Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Новые иммунобиологические методы для профилактики и лечения вирус-ассоциированных заболеваний

Диссертация: Новые иммунобиологические методы для профилактики и лечения вирус-ассоциированных заболеваний
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Результаты исследования докладывались: на конгрессах XXII (Париж, Франция 7−11 июня 2003), XXVI (Гётеборг, Швеция, 9−13 июня 2007 г.), XXVII (Барселона, Испания, 7−11 июня 2008 г.) Европейской Академии Аллергологии и Клинической Иммунологиина XVIII Конгрессе Всемирной Организации Аллергии (Ванкувер, Канада 7−12 сентября 2003) — на VIII конгрессе РААКИ «Современные проблемы аллергологии… Читать ещё >

Новые иммунобиологические методы для профилактики и лечения вирус-ассоциированных заболеваний (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
  • Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Иммунная система и противовирусная защита
      • 1. 1. 1. Иммунопатогенетические аспекты развития вирусной инфекции в макроорганизме
    • 1. 2. Вирусы и вирус-ассоциированные заболевания
      • 1. 2. 1. Папилломавирусы
      • 1. 2. 2. Респираторные вирусы
        • 1. 2. 2. 1. Эпидемиология
        • 1. 2. 2. 2. Роль респираторных вирусов в формировании сенсибилизации и бронхообструктивной патологии
      • 1. 2. 3. Респираторно-синтициальный вирус
    • 1. 3. Естественные механизмы противовирусной защиты
      • 1. 3. 1. Интерфероны
        • 1. 3. 1. 1. Регуляция продукции IFN-a/p на уровне транскрипции
        • 1. 3. 1. 2. Интерферон-регуляторные факторы
        • 1. 3. 1. 3. Транскрипционные факторы
        • 1. 3. 1. 4. Регуляция экспрессии и продукции интерферонов первого типа
        • 1. 3. 1. 5. Типы клеток, вырабатывающие IFN-a/p
        • 1. 3. 1. 6. Механизмы индукции IFN-a/p
        • 1. 3. 1. 7. Внеклеточные рецепторы
        • 1. 3. 1. 8. Внутриклеточные рецепторы
        • 1. 3. 1. 9. Интерфероны третьего типа
      • 1. 3. 2. Интерференция РНК
        • 1. 3. 2. 1. Механизм интерференции РНК
        • 1. 3. 2. 2. Интеференция РНК и интерфероновый противовирусный ответ
  • Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
    • 2. 1. Получение рекомбинантных ВПЧ HPV 16 и 18, синтез пептидов из белка Е7 HPV 31, тестирование полученных препаратов
      • 2. 1. 1. Штаммы микроорганизмов и плазмиды
      • 2. 1. 2. Среды для культивирования микроогранизмов
      • 2. 1. 3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
      • 2. 1. 4. Обработка ДНК эндонуклеазами рестрикции
      • 2. 1. 5. Электрофорез в агарозном геле
      • 2. 1. 6. Трансформация Е. col
      • 2. 1. 7. Выделение плазмидной ДНК
      • 2. 1. 8. Секвенирование на автоматическом секвенаторе
      • 2. 1. 9. Трансформация Sacch. cerevisiae
      • 2. 1. 10. Выделение вирусоподобных частиц (ВПЧ)
      • 2. 1. 11. Измерение белка по методу Брэдфорд
      • 2. 1. 12. Денатурирующий электрофорез в акриламидном геле (SDS-PAGE)
      • 2. 1. 13. Окраска серебром акриламидных гелей после белкового электрофореза
      • 2. 1. 14. Окраска акриламидных гелей после белкового электрофореза по методу Кумасси
      • 2. 1. 15. Иммуноферментный анализ
      • 2. 1. 16. Анализ белка по методу Вестерн
      • 2. 1. 17. Подтверждение структуры рекомбинантных VLP
      • 2. 1. 18. Синтез пептидов
      • 2. 1. 19. Конъюгаты пептидов с KLH и с полиоксидонием
      • 2. 1. 20. Иммунизация и иммуноферментный анализ
      • 2. 1. 21. Анализ Т-клеточной активности методом ELISPOT
    • 2. 2. Экспрессия и продукция интерферонов первого и третьего типа при респираторной вирусной инфекции in vitro
      • 2. 2. 1. Культивирование человеческих бронхоэпителиальных клеткок и респираторных вирусов
      • 2. 2. 2. Выделение мононуклеарных клеток и инфицирование риновирусом
      • 2. 2. 3. Выделение РНК, обратная транскрипция и Taqman RT-ПЦР
      • 2. 2. 4. Оценки продукции интерферонов и RANTES
    • 2. 3. Исследование противовирусной активности siRNA in vitro и in vivo
      • 2. 3. 1. Культуральный штамм вируса и клеточная линия
      • 2. 3. 2. Экспериментальные животные
      • 2. 3. 3. Основные реактивы, использованные в работе
      • 2. 3. 4. Программное обеспечение и аппаратное оборудование, использованное в работе
      • 2. 3. 5. Культивирование клеток и вируса
      • 2. 3. 6. Трансфекция клеток МА104 siRNA и заражение респираторно-синцитиальным вирусом
      • 2. 3. 7. Контроль трансфекции siRNA
      • 2. 3. 8. Титрование вируса в культуральной жидкости по ЦПД определением конечной точки
      • 2. 3. 9. Определение количества вирусной РНК в культуральной жидкости методом обратной транскрипции и ПНР в реальном времени
      • 2. 3. 10. Концентрирование вируса преципитацией
  • По лиэтиленглико л ем
    • 2. 3. 11. Экспериментальная модель инфекции РСВ на мышах
    • 2. 3. 12. Титрование вируса в смывах из легких мышей
    • 2. 3. 13. Определение количества вирусной РНК в гомогенатах легких мышей методом ОТ и ПЦР-РВ
    • 2. 3. 14. Статистический анализ
  • Глава 3. Результаты собственных исследований
    • 3. 1. Получение рекомбинантных ВПЧ HPV 16 и 18, синтез пептидов из белка Е7 HPV 31, тестирование полученных препаратов
      • 3. 1. 1. Клонирование генов белка L1 папилломавирусов серотипов 16 и
      • 3. 1. 2. Исправление ошибок в плазмидах pUC19-Ll-16 №№
      • 3. 1. 3. Конструирование векторов для экспрессии белка L1 в клетках дрожжей
      • 3. 1. 4. Конструирование целевых экспрессионных систем pPDX2-Ll-16 и pPDX2-Ll
      • 3. 1. 5. Оценка продукции в штаммах-трансформантах 618/pPDX2-Ll-16 №№ 1−4 и 618/pPDX2-Ll-18 №№ 1,
      • 3. 1. 6. Отработка протоколов выделения ВПЧ
      • 3. 1. 7. Секвенирование
      • 3. 1. 8. Получение полностью безошибочной копии гена LI HPV серотипа
      • 3. 1. 9. Препаративное выделение ВПЧ
      • 3. 1. 10. Анализ препаратов
        • 3. 1. 10. 1. Подтверждение структуры VLP
      • 3. 1. 11. Синтез пептидов, отвечающих Т-клеточным эпитопам белка Е7 HPV
      • 3. 1. 12. Конъюгация пептидов с полиоксидонием и гемоцианином, выявление иммуногенности полученных коньюгатов
      • 3. 1. 13. Тестирование иммуногенность рекомбинантных ВПЧ, пептидных антигенов белка Е7 и их комбинаций с адъювантами
        • 3. 1. 13. 1. Анализ Т-клеточного иммунного ответа
    • 3. 2. Экспрессия и продукция интерферонов первого и третьего типа при респираторной вирусной инфекции in vitro
      • 3. 2. 1. Оценка уровня экспрессии и продукции мРНК интерферонов первого и третьего типа при инфицировании бронхоэпителиальных клеток BEAS-2B риновирусом
      • 3. 2. 2. Оценка уровня экспрессии интерферонов первого и третьего типа в человеческих бронхоэпителиальных клетках при инфицировании риновирусами серотипов 16, 1 В и вирусом гриппа А
      • 3. 2. 3. Стимуляция экспрессии интерферонов первого и третьего типа в человеческих бронхоэпителиальных клетках не зависит от типа клеточного рецептора, но зависит от репликации вируса
      • 3. 2. 4. Оценка уровня экспрессии интерферонов первого и третьего типа в человеческих бронхоэпителиальных клетках при инфицировании вирусом гриппа А
      • 3. 2. 5. Оценка уровня экспрессии и продукции а-, р и А,-интерферонов в мононуклеарных клетках, инфицированных риновирусом
    • 3. 3. Исследование противовирусной активности siRNA in vitro и in vivo
      • 3. 3. 1. Изучение генома РСВ
      • 3. 3. 2. Дизайн siRNA против мРНК белка Р респираторного синцитиального вируса
      • 3. 3. 3. Оценка антивирусной активности siRNA против мРНК белка Р респираторного синцитиального вируса в культуре клеток
        • 3. 3. 3. 1. Микроскопическая оценка состояния зараженных вирусом клеток, обработанных специфическими и неспецифическими siRNA
        • 3. 3. 3. 2. Оценка противовирусной активности siRNA методом титрования siO
        • 3. 3. 3. 3. Оценка противовирусной активности siRNA путем определения в культуральной жидкости количества вирусной РНК методом ПЦР в реальном времени
      • 3. 3. 4. Оценка антивирусной активности siRNA против мРНК белка Р респираторного синцитиального вируса в экспериментальной модели инфекции на мышах
        • 3. 3. 4. 1. Титрование вируса в бронхоальвеолярных смывах их легких мышей и патологоанатомическая оценка состояния легких
        • 3. 3. 4. 2. Определение количества вирусной РНК в гомогенатах легких методом ПЦР в реальном времени
      • 3. 3. 5. Выявление наиболее эффективных siRNA против мРНК белка

Актуальность проблемы.

Рост заболеваемости социально-значимыми инфекционными болезнями, такими как туберкулёз, вирусные гепатиты, появление новых инфекций: ВИЧ, птичий грипп, вирус атипичной пневмонии свидетельствуют о том, что классические технологии, разработанные Пастером, не позволяют эффективно бороться с указанными заболеваниями.

Несмотря на то, что за последние годы была разработана эффективная противовирусная терапия для многих вирусных инфекций, количество вирус-ассоциированных заболеваний, остается высоким. Рак шейки матки, связанный с персистирующей инфекцией вирусом папилломы человека (HPV) — один из самых распространенных и опасных видов злокачественных новообразований у женщин во всем мире. Из 10 миллионов новых случаев онкологических заболеваний, регистрируемых во всём мире ежегодно, примерно 15% случаев ассоциированы с инфекционными агентами. HPV ответственен за 30% данных злокачественных новообразований (5% от общего числа раковых заболеваний). По данным ВОЗ каждый год в мире диагностируется около 500 ООО новых случаев рака шейки матки, который занимает второе место в мире как причина смерти от рака среди женщин. На сегодняшний день, по крайней мере, 700 миллионов человек являются носителями HPV-инфекции, а количество летальных исходов, связанных с HPV-инфекцией, достигает 280 тысяч в год [8, 11].

Наиболее частыми, до 90% всех случаев инфекционных заболеваний, являются острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ). В России ежегодно регистрируется от 27,3 до 41,2 млн. случаев этих заболеваний [19].

ОРВИ наносят огромный экономический ущерб за счет затраты больших средств на лечение как самого заболевания, так и вызванных им осложнений, кроме того эти вирусы поражают молодое трудоспособное население. Поэтому создание новых методов лечения этих заболеваний привело бы как к своевременному назначению специфической терапии, так и к предотвращению заражения и распространения вирусной инфекции.

Респираторно-синцитиальная вирусная инфекция (РСВ) — одна из главных причин тяжелых заболеваний верхних и нижних дыхательных путей у новорожденных и детей раннего возраста. Инфекция РСВ у новорожденных сопряжена с высокой смертностью, что во многом связано с недостатком эффективных лекарственных средств. Ежегодно в мире в результате заболеваний нижних дыхательных путей, связанных с РСВ, умирает несколько миллионов детей младше 5 лет. РСВ вызывает инфекцию нижних дыхательных путей в примерно 40% случаев первичного инфицирования. Показано, что РСВ является основной причиной заболеваемости и смертности у пожилых людей, взрослых и детей с ослабленным иммунитетом. Кроме того, РСВ инфекция, перенесенная в детском возрасте, приводит к развитию гиперчувствительности дыхательных путей у детей и формированию бронхиальной астмы в дальнейшей жизни [83, 112, 116, 118].

Очевидно, что повсеместная распространённость вирусной инфекции, а также тяжесть заболеваний, ассоциированных с различными вирусами диктует необходимость поиска новых средств для профилактики и лечения данных заболеваний.

Имеющиеся на сегодняшний день подходы к терапии вирусных инфекций не достаточно эффективны. Применяемая в настоящее время специфическая антиретровирусная терапия не излечивает больного и не удаляет ВИЧ из организма хозяина. Для лечения РСВ применяется прежде всего симптоматическая терапия. Рекомбинантная человеческая ДНКаза в виде аэрозоля (Pulmozyme) показала недостаточную эффективность. В 1980;х и до середины 1990;х годов активно в качестве средства специфического лечения РСВ-инфекции использовался рибавирин (Virazole). Но более поздние исследования поставили под сомнение эффективность этого препарата, в связи, с чем встал вопрос о целесообразности его применения.

Эффективной вакцины против РСВ в настоящее время не существует. Первые попытки создать вакцину от РСВ в 1960;е годы оказались неудачными. Вакцина сенсибилизировала детей к РСВ, в 80% случаев приводила к развитию тяжелых осложнений, таких как пневмония и бронхиолит, приведших к госпитализации и даже гибели 2 детей из вакцинированной группы. Вакцины, созданные спустя 30 лет, также не были эффективны по разным причинам: одни вызывали острую РСВ-инфекцию, другие оказывали отсроченное вирулентное действие, либо были столь ослаблены, что не приводили к созданию адекватного иммунного ответа [209].

Крупнейшие фармацевтические фирмы Merck и GlaxoSmithKline разработали и вывели на мировой рынок профилактические вакцины против ВПЧ. Данные вакцины обеспечивают высокий уровень защиты от инфицирования наиболее распространёнными и опасными типами HPV. Однако данные вакцины не обладают высоким терапевтическим потенциалом и являются крайне дорогостоящими.

Таким образом, актуальность проблемы заключается в необходимости разработать принципиально новые подходы к конструированию лечебно-профилактических средств для профилактики и лечения вирус-ассоциированных заболеваний.

Цель исследования: разработать новые подходы для создания средств профилактики и лечения вирус-ассоциированных заболеваний.

Задачи исследования: 1. Получение дрожжевых репликативных плазмид, предназначенных для экспрессии белка L1 папилломавируса человека серотипов 16 и 18 в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Отработка протоколов выделения ВПЧ в количестве необходимом для исследования. Тестирование иммуногенности рекомбинантных белков L1 ВПЧ in vivo на мышах.

2. Идентификация консервативных иммунодоминантных эпитопов белков HPV L1 и Е7 серотипов вируса 16, 18 и 31. Синтез и очистка пептидов, имитирующих иммунодоминантные эпитопы белков L1 и Е7. Тестирование иммуногенности синтезированных пептидов в опытах на мышах.

3. Конъюгирование и комбинирование полученных пептидов с иммуномодуляторами. Определение уровня иммуногенности созданных комбинаций in vivo.

4. Изучение вирус-индуцированной экспрессии и продукции интерферонов первого и третьего типа in vitro. Выявление основного типа интерферонов, продуцируемых эпителиальными клетками при ОРВИ.

5. Изучение генома респираторного синцитиального вируса.

6. Дизайн siRNA против мРНК белка Р респираторного синцитиального вируса.

7. Оценка антивирусной активности siRNA против мРНК белка Р респираторно-синцитиального вируса in vitro в культуре клеток.

8. Оценка антивирусной активности siRNA против мРНК белка Р респираторно-синцитиального вируса in vivo на мышах.

9. Выявление наиболее эффективных siRNA против мРНК белка Р респираторно-синцитиального вируса.

Научная новизна.

Впервые в мире показано, что интерфероны третьего типа являются основными интерферонами, продуцируемыми клетками респираторного эпителия при ОРВИ.

Впервые в Российской Федерации созданы дрожжевые штаммы-продуценты, способные экспрессировать рекомбинантные капсидные белки LI HPV вирусных серотипов 16, 18 в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ). Впервые разработана технология выделения ВПЧ из дрожжевых экстрактов.

Были получены пептиды длиной от 9 до 35 аминокислот, представляющие собой фрагменты трансформирующего белка Е7 HPV серотипов 16 и 31 (Т-эпитопы, как основа терапевтических композиций), а также фрагменты L1 HPV16 (иммунодоминантные Ви Т-эпитопы). Полученные данные свидетельствуют о том, что рекомбинантные ВПЧ индуцируют высокий уровень гуморального иммунного ответа. Свободные рекомбинантные ВПЧ и пептиды из белка Е7 в сочетании с иммуномодуляторами активировали клеточный иммунный ответ. Таким образом, впервые в Российской Федерации получены препараты, имеющие профилактический и терапевтический потенциал в отношении HPVинфекции.

Впервые в Российской Федерации экспериментально изучена возможность использования средств на основе siRNA против вирусов in vitro и in vivo.

Проведен дизайн siRNA против мРНК белка Р респираторно-синцитиального вируса, были спроектированы 6 уникальных экспериментальных образцов siRNA, получивших рабочие названия siOl, si03, si05, si07, si09 и sill, нацеленных к различным участкам мРНК белка Р РСВ в пределах открытой рамки считывания.

На модели РСВ-инфекции в культуре клеток МА104 была проведена оценка противовирусного действия экспериментальных образцов siRNA. Подобранные специфические siRNA эффективно подавляли репродукцию респираторно-синцитиального вируса в культуре клеток.

Впервые в Российской Федерации экспериментальные образцы siRNA проявили противовирусную активность in vivo. Причём полученные в эксперименте на мышах данные подтвердили данные, полученные в культуре клеток.

Таким образом, впервые в Российской Федерации проведенные исследования in vitro и in vivo продемонстрировали противовирусную активность испытанных экспериментальных образцов по снижению репликации респираторно-синцитиального вируса, одного из главных этиологических факторов вирус-индуцированной бронхиальной астмы, что дает возможность для создания специфических противовирусных средств на основе механизма интерефернции РНК.

Практическая значимость.

На сегодняшний день в мире не существует лекарственных средств для эффективной элиминации вирусов из организма человека и лечения социально-значимых вирус-ассоциированных заболеваний. Для решения этой проблемы в данной работе были показаны различные подходы к созданию лечебно-профилактических противовирусных средств.

Разработка предложенных в работе антивирусных препаратов имеет стратегическое значение для Российской Федерации. Так в эпоху биотерроризма респираторные вирусы, ввиду своей способности быстро инфицировать большое количество людей и вызывать смертельно опасные заболевания, несут в себе огромную опасность для населения нашей страны. Наличие высокоспецифичных и высокоэффективных противовирусных средств, основанных на миРНК, позволит оптимизировать профилактику и лечение состояний, ассоциированных с РСВ.

Кроме того, крайне перспективным представляется экономический эффект от коммерциализации противовирусных препаратов. По данным журнала «Forbes» в США продажи антивирусных препаратов за 2007 год составили 10,6 миллиарда долларов. По прогнозам экспертов из консалтингового агентства Business Communications рост продаж антивирусных препаратов в ближайшие 3 года должен составить около 40%.

По данным ЦМИ Фармэксперт за 2006 год в России объём продаж системных противовирусных препаратов составил 5,37% (4-ое место) от общего объёма продаж лекарственных средств, а по темпам прироста продаж по сравнению с 2005 годом — 62% занял первое место со значительным отрывом от группы препаратов сердечной терапии.

На сегодняшний день существует потребность в создании эффективной противовирусной терапии для предотвращения и лечения состояний и заболеваний, связанных с вирусной инфекцией. Возможность использования предложенных методик в качестве эффективных специфических противовирусных средства, безусловно, должна реализоваться в разработке надежных, безопасных и не дорогих противовирусных терапевтических препаратов.

Положения, выносимые на защиту:

1. Отработаны протоколы выделения ВПЧ. Препараты ВПЧ из белков L1 HPV серотипов 16 и 18 наработаны в количестве необходимом для анализа. Анализ препаратов методами визуализации в геле, иммуноферментными методом при помощи специфических антител, а также методом электронной микроскопии позволил сделать вывод о соответствии полученных частиц искомым вирусоподобным частицам.

2. Полученные препараты ВПЧ из белков LI HPV серотипов 16 и 18 являются высокоиммуногенными антигенами.

3. Выбранные участки аминокислотных последовательностей внутреннего белка Е7 ВПЧ 16 и 31 соответствуют Т-клеточным эпитопам ВПЧ. Синтезированные пептиды обладают специфическими иммуногенными свойствами при использовании с иммуностимулирующими препаратами.

4. Комбинированное использование полученных вирусоподобных частиц, состоящих из белка Lie пептидами, имитирующими Т-клеточные эпитопы белка Е7, перспективно в контексте создания лечебно-профилактической вакцины против вируса папилломы человека.

5. Интерфероны третьего типа являются основными факторами противовирусной защиты респираторного эпителия.

6. Белок Р является успешной мишенью для эффективного подавления РСВ при помощи siRNA. siRNA к мРНК белка Р респираторно-синцитиального вируса эффективно снижает репликацию РСВ in vitro и in vivo.

7. siRNA может использоваться в качестве специфического противовирусного средства, не влияющего на нормально протекающие процессы в клетке.

8. siRNA может применяться в качестве противовирусного средства без специальных средств доставки в чистом виде при эндотрахеальном и ингаляционном введении, что может быть использовано при создании лечебно-профилактических средств против респираторных вирусов.

9. Описана возможность создания эффективного лекарственного средства против РСВ, одного из основных этиологических факторов вирус-индуцированной бронхиальной астмы, с использованием механизма интерференции РНК.

Апробация работы.

Результаты исследования докладывались: на конгрессах XXII (Париж, Франция 7−11 июня 2003), XXVI (Гётеборг, Швеция, 9−13 июня 2007 г.), XXVII (Барселона, Испания, 7−11 июня 2008 г.) Европейской Академии Аллергологии и Клинической Иммунологиина XVIII Конгрессе Всемирной Организации Аллергии (Ванкувер, Канада 7−12 сентября 2003) — на VIII конгрессе РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, Россия, 27−29 июня 2007 г.) — на 1-м Международном конгрессе «Иммунитет и болезни: От теории к терапии» (Москва, Россия, 3−7 октября 2005 г.) на 2-м Международном конгрессе «Иммунитет и болезни: От теории к терапии» (Москва, Россия, 10−14 сентября 2007 г.) — на конгрессах Американской Академии Аллергологии, Астмы и Иммунологии (Сан Диего, США, 23−27 февраля 2007 г.) и (Филадельфия США, 14−18 Марта 2008 г.) — на ежегодном съезде Американского Колледжа Аллергологии, Астмы и Иммунологии (Даллас, США, 8−14 ноября 2007 г.).

Часть вошедших в диссертацию материалов представлена в работе, которой присуждена премия Правительства Российской Федерации за 2007 год в области науки и техники.

Основные результаты диссертационной работы отражены в 33 публикациях, в ведущих рецензируемых научных журналах, в том числе в 21 отечественном журнале и 12 зарубежных изданиях.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа построена по традиционному плану, изложена на 220 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, разделов, описывающих материалы и методы исследований, результаты, обсуждения полученных результатов и выводов. Диссертация иллюстрирована 16 таблицами, 39 рисунками, включая фотографии. Список использованной литературы включает 250 источников, из них 20 отечественных и 230 зарубежных.

выводы.

1. Получены дрожжевые репликативные плазмиды, предназначенные для экспрессии белка L1 папилломавируса человека серотипов 16 и 18 в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae.

2. Отработаны протоколы выделения ВПЧ. Препараты ВПЧ из белков L1 HPV серотипов 16 и 18 наработаны в количестве 1,5 мг. Анализ препаратов методами визуализации в геле, иммуноферментными методом при помощи специфических антител, а также методом электронной микроскопии доказал соответствие полученных в работе частиц искомым вирусоподобным частицам.

3. Препараты ВПЧ из белков LI HPV серотипов 16 и 18 являются высокоиммуногенными препаратами.

4. Проанализированы аминокислотные последовательности внутреннего белка Е7 ВПЧ 16 и 31. Выбраны участки, соответствующие Т-клеточным эпитопам ВПЧ. Синтезированные пептиды обладали специфическими иммуногенными свойствами при использовании с иммуностимулирующими препаратами.

5. Комбинированное использование полученных вирусоподобных частиц, состоящих из белка L1, с пептидами, имитирующими Т-клеточные эпитопы белка Е7, перспективно в контексте создания лечебно-профилактической вакцины против вируса папилломы человека.

6. Интерфероны третьего типа являются основными интерферонами, продуцируемыми клетками респираторного эпителия при вирусной инфекции.

7. Белок Р является успешной мишенью для эффективного подавления РСВ при помощи siRNA. siRNA к мРНК белка Р РСВ эффективно снижает репликацию респираторно-синцитиального вируса in vitro в культуре клеток.

8. siRNA к мРНК белка Р респираторно-синцитиального вируса эффективно снижает репликацию РСВ in vivo на мышах. Экспериментальные данные, полученные in vitro, подтверждены in vivo.

9. Выявлены наиболее эффективные siRNA против мРНК белка Р респираторно-синцитиального вируса. siRNA обладает специфическим действием, не оказывает влияния на уровень транскрипции других белков.

10. siRNA может использоваться в качестве специфического противовирусного средства, не влияющего на нормально протекающие процессы в клетке.

11. siRNA может применяться в качестве противовирусного средства без специальных средств доставки в чистом виде при эндотрахеальном и ингаляционном введении, что может быть использовано при создании лечебно-профилактических средств против респираторных вирусов.

12. Использование siRNA в качестве противовирусного средства представляется сравнительно простой и недорогой методикой, требующей лишь выбора белка-мишени вируса, знания методики дизайна siRNA и синтеза олигонуклеотидов, который в настоящее время стал доступен.

13. Теоретически обоснован и экспериментально подтверждён метод создания эффективного лекарственного средства против РСВ, одного из основных этиологических факторов вирус-индуцированной бронхиальной астмы, с использованием механизма интерференции РНК.

Показать весь текст

Список литературы

  1. И.И. Бронхиальная астма у детей. М., Медицина, 2003, с. 320 .
  2. М.Н., Алексеев Л.П. HLA и естественный отбор. Гипотеза «преимущества функциональной гетерозиготности». Иммунология, 2006, т. 27, № 3, с. 172−176.
  3. Л.Б., Смирнова A.M., Фрейдлин И. С. и др. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., Медицина, 1994, с. 528.
  4. В.А., Балаболкин И. И., Сенцова Т. Б. Респираторная вирусная инфекция у детей и подростков с аллергической патологией. Детские инфекции, 2005, № 4, с.17−24.
  5. Ф.И., Киселев О. И. Интерфероны и их индукторы. М.,"Гэотар-Медиа", 2005, с. 356.
  6. А.Н., Пичугина JI.B., Олиферук Н. С., Львов В. Л., Пинегин Б. В. Иммунология, 2005, № 1, с. 12−16.
  7. В.И., Киселёв О. И. Вирусы папилломы человека в развитии рака шейки матки. СПб.: Изд-во «Роза мира», 2003, 92 с.
  8. В.И., Пухнер А. Ф. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий. Руководство для врача. М., ИИД «Филин», 1997, с. 536.
  9. Ю.Мейхи Б. Вирусология. Методы. М., Мир, 1988, с. 344.
  10. П.Петров Р. В., Хаитов М. Р., Андреев С. М., Беневоленский С. В., Смирнова О. В. Иммуногенные свойства рекомбинантных и синтетических пептидов вируса папилломы человека. Доклады Академии Наук, 2008, том 421, № 2, с. 267−273.
  11. Е.В., Мельникова Г. И., Ромахов В. Н., Банников Г. С. Опыт лечения папилломатоза гортани у детей. Новости оториноларингологии и логопедии, 1997, № 3, с. 65.
  12. В.И. Некоторые дискуссионные проблемы аллергологии. И. Взгляд на бронхиальную астму и атопию. Часть I. Российский аллергологический журнал, 2006, № 6, с.42−58.
  13. М.Г., Ф.И. Ершов, О.Г. Шульдяков£ Сравнительная профилактическая и фармакоэкономическая эффективность противовирусных препаратов при острых респираторных заболеваниях. Санкт-Петербург, 2004, с. 38.
  14. Е.П. Современные подходы к профилактике и лечению острых респираторных вирусных инфекций. Русский медицинский журнал, 2001, № 9 (21), с. 960−962.
  15. А.С. Толл-белки: специфические рецепторы неспецифического иммунитета. Иммунология, 2005, № 6, с.368−376.
  16. С. А., Счетчикова О. С., Яковлева Н. В. Обострение неаллергической поздней астмы, индуцированное респираторной инфекцией. Пульмонология, 2005, № 1, с. 53−57.
  17. М. Р., Алексеев Л. П., Трофимов Д. Ю., Болдырева М. Н., Петрова Т. В., Яковлева К. П. Изучение роли респираторных вирусов в этиологии и патогенезе бронхиальной астмы. // Иммунология. 2003. -Т. 24, № 2. С. 96−99.
  18. А.А., Донецкова А. Д. Естественные регуляторные Т-клетки и фактор FOXP3. Иммунология, 2006, т. 27, № 3, с. 176−184.
  19. Ahmad-Nejad, P., Hacker, H., Rutz, M., Bauer, S., Vabulas, R.M., And Wagner, H. Bacterial CpGDNA and lipopolysaccharides activate toll-like receptors at distinct cellular compartments. Eur. J. Immunol., 2002, v. 32, p. 1958−1968.
  20. Ahmed R., Morrison L.A., Knipe D.M. Persistence of viruses. In Fields virology. B.N. Fields, D.M. Knipe, P.M. Howley, editors. Lippincott Williams & Willdns. Philadelphia, Pennsylvania, USA, 1996, p. 219−249.
  21. Alberico S., Pinzano R., Comar M. et al. Maternal-fetal transmission of human papillomavirus. Minerva Ginecol1996, v.48(5), p. 199−204.
  22. Alexopoulou L., Holt A.C., Medzitov R., Flavell R.A. Recognition of double-stranded RNA and activation of NF-kappaB by toll-like receptor 3. Nature, 2001, v. 413, p.732−738.
  23. Aim, J. S., Lilja G., Pershagen G., Scheynius A. Early BCG vaccination and development of atopy. Lancet, 1997, v. 350, p. 400−403.
  24. Au W.C., Pitha P.M. Recruitment of multiple interferon regulatory factors and histone acetyltransferase to the transcriptionally active interferon a promoters. J. Biol. Chem., 2001, v. 276, p.41 629^11637.
  25. Au W.C., Moore P.A., Lafleur D.W., Tombal В., Pitha P.M. Characterization of the interferon regulatory factor-7 and its potential role in the transcription activation of interferon-A genes. J. Biol. Chem., 1998, v. 273, p. 29 210−29 217.
  26. Au W.C., Yeow W.S., Pitha P.M. Analysis of functional domains of interferon regulatory factor 7 and its association with IRP-3. Virology, 2001, v. 280, p.273−282.i
  27. Azevedo A.M., Durigon E.L., Okasima V. Detection of influenza, parainfluenza, adenovirus and respiratory syncytial virus during asthma attacks in children older than 2 years old. Allergol Immunopathol (Madr), 2003, v. 31, p. 311−317.
  28. Barchet W., Cella M., Odermatt В., Asselin-Paturel C., Colonna M., Kalinke U. Virus-induced interferon alpha production by a dendritic cell subset in the absence of feedback signaling in vivo. J. Exp. Med., 2002, v. 196, p. 507−516.
  29. Barnes B.J., Kellum M.J., Field A.E., Pitha P.M. Multiple regulatory domains of IRF-5 control activation, cellular localization, and induction of chemokines that mediate recruitment of T lymphocytes. Mol. Cell. Biol., 2002, v. 22, p. 5721−5740.
  30. Barnes B.J., Moore P.A., Pitha P.M. Virus specific activation of a novel interferon regulatory fetor, IRF-5, results in the induction of distinct interferon alpha genes. Journal of Biol.Chem., 2001, v. 276, p. 2 338 223 390.
  31. Barton, G.M., Medzhitov, R. Toll-like receptor signaling pathways. Science, 2003, v. 300, p. 1524−1525.
  32. Bennett C.F., Cowsert L.M. Application of antisense oligonucleotides for gene fiinctionalization and target validation. J. Curr. Opin. Mol. Ther., 1999, v. l, p.359.
  33. Bernstein E., Caudy A. A., Hammond S. M. et al. Role for a bidentate ribonuclease in the initiation step of RNA interference. Nature, 2001, v. 409, p. 363−366.
  34. Binetruy В., Smeal Т., Karin M. Ha-Ras augments c-Jun activity and stimulates phosphorylation of its activation domain. Nature, 1991, v. 351, p. 122−127.
  35. Birnboim H. C., Doly J. A rapid alkaline eatraction procedure for screening recombinant plasmid DNA. Nucleic Acids Res., 1979, v. 7, p. 1513 1523.
  36. Biron, C.A. Interferons alpha and beta as immune regulators— a new look. Immunity, 2001, v. 14, p. 661−664.
  37. Bitko V, Barik S. Phenotypic silencing of cytoplasmatic genes using sequence-specific double-stranded short interfering RNA and its application in the reverse genetics of wild type negative-strand RNA viruses. BMC Microbiol, 200 l, v. l, p.34.
  38. Bitko Vira, Musienko Alia, Shulyeva Olena, Barik Sailen. Inhibition of respiratory viruses by nasally administered siRNA. Nature Medicine. 2005, v. 11, № 1, p.50 55.
  39. Bitko Vira, Musiyenko Alia, Barik Sailen. Viral Infection of the Lungs through the Eye. J. Virol, 2007, p. 783−790.
  40. Bjorck, P. Isolation and characterization of plasmacytoid dendritic cells from Flt3 ligand and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-treated mice. Blood 2001, v. 98, p. 3520−3526.
  41. Boxman I.L., Hogowoning A., Mulder L.H. et al. Detection of human papillomavirus types 6 and 11 in pubis and perianal hair from patients with genital warts. J Clin Microbiol., 1999, v. 37(7), p. 2270−2273.
  42. Busse WW. The role of respiratory viruses in asthma. In: Holgate S, ed. Asthma: physiology, immunopharmacology, and treatment. London: Academic Press, 1993, p. 345−352.
  43. Campbell M.J., Holgate S.T., Johnston S. L. Trends in asthma mortality. Br. Med. J., 1997, v. 315, p. 1012.
  44. Caplen N.J., Parrish S., Imani F., Fire A., Morgan R.A. Specific inhibition of gene expression by small double-stranded RNAs in invertebrates and vertebrate systems. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2001, v. 98, p. 9746−9747.
  45. Capobianchi, M.R., Malavasi, F., Di Marco, P., Dianzani, F. Differences in the mechanism of induction of interferon-alpha by herpes simplex virus and herpes simplex virus-infected cells. Arch. Virol., 1988, v. 103, p. 219−229.
  46. Chi, J.-T., Chang, H. Y., Wang, N. N., Chang, D. S., Dunphy, N., Brown, P. O. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, v. 100, p.6343−6346.
  47. Chu W.M., Ostertag D., Li Z.W., Chang L., Chen Y., Hu Y., Williams В., Perrault J., Karin M. JNK2 and IKbeta are required for activating the innate response to viral infection. Immunity, 1999, v. 11, p. 721−731.
  48. Clavell, L.A., Bratt, M.A. Relationship between the ribonucleic acid synthesizing capacity of ultraviolet-irradiated Newcastle disease virus and its ability to induce interferon. J. Virol., 1971, v.8, p.500−508.
  49. Cogoni C., Macino G. Post-transcriptional gene silencing across kingdoms. Genes Dev, 2000, v. 10, p. 638−643.
  50. Collins PL. The molecular biology of human respiratory syncytial virus (RSV) of the genus Pneumovirus. In The Paramyxoviruses, Kingsbury DW (ed.). Plenum Press: New York and London, 1991, p. 103−162.
  51. Cypcar D., W.W. Busse. Role of viral infections in asthma. Immunol. Allergy Clin. North Am., 1993, v.13, p. 745−766.
  52. Dakhama A., Park J.-W., Taube C., et al. The role of virus-specific Immunoglobulin E in airway hyperresponsiveness. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 2004, v 170. p. 952−959.
  53. Der, S.D., Lau, A.S. Involvement of the doublestranded- RNA-dependent kinase PKR in interferon expression and interferon-mediated antiviral activity. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, v.92, p.8841−8845.
  54. Deunas L., Alcantud V., Alvares F. et al. Use of interferon-a in laryngeal papillomatosis: eight years of the Cuban national programme. J Laryngol, 1997, v. U 1(2), p. 134−140.
  55. Diebold, S.S., Kaisho, Т., Hemmi, H., Akira, S., Reis, E.S. Innate antiviral responses by means of TLR7- mediated recognition of single-stranded RNA. Science, 2004, v. 303, p. 1529−1531.
  56. Duff A. L., Pomeranz E. S., Gelber L. E., et al: Risk factors for acute wheezing in infants and children: viruses, passive smoke, and IgE antibodies to inhalant allergens. Pediatrics, 1993, v. 92, p. 535−540.
  57. Elbashir S.M., Harborth J., Lendeckel W., Yalcin A., Weber K., Tuschl T. Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells. Nature, 2001, v. 411, p. 494−498.
  58. Elbashir S.M., Lendeckel W., Tuschl T. RNA interference is mediated by 21- and 22-nucleotide RNAs Genes Dev, 2001, v. 15(2), p. 188−200.
  59. Elbashir S.M., Martinez J., Patkaniowska A., Lendeckel W., Tuschl T. Functional anatomy of siRNA for mediating efficient RNAi in Drosophila melanogaster embryo lysate. EMBO J., 2001, v. 20, p. 6877−6888.
  60. Eloranta, M.L., Aim, G.V. Splenic marginalmetallophilic macrophages and marginal zone macrophages are the major interferon-alpha/beta producers in mice upon intravenous challenge with herpes simplex virus. Scand. J. Immunol., 1999, v. 49, p. 391−394.
  61. Eloranta, M.L., Sandberg, K., Aim, G.V. The interferon-alpha/beta responses of mice to herpes simplex virus studied at the blood and tissue level in vitro and in vivo. Scand. J. Immunol., 1996, v. 43, p. 356−360.
  62. Erlandsson L., Blumenthal R., Eloranta M.L., Engel H., Aim G., Weiss S., Leanderson T. Interferon-beta is required for interferon-alpha production in mouse fibroblasts. Curr. Biol., 1998, v. 8, p. 223−226.
  63. Fahey M.T., Irwig L., Macaskill P. Meta-analysis of PAP test accuracy. American J. of Epidemiology, 1995, v.141, p.680−689.
  64. Fearns R., Collins P.L. Role of the M2−1 transcription antitermination protein of respiratory syncytial virus in sequential transcription. J Virol, 1999, v.73, p. 5852−5864.
  65. Fields В, Knipe DM, Howley PM. Virology 5rd Ed., Lippincott Wiliams& Wilkins, 2007.
  66. Finberg R.W., Kurt-Jones E.A. Viruses and Toll-like receptors. Microbes Infect., 2004, v.6, p.1356−1360.
  67. Fire A., Xu S., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mello C.C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature, 1998, v. 391, p. 806−811.
  68. Fitzgerald K.A., McWhirter S.M., Faia K.L., Rowe D.C., Latz E., Golenbock D.T., Coyle A.J., Liao S.M., Maniatis T. IKKepsilon and TBK1 are essential components of the IRF3 signaling pathway. Nat. Immunol., 2003, v. 4, p.491−496.
  69. Fitzgerald, K.A., Rowe, D.C., Barnes, В J., Caffrey, D.R., Visintin, A., Latz, E., Monks, В., Pitha, P.M., Golenbock, D.T. LPS-TLR4 signaling to IRF-3/7 and NF-B involves the toll adapters TRAM and TRIF. J. Exp. Med., 2003, v. 178, p.1043−1055.
  70. Fitzgerald-Bocarsly, P. Human natural interferon-alpha producing cells. Pharmacol. Ther., 1993, v. 60, p. 39−62.
  71. Folkerts G., Busse W.W., Nijkamp F.P. et al. Virus-induced Airway Hyperresponsiveness and Asthma. Am. J. .Respir. Crit. Care Med., 1998, v. 157(6), p. 1708−1720.
  72. Gehlhar К., C. Bilitewski, K. Reinitz-Rademacher, G. Rohde and A. Bufe. Impaired virus induced IFN-alpha release in adult asthmatic patients. Clin. Exp. Allergy, 2006, v.36, p.331−337.
  73. Geiss G., Jin G., Jinjiao Guo, Roger Bumgarner, Michael G. Katze, and Ganes C. Se. A comprehensive view of regulation of gene expression by double-stranded RNA-mediated cell signaling. J Biol Chem, 2001, v.276, p.30 178−30 182.
  74. Gern J.E., Lemanske R.F. Infectious triggers of pediatric asthma. Pediatr Clin North Am., 2003, v. 50(3), p. 555−575.
  75. Govan V. A. Strategies for human papillomavirus therapeutic vaccines and other therapies based on the E6 and E7 oncogenes. Ann. N.Y. Acad. Sci., 2005, v. 1056, p.328−343.
  76. Greenberg S.B. Respiratory viral infection in high-risk patients. Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2004, v. 170, p. l 142−1143.
  77. Grishok A., Tabar H., Mello C.C. Genetic requirements for inheritance of RNAi in C. elegans. Science, 2000, v. 287, p. 2494−2497.
  78. Grissell Т. V., Powell PI., Shafren D. R. et al. Interleukin-10 Gene Expression in Acute Virus-induced Asthma. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 2005, v. 172, p. 433−439.
  79. Guo S, Kempheus K.J. Par-1, a gene required for establishing polarity in C. elegans embryos, encodes a putative Ser/Thr kinase that is asymmetrically distributed. Cell, 1995, v.81, p. 611−620.
  80. Gupta S., Cambell D., Derijard В., Davis R.J. Transcription factor ATF2 regulation by the JNK signal transduction pathway. Science, 1995, v. 267, p.389−393.
  81. Hammond S.M., Caudy A.A., Hannon G.J. Post-transcriptional gene silencing by double-stranded RNA. Nature Rev Gen, 2001, v.2, p. 110−119.
  82. Hata, N., Sato, M., Takaoka, A., Asagiri, M., Tanaka, N., Taniguchi, T. Constitutive IFNalpha/ beta signal for efficient IFN-alpha/beta gene induction by virus. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2001, v. 285, p. 518−525.
  83. Hutvagner G., McLachlan J., Pasquinelli A.E., Balint E., Tuschl Т., Zamore P.D. A cellular function for the RNA-interference enzyme Dicer in the maturation of the let-7 small temporal RNA. Science, 2001, v. 293(5531), p.834−838.
  84. Jartti Т., Lehtinen P., Vuorinen T. et al. Respiratory picornaviruses and respiratory syncytial virus as causative agents of acute expiratory wheezing in children. Emerg Infect Dis, 2004, v. 10, p. 1095−1101.
  85. Jindal, S., Malkovsky, M. Stress responses to viral infection. Trends Microbial., 1994, v. 2, p. 89−91.
  86. Johnston S. L. and D. A. Tyrrell. In E. H. Lennette and N. J. Schmidt (ed.), Diagnostic procedures for viral, rickettsial and chlamydial infections. American Public Health Association, Washington, D.C. 1995, Rhinoviruses, p. 253−263.
  87. Johnston S. L., A. Papi, P. J. Bates, J. G. Mastronarde, M. M. Monick and G. W. Hunninghake. Low grade rhinovirus infection induces a prolonged release of IL-8 in pulmonary epithelium. The Journal of Immunology, 1998, v. 160, p. 6172−6181.
  88. Johnston S. L, Bardin P. G, Pattemore P.K. Viruses as precipitants of asthma symptoms. III. Rhinoviruses: Molecular biology and prospects for future intervention. Clin Exp Allergy, 1993- v. 23 (4), p. 237−246.
  89. Johnston S.L. Overview of virus-induced airway disease. Proc. Am. Thorac Soc., 2005, v. 2(2), p. 150−156.
  90. Johnston S.L. Viruses and asthma. Allergy, 1998, v. 53 (10), p. 922−932.
  91. Johnston, S. L., Pattemore P. K, Sanderson G. et al. Community study of role of viral infections in exacerbations of asthma in 9−11 year old children. Br. Med. J., 1995, v. 310, p. 1225−1229.
  92. Johnston, S. L., Pattemore P. K, Sanderson G., et al. The relationship between upper respiratory infections and hospital admissions for asthma: a time trend analysis. Am. J. Respir. Crit. Care Med., 1996, v. 154, p. 654 660.
  93. Juang YT, Lowther W, Kellum M, Au WC, Lin R, Hiscott J, Pitha PM. Primary activation of interferon A and interferon В gene transcription by interferon regulatory factor 3. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, v.95, p. 9837−9842.
  94. Karin M. The regulation of AP-1 activity by mitogenactivated protein kinases. J. Biol. Chem., 1995, v. 270, p. 16 483−16 486.
  95. Katze, M.G., He, Y., Gale, M. Viruses and interferon: a fight for supremacy. Nat. Rev. Immunol., 2002, v. 2, p. 675−687.
  96. Ketting R.F., Fischer S.E., Bernstein E., Sijen Т., Hannon G.J., Plasterk R.H. Dicer functions in RNA interference and in synthesis of small RNA involved in developmental timing in C. elegans. Genes Dev, 2001, v. 15(20), p. 2654−2659.
  97. Ketting R.F., Haverkamp Т.Н., van Luenen H.G., Plasterk R.H. Mut-7 of C. elegans, required for transposon silencing and RNA interference, is a homolog of Werner syndrome helicase and RNase D. Cell, 1999, v. 99, p. 133−141.
  98. Khammanivong V, Liu XS, Liu WJ, Rodda SJ, Leggatt GR, Tindle RW, Frazer IH, Fernando GJ. Paucity of functional CTL epitopes in the E7 oncoprotein of cervical cancer associated human papillomavirus type 16. Immunol. Cell Biol, 2003, v.81, p.1−7.
  99. Kim D.H., Longo M., Han Y., Lundberg P., Cantin E., Rossi J.J. Interferon induction by siRNAs and ssRNAs synthesized by phage polymerase. Nat Biotechnol, 2004, v. 22, p.321−325.
  100. Knipe, David M., Howley, Peter M. Fields Virology, 5th Edition. Lippincott Williams & Wilkins, p. 2300−2354.
  101. Krista M. Phipps, Alejandro Martinez, Jin Lu, Beverly A. Heinz, Genshi Zhao. Small interfering RNA molecules as potential anti-human rhinovirus agents: in vitro potency, specificity, and mechanism. Antiviral Research, 2004, v. 61, p. 49−55.
  102. Krug, A., Luker, G.D., Barchet, W., Leib, D.A., Akira, S., Colonna, M. Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) activates murine natural interferon-producing cells (IPC) through toll-like receptor 9. Blood, 2003, v. 103, p. 1433−1437.
  103. Kuypers J. Clinical disease in children associated with newly described coronavirus subtypes. Pediatrics, 2007, v. 119, p.70−76.
  104. Lagos-Quintana M., Rauhut R., Lendeckel W., Tuschl T. Identification of novel genes coding for small expressed RNAs. Science, 2001, v. 294, p.853−858.
  105. Lau N.C., Lim L.P., Weinstein E.G., Bartel D.P. An abundant class of tiny RNAs with probable regulatory roles in Caenorhabditis elegans. Science, 2001, v. 294, p. 858−862.
  106. Lee R.C., Ambrose V. An extensive class of small RNAs in Caenorhabditis elegans. Science, 2001, v. 294, p. 862−864.
  107. Lin R., Mamane Y., Hisott J. Multiple regulatory domains control IRF-7 activity in response to virus infection. J. Biol. Chem., 2000, v. 275, p. 34 320−34 327.
  108. Lowy D. R., Howley P. M. In D. M. Knipe, P. M. Howley et al. (eds.), iL
  109. Fields virology, 4 ed. Lippincott-Williams & Wilkins, Philadelphia. Papillomaviruses,. 2001, p. 2231−2264.
  110. Lowy D. R., Schiller J. T. Prophylactic human papillomavirus vaccines. J. Clin. Invest,. 2006, v. 116, p. 1167−1173.
  111. Mallia P., Contoli M., Caramori G., et al. Exacerbations of asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD): focus on virus induced exacerbations. Curr PharmDes., 2007, v, 13(l), p. 73−97.
  112. Manche L., Green S.R., Schmedt C., Mathews M.B. Interactions between double-stranded RNA regulators and the protein kinase DAL Mol. Cell. Biol., 1992, v. 12, p. 5238−5248.
  113. Marcus, P.I., Sekellick, M.J. Interferon induction by viruses. XVI. 2-Aminopurine blocks selectively and reversibly an early stage in interferon induction. J. Gen. Virol., 1988, v.69, p. 1637−1645.
  114. Marcus, P.I., Sekellick, M.J. Defective interfering particles with covalently linked +/-JRNA induce interferon. Nature, 1977, v. 266, p. 815−819.
  115. Marie I., Durbin J.E., Levy D.E. Differential viral induction of distinct interferon-alpha genes by positive feedback through interferon regulatory factor-7. EMBO J., 1998, v. 17, p. 6660−6669.
  116. Marie I., Smith E., Prakash A., Levy D.E. Phosphorylation-induced dimerization of interferon regulatory factor 7 unmasks DNA binding and a bipartite transactivation domain. Mol. Cell. Biol., 2000, v. 20, p. 8803−8814.
  117. Martinez F. D., Morgan W. J., Wright A. L. et al. Diminished lung function as a predisposing factor for wheezing respiratory illness in infants. N. Engl. J. Med., 1988, v. 319, p. 1112−1117.
  118. Martinez F. D, Wright A. L, Taussig L.M. et al. Asthma and wheezing in the first six years of life. N Engl J Med, 1995, v. 332(3), p. 133−138.
  119. Matsumoto, M., Funami, K., Tanabe, M., Oshiumi, H., Shingai, M., Seto, Y., Yamamoto, A., Seya, T.. Subcellular localization of toll-like receptor 3 in human dendritic cells. J. Immunol., 2003, v. 171, p. 3154−3162.
  120. McMurray H.R., D. Nguyen, T.F. Westbrook et al. Biology of human papillomaviruses. Int. J. of Exp. Path., 2001, v.82, p. 15−33.
  121. Mennechet, F. J., G. Uze. Interferon--treated dendritic cells specifically induce proliferation of FOXP3-expressing suppressor T cells. Blood, 2006, v.107, p.4417−4423.
  122. Merkelbach, Bruse S., Jacob C., Tietze L., Schroder W. et al. Consensus polymerase chain reaction and enzymelinked immuno-sorbent assay from human papillomavirus detection and typing in cervical speciment. Diagn Mol Pathol, 1999, v. 8(1), p. 32−38.
  123. Milde Langosch K, Riethdorf S., Park T.W. Naturlicher Verlauf der HPV-infection. Nutzen der of HPV-infection Usefulness of HPV analysis in cervix diagnosis. Pathology, 1999, v. 20(1), p. 15−24.
  124. Miller, J. L, Margot, A.E. Virus-cell interactions in the induction of type 1 interferon by influenza virus in mouse spleen cells. J. Gen. Virol., 2003, v. 84, p. 193−202.
  125. Milone M. C, Fitzgerald-Biocarsly P. The mannose receptor mediates induction of IFN-alpha in peripheral blood dendritic cells by enveloped RNA and DNA viruses. J. Immunol., 1998, v. 161, p. 2391−2399.
  126. Moss E.G., Taylor J.M. Small-interfering RNAs in the radar of the interferon system. Nat Cell Biol, 2003, v.5, p.771−772.
  127. Mosser A.B., Vrtis R., Burchell L. et al. Quantitative and qualitative analysis of rhinovirus infection in bronchial tisues. Am J Respir Crit Care Med, 2005, v. 171, p. 645−651.
  128. Moyer S.A., Smallwood-Kentro S., Haddad A., Prevec L. Assembly and transcription of synthetic vesicular stomatitis virus nucleocapsids. J.Virol., 1991, v.65, № 5, p.2170.
  129. Munoz N., F. X. Bosch, S. de Sanjose, et al., Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer. New England Journal of Medicine, 2003, v. 348, № 6, p. 518−527.
  130. Murray M., Webb M.S., O’Callaghan C. et al. Respirator status and allergy after bronchiolitis. Arch. Dis. Child., 1992, v. 67, p. 482−487.
  131. Nakano, H, Yanagita, M., Gunn, M.D. CDllc (+)B220(+)Gr-l (+) cells in mouse lymph nodes and spleen display characteristics of plasmacytoid dendritic cells. J. Exp. Med., 2001, v. 194, p. 1171−1178.
  132. Nicholson, K. G., Kent J., Ireland D. C. Respiratory viruses and exacerbations of asthma in adults. Br. Med. J., 1993, v. 307, p. 982−986.
  133. Nindl I., Lotz В., Kuhne Heid R. et al. Distribution of 14 high risk HPV types in cervical intraepithelial neoplasia detected by a non-radioactive general primer PCR mediated enzyme immunoassay. J Clin Pathol., 1999, v. 52(1), p.17- 22.
  134. Onoguchi, К., M. Yoneyama, A. Takemura, S. Akira, T. Taniguchi, H. Namiki, T. Fujita. Viral infections activate types I and III interferon genes through a common mechanism. J. Biol. Chem., 2007, v. 282, p. 7576−7581.
  135. Oshiumi, H., Matsumoto, M., Funami, K., Akazawa, Т., And Seya, T. (2003). TICAM-1, an adaptor molecule that participates in toll-like receptor 3-mediated interferon-beta induction. Nat. Immunol. 4, 161−167.
  136. Oshiumi, H., Sasai, M., Shida, K., Fujita, Т., Matsumoto, M., Seya, T. TIR-containing adapter molecule (TICAM)-2, a bridging adapter recruiting to roll-like receptor 4 TICAM-1 that induces interferon-beta. J. Biol. Chem., 2003, v. 278, p. 49 751—49 762.
  137. Papi A., S.L. Johnston. Rhinovirus infection induces expression of its own receptor intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) via increased NF-kappaB-mediated transcription. J. Biol. Chem., 1999, v.274, p.9707−9720.
  138. Papi A., Luppi F., Franco F., Fabbri L.M. Pathophysiology of exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease. Proc. Am. Thorac. Soc., 2006, v.3, p. 245−251.
  139. Parmiani G., Castelli C., Dalerba P., Mortarini R., Rivoltini L., Marincola F.M., Anichini A. Cancer immunotherapy with peptide-based vaccines: what have we achieved? Where are we going? J. Natl. Cancer Inst., 2002, v.94(l 1), p.805−818.
  140. Pattemore P. K., Johnston S. L., Bardin P. G. Viruses as precipitants of asthma symptoms, I: epidemiology. Clin. Exp. Allergy, 1992, v. 22, p. 325 336.
  141. Peebles R. Stokes, Jr., and Graham Barney S. Pathogenesis of respiratory syncytial virus infection in the murine model. Proc Am Thorac Soc, 2005, v.2, p. 110−115.
  142. Persengiev S.P., Zhu X., Green M.R. Nonspecific, concentration-dependent stimulation and repression of mammalian gene expression by small interfering RNAs (siRNAs). RNA, 2004, v. 10, p. 8−12.
  143. Pestka S., C.D. Krause, and M.R. Walter. Interferons, interferon-like cytokines, and their receptors. Immunol Rev., 2004, v. 202, p.8−32.
  144. Pestka, S. The human interferon-a species and hybrid proteins. Semin. Oncol., 1997, 24(3 Suppl 9), S9−4-S9−17.
  145. Proud D., Chow C.-W. Role of Viral Infections in Asthma and Chronic Obstructive Pulmonary Disease. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology, 2006, v. 35, p. 513−518.
  146. Pullan CR., Hey E.N. Wheezing, asthma, and pulmonary dysfunction 10 years after infection with respiratory syncytial virus in infancy. Br. Med. J., 1982, v. 284, p. 1665−1669.
  147. Rajagopalan, S., Fu, J., Long, E.O. Cutting edge: induction oflFN-gamma production but not cytotoxicity by the killer cell Ig-like receptor KIR2DL4 (CD158d) in resting NK cells. J. Immunol., 2001, v. 167, p. 1877−1881.
  148. Rong, Q., Alexander, T.S., Koski, G.K., Rosenthal, K.S. Multiple mechanisms for HSV-1 induction of interferon alpha production by peripheral blood mononuclear cells. Arch. Virol., 2003, v. 148, p. 329−344.
  149. Sandberg, K., Matsson, P., Aim, G. VA distinct population of nonphagocytic and low level CD4 null lymphocytes produce IFN-alpha after stimulation by herpes simplex virus-infected cells. J. Immunol., 1990, v. 145, p. 1015−1020.
  150. Santoro M.G., Rossi A., Amici C. NF-kappaB and virus infection: who controls whom. EMBO J., 2003, v. 22, p.2552−2560.
  151. Sato M, Hata N, Asagiri M, Nakaya T, Taniguchi T, Tanaka N. Positive feedback regulation of type I IFN genes by the IFN-inducible transcription factor IRF-7. FEBS Lett., 1998, v. 441, p. 106−110.
  152. Sato, A., M. Ohtsuki, M. Hata, E. Kobayashi, and T. Murakami. Antitumor activity of IFN- lambda in murine tumor models. J. Immunol., 2006, v. 176, p. 7686−7694.
  153. Schafer S.L., Lin R., Moore .PA., Hiscott J., Pitha P.M. Regulation of type I interferon gene expressionby interferon regulatory factor-3. J. Biol. Chem., 1998, v. 273, p. 2714−2720.
  154. Semizarov, D., Frost, L., Sarthy, A., Kroeger, P., Halbert, D. N., Fesik, S. W. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, v. 100, p.6347−6352.
  155. Sen G.C. Viruses and interferons. Annu. Rev. Microbiol, 2001, v. 55, p. 255−281.
  156. Shaheen, S. O. Changing patterns of childhood infection and the rise in allergic disease. Clin. Exp. Allergy, 1995, v. 25, p. 1034−1037.
  157. Shaheen, S. O., Aaby P., Hall A. J. et al. Measles and atopy in Guinea-Bissau. Lancet, 1996, v. 347, p. 1792−1796.
  158. Sharma S, tenOever BR, Grandvaux N, Zhou GP, Lin R, Hiscott J. Triggering the interferon antiviral response through an IKK-related pathway. Science, 2003, v. 300, p. 1148−1151.
  159. Sharp P.A., Zamore P.D. RNA Interference. Science, 2000, v. 287, p. 2431−2433.
  160. Shirakawa Т., Enomot Т., Shimazu S.-I., Hopkin J.M. The inverse association between tuberculin responses and atopic disorder. Science, 1997, v, 275, p. 77−79.
  161. Sidorchuk A., Lagarde F., Pershagen G. Epstein-Barr virus infection is not associated with development of allergy in children. Pediatr. Infect. Dis. J., 2003, v.22, p. 642−647.
  162. Siegal, F.P., Kadowaki, N., Shodell, M., Fitzgerald- Bocarsly, P.A., Shah, К., Ho, S., Antonenko, S., Liu, Y.J. The nature of the principal type I interferon- producing cells in human blood. Science, 1999, v. 284, p.1835−1837.
  163. Sigurs N. Epidemiologic and clinical evidence of a respiratory syncytial virus-reactive airway disease link. Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2001, v. 163(3), p. S2-S6.
  164. Sigurs N., Bjarnason R., Sigurbergsson F., Kjellman B. Respiratory syncytial virus bronchiolitis in infancy is al important risk factor for asthma and allergy at the 7. Am. J Respir. Crit. Care Med., 2000, v. 161, p. 15 011 507.
  165. Silverman N., Maniatis Т. NF-kappaB signaling pathways in mammalian and insect innate immunity. Genes Dev., 2001, v. 15, p. 2321−2342.
  166. Somers G.R., Tabrizi S. N, Borg A.J. et al. Juvenile laryngeal papillomatosis in a pediatric population: a clinicopathologic study. Pediatr Pathol Lab Med, 1997, v. 17(1), p. 53−64.
  167. Stanley M. The immunology of genital human papillomavirus infection. Eue J Dermatol, 1998, v. 8(7 Suppl), p. 8012.
  168. J. С, С. H. Mann, S. Rookes, et al. T-cell responses to human papillomavirus type 16 among women with different grades of cervical neoplasia. British Journal of Cancer, 2005, v. 93, p. 248−259.
  169. Stein R. T, Sherrill D, Morgan W.J. et al. Respiratory syncytial virus in early life and risk of wheeze and allergy by age 13 years. Lancet, 1999, v. 354, p.541−545.
  170. Sterlc P. J. Virus-induced airway hyperresponsiveness in man. Eur. Respir. J, 1993. v. 6. p. 894−902.
  171. Stewart WE 2nd, Gosser LB, Lockart RZ Jr. Priming: a nonantiviral function of interferon. J. Virol., 1971, v. 7, p. 792−801.
  172. Strachan D. P, Harkins L. S, Johnston I.D.A, Anderson H.R. Childhood antecedents of allergic sensitization in young British adults. J Allergy Clin Immunol, 1997, v.99, p. 6−12.
  173. Sudo Kenji, Watanabe Wataru, Mori Shuichi, Konno Kenji, Shigeta Shiro and Yokota Tomoyuki. Mouse model of respiratory syncytial virus infection to evaluate antiviral activity in vivo. Antiviral Chemistry & Chemotherapy 1999, v.10, p.135−139.
  174. Takaoka A, Hayakawa S, Yanai H. Integration of interferon-alpha/beta signaling to p53 responses in tumor suppression and antiviral defense. Nature, 2003, v 424, p. 516−523.
  175. Takeda, К., Akira, S. Toll receptors and pathogen resistance. Cell Microbiol., 2003, v. 5, p. 143−153.
  176. Taniguchi T. and A. Takaoka. The interferon-a/psystem in antiviral responses: a multimodal machinery of gene regulation by the IRF family of transcription factors. Cur. Opin. Immunol, 2002, v. 14, p. l 11−116.
  177. Taylor G., E. J. Stott, M. Hughes and A. .P Collins. Respiratory syncytial vims infection in mice. Infect Immun., Feb. 1984, v.43(2), p. 649−655.
  178. Tompkins S.M., Lo C.Y., Tumpey T.M., Epstein S.L. Protection against lethal influenza virus challenge by RNA interference in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2004, v.101, p.8682- 8686.
  179. Traves S.L., Proud D. Viral-associated exacerbations of asthma and COPD. Curr Opin Pharmacol., 2007, v.7(3), p. 252−258.
  180. Tytell, A.A., Lampson, G.P., Field, A.K., Hilleman, M.R. Inducers of interferon and host resistance. 3. Double-stranded RNA from reovirus type 3 virions (reo 3-RNA). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1967, v. 58, p. 17 191 722.
  181. Wark P.A., Johnston S. L., Moric I. Neutrophil degranulation and cell lysis is associated with clinical severity in virus-induced asthma. Evr. Respir. J., 2002, v.19, p. 68−75.
  182. Wathelet M.G., Lin C.H., Parekh B.S., Ronco L.V., Howley P.M., Maniatis Т. Virus infection induces the assembly of coordinately activated transcription factorson the IFN-beta enhancer in vivo. Mol. Cell, 1998, v. 1, p.507−518.
  183. Weaver B.K., Kumar K.P., Reich N.C. Interferon regulatory factor 3 and CREB-binding protein/p300 are subunits of double-stranded RNA-activated transcription factor DRAF1. Mol. Cell. Biol., 1998, v. 18, p.1359−1368.
  184. Wedzicha J.A. Role of viruses in exacerbations of chronic obstructiveчpulmonary disease. Proceedings. Am. Thorac Soc., 2004, v. 1(2), p. l 15 120.
  185. Wertz G.M., Howard M.B., Davis N, Patton J. The switch from transcription to replication of a negative-strand RNA virus. Cold Spring Harb Symp Quant Biol, 1987, v.52, p.367−371.
  186. Wilkinson T.M.A., Donaldson G.C., Johnston S.L. Et al. Respiratory syncytial virus, airway inflammation, and FEV1 decline in patients with chronic obstructive pulmonary disease. Am J Respir Crit Care Med, 2006, v.173, p. 871−876.
  187. Willding J.P. Laringeal neoplasmas-respiratory papilloma. The Pediatric Airway. Philadelphia: J.B. Li ppincott Company, 1995, p. 263−266.
  188. Wisdom R. AP-1: one switch for many signals. Exp. Cell Res., 1999, v. 253, p. 180−185.
  189. Wu C. A., Puddington L., Whiteley H. E. et al. Cytomegalovirus infection alters thl/th2 cytokine expression, decreases airway eosinophilia, and enhances mucus production in allergic airway disease. J. Immunol., 2001, v. 167(5), p. 2798−2807.
  190. Yang S., Tutton S., Pierce E., Yoon K. Specific double-stranded RNA interference in undifferentiated mouse embryonic stem cells. Mol. Cell. Biol., 2001, v.21(22), p. 7807−7816.
  191. Yoneyama M, Suhara W, Fukuhara Y, Fukuda M, Nishida E, Fujita T. Direct triggering of the type I interferon system by virus infection: activation of a transcription factor complex containing IRF-3 and CPB/p300. EMBO J., 1998, v. 17, p.1087−1095
  192. Zeng, J., Fournier, P., Schirrmacher, V. Stimulation of human natural interferon-alpha response viaparamyxovirus hemagglutinin lectin-cell interaction. J. Mol. Med., 2002, v. 80, p. 443−451.
  193. Zhang Yongxin, Ying Wang, Xyanthine Gilmore, Keyi Xu, Philip R. Wyde and Innocent N. Mbawuike. An aged mouse model for RSV infection and diminished CD8+ CTL responses. Experimental Biology and Medicine, 2002, v. 227, p.133−140.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!