Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Получение рекомбинантных нуклеокапсидных белков вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) и их применение в качестве специфических компонентов диагностической тест-системы для определения антител к вирусу РРСС

Диссертация: Получение рекомбинантных нуклеокапсидных белков вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) и их применение в качестве специфических компонентов диагностической тест-системы для определения антител к вирусу РРСС
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС) — инфекционное вирусное заболевание, которое вспыхнуло в 1987 году в Северной Америке (Keffaber, 1989; Bilodeau et al., 1991), a затем в Европейских странах (Paton et al., 1991; Baron et al., 1992). К настоящему времени репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС) широко распространен в большинстве стран с развитым свиноводством, исключение… Читать ещё >

Получение рекомбинантных нуклеокапсидных белков вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) и их применение в качестве специфических компонентов диагностической тест-системы для определения антител к вирусу РРСС (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • I. Список сокращений
  • II. Введение
  • III. Обзор литературы
  • — I. Репродуктивно-респираторный синдром свиней
  • — 2. Биологические характеристики вируса РРСС
  • — 2.1. Морфология и физические свойства вируса
    • 2. 1. 1. Структура вириона вируса РРСС
    • 2. 1. 2. Структура генома вируса РРСС
    • 2. 1. 3. Вирусные белки
    • 2. 1. 4. Устойчивость к воздействию различных факторов. ¦¦
    • 2. 1. 5. Нуклеокапсидный белок
  • — 2.2. Классификация вируса РРСС
  • — 2.3. Гуморальный и клеточный иммунный ответ организма при инфекции вирусом РРСС
  • — 2.4. Патогенез и патология РРСС
  • — 2.5. Культивирование вируса РРСС
  • — 2.6. Эпизоотология РРСС
  • — 3. Меры борьбы и профилактики РРСС
  • — 3.1. Неспецифическая профилактика РРСС
  • — 3.2. Вакцинация против вируса РРСС
  • — 4. Диагностика РРСС

Репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС) — инфекционное вирусное заболевание, которое вспыхнуло в 1987 году в Северной Америке (Keffaber, 1989; Bilodeau et al., 1991), a затем в Европейских странах (Paton et al., 1991; Baron et al., 1992). К настоящему времени репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС) широко распространен в большинстве стран с развитым свиноводством, исключение составляют лишь Швейцария и Новая Зеландия (Seuberlich et al., 1992).

В ряде стран вирус РРСС признан самым экономически значимым для свиноводства патогеном (Meng, 2000). Так, в США до 60% экономических потерь свиноводства, связанных с инфекционными заболеваниями, обусловлены вирусом РРСС. Существенный ущерб свиноводству приносят прежде всего мертворождение, аборты, гибель поросят и снижение опоросов. Для РРСС характерна высокая контагиозность, способность к длительной бессимтомной персистенции, что осложняет контроль и борьбу с заболеванием.

Возбудитель принадлежит к роду Arterivirus семейства Arteriviridae. Вирус РРСС представлен двумя типами, имеющими примерно 60% гомологи по нуклеотидной последовательности, — американским и европейским. Американские изоляты имеют более высокую вирулентность. С 1996 года, после применения в Дании живых вакцин против РРСС на основе вируса американского типа, американские изоляты появились на территории западной Европы (Bother et al., 1997; Madsen et al., 1998), они встречаются так же в Китае и Японии (Shibata et al., 1996; Tong et al., 1999). Описано появление европейских изолятов на территории США. В России циркулирует вирус европейского типа, который присутствует в российских хозяйствах с 1990 года. До последнего времени не существовало полных данных по распространенности этого заболевания на территории нашей страны.

В России до недавнего времени отсутствовали средства для диагностики и эпизоотического мониторинга РРСС, разработка которых в условиях экспансии вируса по территории нашей страны представляется крайне актуальной. Серологические методы исследования представляются наиболее удобными для контроля за распространением вируса, так как персистенция вируса может протекать бессимтомно, РНК вируса в сыворотке крови не всегда обнаруживается, но присутствуют антитела к вирусу РРСС. В этих условиях крайне важной задачей была разработка отечественной тест-системы на основе ИФА для определения антител к вирусу РРСС.

Культивирование вируса сопряжено с рядом сложностей. Многие изоляты размножаются только в первичной культуре альвеолярных макрофагов, изоляты европейского типа накапливаются в низких титрах. Не все первичные культуры альвеолярных макрофагов оказываются чувствительными к вирусу. Таким образом, затруднено получение вирусных антигенов, которые можно было бы использовать в качестве специфических компонентов диагностических тест-систем на основе иммуноферментного анализа. В этих условиях актуальной задачей является получение рекомбинантных антигенов для использования в качестве компонентов тест-системы на основе метода иммуноферментного анализа (ИФА). В нашей работе была поставлена задача получения рекомбинантного нуклеокапсидного белка вируса РРСС и разработки на его основе тест-системы для определения антител к вирусу РРСС.

Цель и задачи исследования

.

Целью данной работы была разработка технологии получения рекомбинантных нуклеокапсидных антигенов вируса РРСС и создание на их основе иммуноферментной тест-системы для выявления антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней в сыворотке крови животных.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:1. Провести предварительные исследования распространенности вируса РРСС на территории России и Белоруссии.

2. Разработать технологию и получить рекомбинантные нуклеокапсидные белки вируса РРСС американского и европейского типов.

3. Методом непрямого твердофазного ИФА сравнить между собой антигенную активность полученных рекомбинантных продуктов с использованием сывороток крови, полученных от иммунных и неиммунных животных.

4. Охарактеризовать рекомбинантные белки при их использовании в ИФА в качестве антигенов и сравнить результаты с результатами, полученными при использовании коммерческого ИФА-набора аналогичной направленности (ЮЕХХ, США).

5. Разработать на основе полученных и охарактеризованных рекомбинантных антигенов иммуноферментную тест-систему для выявления антител к вирусу РРСС.

6. Определить диагностическую ценность разработанной тест-системы с использованием панели референтных положительных и отрицательных сывороток крови.

7. Внедрить разработанную тест-систему в ветеринарную практику.

VII. ВЫВОДЫ.

1. На основании проведенных исследований установлено широкое распространение вируса РРСС в различных свиноводческих хозяйствах (до 70% от числа обследованных) на территории Белоруссии и Российской Федерации.

2. Разработана технология получения рекомбинантных нуклеокапсидных белков вирусов РРСС. Установлено, что гены нуклеокапсидного белка вируса РРСС европейского (45+ Воронеж) и американского (NADC-8) типов эффективно экспрессировались в E. coli и бакуловирусной системе экспрессии, при этом выход рекомбинантного продукта составил 5,2% и 1,1% соответственно.

3. Установлено, что очищенные металлоаффинной хроматографией рекомбинантные белки нуклеокапсида вируса РРСС имеют выраженные антигенные свойства, и могут быть использованы в качестве антигенов в непрямом твердофазном ИФА для выявления вирус-специфических антител.

4. Проведены сравнительные исследования рекомбинантных белков нуклеокапсида вируса РРСС европейского и американского типов, полученных в прокариотической и эукариотической системах экспрессии. Показана сопоставимая антигенная активность рекомбинантных белков при их использовании в качестве антигена в иммуноферментной тест-системе (г= 0,91−0,94, Р <0,05).

5. С учетом данных о преимущественной циркуляции на территории России изолятов вируса РРСС европейского типа, установлено, что рекомбинантный белок нуклеокапсида из отечественного штамма 45+ Воронеж может быть использован для разработки непрямого твердофазного ИФА для выявления антител к вирусу РРСС.

6. Разработан метод непрямого твердофазного ИФА, предназначенный для выявления антител к вирусу РРСС. При исследовании панели референс-сывороток показана высокая чувствительность и специфичность диагностической тест-системы (93,5% и 98%.

соответственно). Установлена высокая степень корреляции результатов исследований полученных с помощью разработанного ИФА-набора («РРСС-СЕРОТЕСТ») и ИФА-набора (ГОЕХХ, США) аналогичной направленности (г= 0,86, Р <0,05).

7. Установлено, что разработанный ИФА-набор «РРСС-СЕРОТЕСТ» может эффективно применяться для обследования животных с целью иммунологического мониторинга поголовья, ретроспективной диагностики болезни и оценки напряженности поствакцинального иммунитета против РРСС.

Показать весь текст

Список литературы

  1. , Г. 3., Гусев, А. А., Яременко, Н. А., Дудникова, Н. С., Гаврилова, В. Л., Кукушкин, С. А., Курман, И. Я., Ковалишин, В. Ф. и Рахманов, А. М. (2001). Репродуктивно-респираторный синдром свиней. Ветеринария, 3:18−24.
  2. . Г., Непоклонов, Е. А., Алипер, Т. И., Забережный, А. Д. и Мусиенко, М. И. (2000). Диагностика и специфическая профилактика РРСС. Ветеринария, 10: 16−19.
  3. Albina, E., Madee, F., Cariolet, R. and Torrison, J. (1994) Immune response and persistence of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in infected pigs and farm units. Vet. Rec. 134:567−573.
  4. Andreyev V. G., Scherbakov A. G., Pylnov V. A. and Gusev A. A. (1999) Genetic heterogeneity of PRRSV in Russia. Proceeding of the International Symposium on PRRS and Aujeszky’s Disease, Ploufragan, France, June 2124:211−212.
  5. Bautista, E. M., Meulenberg, J. J. M., Choi, C. S. and Molitor, T. W. (1996). Structural polypeptides of the American (VR-2332) strain of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. Arch. Virol. 141:1357−1365.
  6. Belak, S. and Thoren, P. (2001) Molecular diagnosis of animal diseases: some experience of the past decade. Expert Rev. Mol. Diagn. l (4):89−98.
  7. Benfield, D. A., Nelson, E., Collins, J. E., Harris, L., Goyal, S. M., Robinson, D., Christianson, W. T., Morrison, R. B., Gorcyca, D. and
  8. , D. (1992). Characterization of swine infertility and respiratory syndrome (SIRS) virus (isolate ATCC VR-2332). J. Vet. Diagn. Invest., 4:127−133.
  9. Beyer, J., Fichtner, D., Schirrmeier, H., Polster, U., Weiland, E. and Wege, H. (2000) Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV): kinetics of infection in Lymphatic organs and lungs. J. Vet. Med. B 47:9−25.
  10. Bilodeau, R., Dea, S., Sauvageau, R. and Martineau, G. P. (1991) «Porcine reproductive and respiratory syndrome» in Quebec. Vet.Rec. 129:102−103.
  11. , T. (2000) The «colorful» epidemiology ofPRRS. Vet. Res. 31:77−83.
  12. Bother, A., Nielsen, J. and Bille-Hansen, V. (1994) Isolation of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in a Danish swine herd and experimental infection of pregnant gilts with the virus. Vet. Microbiol. 40:351−360.
  13. Bother, A., Strandbygaard, B., Sorensen, K. J., Have, P., Madsen, K. G., Madsen, E. S. and Alexandersen, S. (1997) Appearance of acute PRRS-like symptoms in sow herds after vaccination with a modified live PRRS vaccine. Vet. Rec. 141:497−499.
  14. Brinton, M. A., Gavin, E. I. and Fernandez, A. V. (1986). Genotypic variation among six isolates of lactate dehydrogenase-elevating virus. J. Gen. Virol. 67:2673−2684.
  15. Carman, S., Sanford, S. E. and Dea, S. (1995) Assestment of seropositivety to porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in swine herds in Ontario, 1978−1982. Can. Vet. J. 36:776−777.
  16. , D. (1997) Nidovirales: a new order comprising Coronaviridae andArteriviridae. Arch. Virol. 142:629−633.
  17. Cho, H. J., Entz, S. C., Magar, R. and Joo, H. S. (1997) Performance of ELISA antigens prepared from 8 isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus with homologous and heterologous antisera. Can. J. Vet. Res. 61:299−304.
  18. Christianson, W. T. and Joo, H. S. (1994) Swine health and production, 2.
  19. Dewey, C., Charbonneau, G., Karman, S., Hamel, L., Nayar, G., Friendship, R., Eernisse, K. and Svenson, S. (2000) Lelystad-like strain of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) identified in Canadian swine. Can. Vet. J. 41:493−494.
  20. Done, S. H., Paton, D. J. and White M. E. C. (1996) Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS): a review, with emphasis on pathological, virological and diagnostic aspects. Br. Vet. J. 152:153−171.
  21. Drew, T. W., Meulenberg, J. J. M., Sands, J. J. and Paton, D. J. (1995). Production, characterization and reactivity of monoclonal antibodies to porcine reproductive and respiratory syndrome virus. J. Gen. Virol. 76:1361−1369.
  22. Drew, T.W., Lowings, J.P., and Yapp, F. (1997). Variation in open reading frames 3, 4 and 7 among porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates in the UK. Vet. Microbiol. 55:209−221.
  23. Duan, X., Nauwynck, H. J., Favoreel, H. W. and Pensaert, M. B. (1998) Identification of a putative receptor for porcine reproductive andrespiratory syndrome virus on porcine alveolar macrophages. J. Virol. 72:4520−4523.
  24. Egli, C., Thur, B., Liu, L. and Hofmann, A. (2001). Quantitive TaqMan® RT-PCR for detection and differentiation of European and North American strains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. J. Virol. Meth. 98:63−75.
  25. Faaberg, K. S., Even, C., Palmer, G. A. and Plagemann, P. G. W. (1995). Disulphide bonds between two envelope proteins of lactate dehydrogenase-elevating virus are essential for viral infectivity. J. Virol. 69:613−671.
  26. Faaberg, K.S., P.G. Plagemann. (1997). ORF3 of lactate dehydrogenase-elevating virus encodes a soluble, nonstructural, highly glycosilated, and antigenic protein. Virology, 227:245−251.
  27. Goldberg, T. L., Weigel, R. M., Hahn, E. C. and Schreba, G. (2000) Association between genetic, farm characteristics and clinical disease in field outbreaks of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. Prev. Vet. Med. 43:293−302.
  28. Gonin, P., Pirzadeh, B., Gagnon, C. A. and Dea, S. (1999) Seroneutralization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus correlates with antibody response to GP5 major envelope glycoprotein. J. Vet. Diagn. Invest. ll (l):20−26.
  29. , S. C. (1992) Effects of blue-eared pigs disease on a breeding and fattening unit. Vet. Rec. 130:513−514.
  30. Horter, D. C., Pogranichniy, R. M., Chang, C.-C., Evans, R. B., Yoon, K.-J. and Zimmerman, J. J. (2002) Characterisation of carrier state in porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection. Vet. Microbiol. 86:213−228.
  31. Kapur, V., Elam, M. R., Pawlovich, T. M. and Murtaugh, M. P. (1996).
  32. Genetic variation in porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates in the midwestern United States. J. Gen. Virol. 77:1271−1276.
  33. , K. K. (1989) Reproductive failure of unknown etiology. ASSP Newsletter 1:1−9.
  34. Kim, H. S., Kwang, J., Yoon, I. J., Joo, H. S. and Frey, M. L. (1993) Enhanced replication of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in a homogeneous subpopulation of MA-104 cell line. Arch. Virol. 133:477−483.
  35. Kono, Y., Kanno, T., Shimizu, M., Yamada, S., Ohashi, S., Nakamine, M. and Shirai, J. 1996. Nested PCR for detection and typing of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in pigs. J. Vet. Met. Sci. 58(10):941−946.
  36. Kwang, J., Zuckermann, F., Ross, G., Yang, S, Osorio, F., Liu, W. and Low, S. (1999) Antibody and cellular immune responses of swine following immunization with plasmid DNA encoding the PRRS virus ORF’s 4, 5, 6 and 7. Res. Vet. Sci. 67(2): 199−201.
  37. , U. K. (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 227:680−685.
  38. Lamontagne, L., Page, C., Larochelle, R., Longtin, D. and Magar, R. (2001) Polyclonal activation of B cells occurs in lymphid organs from porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)-infected pigs. Vet. Immunol. Immunopathol. 82:165−181.
  39. Mardassi, H., Mounir, S. and Dea, S. (1995) Molecular analysis of the ORFs 3 to 7 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus, Quibec reference strain. Arch. Virol. 140:1405−1418.
  40. Mardassi, H., Massie, B. and Dea, S. (1996). Intracellular synthesis, processing, and transport of proteins encoded by ORFs 5 to 7 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. Virology 221:98−112.
  41. , X. J. (2000). Heterogeneity of porcine reproductive and respiratory syndrome virus: implication for current vaccine efficacy and future vaccine development. Vet. Microbiol., 74:309−329.
  42. Mengeling, W. L., Vorwald A. C., Lager, K. M. and Brockmeier, S. L. (1996) Comparison among strains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus for their ability to cause reproductive failure. Am. J. Vet. Res. 57:834−839.
  43. Mengeling, W. L., Lager, K. M., Vorwald, A.C. and Clouser D.F. (2003). Comparative safety and efficacy of attenuated single-strain and multi-strain vaccines for porcine reproductive and respiratory syndrome. Vet. Microbiol. 93:25−38.
  44. Meulenberg, J. J. M., Petersen-den Besten, A., de Kluyver, E. P., Moormann, R. J. M., Schaaper, W. M. M. and Wensvoort, G. (1995a). Characterization of proteins encoded by ORFs 2 to 7 of Lelystad virus. Virology 206:155−163.
  45. Meulenberg, J. J. M. and Petersen-den Besten, A. (1996). Identification and characterization of a sixth structural protein of Lelystad virus: the glycoprotein GP (2) encoded by ORF2 is incorporated in virus particles. Virology 225:44−51.
  46. Meulenberg, J. J. M., Bos-de Ruijter, J. N. A., Wensvoort, G. and Moormann, R. J. M. (1998a) Infectious transcripts from cloned genome-length cDNA of porcine reproductive respiratory syndrome virus. J. Virol. 72:380−387.
  47. Mortensen, S., Stryhn, H., Sogaard, R., Boklunt, A., Stark, K. D. C., Christensen, J. and Willeberg, P. (2001). Risk factors for infection of sow herds with porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus. Prev. Vet. Med. 53:83−101.
  48. Murtaugh, M. P., Elam, M.R. and Kakach (1995) Comparizon of the structural protein coding sequences of the VR-2332 and Lelystad virus strains of the PRRS virus. Arch. Virol. 140:1451−1460.
  49. Nelsen, C. J., Murtaugh, M. P. and Faaberg, K. S. (1999) Porcine reproductive and respiratory syndrome virus comparison: divergent evolution on two continents. J. Virol., 73(1): 270−280.
  50. Nielsen, H. S., Oleksiewicz, M. B., Forsberg, R., Stadejek, T., Bother, A. and Storgaard, T. (2001) Reversion of a live of porcine reproductive andrespiratory syndrome virus vaccine investigated by parallel mutations. J. Gen. Virol. 82:1263−1272.
  51. Paton, D. J., Brown, I. H., Edwards, S. and Wensvoort, G. (1991) «Blue ear» disease ofpigs. Vet. Rec. 128:617
  52. Paton, D. J., Brown, I. H., Scott, A. C., Done, S. H. and Edwards, S. (1992) Isolation of a Lelystad virus-like particles agent from british pigs and scanning electron microscopy of infected macrophages. Vet. Microbiol. 33:195−201.
  53. Pirzadeh, B. and Dea, S. (1997) Monoclonal antibodies to the ORF5 product of porcine reproductive and respiratory syndrome virus define linear neutralizing determinants. J. Gen. Virol. 78:1867−1873.
  54. Pirzadeh, B. and Dea, S. (1998) Immune response in pigs vaccinated with plasmid DNA encoding ORF5 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. J. Gen. Virol. 79:989−999.
  55. Plagemann, P. G. W. (1996). Lactate dehydrogenase-elevating virus and related viruses. Fields Virology, 3rd edition. Lippincott Williams and Wilkins, 1105−1120.
  56. Plagemann, P. G., Rowland, R. R. and Faaberg, K. S. (2002). The primary neutralization epitope of porcine reproductive and respiratory syndrome virus strain VR-2332 is located in the middle of the GP5 ectodomain. Arch. Virol. 147(12):2327−2347.
  57. Plana-Duran, J., Bastons, M., Urniza, A., Vayreda, M., Vila, X. and Mane, H. (1997) Efficacy of an inactivated vaccine for prevention of reproductive failure induced by porcine reproductive and respiratory syndrome virus. Vet. Microbiol. 55:361−370.
  58. Porcine reproductive and respiratory syndrome. (1996) in OIE manual, chapter X. 12:694−700.
  59. Rossow, K.D., Collins, J.E., Goyal, S.M., Nelson, E.A., ChristopherHennings, J. and Benfield D.A. (1995). Pathogenesis of porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection in gnotobiotic pigs. Vet. Pathol. 32(4):361−373.
  60. Sambrook, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T. (1989) Molecular cloning, a laboratory manual. Cold Spring Harbour laboratory press.
  61. Segsles, J. and Domingo, M. (2002) Porcine circovirus type 2 infection: postweaning multisystemic wasting syndrome and other condidions. Proceedings of the 17th IPVS congress, Ames, Iowa, USA, 1:3542.
  62. Shibata, I., Uruno, K. and Mori, M. (1996) Serological property and replication in cell cultures of porcine reproductive and respiratory syndrome viruses isolated in Japan. J. Vet. Med. Sci. 58(8):805−807.
  63. Shibata, I., Mori, M. and Uruno, K. (1998) Experimental infection of maternally immune pigs with porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus. J. Vet. Med. Sci. 60(12): 1285−1291.
  64. Shibata, I., Mori, M. and Yazawa, S. (2000) Experimental reinfection with homologous porcine reproductive and respiratory syndrome virus in SPFpigs. J. Vet. Med. Sci. 62(1):105−108.
  65. Snijder, E. J. and Meulenberg J. M. (1998) Molecular biology of arteriviruses. J. Gen. Virol. 79:961−979.
  66. Snijder, E. J., van Tol, H., Pedersen, K. W., Raamsman, M. J. B. and de Vries, A. A. F. (1999) Identification of a novel structural protein of Arteriviruses. J. Virol. 73:6335−6345.
  67. Snijder, E. J., Dobbe, J. C. and Spaan, W. J. M. (2003) Heterodimerization of the two major envelope proteins is essential for Arterivirus infectivity. J. Virol. 77(1):97−104.
  68. Storgaard, T., Oleksiewicz, M. and Bother, A. (1999) Examination of the selective pressure on a live PRRS vaccine virus. Arch. Virol. 144(12) :23 89−2401.
  69. Sur, J.-H., Doster, A. R., Galeota, J. A. and Osorio, F. A. (2001) Evidence for the localization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) antigen and RNA in ovarian follicles in gilts. Vet. Pathol. 38:58−66.
  70. Terpsta, C., Wensvoort, G. and Pol, J. M. A. (1991). Experimental reproduction of porcine epidemic abortion and respiratory syndrome (mystery swine disease) by infection with Lelystad virus: Koch’s postulates fulfilled. Vet. Q. 13:131−136.
  71. Wills, R. W., Zimmerman, J. J., Yoon, K. J., Svenson, S. L., McGinley, M. J., Hill, H. T., Piatt, K. B., Christopher-Hennings, J. and
  72. , E. A. (1997) Porcine reproductive and respiratory syndrome virus: a persistent infection. Vet. Microbiol. 55:231−240.
  73. Wootton, S. K., Nelson, E. A. and Yoo, D. (1998) Antigenic structure of the nucleocapsid protein of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 5:773−779.
  74. Wootton, S. K., Koljesar, G., Yang, L., Yoon, K.-J. and Yoo, D.(2001) Antigenic importance of the carboxy-terminal beta-strand of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus nucleocapsid protein. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 8(3):598−603.
  75. Yoon, K. J., Wu, L. L., Zimmerman, J. J., Hill, H. T. and Piatt, K. B.(1996) Antibody-dependent enhancement (ADE) of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) infection in pigs. Viral. Immunol. 9:5163.
  76. Zimmerman, J. J., Sanderson, T., Eernisse, K. A., Hill, H. T. and Frey, M. L. (1992). Transmission of SIRS virus in convalescent animals to comminglet penmates under experimental conditions. Am. Assoc. Swine Pract. Newsl. 4:25.
  77. Zimmerman, J., Swenson, S. L., Wills, R. W., Pirtli, E. C., Yoon, K. J., Hill, H. T. and McGinley, M. J. (1993). Transmission ofPRRS virus. In Proceedings of the Allen D Leman swine conference, university of Minnesota, MN, USA, 51−52.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!