Введение. 
Сбор и пересылка патологического материала

Чтобы выделить чистую культуру, сделать посев, окрасить мазок, посмотреть чувствительность к антибиотикам, патологический материал нужно собрать и доставить в лабораторию. Естественно, при этом нужно соблюдать меры собственной безопасности, избежать риска эпизоотий, и, чтобы собранный и доставленный материал нёс интересующую нас информацию, а не все, что было в окружающей среде при его взятии. Для этого нужно знать правила и методы отбора проб патологического материала, знать, как правильно подготовить материал к исследованию, чтобы оно получилось наиболее точным и информативным.

Правила отбора проб патологического материала для микробиологического исследования

Патологический материал необходимо брать стерильными инструментами в стерильную посуду. Поверхность органа (ткани), от которого берут патологический материал, на месте разреза следует обжечь над пламенем или прижечь нагретой металлической пластинкой.

Патологический материал должен быть взят как можно раньше после смерти животного, особенно в теплое время года. Начавшееся разложение трупа может сделать его негодным для исследования.

Патологический материал отправляют в лабораторию в неконсервированном виде; в том случае, если невозможно доставить его в лабораторию в течение ближайших 24−30 часов, патологический материал посылают только в консервированном виде.

Для бактериологического исследования патологический материал (органы или их части) консервируют 30%-ным водным раствором химически чистого глицерина. Воду предварительно стерилизуют кипячением или автоклавированием в течение 30 минут. Материал можно консервировать также в стерильном вазелиновом масле. Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, в 4−5 раз превышающем его объем.

Небольшие трупы павших животных (поросят, ягнят, телят), а также трупы мелких животных лучше посылать целыми в непроницаемой таре.

Трубчатые кости.

Посылаются на исследование в целом виде, с неповрежденными концами, тщательно очистив их от мышц и сухожилий. Кости завертывают в марлю или полотно, смоченное дезинфицирующей жидкостью (5%-ным раствором карболовой кислоты). Кости можно также посыпать поваренной солью и завернуть в полотно или марлю.

Кишечник перед посылкой для бактериологического исследования освобождают от фекальных масс, а концы кишечника перевязывают. На исследование посылают части кишечника с наиболее характерными патологическими изменениями. Кишечник помещают в банки с 30−40%-ным водным раствором глицерина или насыщенным водным раствором поваренной соли. Объем консервирующей жидкости должен превышать объем взятого материала в 5−7 раз.

Кал для исследования отправляют в стерильных стаканах, пробирках или банках, которые хорошо закрывают пергаментной бумагой. От трупов животных кал можно послать в отрезке невскрытого кишечника, завязанного с обоих концов. Кал в лабораторию должен быть доставлен не позднее 24 часов после его взятия.

При посылке для исследования участков кожи берут наиболее пораженные кусочки ее размером 10Ч10 см. Кусочки кожи посылают в стерильной, герметически закупоренной посуде.

Приготовление мазков.

Кровь, гной, слизь, экссудат, мочу, желчь и другой жидкий патологический материал для бактериологического и вирусологического исследований посылают в запаянных пастеровских пипетках, стерильных пробирках или во флаконах, хорошо закрытых стерильными резиновыми пробками.

Кровь, гной, выделения из различных полостей, естественных отверстий и др. посылают для микроскопического исследования (для обнаружения в них микробов, кровепаразитов и для определения лейкоцитарной формулы) в виде мазков.

Предметные стекла предварительно кипятят в течение 10−15 минут в 1−2%-ном водном растворе соды, затем хорошо промывают чистой водой и насухо вытирают. Сухие стекла помещают в раствор спирт-эфира, взятых в равных частях, где и хранят до употребления.

У животных кровь берут из вены ушной раковины или края верхушки уха, у птиц — с поверхности гребня или подкрыльцовой вены. Шерсть на месте взятия крови выстригают или выбривают, кожу тщательно протирают ватными тампонами, смоченными сначала спиртом и затем эфиром.

Инструменты (иглы, скальпель) должны быть стерильными.

Первую каплю крови удаляют стерильной ватой (исключение делается при исследовании крови на гемоспоридиозы, когда берут для мазка первую каплю крови), а следующую свободно выступившую каплю крови берут на предварительно подготовленное предметное стекло путем быстрого и легкого прикосновения к капле поверхностью стекла. Затем стекло быстро поворачивают вверх каплей и удерживают между пальцами левой руки в горизонтальном положении. К левому краю капли прикасаются под углом 45 °C шлифованным краем другого предметного (или покровного) стекла.

Как только капля равномерно распределится по ребру этого стекла, его быстро проводят по поверхности предметного стекла слева направо, не доводя его до края на 0,5−1 см. Ширина мазков должна быть уже предметного стекла. Для каждого нового мазка берут свежую каплю крови.

Готовые мазки крови высушивают на воздухе; подсушивать их над пламенем или на солнце не рекомендуется. В холодное время года мазки делают в теплом помещении или на стеклах, подогретых на крышке теплого стерилизатора.

Метод фиксации мазков зависит от цели исследования. Правильно приготовленные мазки крови должны быть тонкими, равномерными и достаточной длины. На высушенных мазках и отпечатках острым предметом делают надпись с указанием номера или клички животного и даты приготовления мазка.

Мазки из тканей, гноя, органов и различных выделений готовят путем размазывания материала на предметном стекле стерильной палочкой или ребром другого предметного стекла до тонкого слоя. Частицы органов плотной консистенции, твердые узелки, а также вязкий материал целесообразно заключать между двумя предметными стеклами. После растирания помещенного между ними материала стекла разъединяют в противоположные стороны в горизонтальном направлении, в результате чего получаются два довольно тонких мазка. Иногда получают так называемые препараты-отпечатки. Для этого вырезанный острым скальпелем кусочек органа захватывают пинцетом и свободной поверхностью кусочка делают на стекле несколько тонких отпечатков.

Секрет молочной железы.

Сосок обмывают водой, обрабатывают тампонами, смоченными в этаноле (70%). Первые порции молока сливают, последующие сцеживают в стерильные пробирки, транспортируют в лабораторию, исследуют в течении 3-х часов.

Материал при инфекции дыхательных путей.

При отборе материала с поверхности слизистой носа стерильный ватный тампон вводят в носовой ход, вращательными движениями собирают материал со слизистой. Для взятия материала из зева шпателем прижимают язык, стерильным тампоном собирают материал с миндалин, задней поверхности глотки. При поражении нижних дыхательных путей наиболее доступна для исследования мокрота, которую собирают до приема корма. Из трахеи материал берут при помощи трахеотубуса и ватного тампона на проволоке. При глубоком (до бифуркации введения тампона возникает кашель, и удается получить бронхиальную слизь. Тампон с материалом помещают в пробирку со стерильным физиологическим раствором. Сроки доставки мокроты в лабораторию должны быть не более 2-х часов.

Материал при инфекции глаз.

Материал с конъюктивы берут увлажненным ватным тампоном вращательными движениями. При получении соскобов с роговицы предварительно закапывают 1… 2 капли анестетика, делают 3… 4 соскоба с изъязвленных участков роговицы. Внутриглазную жидкость берут путем пункции передней камеры глаза. Материал транспортируют в лабораторию непосредственно в закрытом шприце, или транспортной среде.

Отбор материала при воспалении наружного уха.

Кожу обрабатывают этанолом (70%)Ю промывают стерильным физиологическим раствором, материал берут стерильным ватным тампоном.

Кровь.

Рекомендуется брать кровь при лихорадочных состояниях стерильным шприцом в количестве 15…20 мл. Кожу предварительно обрабатывают 70% этанолом, затем настойкой йода (1…2%) в течение 30 сек. Целесообразно из шприца материал сразу выливать во флаконы с питательной средой. Резиновую пробку флакона обрабатывают этанолом, настойкой йода, и прокаливают иглой шприца.

Кожу в области пункции обрабатывают этанолом, настойкой йода. Материал берут при помощи стерильного шприца. Перед посевом материал центрифугируют при 3000 оборатах в минуту, в течение 20…30 минут в стерильных пробирках, посев производят из осадка.

Моча.

Наружные половые органы обмывают водой, ополаскивают стерильным физиологическим раствором, осушают стерильной марлевой салфеткой, тампоном. Первую порцию мочи не берут, последующую помещают в стерильную посуду. Моча даже здорового животного содержит бактерии, поэтому мочу следует доставлять в лабораторию в кратчайшие сроки. Допускается ее хранение в холодильнике в течение 18 часов. Соблюдение данных условий позволяет не только выделить возбудителя, но и провести количественную оценку содержания бактерий в моче.

Показаниями для исследования на дисбактериоз являются: затянувшийся период восстановления после острых кишечных инфекций, длительные кишечные расстройства, при которых не удается выявить специфический возбудитель, длительная антибиотикотерапия и т. д.

От момента последнего принятия корма до взятия материала должно пройти не менее 8…10 часов. Для количественной оценки содержания бактерий различных групп кал после естественной дефекации собирают в стерильную, герметически закрывающуюся посуду в количестве не менее 2 г и доставляют в лабораторию не позднее 2 часов после забора, посев должен быть произведен не позднее 4 часов после взятия материала. Для объективной трактовки полученных результатов целесообразно проводить 2…3 кратные исследования с интервалом в 1…2 дня.

Для обнаружения возбудителей инфекционных болезней кал берут стерильным ватным тампоном, которые вводят на глубину 8…10 см в прямую кишку и затем помещают в стерильную пробирку.

Взятие материала из половых органов.

Вагинальное отделяемое забирают при помощи стерильного ватного тампона. У крупных животных, например, коров — цервикальную, вагинальную слизь берут с помощью пипеток длиной 40…59 см, употребляемых для искусственного осеменения. Пипетки соединяют короткой резиновой трубочкой со шприцем, набирают 2 мл стерильного физиологического раствора и вводят его во влагалище или шейку матки, а затем выливают жидкость в стерильную пробирку.

Материал от самцов обычно получают в виде препуциальных смывов. Предварительно проводят санитарную обработку препуция, затем в препуциальную полость вводят необходимое количество стерильного физиологического раствора при помощи шприца и полистироловой пипетки, массируют препуций, и отсасывают смывную жидкость.