Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Использование rhHsp70 для регуляции активности иммунокомпетентных клеток

Диссертация: Использование rhHsp70 для регуляции активности иммунокомпетентных клеток
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Кроме того, показано, что многие БТШ обладают иммунорегуляторной активностью и стимулируют созревание незрелых ДК и секрецию ДК цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНОа и ИЛ-12, которые обеспечивают и поддерживают индукцию и пролиферацию антигенспецифических, в том числе, опухолеспецифических ЦТЛ. Однако, сведения об иммунорегуляторной активности БТШ весьма противоречивы. Важно отметить, что при исследовании… Читать ещё >

Использование rhHsp70 для регуляции активности иммунокомпетентных клеток (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • Список сокращений. Стр
  • Глава 1. Обзор литературы
    • 1. 1. Основные свойства белков теплового шока
      • 1. 1. 1. Открытие иммуногенных свойств комплексов
  • Hsp70 с пептидами
    • 1. 1. 2. БТШ. Классификация и функции
    • 1. 1. 3. Особенности генов, полиморфизм, строение и локализация БТШ
    • 1. 2. Рецепторы Hsp
    • 1. 2. 1. Toll-like рецепторы
    • 1. 2. 2. Рецептор CD
    • 1. 2. 3. Эндоцитирующие рецепторы: CD91 и scavenger"
    • 1. 3. Возможные клетки-мишени для Hsp
    • 1. 3. 1. Влияние на дендритные клетки
    • 1. 3. 2. Влияние на естественные киллеры (NK-клетки)
  • Глава 2. Материалы и методы
  • Глава 3. Результаты и обсуждение
    • 3. 1. Характеристика чистоты и иммунохимических свойств препарата rhHsp70А1В
    • 3. 2. Исследование влияния rhHsp70AlB на свойства и функции ДК
      • 3. 2. 1. Характеристика ДК
      • 3. 2. 2. Исследование способности rhHsp70AlB связываться и эндоцитироваться ДК разной степени зрелости
      • 3. 2. 3. Исследование влияния rhHsp70AlB на созревание ДК
      • 3. 2. 4. Изучение влияния белка rhHsp70 на уровень секреции ФНОа дендритными клетками человека
      • 3. 2. 5. Изучение влияния rhHsp70 на антигенпредставляющую способность ДК
      • 3. 2. 6. Изучение влияния белка rhHsp70 на способность дендритных клеток человека стимулировать неспецифическую (спонтанную) ЦТА лимфоцитов
    • 3. 3. Изучение влияния белка rhHsp70 на активность естественных киллеров
    • 3. 4. Исследование влияния АДФ на функции ДК
      • 3. 4. 1. Исследование влияния АДФ на способность ДК эндоцитировать ФИТЦ-меченный пептид
      • 3. 4. 2. Исследование способности зрелых ДК, обработанных вирусоспецифическим пептидом или лизатами опухолевых клеток в присутствии АДФ, индуцировать продукцию ФНОа и ИФу лимфоцитами

      3.4.3. Исследование влияния АДФ, добавляемого при нагрузке ДК пептидными антигенами и антигенами из лизатов опухолевых клеток, на способность ДК активировать неспецифическую и индуцировать антигенспецифическую ЦТА лимфоцитов.

      3.5. Изучение эффективности индукции антигенспецифических ЦТЛ при использовании комплексов rhHsp70 с антигенами для оптимизации введения антигенов в дендритные клетки человека

      3.5.1. Изучение влияния обработки дендритных клеток человека свободным меланомаспецифическим пептидом MelanA/Mart и его комплексами с rhHsp70 на цитотоксическую активность индуцированных ими ЦТЛ в зависимости от степени зрелости дендритных клеток

      3.5.2. Изучение влияния обработки дендритных клеток человека комплексами rhHsp70 с пептидами лизата опухолевых клеток на цитотоксическую активность индуцированных ими ЦТЛ в зависимости от степени зрелости дендритных клеток.

      3.5.3. Анализ уровня секреции цитокинов ИФу и ФНОа лимфоцитами после их стимуляции ДК, обработанными комплексами rhHsp70 с антигенами лизатов опухолевых клеток.

Актуальность проблемы. Многие формы онкологических заболеваний до сих пор трудно поддаются современным методам терапии, основанным на хирургическом вмешательстве, использовании химиотерапии и лучевой терапии. Поэтому наряду с совершенствованием классических методов крайне актуальными являются исследования, направленные на создание новых стратегий борьбы с раком с помощью иммунотерапии, целью которых является как предупреждение развития опухолей, так и их элиминация, в частности, с использованием белков теплового шока (БТШ, Hsp) для специфической активации иммунной системы.

В 1980;х годах в экспериментах Р. К Srivastava и соавторов была обнаружена способность выделенных из опухолевых тканей БТШ разных семейств — Hsp70, gp96, Hsp90 — индуцировать клеточный противоопухолевый иммунный ответ [1,2]. Иммуногенность таких препаратов определяется присутствием в их составе опухолеспецифических антигенов (ОСА) или их фрагментов — опухолеспецифических пептидов (ОСП) — в виде прочно связанных комплексов с БТШ [1,3−5]. Это открытие стимулировало исследования, направленные на создание реконструированных противоопухолевых вакцин на основе рекомбинантных белков Hsp70 и gp96 в виде комплексов с ОСА, в том числе с синтетическими МНС-рестриктированными ОСП, или в виде фьюжен-белков БТШ с ОСА, или в виде ДНК-вакцин, содержащих гены БТШ и ОСА [6−9].

Высокая иммуногенность комплексов ОСА с нативными и рекомбинантными Hsp70 и gp96 обусловлена способностью этих БТШ транспортировать ОСА в важнейшие антигенпредставляющие клетки организма — в дендритные клетки (ДК) [10,11]. В результате процессинга экзогенных антигенов в ДК образуются пептиды, которые могут встраиваться в молекулы МНС класса II и пептиды, которые могут встраиваться в молекулы МНС I, презентироваться в контексте этих молекул.

Т-лимфоцитам и распознаваться Т-клеточным рецептором CD4+ и CD8+ цитотоксических лимфоцитов (ЦТЛ) соответственно. Полагают, что БТШ оптимизируют этот процесс, обеспечивая транспорт ОСП через внутриклеточные мембраны в те везикулы клетки, где происходит формирование комплексов пептидов с белками МНС I.

Кроме того, показано, что многие БТШ обладают иммунорегуляторной активностью и стимулируют созревание незрелых ДК и секрецию ДК цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНОа и ИЛ-12, которые обеспечивают и поддерживают индукцию и пролиферацию антигенспецифических, в том числе, опухолеспецифических ЦТЛ [12−14]. Однако, сведения об иммунорегуляторной активности БТШ весьма противоречивы. Важно отметить, что при исследовании даже высоко очищенных от эндотоксинов нативных и рекомбинантных эукариотических БТШ одни авторы обнаруживают у Hsp70 способность ускорять созревание ДК и активировать их функции [13−15], в то время как другие не находят у этого белка свойств цитокина и показывают, что его способность усиливать презентацию антигенов целиком определяется влиянием Hsp70 на внутриклеточную доставку пептидов при использовании антигенов в виде комплексов с Hsp70 [16,17]. Разногласия в оценке иммунорегуляторной активности БТШ могут зависеть как от особенностей использованных препаратов Hsp70, так и от выбранных клеточных моделей.

В связи с этим целью настоящей работы явилось изучение влияния рекомбинантного белка Hsp70AlB человека (rhHsp70) на активность ДК человека разной стадии созревания и возможности оптимизации противоопухолевого клеточного иммунного ответа при использовании реконструированных комплексов Hsp70 с ОСА.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Выделение и очистка rhHsp70AlB из бактериальной массы штамма клеток E. coli, трансформированных экспрессионной плазмидой pQE80-hHSP70AlB, конструкция которой содержит полноразмерную последовательность гена HSP70A1B.

2. Характеристика полученного белка по молекулярной массе и иммунохимической активности с помощью электрофореза в ПААГе и иммуноблоттинга.

3. Исследование влияния rhHsp70 на активность NK-клеток, уровень секреции ФНОа незрелыми ДК (нзДК) и зрелыми ДК (зрДК) и способность ДК разной степени зрелости стимулировать пролиферацию и цитотоксическую активность (ЦТА) лимфоцитов.

4. Исследование возможности оптимизации индукции опухолеспецифических ЦТЛ при использовании комплексов ОСП MelanA/Mart с rhHsp70.

5. Исследование возможности оптимизации индукции опухолеспецифических ЦТЛ при использовании комплексов ОСА лизатов опухолевых клеток с rhHsp70.

Научная новизна работы.

Впервые обнаружено, что выделенный и очищенный из штамма-продуцента E. coli рекомбинантный белок теплового шока человека rhHsp70AlB по иммунохимическим свойствам отличается от rhHsc70 и rHsp70 М. tuberculosis, несмотря на высокую степень гомологии этих белков.

Впервые обнаружено, что rhHsp70AlB стимулирует секрецию ФНОа и повышает способность дендритных клеток стимулировать спонтанную ЦТА лимфоцитов только при действии на зрелые дендритные клетки.

Впервые показано, что введение комплексов опухолеспецифических антигенов с Hsp70 в ДК можно проводить в присутствии АДФ и Mg~, что обеспечивает стабильность этих комплексов.

Впервые обнаружено, что использование различных опухолеспецифических антигенов при нагрузке зрелых ДК в форме комплексов с rhHsp70AlB позволяет индуцировать ЦТЛ с более высокой специфической цитотоксической активностью, чем при использовании свободных антигенов.

Практическая значимость исследования.

Обнаружено, что выделенный и очищенный из штамма-продуцента E. coli рекомбинантный белок теплового шока человека rhHsp70AlB обладает иммунорегулирующей активностью, но при этом оказывает разные эффекты на ДК человека на разных стадиях их дифференцировки: ускоряет созревание незрелых ДК и повышает их антигенпредставляющую способность, но активирует только зрелые ДК, стимулируя секрецию ФНОа и повышая их способность стимулировать ЦТА лимфоцитов, что необходимо учитывать, при создании вакцин на основе этого белка.

Обнаруженная возможность проводить введение комплексов антигенов с л 1.

Hsp70 в ДК в присутствии комплексообразующих агентов АДФ и Mg упрощает и делает более стабильной процедуру введения антигенов в ДК. Продемонстрированная в работе оптимизация индукции клеточного иммунного ответа при стимуляция лимфоцитов ДК, в которые опухолеспецифические антигены вводили в виде комплексов с rhHsp70AlB позволяет рекомендовать этот белок для разработки реконструированных вакцин и для оптимизации приготовления ДК-вакцин.

Апробация работы. Результаты исследований были доложены на Российском Медицинском Форуме-2006 «Фундаментальная наука и практика» (2006, Москва), на International Scientific-Practical Interdisciplinary Workshop «New Technologies in Medicine and Experimental Biology» (2007,.

Bangkok-Pattaya, Thailand), на Международной конференции «Физиология и патология иммунной системы» и IV Международной конференции по иммунотерапии (2008 г., Москва), на XII Онкологическом конгрессе (2008 г., Москва), на Иммунологическом форуме с международным участием (2008 г., Санкт-Петербург).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ: 3 статьи, опубликованные в журналах, состоящих в перечне ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, рекомендованных ВАК, и 5 публикаций, представленных в материалах конференций.

Выводы.

1. Обнаружено, что выделенный и очищенный из штамма-продуцента E. coli рекомбинантный белок теплового шока человека rhHsp70AlB по иммунохимическим свойствам отличается от rhHsc70 и rHsp70 М. tuberculosis.

2. Показано, что rhHsp70AlB специфически связывается и эндоцитируется дендритными клетками человека.

3. Показано, что rhHsp70AlB ускоряет созревание незрелых дендритных клеток человека и повышает их антигенпредставляющую способность, а также активирует NK-клетки.

4. Обнаружено, что rhHsp70AlB стимулирует секрецию ФНОа и повышает способность дендритных клеток стимулировать спонтанную ЦТА лимфоцитов при действии только на зрелые дендритные клетки.

5. Показано, что введение комплексов антигенов с Hsp70 в дендритные клетки можно проводить в присутствии АДФ и Mg, что обеспечивает стабильность этих комплексов.

6. Обнаружено, что использование различных опухолеспецифических антигенов при нагрузке зрелых дендритных клеток в форме комплексов с rhHsp70AlB позволяет индуцировать ЦТЛ с более высокой специфической цитотоксической активностью, чем при использовании свободных антигенов.

7. Показано, что стимуляция лимфоцитов дендритными клетками, в которые опухолеспецифические антигены вводили в виде комплексов с rhHsp70AlB, сопровождалась более высоким уровнем секреции цитокинов ФНОа и ИФу.

Заключение

.

В результате проведенной работы был выделен из штамма-продуцента, очищен и охарактеризован рекомбинантный белок Hsp70AlB человека. Используемый при очистке протокол позволяет получить белок с чистотой не менее 99% (рис. 1). Чистота препарата подтверждена данными электрофореза и иммуноблоттинга. Кроме того, с помощью иммуноблоттинга показано отсутствие взаимодействия препаратов rhHsc70 и rHsp M. tuberculosis в отличие от rhHsp70 с использовавшимися нами МоАТ к белку rhHsp70 (рис. 2). Этот факт свидетельствует о том, что, несмотря на очень высокий уровень гомологии между белками семейства HSP70, их иммунохимические свойства имеют значительные различия, что может обусловливать различия и в иммунорегулирующих свойствах. Содержание эндотоксина в полученных нами препаратах rhHsp70 согласно результатам JIAJI-теста составляло от 150 до 480 нг ЛПС на 1 мг белка. В связи с этим, а также для исключения влияния на результаты исследований возможных примесей ЛПС в других реактивах, все эксперименты проводили с использованием полимиксина В, связывающего ЛПС.

Иммунорегуляторные свойства rhHsp70AlB и иммуногенные свойства его комплексов с ОСА были изучены нами в экспериментах с ДК.

В экспериментах с ФИТЦ-меченным белком нами показано, что rhHsp70AlB связывается с ДК, причем это связывание является высокоспецифическим (рис. 4). Уровень связывания rhHsp70 с ДК зависит от степени их зрелости, достигая более высоких значений при взаимодействии белка со зрелыми ДК, что, по всей видимости, связано с увеличением количества рецепторов к Hsp70 при созревании ДК (рис. 5). В соответствии с литературными данными, одним из наиболее вероятных рецепторов в этом случае является CD40 [101,102]. Показана также способность ДК накапливать rhHsp70AlB. Таким образом, rhHsp70AlB специфически взаимодействует с ДК и, следовательно, может оказывать влияние на их свойства и функции.

Взаимодействуя с незрелыми ДК, rhHsp70 несколько ускоряет их созревание, что наблюдается по повышению уровня экспрессии CD80, CD86 и в меньшей степени CD83 (рис. 6). Тем не менее, созревание, индуцированное rhHsp70, выражено в значительно меньшей степени, по сравнению с созреванием, вызванным ФНОа и лейкинфероном, и ДК, полученные при обработке rhHsp70, занимают промежуточное положение между зрелыми и незрелыми ДК. Таким образом, для получения полноценных зрелых ДК недостаточно сигнала только от rhHsp70. В то же время в исследовании по изучению влияния rhHsp70 на АПС незрелых ДК, проведенные в аллогенной системе, выявили стимулирующие свойства rhHsp70 (рис. 8).

Кроме того, показано, что обработка зрелых ДК белком rhHsp70 приводит к увеличению уровня секреции ФНОа (рис. 7) и повышает их способность к индукции спонтанной ЦТА лимфоцитов (рис. 9).

Таким образом, в условиях, исключающих действие незначительной примеси ЛПС благодаря использованию полимиксина В, обнаружено, что rhHsp70AlB обладает иммунорегулирующей активностью.

Для образования комплексов ОСА с rhHsp70 необходимо использовать.

АДФ и Mg2+ и целесообразно добавлять приготовленные комплексы, не удаляя эти компоненты, что обеспечило бы более длительную стабильность комплексов. Но поскольку присутствие АДФ и Mg в смеси для получения комплексов могло повлиять на результаты исследований при добавлении к.

ДК, нами было изучено их воздействие на способность ДК индуцировать специфические ЦТЛ. Эксперименты, проведенные с этой целью, показали.

2+ отсутствие отрицательного влияния АДФ и Mg на накопление зрелыми ДК антигенов. Более того, инкубация зрелых ДК с АДФ приводила к повышению их способности активировать лимфоциты, что оценивалось по уровню продукции цитокинов индуцированными лимфоцитами (рис. 12). В целом же,.

2+ влияние АДФ и Mg на функции ДК является незначительным по сравнению с эффектами, обусловленными воздействием на ДК комплексов rhHsp70-антиген.

Исследования, проведенные нами для изучения иммуногенных свойств комплексов rhHsp70 с антигенами, показали, что введение опухолеспецифического пептида в зрелые ДК в виде комплексов с rhHsp70 позволяет за два цикла стимуляции такими ДК индуцировать специфическую ЦТА лимфоцитов, чего не происходит при введении в ДК свободного пептида (рис. 16). Более того, нагрузка ДК комплексами rhHsp70 с лизатами опухолевых клеток, даже в случае использования незрелых ДК, позволяет индуцировать более активные ЦТЛ (рис. 17- рис. 18). Также показано, что предварительная обработка ДК комплексами rhHsp70 с антигенами лизатов опухолевых клеток, независимо от степени зрелости ДК, приводит к значительному повышению секреции ИФу (рис. 19) и ФНОа (рис. 20) индуцированными лимфоцитами, что свидетельствует об оптимизации развития иммунного ответа при использовании комплексов.

Как уже говорилось, различия в эффектах rhHsp70, а, соответственно, и его комплексов с антигенами при воздействии на незрелые и зрелые ДК обусловлены, по всей видимости, соотношением на поверхности клеток рецепторов, участвующих в распознавании rhHsp70. Несмотря на то, что в настоящей работе не ставилось задачи определить данные рецепторы, сопоставление данных литературы и полученных нами результатов позволяет сделать вывод, что эффекты исследовавшегося нами белка rhHsp70AlB косвенно подтверждают участие в его распознавании рецептора CD40, являющегося одним из основных рецепторов, изучаемых в качестве рецептора Hsp70 [101,102]. Данный вывод следует из того, что наблюдавшиеся в наших исследованиях эффекты rhHsp70 и его комплексов с антигенами были наиболее выражены при взаимодействии со зрелыми ДК, на поверхности которых экспрессируется значительно большее количество молекул CD40 по сравнению с незрелыми ДК. В тоже время, не стоит исключать возможности наличия и других рецепторов к Hsp70. Тем не менее, маловероятным является возможное участие TLR4 в наблюдавшихся нами эффектах, так как многие исследования показали необходимость присутствия молекул CD 14 для его взаимодействия с Hsp70 [13,16], а их экспрессия на поверхности зрелых ДК практически полностью прекращается. В тоже время, это еще раз подтверждает, что эффекты rhHsp70, наблюдавшиеся в наших экспериментах, не являются результатом загрязненности ЛПС, для распознавания которых также необходимы молекулы CD14.

В контексте ведущихся в литературе дискуссий о свойствах Hsp70 необходимо отметить, что полученные в наших исследованиях результаты характеризуют белок rhHsp70AlB как перспективный препарат, комплексы с которым позволяют оптимизировать доставку антигенов в ДК, и, в то же время, свидетельствуют о слабой выраженности цитокиновых (так называемых, шаперокиновых) свойств индивидуального белка.

Выявленные в результате настоящей работы различия в эффектах rhHsp70 и его комплексов на ДК разной степени зрелости являются важным аспектом для планирования будущих исследований, в частности, при использовании комплексов rhHsp70 с антигенами в качестве основы для вакцин предстоит решить вопрос о наилучшем способе их введения в организм.

Таким образом, в проведенных исследованиях показано, что полученный нами белок rhHsp70AlB обладает иммунорегулирующими свойствами, а его комплексы с различными антигенами позволяют оптимизировать введение антигенов в ДК, что позволяет рекомендовать использование белка rhHsp70AlB в качестве основы для создания противоопухолевых вакцин, а также для приготовления ДК-вакцин.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Srivastava РК, Menoret A, Basu S, et al. Heat shock proteins come of age: primitive functions acquire new roles in an adaptive world. // Immunity. — 1998. — Vol.8.-P.657−65.
  2. Udono H, Srivastava PK. Comparison of tumor-specific immunogenicities of stress-induced proteins gp96, hsp90, and hsp70. // J. Immunol. 1994. -Vol. 152(1 l).-P.5398−403.
  3. Suto R, Srivastava PK. A mechanism for the specific immunogenicity of heat shock protein-chaperoned peptides. // Science. 1995. — Vol.269(5230). — P.1585−8.
  4. Przepiorka D, Srivastava PK. Heat shock protein—peptide complexes as immunotherapy for human cancer. // Mol. Med. Today. 1998. — Vol.4(ll). -P.478−84.
  5. Ishii T, Udono H, Yamano T, Ohta H, et al. Isolation of MHC class I-restricted tumor antigen peptide and its precursors associated with heat shock proteins hsp70, hsp90, and gp96. // J. Immunol. 1999. — Vol. 162(3). — P. 1303−9.
  6. Blachere NE, Li Z, Chandawarkar RY, et al. Heat shock protein-peptide complexes, reconstituted in vitro, elicit peptide-specific cytotoxic T lymphocyte response and tumor immunity.//J. Exp. Med. 1997. — Vol.186. -P.1315−22.
  7. Li Z. In vitro reconstitution of heat shock protein-peptide complexes for generating peptide-specific vaccines against cancers and infectious diseases. // Methods. 2004. — Vol.32(l). — P.25−8.
  8. Wang XY, Li Y, Yang G, Subjeck JR. Current ideas about applications of heat shock proteins in vaccine design and immunotherapy. // Int. J. Hyperthermia. 2005. — Vol.21(8). — P.717−22.
  9. Zhang X, Yu C, Zhao J, et al. Vaccination with a DNA vaccine based on human PSCA and HSP70 adjuvant enhances the antigen-specific CD8+ T-cellresponse and inhibits the PSCA+ tumors growth in mice. J Gene Med. 2007 Aug-9(8):715−26.
  10. Arnold-Schild D, Hanau D, Spehner D, et al. Cutting edge: receptor-mediated endocytosis of heat shock proteins by professional antigen-presenting cells. //J. Immunol. 1999. — 162(7).-P.3757−60.
  11. Noessner E, Gastpar R, Milani V, et al. Tumor-derived heat shock protein 70 peptide complexes are cross-presented by human dendritic cells. // J. Immunol. 2002. — Vol.169(10). — P.5424−32.
  12. Asea A, Rehli M, Kabingu E et al. Novel signal transduction pathway utilized by extracellular HSP70 role of toll-like receptor (TLR) 2 and TLR4. // J. Biol. Chem. 2002. — Vol.277. — P. 15 028−43.
  13. Asea A. Stress proteins and initiation of immune response: chaperokine activity of hsp72. // Exerc. Immunol. Rev. 2005. — Vol.11. — P.34−45.
  14. Tsan MF, Gao B. Heat Shock Protein and Innate Immunity. // Cellular & Molecular Immunology. 2004. — Vol. 1(4). — P.274−279.
  15. Bausinger H, Lipsker D, Ziylan U et al. Endotoxin-free heat-shock protein 70 fails to induce APC activation. // Eur. J. Immunol. 2002. — Vol.32. -P.3708−13.
  16. Bendz H, Ruhland SC, Pandya MJ, et al. Human heat shock protein 70 enhances tumor antigen presentation through complex formation and intracellular antigen delivery without innate immune signaling. // J. Biol. Chem. 2007. -Vol.282(43). — P.31 688−702.
  17. Srivastava PK. Peptide-binding heat shock proteins in the endoplasmic reticulum: role in immune response to cancer and in antigen presentation.// Adv. Cancer. Res. 1993. — Vol.62. — P. 153−77.
  18. Udono H, Srivastava PK. Heat Shock Protein 70-associated Peptides Elicit Specific Cancer Immunity.// J. Exp. Med. 1993. — Vol. l78(4). — P.1391−6.
  19. Ciupitu AM, Petersson M, Kono K, et al. Immunization with heat shock protein 70 from methylcholanthrene-induced sarcomas induces tumor protection correlating with in vitro T cell responses.// Cancer Immunol. Immunother. 2002. — Vol.51. — P. 163−170.
  20. Navaratnam M, Deshpande MS, Hariharan MJ, Zatechka DS, Srikumaran S. Heat shock protein-peptide complexes elicit cytotoxic T-lymphocyte and antibody responses specific for bovine herpesvirus 1. // Vaccine. — 2001. Vol.19(11−12). — P.1425−1434.
  21. Wallin RP, Lundqvist A, More SH, et al. Heat-shock proteins as activators of the innate immune system. // Trends Immunol. 2002. — Vol.23. -P.130−135.
  22. Tsan MF, Gao B. Cytokine function of heat shock proteins. // Am. J. Physiol. 2004. — Vol.286. — P.739−744.
  23. Ritossa FA. A new puffing pattern induced by temperature shock and DNP in Drosophila. // Experientia. 1962. — Vol. l8. — P.571−573.
  24. Tissieres A, Mitchell HK, Tracy U. Protein synthesis in salvary glands of Drosophila melanpgaster: relation to chromosome puffs. // J. Mol. Biol. 1974. — Vol.84.-P.389−398.
  25. Fink AL. Chaperone-mediated protein folding. // Physiol. Rev. -1999. Vol.79. — P.425−449.
  26. Hard FU, Hayer-Hartl M. Molecular chaperones in the cytosol: from nascent chain to folded protein. // Science. 2002. — Vol.295. — P. l852−1858.
  27. Lindquist S, Craig EA. The heat-shock proteins. // Annu. Rev. Genet. 1988.- Vol.22. -P.631−677.
  28. Jaattela M. Heat shock proteins as cellular lifeguards. // Ann Med. -1999.-Vol.31.-P.261−271.
  29. Hightower LE, Hendershot LM. Molecular chaperones and the heat shock response at Cold Spring Harbor. Cell Stress Chaperon. 1997. — Vol.2. — P. l-11.
  30. Ingolia T.D., Craig E.A. Four small Drosophila heat shock proteins are related to each other and to mammalian alpha-crystallin. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982. — Vol.79. -P.2360−2364.
  31. Brocchieri L, Conway de Macario E, Macario AJ. hsp70 genes in the human genome: Conservation and differentiation patterns predict a wide array of overlapping and specialized functions. // BMC Evol. Biol. 2008. — Vol.8. — P. 19.
  32. Singh R, Kolvraa S, Rattan SI. Genetics of human longevity with emphasis on the relevance of HSP70 as candidate genes. // Front. Biosci. 2007. -Vol.12.-P.4504−4513.
  33. Milner CM, Campbell RD. Structure and expression of the three МНС-linked HSP70 genes. // Immunogenetics. 1990. — Vol.32. — P.242−251.
  34. Flaherty KM, DeLuca-Flaherty C, McKay DB. Three-dimensional structure of the ATPase fragment of a 70K heat-shock cognate protein. // Nature. -1990. Vol.346. — P.623−628.
  35. Cegielska A, Georgopoulos C. Functional Domains of the Escherihia coli dnaK Heat Shock Protein as Revealed by Mutational Analysis // J. Biol. Chem. — 1998. — Vol. 264(35). — P.21 122−21 130.
  36. Caplan AJ, Cyr DM, Douglas MG. Eukaiyotic homologues of Escherichia coli dnaj: a diverse protein family that functions with hsp70 stress proteins. // Mol. Biol. Cell. 1993. — Vol.4. — P.555−563.
  37. Kathryn V. Anderson, Gerd Jiirgens, Christiane Nusslein-Volhard. Establishment of dorsal-ventral polarity in the Drosophila embryo: Genetic studies on the role of the Toll gene product. // Cell. 1985. -Vol.42(3). — P.779−89.
  38. Anderson KV, Bokla L, Nusslein-Volhard C. Establishment of dorsal-ventral polarity in the Drosophila embryo: the induction of polarity by the Toll gene product. // Cell. 1985. — Vol.42(3). — P.791−8.
  39. Lemaitre B, Nicolas E, Michaut L, et al. The dorsoventral regulatory gene cassette spatzle/ToII/cactus controls the potent antifungal response in Drosophila adults. // Cell. 1996. — Vol.86(6). — P.973−83.
  40. Medzhitov R, Preston-Hurlburt P, Janeway С A. A human homologue of the Drosophila Toll protein signals activation of adaptive immunity. // Nature. -1997. Vol.388 (6640). — P.394−7.
  41. Gay N, Keith F. Drosophila Toll and IL-1 receptor. // Nature — 1991. — Vol.351. -P.355−356.
  42. Bowie A, O’Neill LA. The interleukin-1 receptor/Toll-like receptor superfamily: signal generators for pro-inflammatory interleukins and microbial products. // J. Leukoc. Biol. 2000. — Vol.67(4). -P.508−14.
  43. Poltorak A, He X, Smirnova I, et al. Defective LPS signaling in C3H/HeJ and C57BL/10ScCr mice: mutations in Tlr4 gene. // Science. 1998. -Vol.282. -P.2085−2088.
  44. Hoshino K, Takeuchi O, Kawai T, et al. Cutting edge: Toll-like receptor 4 (TLR4)-deficient mice are hyporesponsive to lipopolysaccharide: evidence for TLR4 as the Lps gene product. // J. Immunol. 1999. — Vol.162. — P.3749−3752.
  45. Kurt-Jones EA, Popova L, Kwinn L, et al. Pattern recognition receptors TLR4 and CD 14 mediate response to respiratory syncytial virus. // Nat. Immunol. 2000. — Vol. 1. — P.398−401.
  46. Smiley ST, King JA, Hancock WW. Fibrinogen stimulates macrophage chemokine secretion through tolllike receptor 4. // J. Immunol. — 2001. Vol.167. — P.2887−2894.
  47. Taylor KR, Trowbridge JM, Rudisill JA, et al. Hyaluronan fragments stimulate dermal endothelial recognition of injury through TLR4. // J. Biol. Chem.- 2004. Vol.279. — P. 17 079−17 084.
  48. Termeer C, Benedix F, Sleeman J, et al. Oligosaccharides of Hyaluronan activate dendritic cells via toll-like receptor 4. // J. Exp. Med. 2002. -Vol.195.-P.99−111.
  49. Tobias PS, Soldau K, Ulevitch RJ. Isolation of a lipopolysaccharide-binding acute phase reactant from rabbit serum. // J. Exp. Med. 1986. — Vol.164.- P.777−793.
  50. Shimazu R, Akashi S, Ogata H, et al. MD-2, a molecule that confers lipopolysaccharide responsiveness on Toll-like receptor 4. // J. Exp. Med. 1999. -Vol.189.-P.1777−1782.
  51. Viriyakosol S, Kirkland T, Soldau K, Tobias P. MD-2 binds to bacterial lipopolysaccharide. // J. EndotoxinRes. 2000. — Vol.6 — P.489−491.
  52. Medzhitov R, Preston-Hurlburt P, Kopp E, et al. MyD88 is an adaptor protein in the hToML-1 receptor family signaling pathways. // Mol. Cell. 1998.- Vol.2.-P.253−258.
  53. Muzio M, Ni J, Feng P, Dixit VM. IRAK (Pelle) family member IRAK-2 and MyD88 as proximal mediators of IL-1 signaling. // Science. 1997. -Vol.278.-P.1612−1615.
  54. Muzio M, Natoli G, Saccani S, et al. The human toll signaling pathway: divergence of nuclear factor kappaB and JNK/SAPK activation upstream of tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 (TRAF6). // J. Exp. Med. -1998. Vol.187. — P.2097−2101.
  55. Yamamoto M, Sato S, Hemmi H, et al. TRAM is specifically involved in the Toll-like receptor 4-mediated MyD88-independent signaling pathway. // Nat. Immunol. 2003. — Vol.4(l 1). — P. 1144−50.
  56. Yamamoto M, Sato S, Hemmi H, et al. Essential role for TIRAP in activation of the signalling cascade shared by TLR2 and TLR4. // Nature 2002. -Vol.420(6913). -P.324−9.
  57. Schwadner R, Dziarski R, Wesche H, et al. Peptidoglycan- and lipoteichoic acidinduced cell activation is mediated by Toll-like receptor 2. // J. Biol. Chem. 1999. — Vol.274. — P. 17 406−17 409.
  58. Yoshimura A, Lien E, Ingalls RR, et al. Cutting edge: Recognition of Gram-positive bacterial cell wall components by the innate immune system occurs via Toll-like receptor 2. // J. Immunol. 1999. — Vol.165. — P. 1−5.
  59. Brightbill HD, Libraty DH, Krutzik SR, et al. Host defense mechanisms triggered by microbial lipoproteins through Toll-like receptors. // Science. 1999. — Vol.285. — P.732−736.
  60. Means TK, Wang S, Lien E, et al. Human Toll-like receptors mediate cellular activation by Mycobacterium tuberculosis. // J. Immunol. 1999. -Vol.163.-P.3920−3927.
  61. Underhill DM, Ozinsky A, Hajjar AM, et al. The Toll-like receptor 2 is recruited to macrophage phagosomes and discriminates between pathogens. // Nature. 1999. — Vol.401. — P.811−815.
  62. Bieback K, Lien E, Klagge IM, et al. Hemagglutinin protein of wild-type measles virus activates toll-like receptor 2 signaling. // J. Virol. 2002. — Vol.76.-P.8729−8736.
  63. Compton T, Kurt-Jones EA, Boehme KW, et al. Human cytomegalovirus activates inflammatory cytokine responses via CD 14 and Tolllike receptor 2. // J. Virol. 2003. — Vol.77. — P.4588−4596.
  64. Kurt-Jones EA, Chan M, Zhou S, et al. Herpes simplex virus 1 interaction with Toll-like receptor 2 contributes to lethal encephalitis. //Proc. Natl.Acad. Sci. USA 2004. — Vol.101. -P.1315−1320.
  65. Werts C, Tapping RI, Mathison JC, et al. Leptospiral lipopolysaccharide activates cells through a TLR2-dependent mechanism. //Nat. Immunol. 2001. — Vol.2. — P.346−352.
  66. Ogawa T, Asai Y, Hashimoto M, et al. Cell activation by Porphyromonas gingivalis lipid A molecule through Toll-like receptor 4- and myeloid differentiation factor 88-dependent signaling pathway. // Int. Immunol. -2002. Vol.14. — P.1325−1332.
  67. Ozinsky A, Underhill DM, Fontenot JD, et al. The repertoire for pattern recognition of pathogens by the innate immune system is defined by cooperation between Toll-like receptors. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000. -Vol.97.-P.13 766−13 771.
  68. Takeuchi O, Sato S, Horiuchi T, et al. Role of TLR 1 in mediating immune response to microbial lipoproteins. // J. Immunol. 2002. — Vol.169. — P.10−14.
  69. Cooperstock MS. Inactivation of endotoxin by polymyxin B. // Antimicrob. Agents Chemother. 1974. — Vol.6 — P.422−425.
  70. Cavaillon JM, Haeffner-Cavaillon N. Polymyxin В inhibition of LPS-induced interleukin-1 secretion by human monocytes is dependent upon the LPS origin. // Mol. Immunol. 1986. — Vol.23. — P.965.
  71. Stokes DC, Shenep JL, Fishman M, et al. Polymyxin В prevents lipopolysaccharide-induced release of tumor necrosis factors from alveolar macrophages. // J. Infect. Dis. 1989. — Vol.160. — P.52.
  72. Asea A, Kraeft SK, Kurt-Jones EA, et al. Hsp70 stimulates cytokine production through a CD-14-dependent pathway, demonstrating its dual role as a chaperone and cytokine. // Nat. Med. 2000. — Vol.6 — P.43 5−442.
  73. Chen W, Syldath U, Bellmann K, et al. Human 60-kDa heat-shock protein: a danger signal to the innate immune system. // J. Immunol. 1999. -Vol.162.-P.3212−3219.
  74. Dybdahl B, Wahba A, Lien E, et al. Inflammatory response after open heart surgery: release of heat-shock protein 70 and signaling through Toll-like receptor-4. // Circulation. 2002. — Vol.105. — P.685−690,.
  75. Kol A, Lichtman AH, Finberg RW, et al. Cutting edge: heat shock protein (HSP) 60 activates the innate immune response: CD 14 is an essential receptor for HSP60 activation of mononuclear cells. // J. Immunol. 2000. -Vol.164. -P.13−17.
  76. Retzlaff C, Yamamoto Y, Hoffman PS, et al. Bacterial heat shock proteins directly induce cytokine mRNA and interleukin-1 secretion in macrophage cultures. // Infect. Immun. 1994. — Vol.62. — P.5689−5693.
  77. Retzlaff C, Yamamoto Y, Okubo S, et al. Legionella pneumophila heat-shock protein-induced increase of interleukin-1 mRNA involves protein kinase С signaling in macrophages. // Immunology 1996. — Vol.89. — P.281−288.
  78. Wang Y, Kelly CG, Singh M, et al. Stimulation of Th-1 polarizing cytokines, C-C chemokines, maturation of dendritic cells, and adjuvant function by the peptide binding fragment of heat shock protein 70. // J. Immunol. — 2002. -Vol.169.-P.2422−2429.
  79. Galdiero M, DeL’ero GC, and Marcatili A. Cytokine and adhesion molecule expression in human monocytes and endothelial cells stimulated with bacterial heat shock proteins. // Infect. Immun. 1997. — Vol.65. — P.699−707.
  80. Asea A, Kraeft SK, Kurt-Jones EA, et al. Hsp70 stimulates cytokine production through a CD-14-dependent pathway, demonstrating its dual role as a chaperone and cytokine. // Nat. Med. 2000. — Vol.6 — P.435−442.
  81. McLeish KR, Dean WL, Wellhausen SR, Stelzer GT. Role of intracellular calcium in priming of human peripheral blood monocytes by bacterial lipopolysaccharide. // Inflamation. 1989. — Vol.13. — P.681−92.
  82. Gao B, Tsan MF. Induction of cytokines by heat shock proteins and endotoxin in murine macrophages. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004. -Vol.317.-P.l 149−54.
  83. Gao B, Tsan MF. Endotoxin contamination in recombinant human Hsp70 preparation is responsible for the induction of TNFa release by murine macrophages. // J. Biol. Chem. 2003. — Vol.278. — P. 174−179.
  84. Johnson JD, Fleshner M. Releasing signals, secretory pathways, and function of endogenous extracellular heat shock protein 72. // J. Leucocyte Biol. — 2006. Vol.79. — P.425−433.
  85. Banchereau J, Bazan F, Blanchard D, et al. The CD40 antigen and its ligand. // Annu. Rev. Immunol. 1994. — Vol.12. — P.881−922.
  86. McWhirter SM, Pullen SS., Holton JM, et al. Crystallographic analysis of CD40 recognition and signaling by human TRAF2. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999.-Vol.96.-P.8408−8413.
  87. Cheng G, Cleary AM, Ye ZS, et al. Involvement of CRAF1, a relative of TRAF, in CD40 signaling. // Science. 1995. — Vol.267. — P. 1494−1498.
  88. Ishida T, Tojo T, Aoki T, et al. TRAF5, a novel tumor necrosis factor receptor-associated factor family protein, mediates CD40 signaling. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. — Vol.93. — P.9437−9442.
  89. Datta SK, Kalled SL. CD40-CD40 ligand interaction in autoimmune disease. // Arthritis Rheum. 1997. — Vol.40. — P. 1735−1745.
  90. Caux С, Massacrier С, Vanbervliet В, et al. Activation of human dendritic cells through CD40 cross-linking. // J. Exp. Med. 1994. — Vol.180. -P.1263−1272.
  91. Ridge JP, Di Rosa F, Matzinger P. A conditioned dendritic cell can be a temporal bridge between a CD4+ T-helper and a T-killer cell. // Nature. 1998. -Vol.393. -P.474−478.
  92. Buhlmann JE, Foy TM, Aruffo A, et al. In the absence of a CD40 signal, В cells are tolerogenic. // Immunity. 1995. — Vol.2. — P.645−653.
  93. Bennett SRM, Carbone FR, Karamalis F, et al. Help for cytotoxic-T-cell responses is mediated by CD40 signalling. // Nature. 1998. — Vol.393 -P.478−480.
  94. Kiener PA, Moran-Davis P, Rankin BM, et al. Stimulation of CD40 with purified soluble gp39 induces proinflammatory responses in human monocytes.//J. Immunol. 1995.-Vol.155. — P.4917−4295.
  95. Ballantyne J, Henry D. L, Muller J. R, et al. Efficient recombination of a switch substrate retro vector in CD40-activated В lymphocytes: implications for the control of CH gene switch recombination. // J. Immunol. 1998. — Vol.161. -P.1336−1347.
  96. Wang Y, Kelly C. G, Karttunen J. T, et al. 2001. CD40 is a cellular receptor mediating mycobacterial heat shock protein 70 stimulation of CC-chemokines. // Immunity. Vol.15. -P.971−983.
  97. Becker T, Hartl F. U, Wieland F. CD40, an extracellular receptor for binding and uptake of Hsp70-peptide complexes. // J. Cell Biol. 2002. -Vol.158.-P.1277−85.
  98. Delneste Y, Magistrelli G, Gauchat J, et al. Involvement of Lox-1 in dendritic cell-mediated antigen cross-presentation. // Immunity. 2002. — Vol.17. — P.353−62.
  99. Binder R. J, Han D. K, Srivastava P.K. CD91: a receptor for heat-shock protein gp96. // Nat. Immunol. 2000. — Vol. 1. — P. l51−155.
  100. Basu S, Binder R. J, Ramalingam T, Srivastava P.K. CD91 is a common receptor for heat shock proteins gp96, hsp90, hsp70, and calreticulin. // Immunity. 2001. — Vol.14. — P.303−313.
  101. Robert J, Ramanayake T, Maniero G. D, et al. Phylogenetic conservation of glycoprotein 96 ability to interact with CD91 and facilitate antigen cross-presentation. // J. Immunol. -2008. Vol. 180(5). -P.3176−82.
  102. Chen M, Masaki T, Sawamura T. LOX-1, the receptor for oxidized low-density lipoprotein identified from endothelial cells: implications in endothelial dysfunction and atherosclerosis. // Pharmacol. Ther. 2002. — Vol.95(l). — P.89−100.
  103. Shimaoka T, Kume N, Minami M, et al. LOX-1 supports adhesion of Gram-positive and Gram-negative bacteria. // J. Immunol. 2001. — Vol. 166(8). — P.5108−14.
  104. Kume N, Murase T, Moriwaki H, et al. Inducible expression of lectin-like oxidized LDL receptor-1 in vascular endothelial cells. // Circ. Res. 1998. -Vol.83(3). -P.322−7.
  105. Murase T, Kume N, Korenaga R, et al. Fluid shear stress transcriptionally induces lectin-like oxidized LDL receptor-1 in vascular endothelial cells. // Circ Res. 1998. — Vol.83(3). — P.328−33.
  106. Li D, Liu L, Chen H, et al. LOX-1, an oxidized LDL endothelial receptor, induces CD40/CD40L signaling in human coronary artery endothelial cells. //Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. -2003. -Vol.23(5). -P.816−21.
  107. Arnold D, Faath S, Rammensee H, Schild H. Cross-priming of minor histocompatibility antigen-specific cytotoxicT cellsupon immunization with the heat shock protein gp96. // J. Exp. Med. 1995. — Vol.182. — P.885−889.
  108. Roman E, Moreno C. Synthetic peptides non-cova-lently bound to bacterial hsp 70 elicit peptide-specific T-cell re-sponses in vivo. // Immunology. -1996. Vol.88 — P.487−492.
  109. Roman E, Moreno C. Delayed-type hypersensitivity elicited by synthetic peptides complexed with Mycobacterium tuberculosis hsp 70. // Immunology. 1997. — Vol.90. — P.52−56.
  110. Blachere N. E, Udono H, Janetzki S, et al. Heat shock protein vaccines against cancer. // J. Immunother. 1993. — Vol.14. — P.352−356.
  111. Banchereau J, Steinman R.M. Dendritic cells and the control of immunity. //Nature. 1998. — Vol.392. — P.245−252.
  112. Banchereau J, Briere F, Caux C, et al. Immunobiology of dendritic cells. // Annu. Rev. Immunol. 2000. — Vol. 18. — P.767−811.
  113. Sallusto F, Schaerli P, Loetscher P, et al. Rapid and coordinated switch in chemokine receptor expression during dendritic cell maturation. // Eur. J. Immunol. 1998. — Vol.28. — P.2760−2769.
  114. Gunn M. D, Tangemann K, Tam C, et al. A chemokine expressed in lymphoid high endothelial venules promotes the adhesion and chemotaxis of naive T lymphocytes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. — Vol.95. — P.258−263.
  115. Dieu M. C, Vanbervliet В, Vicari A, et al. Selective recruitment of immature and mature dendritic cells by distinct chemokines expressed in different anatomic sites. // J. Exp. Med. 1998. — Vol.188. — P.373−386.
  116. Chaux P, Moutet M, Faivre J, et al. Inflammatory cells infiltrating human colorectal carcinomas express HLA class II but not В7−1 and В7−2 costimulatory molecules of the T-cell activation. // Lab. Invest. — 1996. — Vol.74. — P.975−983.
  117. Marincola F.M., Jaffee E.M., Hicklin D.J. et al. Escape of human solid tumors from T-cell recognition: molecular mechanisms and functional significance // Adv. Immunol. 2000. — Vol. 74. — P. 181 -273.
  118. Banchereau J, Schuler-Thurner B, Palucka A. K, Schuler G. Dendritic cells as vectors for therapy. // Cell. 2001. — Vol.106. — P.271−274.
  119. Nestle F. O, Alijagic S, Gilliet M, et al. Vaccination of melanoma patients with peptide- or tumor lysate-pulsed dendritic cells. // Nat. Med. 1998. -Vol.4. -P.328−332.
  120. Mackensen A, Herbst B, Chen J.L., et al. Phase I study in melanoma patients of a vaccine with peptide-pulsed dendritic cells generated in vitro from CD34(+) hematopoietic progenitor cells. // Int. J. Cancer 2000. — Vol.86. -P.385−392.
  121. Murphy G.P., Elgamal A.A., Troychak M.J., Kenny G.M. Follow-up ProstaScint scans verify detection of occult soft-tissue recurrence after failure of primary prostate cancer therapy. // Prostate. 2000. — Vol.42. — P.315−317.
  122. Brossart P., Wirths S., Stuhler G., et al. Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses in vivo after vaccinations with peptide-pulsed dendritic cells. // Blood 2000. — Vol.96. — P.3102−3108.
  123. Yu J.S., Wheeler C.J., Zeltzer P.M., et al. Vaccination of malignant glioma patients with peptide-pulsed dendritic cells elicits systemic cytotoxicity and intracranial T-cell infiltration. // Cancer Res. 2001. — Vol.61. — P.842−847.
  124. Hsu F.J., Benike C., Fagnoni F., et al. Vaccination of patients with B-cell lymphoma using autologous antigen-pulsed dendritic cells. // Nat. Med. -1996,-Vol.2.-P.52−58.
  125. Reichardt V.L., Okada C.Y., Liso A., et al. Idiotype vaccination using dendritic cells after autologous peripheral blood stem cell transplantation for multiple myeloma a feasibility study. // Blood. — 1999. — Vol.93. — P.2411−2419.
  126. Gao B, Tsan MF. Recombinant human heat shock protein 60 does not induce the release of tumor necrosis factor a from murine macrophages. // J. Biol. Chem. 2003. — Vol.278. — P.22 523−22 529.
  127. Dhodapkar M.V., Steinman R.M., Krasovsky J., et al. Antigen-specific inhibition of effector T cell function in humans after injection of immature dendritic cells. // J. Exp. Med. 2001. — Vol.193. — P.233−238.
  128. Multhoff G. Activation of natural killer cells by heat shock protein 70. //Int. J. Hyperthermia. -2002. Vol. 18(6). -P.576−85.
  129. Н.Б., Кулагина M.A., Луценко C.B. и др. Экспрессия синтетического гена интерлейкина-4 человека в клетках Е. coli. Получение- P.766−776.
  130. H.B., Москалёва Е. Ю., Родина А. В. и др. Характеристика дендритных клеток человека, полученных с использованием стандартного и «ускоренного» методов культивирования. //Молекул. Медицина 2004. — Vol.2. — Р.38−44.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!