Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Конструирование диагностических препаратов для экспрессных методов лабораторной диагностики бруцеллеза и детекции его возбудителей

Диссертация: Конструирование диагностических препаратов для экспрессных методов лабораторной диагностики бруцеллеза и детекции его возбудителей
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Для длительного сохранения исходных свойств и увеличения срока годности отработаны режимы лиофильного высушивания бруцеллезных эритроцитарных антигенных диагностикумов. При контроле полученных серий диагностикумов титры специфических антител в РИГА достигали 1: 10 240−1: 20 480 при нагрузке водорастворимым белковым лигандом, а при сенсибилизации ЛПС — не менее 1: 20 480. При изучении… Читать ещё >

Конструирование диагностических препаратов для экспрессных методов лабораторной диагностики бруцеллеза и детекции его возбудителей (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ: «МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА»
  • СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
  • ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
    • 2. 1. Характеристика используемых штаммов микроорганизмов
    • 2. 2. Методы выделения антигенов
    • 2. 3. Разрушение микробных клеток
    • 2. 4. Определение оптической плотности
    • 2. 5. Метод количественного определения белка
    • 2. 6. Метод иммунизации животных
    • 2. 7. Методика выделения иммуноглобулинов ПЭГом
    • 2. 8. Постановка реакции радиальной иммунодиффузии по Оухтерлони
    • 2. 9. Метод постановки реакции Райта
    • 2. 10. Метод получения иммунопероксидазных коньюгатов и определение их активности в ИФА
    • 2. 11. Получение флюоресцирующих иммуноглобулинов
    • 2. 12. Иммунофлюоресцентный анализ
      • 2. 12. 1. Прямой метод окрашивания
      • 2. 12. 2. Реакция непрямой иммунофлюоресценции
      • 2. 12. 3. Количественный иммунофлюоресцентный анализ
  • КИФА)
    • 2. 13. Метод проведения генетической идентификации возбудителя бруцеллеза с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР)
    • 2. 14. Методика проведения хемилюминесцентного иммунного анализа (ХЛИА)
    • 2. 15. Лиофилизация иммуноглобулинов, антигенов, сывороток и коньюгатов
    • 2. 16. Характеристика лабораторных животных, использованных в опытах
    • 2. 17. Методы математической и статистической обработки
  • ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА АНТИГЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ
  • СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА
    • 3. 1. Разработка эритроцитарного бруцеллезного антигенного диагностикума
    • 3. 2. Стабилизация антигенного эритроцитарного бруцеллезного диагностикума
    • 3. 3. Изучение диагностической ценности антигенного эритроцитарного диагностикума
    • 3. 4. Разработка бруцеллезного антигенного диагностикума для реакции агглютинации латекса
  • ГЛАВА 4. ПОЛУЧЕНИЕ АФФИННЫХ СОРБЕНТОВ С МАГНИТНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА В ЭКСПРЕССНЫХ МЕТОДАХ ИММУНОАНАЛИЗОВ (ИФА и КИФА)
  • ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА СОЧЕТАННЫХ МЕТОДОВ ИНДИКАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БРУЦЕЛЛЕЗА: МАГНОИММУ-НОСОРБЦИЯ — ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ И МАГНОИММУНОСОРБЦИЯ — ХЕМИЛЮМИНЕС-ЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
    • 5. 1. Сочетанный метод детекции возбудителей бруцеллеза: селективное концентрирование на магноиммуносорбенте — ПЦР-анализ
    • 5. 2. Сочетанный метод детекции возбудителей бруцеллеза: селективное концентрирование на магноиммуносорбенте — хеми-люминесцентный иммунный анализ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.

В последние годы во всем мире отмечается рост заболеваемости бруцеллезом, особенно в районах развитого овцеводства (Губина, Маликов, 1989; Воробьев, Черкасский, Степанов, 1997; Онищенко, 2001; Покровский, Филатов, Шаханина, 2001; Gavazzi, Prigeut, Baudet et al., 1997; Sun, Zhang, Sun, 1998; Handa, Singh, Sing et al., 1998;Cerri, Ebani, Pedrini et al., 1999 и др.). Зависимость поражения этой инфекцией сельскохозяйственных животных прямо пропорциональна частоте случаев заболеваемости бруцеллезом людей (Вершилова, 1973; Ковалев, Петров, Богданов и др., 1997; Баташев, Уралева, Кучин и др., 1998; Schopf, Khaschabi, 1997; Miller, Adams, Ficht et al., 1999; Sanchez Chaparro, Merida de la Torre, Gonzalez Alegre et al., 1999; Milionis, Christou, Elisaf, 2000 и др.).

В России проблема бруцеллеза стоит достаточно остро, так как заболевания людей и животных регистрируются ежегодно практически на всех её административных территориях. Почти 90% заболевших людей бруцеллезом приходится на территории Северо-Кавказкого (Карачаево-Черкесская Республика и Дагестан), Поволжского (Волгоградская и Саратовская области), Западного и Восточно-Сибирского (прежде всего Челябинская область) регионов. Наиболее пораженным бруцеллезом регионом является Ставропольский край, где показатели заболеваемости населения края превышают среднероссийские в 9−15 раз (Гнутов, Богданов, Постовой и др., 1995; Лямкин, Таран, Бутаев, 2001).

Использование специфической вакцинации привело к изменению иммунологического фона в сторону гиперсенсибилизации населения к бруцеллезному антигену, клинической картины болезни и эпидемиологического процесса в целом (Вершилова, Голубева, 1972; Ельников, Ангелов, Юндин и др., 1987; Панова, Мансурова, 1998; Kumar, Singh, Barbuddne, 1997). Появились сведения по клинике бруцеллеза у лиц различного профессионального состава, не всегда укладывающиеся в общепринятую патогенетическую схему (Панова, Мансурова, 1998; Баташев, Уралева, Кучин и др., 1998; Цирельсон, Салов, Сыздыков, 1999; Palanduz, Palanduz, Guler et al., 2000).

Особенности клинического течения бруцеллеза, тенденции к хронизации процесса, его полиморганотропность и сменяемость поражений, обуславливающих полиморфизм клинических проявлений, осложняют своевременную диагностику и дифференциацию его форм. В связи с чем, важная роль отводится лабораторным методам подтверждения диагноза (Абусуева, Арбулиева, Хаиров, 1999; Закарян, Цирельсон, Бекетов и др., 1999; Дентовская, Шарова, Самойлова и др., 2000; Baldi, Wanke, Loza et al., 1994; Baldi, Miguel, Fossati et al., 1996; Nunez-Torres., Diaz-Aparicio, Tenorio et al., 1998).

До 1995 года в практическом здравоохранении России использовались диагностические препараты, производимые в странах ближнего зарубежья (Украине, Республике Казахстан, Грузии, Молдове). В связи с возникшими значительными трудностями в поставках МИБП из указанных государств, а также отсутствием аналогичного производства в Российской Федерации, Государственный комитет санитарно-эпидемиологического надзора Российской Федерации дал указание (от 28.04.1995 г. № 28) разработать и организовать выпуск МИБП для диагностики особо опасных инфекций и индикации их возбудителей в Российских научно-исследовательских противочумных институтах. На рабочем совещании представителей противочумных институтов, состоявшемся 16−18 мая, 1995 года, было принято решение о распределении номенклатуры МИБП между институтами. В частности, СтавНИПЧИ, в ряду прочих, было вменено в обязанность совершенствование, разработка бруцеллезных МИБП и организация их производства.

ЦЕЛЬ И ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Цель диссертационной работы заключалась в совершенствовании методов и разработке новых медицинских иммунобиологических препаратов для диагностики бруцеллеза и индикации его возбудителей.

Для достижения указанной цели предполагалось решить следующие задачи:

1. Разработать высокочувствительные и специфичные бруцеллезные антигенные эритроцитарные и суспензионный диагностикумы для выявления специфических антител.

2. Разработать композиционные сорбенты с магнитными свойствами для селективной иммуносорбции специфических антител и антигенов при диагностике бруцеллеза и индикации его возбудителей в экспрессных методах иммуноанализов (ИФА и КИФА).

3. Разработать условия сочетанных методов детекции возбудителя бруцеллеза: магноиммуносорбция — ПЦР — анализмагноиммуносорбцияхемилюминесцентный иммунный анализ (ХЛИА).

4. Провести лабораторные и клинические испытания диагностикумов.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.

Разработаны высокочувствительные и специфичные антигенные эритроцитарные и латексный диагностикумы для серологической диагностики бруцеллеза.

Показана эффективность и ценность применения антигенных магноиммуносорбентов в экспресс-методах диагностики бруцеллеза.

Разработаны условия сочетанных методов: предварительное селективное концентрирование инфекционного агента на магноиммуносорбенте с последующей его детекцией в ПЦР — анализе и индикация возбудителя бруцеллеза в хемшпоминесцентном иммунном анализе с предварительным избирательным концентрированием на магноиммуносорбенте, что впервые дало возможность применения ХЛИА для исследования объектов внешней среды.

Приоритетность вышеизложенного подтверждена:

— Патентом № 21 65 081 РФ, С 2 7 G 01 № 33/ 53, заяв. 05.01.99., опубл. 10.04.2001, Бюл. № 10. «Способ индикации микроорганизмов» ;

— Решением о выдаче патента от 20.11.2002 г. Заявка № 2 001 121 392/14 на патент: «Способ лабораторной диагностики бруцеллезной инфекции у людей» ;

— Положительным решением от 05.03.2002 г. Заявка № 2 001 135 978 на патент: «Способ обнаружения патогенных микроорганизмов в объектах внешней среды» .

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ.

Предварительное селективное концентрирование патогена на аффинном магносорбенте дает возможность с большей эффективностью исследовать объекты внешней среды, в том числе и сильно загрязненные, а последующая индикация возбудителей в таких методах как полимеразная цепная реакция и хемилюминесцентной иммунный анализ позволяет повысить эффективность и достоверность исследования при увеличении специфической чувствительности на 2−3 порядка по сравнению с общепринятыми экспрессными методами. Разработанные бруцеллезные антигенные магноиммуносорбентные тест-системы для избирательного концентрирования специфических антител и последующего проведения ИФА и КИФА обладают более высокой разрешающей способностью, что выражается в увеличении числа серопозитивных результатов исследований на бруцеллез по сравнению с традиционными лабораторными методами иммуноанализов. Проведенные лабораторные и клинические испытания разработанных бруцеллезных антигенных эритроцитарных и латексных диагностикумов свидетельствуют об их высокой чувствительности, специфичности и перспективе использования в лабораториях практического здравоохранения РФ.

Составлена нормативная документация на диагностикум эритроцитарный бруцеллезный антигенный сухой и жидкий (регламент производства, фармакопейная статья предприятия, инструкция по применению), одобренная Ученым Советом СтавНИПЧИ и утвержденная директором института (протокол № 11 от 28.10. 1998 г.).

Материалы исследований легли в основу: методических рекомендаций «Детекция бруцелл в материале, зараженном или подозрительном на зараженность возбудителем бруцеллеза, с помощью полимеразно-цепной реакции с предварительным селективным концентрированием на МИС», одобренных Ученым Советом СтавНИПЧИ и утвержденных директором института (протокол № 1 от 27.01.2000 г.) — «Методических рекомендаций по применению антигенных бруцеллезных магноиммуносорбентов в методах иммуноанализа (непрямого ИФА и КИФА)», одобренных Ученым Советом СтавНИПЧИ и утвержденных директором института (протокол № 5 от 31.05.2001 г.) — «Методических рекомендаций по использованию тест-системы бруцеллезной иммуноглобулиновой магноиммуносорбентной в хемилюминесцентном иммунном анализе (ХЛИА)», одобренных Ученым Советом СтавНИПЧИ и утвержденных директором института (протокол № 1 от 30.01. 2002 г.).

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Разработка антигенных бруцеллезных эритроцитарных (на основе белкового и липосахаридного сенситинов) и латексного диагностикумов для выявления специфических антител.

2. Получение МИБП на основе магноиммуносорбентов и использование их в экспресс-методах диагностики и индикации возбудителя бруцеллеза.

3. Результаты изучения диагностической ценности бруцеллезной антигенной магноиммуносорбентной тест-системы в методах непрямого иммуноанализа ИФА и КИФА, бруцеллезных антигенных эритроцитарных и суспензионных диагностикумов в лабораторных и клинических испытаниях при исследовании сывороток крови с целью обнаружения специфических антител.

4. Разработанные условия сочетанных методов: предварительное селективное концентрирование инфекционного агента на магноиммуносорбенте с последующей его детекцией в ПЦР — анализе и индикация возбудителя бруцеллеза в ХЛИА с предварительным избирательным концентрированием на магноиммуносорбенте.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ПУБЛИКАЦИИ.

Основные результаты диссертационной работы были представлены и доложены на юбилейной научной конференции, посвященной 70-летию НИИ микробиологии МОРФ (Киров, 30 ноября-1 декабря, 1998 г.) — научной конференции общества молодых ученых и специалистов СтавНИПЧИ (Ставрополь, 18 марта, 1999 г.) — I Всесоюзного научнопрактической конференции (Саратов, 21−22 ноября, 2000 г.) — международной научно-практической конференции «Современный эпидемиологический потенциал природных очагов чумы», посвященной 10-летию Суверенитета Республики Казахстан и 50 -летию Талдыкарганской ПЧС (Талдыкарг, 1−2 августа, 2001 г.) — межлабораторной научной конференции СтавНИПЧИ (3 октября, 2002 г.).

Основные результаты диссертации отражены в 13 научных публикациях.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературы, включающий 202 отечественных и 160 зарубежных источников. Она изложена на 180 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы и 14 рисунков.

ВЫВОДЫ.

1. Разработан высокочувствительный бруцеллезный эритроцитар-ный антигенный диагностикум для выявления специфических антител, при этом показана возможность использования в качестве сенситина с равным успехом как комплексного водорастворимого белкового антигена, так и ли-пополисахарида.

2. Разработан эффективный суспензионный антигенный диагностикум для реакции агглютинации на основе окрашенной полиакролеиновой матрицы и бруцеллезного комплексного белкового водорастворимого антигена.

3. Впервые сконструирована магноиммуносорбентная антигенная тест-система для диагностики бруцеллеза в экспрессных методах иммуноа-нализов: иммуноферментном и количественной иммунофлюоресценции.

4. Показана возможность и подобраны условия сочетанного применения избирательного концентрирования возбудителей бруцеллеза на магноиммуносорбенте с последующей детекцией патогена в ПЦР-анализе, что позволило повысить чувствительность метода в несколько раз и сократить время проведения анализа до 3-х часов.

5. Отработаны условия сочетанного применения предварительного селективного концентрирования возбудителей бруцеллеза на магноиммуносорбенте с последующим проведением хемилюминесцентного анализа, что впервые позволило привлекать ХЛИА для исследования объектов внешней среды, при этом разрешающая способность метода составляет от 10 до 100 и выше мк.кл. в пробе.

6. Лабораторные и клинические испытания полученных бруцеллезных диагностикумов подтвердили их высокую чувствительность, специфичность, информативность, что расширяет возможности и арсенал лабораторных средств диагностики бруцеллеза и индикации его возбудителей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Бруцеллезэто медико-ветеринарная проблема, связанная с тем, что во всем мире до сих пор отмечается рост заболеваемости бруцеллезом. В России проблема бруцеллеза стоит достаточно остро, так как заболевания людей и животных регистрируются ежегодно практически на всех её административных территориях (Воробьев, Черкасский, Степанов, 1997; Голубин-ский, Марамович, 1998; Онищенко, 2001; Handa, Singh, Sing et al., 1998; Cerri, Ebani, Pedrini et al., 1999 и др.).

В связи с этим, возникает необходимость повышения качества выполнения и усиления всех этапов комплекса противобруцеллезных мероприятий, где лабораторная диагностика занимает одну из ключевых позиций. Поэтому совершенствование имеющихся МИБП, разработка новых бруцеллезных диагностикумов и методов, повышающих их чувствительность и специфичность, несомненно актуальны.

До сих пор традиционно используются простые, достаточно чувствительные, не требующие применения специальной аппаратуры и поэтому общедоступные серологические тесты и, в частности, РНГА. Причем, подходы к их изготовлению отличаются большим разнообразием. При отработке условий и параметров изготовления эритроцитарного антигенного бруцеллезного диагностикума необходимо было решить ряд задач: выбрать специфичный лиганд и подобрать эффективную методику его извлечения из микробной клеткиотработать условия формалинизации эритроцитов баранаподобрать условия сенсибилизации эритроцитов специфичным бруцеллезным антигеномотработать условия его стабилизации. Комплексный водорастворимый белковый антиген изолировали водно-солевой экстракцией в сочетании с ультразвуковой дезинтеграцией, используя биомассы вакцинных штаммов В. abortus 19, B. suis 61, B. melitensis Rev-1. Кроме водорастворимых комплексов бруцелл, в качестве сенситина использовали специфический ЛПС, извлеченный из микробных клеток S-форм бруцелл воднофенольной экстракцией по модифицированному методу E. Moreno et al. (1974). Антигены иммобилизовали на поверхности эритроцитов барана, формалинизированных по методу Чизмена в модификации М. И. Леви с со-авт. (1962), при этом активацию их поверхности проводили 2% раствором вторичного алкилсульфата натрия. Оптимальная нагрузка белкового лиганда равнялась 200 мкг/мл, а ЛПС — 100 мкг/мл при следующих условиях конъюгации: концентрация эритроцитов 20%- температура их связывания с сенси-тином 45° СрН раствора — 6,0 в течение 18 часов.

Для длительного сохранения исходных свойств и увеличения срока годности отработаны режимы лиофильного высушивания бруцеллезных эритроцитарных антигенных диагностикумов. При контроле полученных серий диагностикумов титры специфических антител в РИГА достигали 1: 10 240−1: 20 480 при нагрузке водорастворимым белковым лигандом, а при сенсибилизации ЛПС — не менее 1: 20 480. При изучении специфичности на коммерческих гетерологичных агглютинирующих сыворотках перекрестных реакций не наблюдалось. Таким образом, антигенные эритроци-тарные препараты с обоими сенситинами пригодны для лабораторной диагностики бруцеллеза. На диагностикумы составлена нормативная документация (регламент производства, фармакопейная статья предприятия, инструкция по применению), утвержденная директором и одобренная Ученым Советом СтавНИПЧИ (протокол № 11 от 28.10.1998 г.). ОБТК проведены лабораторные испытания экспериментальных серий препаратов, которые подтвердили соответствие их требованиям нормативной документации и общим медико-биологическим требованиям к эритроцитарным диагностикумам. Диагностическая ценность диагностикумов подтверждена клиническими испытаниями при исследовании сывороток крови женщин из роддома г. Ставрополя (акт испытаний от 20.12.2000 г.).

Латексные микроносители обеспечивают более воспроизводимые результаты по сравнению с эритроцитарными и могут с успехом их заменять в реакции гемагглютинации в связи с тем, что химические свойства полимерных микросфер относительно постоянны и поддаются более легкой и точной характеристике по сравнению с поверхностными свойствами наружной мембраны эритроцитов (Лукин, 1986; Воробьева, Фокина, 1992; Matsumoto, Ishikawa et al., 1993; Young, Moyesctal, 1998).

Для изготовления суспензионного бруцеллезного антигенного диагностикума нами разработана биотехнологическая схема, включающая выделение комплексного белкового водорастворимого антигена, получение окрашенной полиакролеиновой матрицы, иммобилизацию антигена на поверхности латекса, лиофилизацию диагностикума.

Изучение чувствительности и специфичности 15 экспериментально-производственных серий диагностикума при постановке РАЛ на стекле (качественный тест) и титровании 1326 сывороток крови от людей в микропланшетах (количественный тест) свидетельствовало о равноценности эрит-роцитарному антигенному бруцеллезному диагностикуму и возможности применения в практическом здравоохранении, особенно при проведении массовых обследований на бруцеллез.

Новые возможности в диагностике инфекционных заболеваний вносят иммуносорбционные методы, особое место среди которых занимают аффинные сорбенты с магнитными свойствами. Используя принцип получения биотехнологических композиционных МИС на основе алюмосиликата, мы изготовили бруцеллезные антигенные композиционные магноиммуносор-бенты на основе кремнезема-алюмосиликата (КМИС).

Технология получения магноиммуносорбента на основе алюмосиликата включает 8 стадий. На I стадии получали гидрогель из алюмосиликата А120з х 3SiO 2 х nH20 и компонентов синтеза (Fe 2O3, полиглюкин) — на II стадии происходило созревание композиционного гидрогеляна III стадии путем термообработки из гидрогеля получали ксерогельна IV стадии производили размельчение ксерогеля механическим путемна V стадии получали методом рассева высокодисперсные фракции сорбентана VI — проводили химическое модифицирование сорбента активными группами (метод окисления с помощью вторичного алкилсульфата натрия) — на VII стадииковалентное присоединение лиганда (бруцеллезный комплексный водорастворимый антиген) — VIII стадиялиофилизация.

В итоге был получен магноиммуносорбент, представляющий собой высоко дисперсные микрогранулы размером от 70 до 150 мкм, неправильной формы, обладающие магнитными свойствами, хорошей смачиваемостью, отсутствием склонности к конгломерации, с повышенной специфической емкостью, характеризующейся механической, химической и микробиологической устойчивостью, а также способностью к лиофилизации с сохранением при этом специфической биологической активности.

Изготовлено 18 экспериментальных серий алюмосиликатных бруцеллезных антигенных магноиммуносорбентов, которые были проверены на активность и специфичность в методах иммуноанализов: непрямом иммуно-ферментном и количественном иммунофлюоресцентном.

Диагностическая ценность разработанного антигенного композиционного МИС была подтверждена при исследовании 1326 сывороток беременных женщин, поступивших в палату патологии, на роды, у здоровых беременных и с отягощенным акушерским анамнезом (самопроизвольными выкидышами на ранних и поздних сроках, с замершей беременностью, уродством плода, преждевременными родами, многоводием, преждевременной отслойкой нормально расположенной плаценты, хронической внутриутробной гипоксией плода) на базе клинической лаборатории Ставропольского родильного дома.

Параллельно эти же сыворотки исследовались в непрямом ИФА и НРИФ без применения КМИС.

При исследовании сывороток крови показано преимущество использования композиционных антигенных КМИС в ИФА, которое выразилось в увеличении положительных результатов на 0,22% от общего количества исследованных сывороток и на 21,5% от общего количества положительно реагирующих сывороток (при разведении сывороток 1:200) при сравнении с результатами исследования этих же сывороток в непрямом ИФА без использования КМИС.

При исследовании эффективности и чувствительности разработанных КМИС в КИФА показано преимущество данного теста на 0,23% от общего количества исследованных сывороток и на 14, 3% от общего количества положительно реагирующих сывороток (в разведении 1:200) по сравнению с РНИФ.

Таким образом, при использовании антигенных бруцеллезных магно-иммуносорбентных тест-систем дополнительно были выявлены 14 женщин с положительными реакциями на бруцеллез. В последующем у них была определена положительная аллергическая реакция и при детальном клиническом обследовании поставлен диагноз: «бруцеллез» .

Были проведены повторные исследования положительно реагирующих сывороток крови, взятых спустя 2 недели после первого исследования в этих же методах. При этом отмечено подтверждение ранее полученных результатов без нарастания титров антител, что свидетельствовало об отсутствии динамики процесса.

В результате проведенных исследований отмечено, что при помощи методов иммуноанализов — непрямого ИФА и количественного иммуноф-люоресцентного анализа (КИФА) с использованием бруцеллезного антигенного КМИС выявлены положительные сыворотки крови с более высокими титрами специфических антител, чем в традиционных методах иммуноа-нализа (непрямого ИФА и РНИФ).

Это свидетельствует о более высокой разрешающей способности методов иммуноанализов с применением КМИС, что выражается в повышении их чувствительности и информативности, а также перспективности использования в диагностике бруцеллезной инфекции. На основе полученных результатов оформлены методические рекомендации: «Использование бруцеллезных антигенных МИС тест-систем в методах иммуноанализа непрямом ИФА и КИФА», утвержденные директором и одобренные Ученым Советом СтавНИПЧИ (протокол № 5 от 21.05.2001 г.).

Способность магноиммуносорбентов прочно (на уровне реакций антиген-антитело) фиксировать на своей поверхности искомый антиген дает возможность исследовать широкий диапазон проб, в том числе и сильно загрязненных, и их объемов (от нескольких сот микролитров до многих кубических метров жидкостей), осуществлять тщательную отмывку пробы от загрязнений, мешающих проведению индикационных реакций, тем самым, повышая достоверность как положительных, так и отрицательных результатов.

Для дальнейшего совершенствования экспрессных методов индикации возбудителей бруцеллеза мы объединили метод предварительного концентрирования искомого патогена на КМИС с последующей детекцией его в полимеразной цепной реакции и хемилюминесцентном иммунном анализе.

В основе ПЦР лежит амплификация участка генома путем многократного копирования специфической для данного микроорганизма нуклеотид-ной последовательности с последующей визуализацией фрагментов ДНК в электрофорезе.

Хемилюминесцентная реакция является разновидностью люминесценции. Хемилюминесцентными называют химические реакции, при которых вещества переходят в возбужденное состояние, а затем высвобождают накопленную энергию в виде эмиссии света. Применительно к микробиологическим исследованиям один из компонентов специфической реакции «антиген-антитело» коньюгируют (метят) маркером, участвующем в последующем в реакции хемилюминесценции, которую регистрируют любыми приборами, чувствительными к эмиссии видимого света, используя для этого сцинтилляционные счетчики или люминометры.

При отработке условий сочетанного метода: КМИС + ПЦР эксперименты проводили с чистыми культурами бруцеллезного микроба В. abortus 19 и в модельных опытах на почве и фураже, контаминированных вирулентным штаммом Br. abortus 544. Из культуры Br. abortus 19, выращенной при температуре 37° С, готовили по 500 мл суспензий с концентрациями lx 101- 1×102- 2×102- 5×102- 8×102- 1×103мк. кл. в этом объеме пробы, в которые вносили по 1 мл взвеси клеток гетерологичных штаммов (Fr.tularensis, Y. enterocolitica, E. coli) в концентрации lx 109 мк.кл./мл. Пробы пропускали самотеком через специальную проточную магнитную ловушку с фиксированным бруцеллезным КМИС. После контакта с пробой и тщательной отмывки физиологическим раствором для лизиса клеток и их стерилизации иммуносорбент прогревали на водяной бане при температуре 100° С в течение 30 мин. Аликвоту в 5 мкл исследовали в ПЦР, используя тестсистему «Ниармедик» (Россия), включающую праймеры 1 и 2. Амплификацию осуществляли с использованием амплификаторов Gene Amp PSR System 2400 фирмы «Perkin Elmer» и PCT Minicycler «M.J. Research» (США).

В качестве положительных контролей были использованы образцы ДНК возбудителя бруцеллеза.

Параллельно исследуемые пробы подвергали ПЦР — анализу без пред-варительнрго концентрирования на МИС с использованием вышеназванной тест-системы.

Положительные результаты получены при обоих вариантах постановки, однако, в ПЦР без КМИС этот показатель составил — 2×10 мк.кл. в 1 мл, у, а при постановке ПЦР с КМИС — 1×10 м.к. в объёме пробы, что повысило чувствительность анализа на несколько порядков.

В модельных опытах на почве и фураже, контаминированных ви.

1 2 2 рулентным штаммом В. abortus 544 концентрациях 1×10 — 1×10 — 2×10 ;

5х 102- 8×102- lx 103 mk.kji. в объёме пробы, после концентрирования на КМИС и проведения ПЦР-анализа получены идентичные результаты.

При подборе условий сочетанного метода: КМИС+ХЛИА были использованы бруцеллезные магноиммуносорбенты, выявляющие возбудитель бруцеллеза в S-форме, соответствующие бруцеллезные иммуноперок-сидазные коньюгаты в разведении 1:200, бруцеллезные корпускулярные антигены Br. abortus 544, Br. melitensis 16-М, Br. suis 1330 в разведениях I х 109 — 1×101 мк. кл. в объёме пробы, водорастворимые антигены Br. abortus 544, Br. melitensis 16-М, Br. suis 1330 в разведениях 0,05 — 20 нг/мл, а так же корпускулярные антигены гетерологичных штаммов Fr. tularensis Schu, Y. enterocolitica 383, E. coli 010 в разведениях 1×109мк/мл. Опыты проводили как на чистых культурах, так и в модельных опытах, как описано выше. Пробы также пропускали через проточную магнитную ловушку. Чувствительность бруцеллезных КМИС, выявляющих возбудитель бруцеллеза в ХЛИА, составила 1×102 — 1 хЮ1 мк.кл. в пробе для корпускулярных антигенов и 0,1 нг/мл — для водорастворимых, при этом воспроизводимость опытов составила 100%.

Таким образом, проведенные эксперименты по сочетанному применению предварительного концентрирования возбудителей бруцеллеза на аффинных сорбентах с магнитными свойствами и последующей детекцией патогена в ПЦР-анализе и ХЛИА убедительно показали возможность обнаружения от 100 до 10 мк.кл. в исследуемом объеме пробы, в том числе и сильно загрязненной, что свидетельствует о значительном (на несколько порядков) повышении чувствительности названных методов. При этом нами впервые ХЛИА был успешно привлечен для исследования объектов внешней среды в условиях эксперимента.

Новизна проведенных разработок и полученных положительных результатов подтверждены патентами: «Способ индикации микроорганизмов». Патент № 21 65 081 РФ, С27 G01 № 33/53, заяв. 05.01.99., опубл. 10.04.2001,.

Показать весь текст

Список литературы

  1. А.С., Арбулиева Е. У., Хаиров С. Г. Сравнительная оценка различных диагностикумов в РПГА при бруцеллезе //ЖМЭИ. 1999. -N4.-C. 98−100.
  2. Е.Н., Карпенкова Н. И. Вопросы прикладной иммунологии. -Л. 1967, — С.144−146.
  3. О.Я. Усовершенствование методов производства эритроцитарных препаратов для диагностики особо опасных инфекций: Автореф. дис.. канд. мед. наук. Саратов. -1986.
  4. А.А., Бекетов Б. И., Шамардин В. А., Руль Н. В., Тугам-баев Т.Н. Ускоренный метод обнаружения бруцелл //Там же. С. 103.
  5. Е.Н. Сравнительная характеристика антигенной структуры бактерий рода Brucella: Дис.канд. мед. наук. Ставрополь, 1983.- 173 С.
  6. Е.Н., Таран И. Ф., Тюменцева И. С. Антигенная структура бруцелл. Сообщение III. Иммуноферментный анализ водорастворимых антигенов бруцелл. Деп. в ВИНИТИ 12.09.86 г. — N 6637, — В. — 1986 б.
  7. Е.Н., Таран И. Ф., Тюменцева И. С. Антигенная структура бруцелл. Сообщение V. Изучение антигенных взаимосвязей бруцелл методом непрямой реакции иммунофлюоресценции. Деп. в ВИНИТИ 12.09.86 г. — N 6635. -В. — 1986 г.
  8. Е.Н., Тюменцева И. С., Касторная М. Н. К вопросу диагностики возбудителя бруцеллеза //Эрдэм шинжилгээний бутээл. -Улаанбаатор, 1999. № 7. — С. 229−231.
  9. Е.Н. Научно-методические аспекты экспресс-диагностики возбудителей особо опасных зоонозных инфекций (чума, бруцеллез, сибирская язва): Автореф. дис.. докт. мед. наук. Ростов, 2000. -45 с.
  10. А.Н., Рыбкин B.C., Тихонов В. Г., Зыкин Л. Ф., Яковлев А. Т. Информативность ИФА при поисках антигенов бруцелл //ООИ на Кавказе: Тезисы докл. VI краевой науч. конфер., посвящ. 70- летию ВОСР. -Ставрополь, 1987, — С. 2 4- 26.
  11. И.П., Воробьев А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз, 1962. — 180 с.
  12. И.А. Разработка новых препаратов для экспрессных методов диагностики сифилиса: Дис. .докт. мед. наук. Ставрополь, 2000. — 200 с.
  13. С.В., Шестопалов М. Ю., Калиновский А. И., Голу-бинский Е.П. Опыт использования ПЦР в диагностике бруцеллеза и холеры //Эрдэм шинжилгээний бутээл. Улаанбаатор, 1999. — № 7. — С. 175−183.
  14. B.C. Бруцеллез. Ленинград. — 1985. — 183 с.
  15. Н.А., Митина B.C., Вейнблат В. И. Микрометод фракционирования и идентификации белков бактерий //Материалы СевероКавказской биохим. конф. Махачкала, 1970. — С.270−271.
  16. Н.А., Митина B.C., Вейнблат В. И. Микрометод фракционирования и идентификация белков //Лаб. дело. 1972. — № 10. — С.514−616.
  17. .И., Клебанов Д. Л. Применение лиофилизации в микробиологии М, — 1961.- С.57−87.
  18. В. И. Синтез, свойства и применение новых видов модифицированных кремнеземов: Автореф. дисс.. канд. хим. наук. Киев, 1982 .-С. 21.
  19. А.В. Сорбенты на основе кремнеземов и активированных углей в биотехнологии и медицине //Матер, конф. химиков Сев. Кавказа Нальчик, 1991, — С. 185−186.
  20. А.В. Получение биопрепаратов на основе методов аффинной сорбции и иммобилизации: Дисс.. докт. химич. наук. Санкт-Петербург, 1993, — 330 с.
  21. О.И., Алексеев В. В. Количественная иммунофлюорес-ценция. Аспекты практического применения //ЖМЭИ, — 1986. № 5. — С. 9499.
  22. В.И., Павлова Ю. П. Применение реакции агломерации ализариновых суспензионных антител для количественного определения фракции I //Проблемы ООИ. Саратов, 1969. — № 4. — С. 51−53.
  23. В.И., Вельская Н. А., Митина B.C. Белковый и антигенный состав фракций, выделенных осаждением сульфатом аммония из экстрактов чумного микроба штамма ЕВ //Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1971. — Вып. 5 (22). — С. 120−123.
  24. В.И., Бельская Н. А., Митина B.C. Белковый и антигенный состав фракций, выделенных осаждением сульфатом аммония из экстрактов чумного микроба штамма ЕВ //Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1971. — Вып. 5 (22). — С. 120−123.
  25. П.А. Бруцеллез //Общая и частная эпидемиология. Т. 1. Общая эпидемиология и эпидемиология кишечных инфекций. М.: Медицина, 1973. — С.378−402.
  26. П.А., Голубева А. А., Кайтмазова Е. И., Островская Н. Н., Ходжаев Ш. Х., Чернышева М. И. Лабораторная диагностика бруцеллеза //Бруцеллез М.: Медицина. — С.225.
  27. П.А., Голубева А. А. Эпидемиология бруцеллеза //Бруцеллез. -М.: Медицина, 1972. -С.319−347.
  28. А.А., Черкасский Б. Л., Степанов А. В. и др. Актуальные проблемы борьбы с особо опасными инфекциями //Междунар. симп. «00 инфекц. заболевания: эпидемиол., экспресс-диагност, и профилакт.»: Докл., 16−20 июня 1997. Киров, 1997. — С.243−257.
  29. Е.С., Кузьмина В. Б., Астахова Т. С., Богаутдинов З. Ф., Ниязов У. Э., Шумилов К. В. Изучение возможности применения ИФА для дифференциальной диагностики бруцеллеза и иерсинеоза //Клинич. лаборатор. диагност. 1999. — № 12. — С.13−14.
  30. С.Д., Ефременко В. И., Климова И. М., Пушкарь В. Г., Перов В. Ю. Бактериологический метод определения концентрирующей способности магнитных иммуносорбентов //Сборн. научн. работ. Волгоград, 1989. — Вып. 4 — С.23−27.
  31. С.Д., Пушкарь В. Г. Жизнеспособность микроорганизмов в магнитных иммуносорбентах //Актуал. вопр. профилакт. 00 и др. инфекц. заболеваний Ставрополь, 1995, — С. 115.
  32. А.В., Староверов С. М. Модифицированные кремнеземные носители в биотехнологии //Журн. Всесоюзн. химич. общества им. Д. И. Менделеева, 1989. Т.34, — № 3, — С. 350−361.
  33. С.Я., Клисенко Г. А., Шаноян Н. К. Реакция агглютинации сенсибилизированных антителами эритроцитов вирусом колорадской клещевой лихорадки //Вопросы вирусол.- 1974. № 2. — С.169.
  34. . Г., Желудков М. М., Чернышева М. М. Оценка эффективности методов лабораторной диагностики бруцеллеза //ЖМЭИ,-1984.-№ 4.- С. 54 58.
  35. Л.Г., Сажин Б. Е., Валашек Е. Р. Сушка в химико-фармацевтической промышленности М.- 1978.- С. 18−50.
  36. В.Н., Селютина Д. Ф., Кулаков Ю. К., Скавронская А. Г. Разработка методов генетического анализа бруцелл //Там же. С. 80−81.
  37. Л.И., Владимерцева И. В., Ефременко В. И. Способ получения сорбента: А. С. N 1 643 073 от 22.12.90.
  38. Г. И. Мембраны и мембранные белки в сравнительной характеристике стафилококков. Автореф. дисс.. канд. биолог, наук. -Пущино, 1980, — 19 с.
  39. Е. А., Желудков М. М., Дьяков С. И., Лебедева И. К., Толмачева Т. А. Иммунофлюоресцентный экспресс-метод определения ан-тибиотикочувствительности бруцелл //Антибиотики и химиотерапия.-1989. № 2. — С.107.
  40. Е.А., Маликов В. Е. Некоторые проблемы эпидемиологии и профилактики бруцеллеза в СССР //Актуал. вопр. профилакт. бруцеллеза и организ. мед. помощи больным: Тез. докл. Всесоюзн. конфер. Новосибирск (24−25 октября 1989 г.) Москва, 1989. — С. 5.
  41. С.В., Гаранина С. Б., Щербакова С. А., Миронова Н. И., Куличенко А. Н. Применение ПЦР и ИФА для диагностики хронического у людей //Карантин, и зооноз. инфекц. в Казахстане.- Алматы, 1999. -Вып. 1.-С. 193−195.
  42. С.В., Куличенко А. Н. Использование молекулярно-генетических подходов для лабораторной диагностики бруцеллеза //Проблемы ООИ, — Саратов, 1999. С. 3- 11.
  43. В.А., Григорьева Г. И., Джемухадзе Г. К., Харатьян Е. Ф., Дегтярева Г. К., Лукоянова М. А., Рудзит Э. А. Получение мембран стафилококков и их ферментативная и белковая характеристика.- Москва, 1978, — С. 74.
  44. Е.П. Метод пассивной агглютинации полимерных дисперсий для диагностики легионеллеза //ЖМЭИ. 1991.- № 11.- С. 41−43.
  45. В.И., Пушкарь В. Г., Трофимов Е. Н., Перов В. Ю. Получение и применение магнитных сорбентов в методах иммуноанализа микроорганизмов//ЖМЭИ, — 1989. -№ 12. С. 100−105.
  46. В.И., Тюменцева И. С., Хорошенький А. Г., Бинатова В. В., Климова И. М., Пушкарь В. Г. Способ получения МИС: Патент N 5 040 754 РФ, А в/к 39/385 с. 12. N 11/00//01, заявл. 29.04.92. опубл. 7.06.95.
  47. В. И. Магносорбенты в микробиологических исследованиях. Ставрополь, 1996. — 130 с.
  48. В.И. Магнитоуправляемые иммобилизованные системы в микробиологическом мониторинге природных очагов и объектов внешней среды на наличие возбудителей опасных инфекционных болезней //ЖМЭИ. № 2. — 1997. — С. 102 — 106.
  49. И.В. Разработка технологии композиционных магноиммуносорбентов и конструирование их на основе диагностических тест-систем для иммуноанализа возбудителей чумы и туляремии: Дис.. канд. биолог, наук. Ставрополь, 1995. — 149 с.
  50. М.М. Перспективы совершенствования лабораторной диагностики бруцеллеза //Актуал. вопр. профилакт. бруцеллеза и орга-низ. мед. помощи больным: Тез. докл. Всесоюзн. конфер.- Новосибирск (24−25 октября 1989 г.) Москва, 1989. — С. 91.
  51. М.М., Павлова И. П., Курманова К. Б., Полыцикова Н. Н., Перекопский И. С. Определение специфических циркулирующих в крови иммунных комплексов при бруцеллезной инфекции //Там же, — С. 105.
  52. М.М., Павлова И. П., Умнова Н. С., Курманова К. Б., Сулейманов А. К., Перекопский И. С. Использование иммуноферментного анализа для выявления бруцеллезных антител разных классов //Там же С. 107−109.
  53. М.М., Маликов В. Е., Драновская Е. А. Совершенствование ИФА для диагностики бруцеллезной инфекции //Актуал. вопр. профилакт. 00 и др. инфекц. заболев. Ставрополь, 1995. — С. 149.
  54. М.М., Кулаков Ю. К. Использование в иммунофер-ментном анализе белковых антигенов бруцелл, синтезированных в клетках Escherichia coli //ЖМЭИ. 1998. — № 5. — С. 74 -77.
  55. Казахстан и 50-летию Талдыкорганской ПЧС (г. Талдыкарган, 1−2 августа, 2001 г.). Вып.З. — Алматы, 2001. — С. 25- 29.
  56. Т.Ю., Марков Е. Ю., Калиновский А. И., Голубинский Е. П. Обнаружение антигенов бруцелл с помощью частиц коллоидных металлов в качестве маркеров специфических антител //ЖМЭИ. 2001. — № 3. -С.65−69.
  57. А.А. Сравнительные аспекты применения иммуноглобу-линовых тест-систем на основе моноклональных антител для серодиагностики возбудителя чумы в природных очагах Кавказа: дисс.. канд. мед. наук. Ставрополь, 1990. — 199 с.
  58. С.Б., Цирельсон JI.E., Бекетов Б. И., Салов В. Д. Эффективность клинико-лабораторных методов диагностики хронического бруцеллеза //Карантин, и зооноз. инфекции в Казахстане. Алматы, 1999. -Вып. 1,-С. 71−74.
  59. В.И. Иммуносорбенты и их применение в иммунологии микроорганизмов //ЖМЭИ. 1980. — № 4. — С. 9−15.
  60. В.И., Ефременко В. И., Фабер С. М. Приготовление и применение иммуносорбентов для изучения антигенного состава микроорганизмов I и II группы: Методич. рекоменд. Волгоград, 1982, — Ч. 2. — С. 9.
  61. Л.Ф., Яковлев А. Т. Очерки по лабораторной диагностике опасных инфекций. Саратов, 1993. — 109 с.
  62. Л.Ф. Иммуноферментный анализ при экспертизе некоторых зоонозов //Матер. VII съезда Всеросс. общества эпидемиол., микро-биол., паразитол. Москва, 1997. — Т. 1. — С. 442.
  63. Ю.В., Коровкин С. А. Флюоресценция с временным разрешением и ее применение для диагностики ООИ //Матер. VII съезда Все-росс. общества эпидемиол., микробиол. и паразитол. Москва, 1997. — Т. 1. -С. 442.
  64. М.Р., Дзамихова А. А., Хамукаева 3.3. Некоторые кли-нико-лабораторные особенности течения бруцеллеза //Актуал. вопросы ООИ: Матер, регионал. научно-практич. конфер. Нальчик, 2000. — С. 5659.
  65. С.М., Тюменцева И. С., Ефременко В. И., Швецова Н. М., Таран В. И. Повышение эффективности улавливания микроорганизмов из воздуха //Там же. С. 365.
  66. .В. Теоретическое обоснование принципов стандартизации эритроцитарных диагностикумов. В кн.: Матер, межинстит. Науч. конфер. Памяти Л. А. Тарасевича. — М., 1967 в. — С. 225.
  67. .В. О выявлении инфицированности по реакциям с эритроцитарными диагностиками //Эритроцитарные диагностикумы. Москва, «Медицина», 1976. — С. 127.
  68. .В., Царевский Ю. П., Шамардин В. А. Эритроцитарные белковые диагностикумы. Изд-во «Наука», 1982. — Алма-Ата, 1982. -148 с.
  69. М.Н., Афанасьев Е. Н., Тюменцева И.С., Ефременко
  70. А. А. Разработка хемилюминесцентного анализа для иммунодиагностики сибирской язвы: Автореф.. дис. канд. биол. наук. -Саратов, 1992. 16 с.
  71. Ю.К., Желудков М. М. Молекулярные основы вирулентности бруцелл //Молекуляр. генетика, микробиол. и вирусол. 2001, — № 4.-С. 8−12.
  72. М.И., Басова Н. Н., Сучков Ю. Г. и др. Реакция пассивной гемагглютинации в реакции нейтрализации антител при некоторых инфекциях //ЖМЭИ, — 1962, — № 10, — С. 40- 45.
  73. С.В. Диагностика и оценка эффективности лечения системной красной волчанки с помощью иммобилизованных гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами: Дис.. канд. мед. наук. Волгоград. — 1991. — 246 с.
  74. И., Пернис Б. В кн.: Иммунологические методы исследований. Москва, изд. «Мир», 1988. — 528 С.
  75. Д.О., Жаров В. П., Романовская Т. Р., Кугинский Г. С. Исследование влияния фотодинамического эффекта на микроорганизмы методом лазерной термооптической цитометрии //Квантовая электроника. -Москва, 1999. 29, № 3. — С. 221−226.
  76. Л.М., Лямкин Г. И. Особенности технологии изготовления бруцеллезного антигенного эритроцитарного диагностикумажидкого) //Актуал. вопр. профил. чумы и др. инфекц. заболев. -Ставрополь, 1994. -С. 194.
  77. Л.М., Лямкин Г. И. Сравнительная характеристика чувствительности бруцеллезных антигенных эритроцитарных диагностикумов //Там же. С. 195.
  78. Ю.В., Бахарев В. Н., Заиченко и др., Полиакролеиновые латексы: синтез, введение наполнителей и механизмы формированиф. -доклад АН СССР.- 1985.-Т. 285.-№ 1 .-С. 159−161.
  79. Ю.В., Трифонов В. Д., Туркин С. И., Зубов В. П. Полиакролеиновые латесы в качестве иммунореагентов // Тр. МХТИ. 1985. -Вып. 185.-С. 88−92.
  80. В.В., Зыкин Л. Ф., Яковлев А. Т., Напалкова И. М. Усовершенствование ТИФА на основе авидин-биотиновой системы для лабораторной диагностики бактериальных ООИ //Генетика и биохимия виру-лент. возбуд. ООИ. Волгоград, 1992. — С. 161.
  81. П.И., Шмутер М. Ф. Формалинизация эритроцитов с помощью мешалки //Проблемы ООИ.- Саратов, 1969, — № 5, — С.202−203.
  82. П.И., Шмутер М. Ф. Подбор оптимальных методов формалинизации эритроцитов для приготовления стойких эритроцитарных диагностикумов для чумы и бруцеллеза //Проблемы ООИ. Саратов, 1969.-№ 6 — С. 231.
  83. Л.Ю., Рыбкин B.C., Яковлева А. Т., Лобанов А. Н., Шедерикина А. Я. Хемилюминесцентный иммуноанализ в ранней диагностике сапа и мелиоидоза //Там же. С. 165.
  84. Л.М., Титенко A.M. К вопросу получения и использования моноклональных антител антигенов бруцелл //Матер, научно -практич. конфер., посвящ. 100-летию образов. Противочумн. службы России (16 -18 сентября 1997 г.) Т. 2. — С. 196.
  85. Л.М., Титенко A.M., Захлебная О. Д. Получение гибридом к поверхностным антигенам бруцелл и их специфичность //Актуал. пробл. профилакт. 00 и природно-очаговых инфекц. болезней. Иркутск, 1994, — С. 111−112.
  86. Нго Т.Т., Ленхофф Г. М. В кн.: Иммуноферментный анализ. -Москва, 1988. 626 С.
  87. В.М., Шуанова Р. Ж. Пути усовершенствования диагностики бруцеллеза //Актуал. вопр. проф-ки бруцеллеза и организ. мед. помощи больным: Тез. докл. Всесоюзн. конфер. Новосибирск (24 25 октября 1989 г.) — Москва, 1989. — С. 93.
  88. А.М. Агрегат гемагглютинационная проба на анти-эритроцитарные антитела //Бюл. экспер. медиц. — 1975. № 9, — С. 61.
  89. Г. Г. Об эпидемиологической ситуации и заболеваемости природно-очаговыми инфекциями в Российской Федерации и мерах по их профилактике //ЖМЭИ. 2001, — № 3, — С. 22−28.
  90. И. С., Умнова Н. С., Желудков М. М., Павлова И. П. Использование реакции агглютинации латекса для диагностики бруцеллезной инфекции //ЖМЭИ. -1991. № 7. — С. 61.
  91. Л.Д., Мансурова Р. Ф. Современные аспекты бруцеллеза беременных и новорожденных детей //Здравоохранение Башкорстана. -1998.-№ 3−4.-С. 111−115.
  92. О.А., Ванеева Л. И. Непрямой твердофазный метод иммуноферментного анализа, его точность и источники погрешности //ЖМЭИ. 1986, — № 3. — С. 95.
  93. Г. Г., Климова ИМ., Ефременко В. И., Пушкарь В. Г., Быкова О. И., Ярулин Р. Г. Применение количественной иммунофлюорес-ценции для определения адсорбционной способности магнитных иммуно-сорбентов //ЖМЭИ. 1988. -№ 5. — С. 56−58.
  94. В.И., Голубинский И. П. В кн.: Иммуноферментный анализ и его применение при инфекционной патологии. — Москва, 1986. — 549 С.
  95. В.И., Филатов Н. Н., Шаханина И. Л., Брико Н. И. Методология эпидемиологического надзора и социально-гигиенического мониторинга //Эпидемиол. и инфекц. болезни. 2001. — № 2, — С.4−7.
  96. Практическая химия белка: М: Мир, 1989. — С.300−301.
  97. Л.П., Тукачинский С. Е. влияние частичной модификации сывороточного альбумина на его конформацию и комплексообра-зующую активность //ЖМЭИ, — 1977. № 3. — С. 115.
  98. Л.В., Гнутов И. Н. Состояние сосудисто-тканевой проницаемости у больных бруцеллезом //Современ. аспекты природн. очаговости, эпидемиол. и проф-ки ОО инфекц. заболев. Ставрополь, 1993. -С.350−351.
  99. Р.А., Яковлев А. Т. Возможности использования хеми-люминесцентного анализа в диагностике КУ риккетсиоза // Эпидемиолог, и клинико-иммунолог. аспекты профилакт. важнейших инфекц. заболеваний: Матер, конференции. — Астрахань, 1996. — С. 127.
  100. B.C., Тихонов Н. Г., Жуков А. Н. Совершенствование эпиднадзора по бруцеллезу //Эрдэм шинжилгээний бутээл. Улаанбаатор, 1999. -№ 7.-С. 65−68.
  101. Э.С. Средство для дифференциальной диагностики бруцеллеза и способ его получения: Патент 2 104 547 Россия, МПК6 G 01 N 33/531 N 96 109 903/14- Заявл. 28.05.96- Опубл. 10.02.98. Бюл. № 4.
  102. И.А., Лямкин Г. И., Касторная М. Н., Ляпустина Л. В. Способ индикации бруцелл основанный на применении ПЦР //Генная диагностика ООИ: Мат. I Всесоюзного научно- практической конф. (21−22 ноября, 2000 г., Саратов). Саратов, 2000. — С. 40−41.
  103. В.К., Грушина Т. А. Экспресс-метод серологической диагностики бруцеллеза //Актуал. вопр. профилакт. бруцеллеза и организ. мед. помощи больным: Тез. докл. Всесоюзн. конфер. Новосибирск (24−25 октября 1989 г.) Москва, 1989. — С. 112.
  104. К.Г., Чибисова В. А., Шаханина К. А., Походзей И. В. Новый количественный иммуноферментный метод определения Ig Е с помощью специфического сефарозного иммуносорбента и люминесцентного микроскопа //Журн. иммунолог. 1981. — № 1 — С.85−88.
  105. В. К., Саттаров А. И., Ременцова М. М., Джубанга-лиев М. У. К использованию макрометодов постановки серологических реакций в диагностике бруцеллеза //Там же. С. 115.
  106. Ю.Г., Конатов Ю. В. Сенсибилизация формалинизиро-ванных эритроцитов иммунными гамма-глобулинами //Журн. микробиол. -1965,-№ 8.- С. 63.
  107. П.И. Простые способы вычисления основных статистических величин //Соц. зерновое хозяйство. 1978. — № 3. — С.185−203.
  108. И.Ф., Лямкин Г. И. Бруцеллез (микробиология, иммунология, эпидемиология, профилактика). Ставрополь, 1996. — 173 с.
  109. .Н., Поливода А. И., Журавлев А. И. Изучение сверхслабой спонтанной хемилюминесценции животных клеток //Биофизика. -1961. Вып.4. — С. 490−492.
  110. А.И. Влияние сублимационного (лиофильного) высушивания на штамм ЕВ чумного микроба. Дисс.. доктора мед. наук. -Ставрополь, 1971. С. 351.
  111. A.M., Михайлов Л. М., Рудник М. П., Гриднева Г. Л. Суспензионная тест-система на основе моноклональных антител для определения антигенов бруцелл //Актуал. пробл. профилакт. 00 и природно-очаговых инфекц. болезней. Иркутск, 1994, — С. 153.
  112. Тупикин Д. В. Телемикрометрический и проточный фотоэлектрический способы регистрации реакций агглютинации: Автореф. дисс.. канд. биолог, наук, — Саратов, 1990, — 19 с.
  113. И.С. Научно-методические основы конструирования и усовершенствования производства диагностических тест-систем для выявления возбудителей 00 и других инфекций: Автореф. дис.. доктор, мед. наук. -Саратов, 1996. -57 с.
  114. В.Ю. Статистические методы в биологических и медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1975. — 296 с.
  115. Л.И. Разработка и апробация реакции латексной агглютинации для экспрес-диагностики стафилококковой инфекции //ЖМЭИ.1995.- № 6. -С. 73−74.
  116. В.И., Владимирский М. А., Андросова М. В., Добринский Э. К. Матрица иммуносорбента: Патент 2 140 084 Россия, МПК6 G 01 № 33/551, G 01 № 33/552 № 98 101 146//12- Заявл. 12.01.98- Опубл. 20.10.99. Бюл.№ 20.
  117. Г. З. Профилактика зооантропонозов в Республике Баш-корстан //Сев. Вост. Регион Башкорстана: Актуал. пробл. и пути их решения: Тез. докл. научно-практич. конфер., Уфа — Болыпеустинск, 6−7 июня, 1996. Уфа, 1996. — С.308- 310.
  118. Л.Е., Салов В. Д., Сыздыков М. С. К проблеме патогенеза современного бруцеллеза //Карантин, и зоонозн. инфекции в Казахстане. Алматы, 1999. — Вып. 1. — С. 140−142.
  119. .П., Таран И. Ф. Оценка диагностических свойств бруцеллезного антигенного эритроцитарного диагностикума //Пробл. ООИ.- Саратов, 1976, — Вып. 6 (52).- С.26−30.
  120. .П. Эритроцитарные диагностикумы и перспективы их использования в диагностике бруцеллеза, холеры и туляремии. Дисс.. канд. мед. наук. Ставрополь, 1974.- С. 180.
  121. В.А., Каральник Б. В. Способ получения эритроцитарного диагностикума: АС СССР, N 634 749 от 11.07.77, Б.И. N44, 1978 б.
  122. В.А., Каральник Б. В. Способ сенсибилизации эритроцитов: АС СССР, N 614 377 от 22.03.76, Б.И. N 25,1978 а.
  123. В.А., Каральник Б. В. Способ приготовления диагностикума направленного действия: АС № 889 004 А 61 К 39/44. 1981.
  124. И.Н., Плотникова И. А., Самойлова Л. В. Применение ПЦР для обследования групп риска по бруцеллезу //Матер, научно прак-тич. конфер., посвящ. 100-летию образов, противочумн. службы России (16−18 сентября 1997 г.) — т. 2. — Саратов, 1997, — С. 237.
  125. И.Н., Куличенко А. Н., Плотникова Е. А., Казакова Е. С., Гусева И. В. Сравнительная оценка ПЦР и бактериологического анализа при экспериментальном бруцеллезе //Пробл. ООИ: Сборн. научн. трудов. Вып. 79. — Саратов: «Слово», 1999. — С. 121−124.
  126. Шуб Г. М., Тупикин Д. В., Хотющенко Т. Н., Коломиец В. В. Использование метода телевизионного микроскопического анализа для серодиагностики сальмонеллеза и бруцеллеза //ЖМЭИ. 1996. — № 1, — С. 46.
  127. Шуб Г. М. Применение метода телевизионного микрометрического анализа для совершенствования лабораторной диагностики инфекционных заболеваний //Матер съезда Всероссийск. общества эпидемиол., микробиол. и паразитол. -Москва, 1997.- Т. 1.- С. 509.
  128. М.Н. Возможность применения латекс-агглютинации для экспресс-диагностики дизентерии //Иммунология. 1991, — № 1. — С.63−64.
  129. А.Т., Коваленко А. А., Липницкий А. В., Зыкин Л. Ф. и др. Применение хемилюминесцентного иммуноанализа для ускоренной диагностики ООИ //Сборн. научн. работ. Вып. 4, — Волгоград, 1989. — С. 262.
  130. А.Т., Коваленко А. А. Хемилюминесцентный иммуноа-нализ и его применение в микробиологии //Биотехнол., иммунол. и биохимия ООИ, — Саратов, 1989, — С. 3−9.
  131. А.Т. ИФА в лабораторной диагностике бактериальных особо опасных инфекций: Автореф. дисс.. доктора мед. наук. Саратов, 1992, — 43 с.
  132. Abalos P., Daffner J., Pinochet L. Evaluation of three Brucella soluble antigens used in an indirect Elisa to discriminate S19 vaccinated from naturally infected cattle //Vet.- Microbiol.- 2000, — Vol. 71(1−2).- P.7−161.
  133. Afral M., Tengerdy R.P., Squire P.G., Elis R.P. Characterization of Brusella ovis lipopolysaccharide and its use for diagnosis of ram epididymitis by enzymelinked immunosorbent assay //J. clin. Microbiol.-1984.- v. 20, N 6,-P. 59 -60.
  134. Alballa S.R. Epidemiology of human brucellosis in southern Saudi Arabia //J. Trop. Med. Hyg. 1995. -V. 98 (3). -P.185−189.
  135. Albrecht В., Solbach W. Moderne methoden der infektionsdiagnostic //Focus MUL. 1999. -16, N 1. -P.31−32, 37−41.
  136. Anaokar S., Garry P.J., Standefer J.C. Solid-phase enzyme immunoassay for serum ferritin. //Clin.Chem.- 1979. V.25. — P. 1426−1431.
  137. Ansari A.A., Haffikudus, Goshi S.R., Medeira M.A. ELISA silid phase: stability and binding characteristics //J. Immunol. Meth.- 1985. V.84, N 1. -P.117−124.
  138. Aphanasev E.N., Tyumentzeva I. S, Kastornaya M.N. Tne problems of brucellosis //ЭРДЭМ Шинжилгээний БУТЭЭЛ, 1999. № 7. — P.229.
  139. Asbakk K., Gall D., Stuen S. A. Sceening ELISA for brucellosis in reindeer //Hystochem. J.- 1972, — V.20. N4. -P .321−330.
  140. Avrameas S.M., Guesdon J.L. Magnetic del suitable to immunoen-zimatic determination //Patent 4 241 176 (USA) — 23.12.1980 Int. CI. С 1201/66, C07 G7 /00.
  141. Baldi P.C., Wanke M.M., Loza M.E., Fossati C.A. Brucella abortus cytoplasmic proteins used as antigens in an ELISA potentially useful for the diagnosis of canine brucellosis //Vet. Microbiol. 1994. -V. 41(1−2). — P. 127−134.
  142. Baldi P.C., Miguel S.E., Fossati C.A., Wallach J.C. Serological follow-up of human brucellosis by measuring IgG antibodies to lipopolysaccharide and cytoplasmic proteins of Brucella species //Clin. Infect. Dis.- 1996. V.22(3). -P.:446−455.
  143. Baum M., Zamir O., Bergman-Rios R. et al. Comparative evaluation of microagglutination test and serum agglutination test as supplementary diagnostic methods for brucellosis // J. Clin. Microbiol. 1995. — V.33(8). -P.2166−2170.
  144. Bercovich Z., Dekker Т., Eger A., Haagsma J. A comparison of the potency of several Brucella allergens used to detect brucellosis in cattle //Vet. Res. Commun. 1996. — V.20 (2). — P.141−151.
  145. Berman D.Т., Wilson B.L., Moreno E. Characterization of Brucella abortus soluble antigen employed in immunoassay //J. clin. Microbiol.-1980,-v. 11,-N4.-P. 355−362.
  146. Biancifiori F., Nannini D., Di Matteo A., Belfiore P. Assessment of an indirect ELISA in milk for the diagnosis of ovine Brucellosis //Сотр. Immunol. Microbiol. Infect. Dis.- 1996. V.19(l). — P. 17−24.
  147. Bing D.H., Weyand J.G.M., Stavitsky A.B. Hemagglutination with aldehyde-fixed erythrocytes for assay of antigens and antibodies. Proc. Soc. exp. Biol. Med. — 1967,-V. 124.-P. 1166.
  148. Blasco J.M., Garin-Bastuji В., Marin C.M., Gerbier G., Efficacy of different Rose Bengal and complement fixation antigens for the diagnosis of Bru
  149. Brucella melitensis infection in sheep and goats //Vet. Rec. 1994. — V. 16−134(16). -P.415−420.
  150. Boorsma D.M., Strefkert J.G. Peroxidase on glutaraldehyde for propering peroxidase conjugates //J.immunol. methods. 1979. — N 30. — P. 245 255.
  151. Boyden S.V. The adsorption of proteins treated with tannic acid and subsequent hemagglutination by antiprotein sera //J. Exp. Med.-1951, — N 93.-P.107−120.
  152. Bricker B.J., Ewalt D.R., MacMillan A.P., Foster G., Brew S. Molecular Characterization of Brucella Strains Isolated from Marine Mammals //J. Clin Microbiol.- 2000, — Vol.38(3).- P.1258−1262.
  153. Bricker B.J. Characterization of the three ribosomal RNA operons rrnA, rrnB, and rrnC, from Brucella melitensis //Gene. 2000. -Vol. 255 (1). -P.l 17−126. Related Articles, Books, LinkOut.
  154. Brodzicki S. Oznaeznie nickilkicii ielosci bialka toksyng botuli-nowey nuthoda immunoenzymaticana z odezytem chemiliiminesnoyjnym //Prz. epidemiol.- 1984, — v. 38, N 1, — P. 67−72.
  155. Brooks-Adler В., Splitter G. Determi nation of bovine lymphocyte responces to extracted protein of Brucella abortus by using protein immunoblot-ting //Infect. Immun.- 1988.- v.56, N10 P. 2581−2586.
  156. Bundle D.R., Gidney M.A.J., Perry V.D. et al. Serological cofirma-tion of Brucella abortus and Yersinia enterocolitica 0:9 O-antigens by monoclonal antibodies //Infect.and Immun.- 1984, — v. 46, N 2.- P. 389−393.
  157. R.J., Perkins L.B., Hurst H.L., Ferguson B.S. //Food chemistry.-1992. V.43. — P. 283.
  158. Camargo Z., Guesdon J.L., Drouhet E. Magnetic enzyme-linked immunosorbent assay (Melisa) for determination of specific IgG in paracoccidiodomycosis //Sabouraudia.- 1984. V.22, N 4. — P.291−299.
  159. Carlsson В., Giebinr G., Scott S. Measurement of immunoglobulin G and M antibodies to type 3 pneumococcal polysaccharide by enzyme-linked immunosorbent assay //J. Clin. Microbiol.- 1982 V. 16, — P. 63−69.
  160. Cerri D., Ebani V.V., Pedrini A. et al. Epididymitis by Brucella ovis: experemental infection in virgin ram lambs //New. Microbiol. 1999. — V. 22 (3). -P. 227−231.
  161. Cerri D., Ebani V.V., Pedrini A., Bassi S., Bey R.F., Andreani E., Farina R. Evaluation of tests employed in serological diagnosis of brucellosis caused by Brucella ovis //New. Microbiol. 2000. — Vol. 23 (3). — P. 8−281. -Related Articles, Books.
  162. Chomel B.B., DeBess E.E., Mangiamele D.M. Changing trends in the epidemiology of human brucellosis in California from 1973 to 1992: a shift toward foodborne transmission //J. Infect. Dis.- 1994. V. 170 (5). -P.1216−1223.
  163. Clark M.F., Adams A.N. Characteristics of the microplate method of enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of plant virus //J. Gen. Virol. 1977. — V.36, № 3. — P.475−483.
  164. Cloeckaert A., Zygmunt M.S., Dubray G., Limet J.N. Characterization of O-polysaccharide specific monoclonal antibodies derived from mice infected with the rough Brucella melitensis strain B115 //J. Gen. Microbiol. 1993. — V. 139(Pt7).-P. 1551.
  165. CNBr Activated Sepharose 4 В for Affinity Chromatography of Polysaccharides and Glycoproteins. Pharmacia Fine Chemicals Upssala.-1974.-P.4.
  166. Corbel M.J. Brucellosis: an overview //Emerg. Infect. Dis.- 1997.-V. 3.(2). -P.213−221.
  167. Coons A.H., Greech H.G., Gones A.N., Berliner N. The demonstration of pneumococcal antigens in tissue for the use of fluorescent antibody //J.Immunol.-1942.-V. 45, N 3, — P. 157−163.
  168. Coons A.H., Kaplan M.H. Localisation of antigen in tissue cells. II. Improwevent in method for the detection antigen by means of fluorescent antibody//! Exp. Med. 1950. — V. 91, N1, — P. 1−13.
  169. Cox D.L. Culture of Treponema pallidum //Methods-Enzymol.-1994,-Vol. 60-P. 390−405.
  170. Csizmas L. Preparation of fermalinised erythrocytes. «Proc. soc. exp. Biol." — I960, — V.103. — P.157.
  171. Dekker Robert F.H. Immobilization of a lactase onto a magnetic suppotr by covalent attachment to polyethyleneimineglutaraldehyde-activated magnetite //Appl. Biochem and Biotechnol. 1989, — V.22, N 3. — P. 289−310.
  172. Delgado S., Fernandez M., Carmenes P. Evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of sheep infected and vaccinated with Brucella melitensis //J. Vet. Diagn. Invest. 1995. — V.7(2). — P.206−209.
  173. Denes В., Glavits R. .Bacteriologically confirmed cases of ovine epi-didymo-orchitis caused by Brucella ovis in Sub-Carpathia //Acta Vet. Hung. -1994. V.42(l). — P.25−33.
  174. Diaz R., Jones L.M., Wilson J.B. Antigen relationship of the gram-negative organism causing abortion to smooth and rouh Brucellae //J. Bacteriol. -1968. V.95, № 2. — P. 618−624.
  175. DiDomenico N., Line H., Knobel R., Caratsch Т., Weschler W., Loewy Z., Rosenstraus M. COB AS AMPLICOR TM: Fully automated RNA and DNA amplification and detection system for routine liagnostic PCK //Clin. Chem. 1996. — Vol.42.- N 12. — P. 1915 -1923.
  176. Ewalt D R., Payeur J.B., Rhyan J.C., Geer P.L. Brucella suis biovar 1 in naturally infected cattle: a bacteriological, serological, and histological study //J.Vet. Diagn. Invest. 1997. — V.9 (4). -P.417−420.
  177. Ficapal A, Alonso-Urmeneta B, Velasco J. et al. Diagnosis of Brucella ovis infection of rams with an ELISA using protein G as conjugate //Vet. Rec.- 1995, — V. 5137, N6.-P. 145−147.
  178. Gall D., Nielsen K. Improvements to the competitive ELISA for detection of antibodies to Brucella abortus in cattle sera. //J. Immunoassay. 1994. -V. 15. (3).-P. 277−291.
  179. Fulthorpe A.M. Tetanus antitoxin titration by haemagglutination IIJ. Hyg.-1957, — V. 1.-P.46.
  180. Gallien P., Dorn C., Alban G., Staak C., Protz D. Detection of Brucella species in organs of naturally infected cattle by polymerase chain reaction//Vet. Rec. 1998. -V. 9−142 (19). -P.512−514.
  181. Gavazzi G., Prigeut D., Baudet J-M., Banoita S., Daoud W. JAs-pectc epidemiologiques de 42 cas de Brucellose humaine en Republique de Djibouti //Med. Trop.(Fr.). 1997. — 57, N 4. — P. 365 -368.
  182. Gedikoglu S., Helvaci S., Ozakin C. et al. Detection of Brucella melitensis by BACTEC NR 730 and BACTEC 9120 systems //Eur. J. Epidemiol.-1996. -V. 12(6). P. 649−650.
  183. Gidlewski Т., Cheville N.F., Rhyan J.C., Miller L.D., Gilsdorf M.J. Experimental Brucella abortus induced abortion in a llama: pathologic effects //Vet. Pathol.- 2000. Vol. 37 (1). — P.77−82.
  184. Granfors K., Toivanen A.I. Diagnjsis of human brucellosis with ELISA//Lancet.- 1982, — V. ll, N 8299,-P. 668.
  185. Griffin Т., Mosbach K., Mosbach R. Magnetic diospecific affinity adsorbent for immunoglobulin and ensyme isolation//Appl.Biochem.-1981.-V.6.- P.283−292.
  186. Handa R., Singh S., Singh N., Wali J.P. Brucellosis in North India: Results of a prospective study //J.Commun. Diseases. 1998. — 30, N 2. — H. 8587.
  187. Harding N. Laboratory equipment digest //J.immunol. Meth. -1982. V.20, — N4,-P. 89−93.
  188. Hendricks M.K., Perez E.M., Burger P.J., Mouton P.A. Brucellosis in childhood in the Western Cape. // S. Afr. Med. J. 1995. — V.85(3). — P. 176 178.
  189. Herman L., De Ridder H. Identification of Brucella spp. by using the polymerase chain reaction //Appl. Environ. Microbiol. 1992. — V. 58, N:6. — P. 2099−210.
  190. Issa H., Jamal M. Brucellosis in children in south Jordan //East Mediterr. Health. J. 2000. — Vol. 5(5). — P. 895−902. Related Articles, Books.
  191. Jandl I., Simmons R., The agglutination and sensitisation of red cell by metallic cations. Interaction beween multivalent metals and the red ctll membrane //Brit. J. Haemat.- 1957. V.3. — № 1. — P. 19.
  192. Kato K., Hamguchi Y., Fukui H., Ishikayawa E. Enzyme-linked immunoassay. Novel method for synthesis of the insulin D — galactosidase conjugate and its applicability for insulin assay //J.Biochem.- 1975. — V. 78. — P. 235−237.
  193. KlampB. Zoonosen//MTA. 1998. — 13, N 10. -P.711−715.
  194. Klingler W., Strasburger C.Y. and Wood W.G. Chemilumines cent tags in immunoassay//Trendsin analytical chemistry -v. 2,-n. 6, — 1983.
  195. Konig H.J., Vob H. Vertahren zur Herstelling von mechanisch stobi-len enzymhaltigen Immobilisation. Pat. 282 923. GDR, MRU 54 0 P.12. — N 11/04 /Tschistowkaya/. Martin — Luther-Univer- sitet Halle — Wittenbery. — N 3 281 731, — 1990.
  196. Kubuafor D.K., Awumbila В., Akanmori B.D. Seroprevalence of brucellosis in cattle and humans in the Akwapim-South district of Ghana: public health implications //Acta.Trop. 2000. — Vol. 76(1):45. — P. 8. — Related Articles, Books, LinkOut.
  197. Kumar P., Singh D.K., Barbuddne S.B. Sero-prevalense of Brucellosis among abattoir personnes of Delhi //J. Commun. Diseases. 1997. — Vol. 29.-N2. -P. 131−137.
  198. Lea Т., Vartdal F., Davies C., Ugelstad J. Magnetic monosired polymer pasticles for fast and specific fractionation of human mononuclear cells //Scand. J. Immunol. 1985. — V.22, № 2. — P.207−216.
  199. Leal-Klevezas D.S., Lopez-Merino A., Martinez-Soriano J.P. Molecular detection of Brucella spp.: rapid identification of B. abortus biovar I using PCR //Arch. Med. Res. 1995. — V.6 (3). — P.263−267.
  200. Leal-Klevezas D.S., Martinez-Vazquez I.O., Lopez-Merino A., Martinez-Soriano J.P. Single-step PCR for detection of Brucella spp. from blood and milk of infected animals //J. Clin. Microbiol. 1995. — V.33 (12). — P.3087−3090.
  201. Leong Dian U., Hoffmann- La Roche Inc. Method and probes for identifying bacteria found in blood. Pat. 56 355 348, USA, MKI С 12Q 1/68 .- N 348 683. Заявл. 02.12.94.- Опубл. 03.06. 97- НКИ 435/6.
  202. Lifesso R.M., Harder E., Mc Corkell S.J. Spinal brucellosis //J. Bone Soint Surg. 1985. — Vol. 67 B, N 3. — P.345−351.
  203. Lu Q., Zhang W., Hao Z. Study on double antigens sandwich enzyme immunoassay for detection of Brucella specific antibodies in human and animals
  204. Chung. Hua. Liu. Hsing. Ping. Hsueh. Tsa. -Chih.- 1999, — Vol.20 (2). P.21−118.
  205. Masson P.Z., Cambiaso C.Z., Collet-Cassat D., Magmisson C.G. et al. Methods in enzymology //Academic Press Ing. New-York., USA.-1981.-V. 74-P. 106−139.
  206. Matar G.M., Khneisser I.A., Abdelnoor A.M. Rapid laboratory confirmation of human brucellosis by PCR analysis of a target sequence on the 31-kilodalton Brucella antigen DNA //J. Clin. Microbiol. 1996. — V.34 (2). -P.477−478.
  207. McLean G., Hilbink F. Use of dried blood on filter paper in the ELISA for Brucella abortus //J. Immunol. Methods. 1989. -V.123, №:1. — P.39−43.
  208. McKenna J.M., Zuscher F., Frankel J.W. An hemagglutination test for titration of antibodies to polio viruses.- «Proc. Soc. exp. Biol.». 1958, — v. 97. -P. 160.
  209. Mikolon A.B., Gardner I.A., Hietala S.K.Evaluation of North American antibody detection tests for diagnosis of brucellosis in goats // J.Clin. Microbiol. 1998. — V.36.(6). — P.1716−1722.
  210. Milionis H., Christou L., Elisaf M. Cutaneous manifestations in brucellosis: case report and review of the literature //Infection. 2000. — Vol. 28(2): 124, — P.6. — Related Articles, Books, LinkOut.
  211. Miller W.G., Adams L.G., Ficht T.A. et al. Brucella induced abortions and infection in dittlenose dolphins //J. Zoo Wildl. Med. 1999. — V. 30 (1). -P. 100−110.
  212. Molday R.S., Jen S. P. S., Rembaum A. Application of magnetic microspheres in labelind and separation of cells //Nature. 1977. — V. 268. -P.437−438.
  213. Monsan P. Optimization of glutaraldehude activation of a support for enzyme immobilization//J. Mol.Catal.- 1978, — V. 3, N5. P. 371−384.
  214. Moreno E., Speth S., Jones L.M., Berman D.T. Immunochemical characterisation of Brucella lipopolysaccharides and polysaccharides // Infect Immun. 1981. — V.31, № 1. — P. 214−222.
  215. I. Неспецис|ичш серологичш реакцп, зумовлеш Ier-sinia enterocolitica, при дослиженнях на бруцельоз //Вет. Мед. Украши. -1998. -№ 10.-С. 20−21.
  216. Nakane Р.К., Kawaoi A. Peroxidase-labelled antibody-a new method of conjugation //J.Histochem. Cytochem. -1974, — V. 22, N 4. P. 506−508- 10 841 091.
  217. Neter E. Bacterial hemagglutination and hemolisis //Bact. Reviews. -1956.-v. 20,-P. 166.
  218. Nickeless G., Thorpe G., Kricka L. et al. A rapid chamiluminescent enzyme-linked immunosorbent assay for cytomegalovirus immunoglobulin G //J.Virol.Meth.-1985.- Y.12, N 34, — P. 313−321.
  219. Nielsen K., Gall D., Jolley M. et al. A homogeneous fluorescence polarization assay for detection of antibody to Brucella abortus //J. Immunol. Methods. 1996. — V. 9−195(l-2). — P.161−168.
  220. Nielsen K., Kelly L., Mallory M. Standartization of smooth lipopoly-saccharide preparations for use in diagnostic serological tests for bovine antibody Brucella abortus //J. Immunoassay. 1998. — V.19, № 4. — P.239−250.
  221. Nielsen K., Smith P., Gall D. et al. Development and validation of an indirect enzyme immunoassay for detection of antibody to Brucella abortus in milk. //Yet. Microbiol. 1996. — Y.52 (1−2). — P.165−173.
  222. Nielsen K.H., Kelly L., Gall D., Nicoletti P., Kelly W. Improved competitive enzyme immunoassay for the diagnosis of bovine brucellosis //V et. Immunol. Immunopathol. 1995. — V.46(3−4). — P.285−291.
  223. Nielsen K., Lin M., Gall D., Jolley M. Fluorescence Polarization Immunoassay: Detection of Antibody to Brucella abortus //Methods. 2000,-Vol. 22(1). P- 71−76. Related Articles, Books, LinkOut.
  224. Nunez-Torres E., Diaz-Aparicio E., Tenorio V.R. et al. Stability of antigen and agarose used in a double immunodiffusion serologic test for Brucella ovis II. J. Vet. Diagn. Invest. 1998. -V. 10(1). — P. 113−115.
  225. Ocholi R.A., Ezeokoli C.D., Akerejola O.O., Saror D.I. Use of the enzyme-linked immunosorbent assay for screening cattle for Brucella antibodies in Nigeria // Vet. Q. 1996. — V.18(l). — P.22−24.
  226. O’Sullivan M.J., Marks V. Method of preparation of enzymatibody conjugates for use in enzyme immunoassay //Meth. In Enzymol.- New. York, 1981.-V. 73. P.147−166.
  227. Ouahrani-Bettache S., Soubrier M.P., Liautard J.P. IS6501-anchored PCR for the detection and identification of Brucella species and strains //J. Appl. Bacteriol. 1996. — V. 81, N 2. -P. 154−160.
  228. Ouchterlony O. Antigen-antibody reactions in gel //Arkiv for Kemi. Mineral. О Ged. 1949. — V.261, N 14. -P.l-9.
  229. Patel R.D., Wood J., Gibbs A. Development of magnetic ensyme immunoassay (MELA) teihnique for determinatien of and (St. enterotoxin) immunoglobulin G-type antibodies //Biochem. Soc. Trans. 1984.- V. 12. — P. 264 268.
  230. Poison A., Potgieter G.M., Largier J.E. The fractionation of protein mixtures by linear polymers of higth molecular weigh //Biochem. Biophis. Acta.- 1964. V.82. — P.463−475.
  231. Reddy D.V.R., Hariprasada R., Padma M.C., Lopal V.R. Hemagglutination test to detect Tobacco Mosaic virus antigens //Indian J. Exp. Biol. 1969. -V.7.-P. 162.
  232. Reid Terrence S. Immobilization of affinity ligands using epoxy silica //11 the Int. Symp. HPLC. Proteins, Peptides and Polynucleotides.-Washington, 1991. -P.22.
  233. Reambaum A., Dreuer W. Immunomicrospheres: reagents fir cell labeling and separation //Sciens. 1980.- Vol. 208.- № 4442.- P. 364−368.
  234. Rijpens N.P., Jannes G., Van Asbroeck M. et al. Direct detection of Brucella spp. in raw milk by PCR and reverse hybridization with 16S-23S rRNA spacer probes // Appl. Environ. Microbiol. 1996. — V.62(5). — P.1683−1688.
  235. Rojas N., Freer E., Weintraub A. et al. Immunochemical identification of Brucella abortus lipopolysaccharide epitopes // Clin. Diagn Lab Immunol.- 1994,-V. 1(2).-P. 206−213.
  236. Romero C., Pardo M., Grillo M.J. et al. Evaluation of PCR and indirect enzyme-linked immunosorbent assay on milk samples for diagnosis of brucellosis in dairy cattle. // J. Clin. Microbiol. 1995 — V. 33 (12). — P.3198−3200.
  237. Romero C., Gamazo C., Pardo M., Lopez-Goni I. Specific detection of Brucella DNA by PCR //J. Clin. Microbiol. 1995. — V. 33 (3). — P.615−617.
  238. Romero С., Lopez-Goni I. Improwed method for purification of bacterial DNA from bovine milk for detection of Brucella spp. by PCR //Appl. Environ Microbiol. 1999. — V. 65(8). — P.3735−3737.
  239. Ruiz- Bravo A., Jimemez- Valera M. Perspectivas de la microbiolo-gia: El fufuro immediato //Ars pharm. 1996. — Vol. 37. — N 2. — P.171−181.
  240. Sanchez Chaparro M.A., Merida de la Torre F.J., Gonzalez Alegre P., Gonzalez Santos P. Transverse myelitis caused by Brucella //Rev. Clin. Esp. 1999. -Vol.199 (11). -P.778.
  241. Scheu Pia M., Berghof Kornelia, Stahl U. Detection of pathogenic and Spoilage microorganisms in food with the polymerase chain reaction Food Microbiol. 1998. -15, N 1.-P. 13−31.
  242. Schopf K., Khaschabi D. Experiences in the eradication of Brucella ovis infections in sheep in Tyrol // Tierarztl. Prax. Ausg. G Grosstiere Nutztiere. -1997. V.25(5). — P.413−416.
  243. Sifuentes-Rincon A.M., Revol A., Barrera-Saldana H.A.Detection and differentiation of the six Brucella species by polymerase chain reaction // Mol. Med. 1997. — V.3.(ll). -P.734−739.
  244. Silva I., Dangolla A., Kulachelvy K. Seroepidemiology of Brucella abortus infection in bovids in Sri Lanka //Prev. Vet. Med. 2000. — Vol. 3−46(1):51.- P. 9. — Related Articles, Books, LinkOut.
  245. Srulowski K., Iwaniak W., Pilaszek J., Iruszcrynski M., Chrobocin-ska M. Zhe ELISA for examination of hare sera for anti-Brusella antibodies //Compar.Immunol., Microbiol. And Infect.Diseases. 1999. — Vol. 22, — N 1. — P. 33- 40.
  246. Staak C., Draeger A., Bahn P., Dorn C., Ortmann G. Comparison of the results from commercially available Brucella ELISA test kits for the investigation of bovine sera //Berl. Munch Tierarztl. Wochenschr. 1997. — V. 110(6). -P.206−210.
  247. Stahe S.P., Marmonier A., Micoud M.I. Diagnosis of human brucellosis with ELISA //Lancet.-1982, — V. 11, N 8299, — P. 669.
  248. Stavitsky A.B. Haemagglutination and haemagglutination-inhibition reactions with tannic acid and bis-diazotired benzidin- hrotein-conjugated erythrocytes //In: Immunological methods.- Ed. Ackroyd J.F.- Oxford. — 1964.
  249. Sting R., Ortmann G. Erfahrungen mit einfachen ELISA-Testsystemes fur die Brucellose Serologie bei Rind, Schaf und Ziege //Berlin. Und munch. Wochenschr.- 2000. — Vol.113, — N 1. -P. 22−28.
  250. Stone S.S., Patterson J.M., Deyoe B.L. Extraction, separation and partial characterization of Brucella abortus antigens // Amer. J. Vet. Res. 1982. — V. 45, № 1. -P.149−153.
  251. H. (Шторц X.) Иммунофлуоресценция //Иммунологические методы. М.: Медицина, 1987. — С.128−148.
  252. Suares С.В., Pacheco G.A., Vigliocco A.M. Characterisation of Brucella ovis surface antigens // Vet. Microbiol. 1988. — V.18, № 3−4. — P. 349 356.
  253. Sun Т., Zhang Q., Sun Z. Analyze on the epidemiologic characteristics of brucellosis and in Inner Mongolia through rhe observation of the change ammong brucella species //Chung. Hua. Ping Hsueh Tsa. Chin. 1998. — V.19 (5). — P.267−270.
  254. Tabatabai L.B., Deyoe B.L. Biochemical and biological properties of soluble protein preparations from Brucella abortus //3-rd Int. Symp. in Brucellosis Algiers, 18 20 Apr. — 1983, — Basel, 1984, — P. 199 — 211.
  255. Tabatabai L.B., Deyoe B.L. Specific enzyme-linked immunosorbent assay for detection of bovine antibody to Brucella abortus //J. Clin. Microbiol.-1984.-V. 20, N2.-P. 209−213.
  256. Tang Yi Wei, Procop G., Persing D., Molecular diagnostics of infectious diseases //Clin. Chem. 1997. — Vol. 43, — N 11. — P. 2021−2038.
  257. Tcherneva E., Rijpens N., Naydensky C., Herman L. Repetitive element sequence based polymerase chain reaction for typing of Brucella strains //Vet. Microbiol. 1996. — V. 51. N1−2. — P. 169−178.
  258. Tcherneva E., Rijpens N., Jersek В., Herman L.M. Differentiation of Brucella species by random amplified polymorphic DNA analysis //J.- Appl. -Microbiol. 2000. — Vol. 88 (1).- P. 69−80.
  259. Thorpe G., Kricka L. Incorporation of enhanctd chemiliminescent reactions into fully automated enzyme immunoassay //J. Bioiumin. Chemiliemines.- 1989, — V. 3, N 2, — P. 97 100.
  260. Tounkara K., Maiga S., Traore A., Seek B.M., Akakpo A.J. Epidemiology of bovine brucellosis in Mali: serologic investigation and initial isolation of strains of Brucella abortus //Rev. Sci. Tech. 1994. — V.13(3). — V. 777−786.
  261. Tryland M., Kleivane L., Alferdsson A. et al. Evidence of Brucella infection in marine mammals in the North Atlantic Ocean // Vet. Rec. 1999. -V.144(21). — V. 588−592.
  262. Vigliocco A.M., Silva Paulo P. S., Mestre J. et al. Development and validation of an indirect enzyme immunoassay for detection of ovine antibody to Brucella ovis //Vet. Microbiol. 1997. — V. 54, N 3−4. — P. 357−368.
  263. Voller A., Sidwell D.E., Bartlett A., Fleck D.G., Porkns M., Aladehin B. A microplate enzyme immunoassay for toxoplasma antibody //J. Clin. Pathol. 1976. — V. 29, N 2. — P. 150 — 153.
  264. Waites Will M. Principles of rapid testing and a look to the future //Ind. J. Dairy Technol. 1997. — Vol.50. — N 2. — P. 57−60.
  265. Wallach J.C., Miguel S.E., Baldi P.C. Urban outbreak of a Brucella melitensis infection in an Argentine family: clinical and diagnostic aspects //FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1994. — V. 8 (1). — V.49−56.
  266. Warburg O., Christian W. Isolierung und kristalisation des Garug-stermens enjlase // Biochem. Z.-1941, — V.310. -P.384−421.
  267. Weinbach R. Die Verwendbarkeit formolbehandelfer Erythrocyten als Antigentrager in der indirecten Haemagglutinatin. 2 -«Schweiz. Z. Allg. Path." — 1958.-v. 21.-P. 1043.
  268. Weinbach R. Die Verwendbarkeit formolbehandelfer Erythrocyten als Antigentrager in der indirecten Haemagglutinatin. -1 «Schweiz. Z. Allg. Path." — 1959.-v. 22.-P. 1.
  269. Weller Т.Н., Coons A.H. Fluorescent antibody studies with agents of varicella and herpes zoster propagated in vitro // Proc. Soc. Exp. Biol. 1954. -V.86. -P.789−794.
  270. Weston P.D., Devries G.A., Wriggleworth R. Conjugation of enzyme to immunoglobulins using dimallimids //J. Bioch. Biophys. Acta. 1980. -V. 612. — P.40−49.
  271. Westhal O., Luderitz O., Bister F. Veber dia Extraxtion von Bak-terien mit Phenol. Wasser.- «Z. Naurforsch.». — 1952. -Bd. 76, — S. — 148.
  272. Weynants V., Gilson D., Cloeckaert A. et al. Characterization of smooth lipopolysaccharides and О polysaccharides of Brucella species by competition binding assays with monoclonal antibodies //Infect. Immun. 1997. -V. 65, N5.-P. 1939−1943.
  273. Yagupsky P., Peled N., Riesenberg K., Banai M. Exposure of hospital personnel to Brucella melitensis and occurrence of laboratory-acquired disease in an endemic area //Scand .- J.- Infect.- 2000. Vol. 32 (1). P. 5−31.
  274. Young H., Moyes A., De Ste Croix I., McMillian A. A new recombinant antigen latex agglutination test (Syphilis Fast) for the rapid serological diagnosis of syphilis Hint. J. STD AIDS. 1998. — Vol. 9 (4). — P. 196−200.
  275. Yu H. Comparative and electrochemiluminescent immunoassay //J. Immunol. Meth. 1998. — Vol. 218. -N 1−2. -P.l-8.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!