Методы качественного определения пуриновых алкалоидов

Общие способы идентификации.

1. Мурексидная проба. Общегрупповая реакция на пурины, основанная на окислительно-гибролитическом разложении веществ группы ксантина до производных пиримидина. Для проведения реакции препарат нагревают на водяной бане с окислителем (H2O2, Br2, HNO3) в кислой сореде. Затем добавляют раствор аммиака — появляется пурпурно-красное окрашивание.

На примере мочевой кислоты.

Для мочевой кислоты нагревание производят с концентрированной азотной кислотой. В случае метилированных производных ксантина вместо азотной кислоты применяют раствор перекиси водорода в солянокислой среде.

2. Электрофильное замещение после щелочного гидролиза. При значении pH свыше 9 происходит разложение кофеина до кофеиндикарбоновой кислоты, которая разлагается до кофеидина и соответствующего карбоната.

В сернокислой среде кофеин может разлогаться до муравьиной кислоты. Теофиллидин, полученный в такой же реакции с теофиллином, может быть идентифицирован по образованию азокрасителя.

• 3. Реакция с реактивом Вагнера. При нагревании в 0,5−1,0 мл воды, прибавляют 1−2 капли раствора йода 0,1 моль/л, 1−2 капли разведенной хлористоводородной кислоты и наблюдают оранжево-красный или кирпично-красный осадок.
• 4. Реакция с танином. К навеске препарата прибавляют по каплям 0,1% раствор танина и наблюдают беловатый или желтоватый аморфный осадок, растворимый в избытке реактива.
• 5. Реакция с хлоридом ртути (II). Общая для кофеина, теобромина, теофиллина реакция с хлоридом ртути (II); образуется белый кристаллический осадок, представляющий собой комплексное соединение, включающее оба вещества в эквимолярном соотношении.
• 6. ТСХ

Частные способы идентификации Кофеин:

• 1. Определяют Тпл. (234° - 239°С), ИК-спектральные характеристики.
• 2. Реакция с ацетилацетоном и диметиламинобензальдегидом. Раствор субстанции в смеси ацетилацетона и раствора натрия гидроксида разведенного нагревают на водяной бане, охлаждают и прибавляют раствор диметиламинобензальдегида и еще раз нагревают. Охлаждают и прибавляют воду — появляется интенсивное синее окрашивание

• 3. Реакция с раствором калия йодида йодированным в присутствии кислоты хлористоводородной разведенной — появляется коричневый осадок, который растворяется при добавлении раствора натрия гидроксида.
• 4. Потеря в массе при высушивании не должна превышать 0,5% - в отличие от кофеина моногидрата.

Кофеин-бензоат натрия:

• 1. Остаток бензойной кислоты в кофеин-бензоате натрия определяют по осадку телесного цвета в реакции с хлоридом железа (III).
• 2. Препарат подкисляют уксусной кислотой, если нужно, фильтруют, прибавляют цинк-уранил-ацетат — образуется желтый кристаллический осадок.
• 3. Препарат внесенный в пламя, окрашевает его в желтый цвет.

Теобромин:

1. Реакция его натриевой соли, полученной при взаимодействии щелочи с избытком теобромина (используется фильтрат) с раствором CоCl2 — появляется быстро исчезающее интенсивное фиолетовое окрашивание и образуется осадок серовато — голубого цвета.

2. Реакция натриевой соли теобромина с раствором AgNО3 — образуется коричневая густая желатинообразная масса (серебрянная соль), которая разжижается при нагревании до 60−80°С и снова застывает при охлаждении.

Теофиллин.

• 1. Со щелочным раствором нитропруссида натрия — образуется зеленое окрашивание, исчезающее при добавлении избытка кислоты.
• 2. С 2,6-дихлорхинонхлоримидом в боратном буферном растворе буферном растворе образует мероцианиновый краситель интенсивно-голубого цвета

3. Реакция с CoCl2(см. теобромин) Эуфиллин.

1. Реагирует с раствором сульфата меди с образованием красно-фиолетового комплекса (реакция на этилендиамин).

Дипрофиллин.

• 1. При кипячении препарата с раствором едкого натра наблюдают выделение аммиак, окрашивающий красную лакмусовую бумажку в синий цвет.
• 2. Препарат и бисульфат калия помещают в пробирку, накрывают фильтровальной бумагой, смоченной свежеприготовленным раствором нитропруссида натрия и каплей пиперидина и нагревают; появляется синее пятно, переходящее в розовое при добавлении 2−3 капель 1 н. раствора едкого натра.