и встряхивают в течение 5

минут. Раствор сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой, затем операцию повторяют еще 2 раза, используя для экстракции по 2 мл тетрагидрофурана. Степень адсорбции с фильтра — 98%. Экстракты объединяют. Далее анализ проводят аналогично градуировочным растворам. Количественное определение вещества в мкг в анализируемой пробе проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Расчет концентрации

Концентрацию эстрона «C» в воздухе (в мг/куб. м) рассчитывают по формуле:

a х B

C = ——-,

б х V

где:

a — содержание трифторацетата эстрона в хроматографируемом объеме, найденное по градуировочному графику, мкг;

B — общий объем раствора пробы, мл;

б — объем раствора пробы, взятой для хроматографирования, мл;

V — объем воздуха (л), отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям.

Приведение объема воздуха к стандартным условиям проводят по следующей формуле:

V x (273 + 20) x P

t

V = —————————-,

20 (273 + t) x 101,33

где:

V — объем воздуха, отобранный для анализа, л;

t

P — барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт.

ст.);

t — температура воздуха в месте отбора пробы, -C.

Диэтилстильбэстрол Качественные реакции

1. Около 0,01 г препарата растворяют в 5 мл ледяной уксусной кислоты, прибавляют 1 мл 1%-ного раствора брома в ледяной уксусной кислоте и нагревают на водяной бане в течение 2 минут;

0,5 мл этого раствора переносят в сухую пробирку, прибавляют

0,5 мл безводного алкоголя, смешивают и добавляют 10 мл воды.

Появляется красновато-фиолетовое окрашивание. Затем прибав ляют 5 мл хлороформа, энергично взбалтывают и оставляют для разделения слоев: хлороформный слой окрашивается в оранжево;

красный цвет, а водный остается почти бесцветным.

2. При растворении 0,01 г препарата в 1 мл концентрированной серной кислоты жидкость окрашивается в интенсивный оранже вый цвет. При разбавлении этого раствора 10 мл воды получается мутноватая слегка окрашенная в оранжевый цвет жидкость, обес цвечивающаяся через несколько минут.

3. К раствору 0,05 г препарата в 1 мл спирта прибавляют 5 ка пель 1%-ного раствора хлорного железа. Появляется зеленая окраска, постепенно переходящая в желтую.

Количественное определение Диэтилстильбэстрол ацетилируют и полученный диацетат взвешивают

(ФVIII первое дополнение, 1952) (3)

Определение синестрола в мази (вазелин 30,0, ланолин 30,0, синестрол 2% -1 мл)

Rp.: Vaselini 30,0

Lanolini 30,0

Synoestrolum 2%-1ml

Misce, ut fiat unguentum.

Da.

Signa: наносить на кожу.

«Государственная фармакопея» Т.:1, М.:Медицина, 1987

Кулешова М.И., Гусева Л. Н., Сивицкая О. К. Анализ лекарственных форм, изготовляемых в аптеках, М.:Медицина, 1997

Машковский М.Д. «Лекарственные средсва», 17-е издание, новое; М, 2005

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ЭСТРОНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ. МУК 4.

1.1554−03 (УТВ. ГЛАВНЫМ ГОСУДАРСТВЕННЫМ САНИТАРНЫМ ВРАЧОМ РФ 29.

06.2003)

Перельман Я. М. Анализ лекарственных форм., М.:Медицина, 1987