Гидроксильные группы.
Создание полимерных микросфер для биотехнологии с функционально-модифицированной поверхностью в широком интервале диаметров
И 2-ая стадии протекают при 25 °C в течение 15 минут с периодическим добавлением 2Nраствора гидроксида натрия для поддержания щелочного pH, после чего проводят очистку суспензии от побочных продуктов. 3-ая стадия проводится в 0.1 М боратном буфере при рН=8.0−8.5 и температуре 4 °C в течение 4 часов. Непрореагировавшие активированные гидроксильные группы связывают добавлением 0.1 М глицинового… Читать ещё >
Гидроксильные группы. Создание полимерных микросфер для биотехнологии с функционально-модифицированной поверхностью в широком интервале диаметров (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
Гидроксильные группы на поверхности частиц полимерной суспензии активируют в 2 стадии цианоген-бромидным методом. Первоначально они взаимодействуют с бромцианом в сильнощелочных средах (pH=10−11) с последующим связыванием с аминогруппами белковых молекул. Реакция протекает по схеме, описанной в [44]:
1 и 2-ая стадии протекают при 25 °C в течение 15 минут с периодическим добавлением 2Nраствора гидроксида натрия для поддержания щелочного pH, после чего проводят очистку суспензии от побочных продуктов. 3-ая стадия проводится в 0.1 М боратном буфере при рН=8.0−8.5 и температуре 4 °C в течение 4 часов. Непрореагировавшие активированные гидроксильные группы связывают добавлением 0.1 М глицинового буфера с рН=8.5 и проводят полную очистку суспензии.
Этот метод активации может быть использован только для ковалентного связывания биомолекул, устойчивых в сильнощелочных средах. К недостаткам метода следует отнести высокую токсичность бромциана и заметную агрегацию полимерных микросфер в процессе связывании биолигандов с функциональными группами.
Согласно работам [2,75,76], для активации гидроксильных групп также могут быть применены и другие реактивы: тозилхлорид (п-толуолсульфонилхлорид), 2,2,2-трифтор-этансульфонилхлорид [75,76] и карбонил-ди-имидазол [67,68]. Для примера, ниже приведена схема активации гидроксильных групп с использованием тозилхлорида:
Весьма удобным методом активации гидроксильных групп является окисление гликольных групп, которые могут быть легко получены как промежуточное соединение при гидролизе эпоксидных групп или окислении двойных связей в полидиенах (см. ниже). Микросферы с гликолевыми группами на поверхности микросфер получают, как это было сказано ранее, при полимеризации стирола в присутствии декстранов в качестве функциональных поверхностно-активных веществ[59]. Окисление проводят йодной кислотой или ее солями — перйодатами, при комнатной температуре и нейтральном pH в течение 30−60 минут в отсутствие освещения[50,40,41]. В реакцию вступают только гликоли с первичными и вторичными гидроксильными группами, при этом происходит разрыв связи С-С с образованием двух альдегидных групп:
Образовавшиеся побочные продукты отделяются на стадии очистки полимерных микросфер.