Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Получение и применение изотопомеров белков для количественного масс-спектрометрического определения белков в биологических объектах

Диссертация: Получение и применение изотопомеров белков для количественного масс-спектрометрического определения белков в биологических объектах
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Определение концентрации пептидов и белков — целевых продуктов при производстве лекарственных препаратов, диагностических наборов, реагентов для биохимических исследований — является актуальной задачей. В последние годы для определения концентрации белков, помимо традиционных методов анализа, успешно используются масс-спектрометрия. Это произошло после внедрения в практику мягких методов… Читать ещё >

Получение и применение изотопомеров белков для количественного масс-спектрометрического определения белков в биологических объектах (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • Перечень используемых сокращений
  • Глава 1. Обзор литературы по теме исследования
    • 1. 1. Принципы работы масс-спектрометров и их источников ионизации для анализа белков
      • 1. 1. 1. Масс-спектрометрия с ионизацией типа электроспрей
      • 1. 1. 2. Масс-спектрометрия с матричной лазерной десорбционной ионизацией (МЛДИ, МА1ЛЭ1)
      • 1. 1. 3. Качественное и количественное определение белков с помощью технологии 8Е1Х)
    • 1. 2. Масс-спектрометрическое определение концентрации белков
      • 1. 2. 1. Стадии пробоподготовки при проведении массспектрометрического определения концентрации белков
      • 1. 2. 2. Теория изотопного разбавления
      • 1. 2. 3. Способы введения метки
        • 1. 2. 3. 1. Метаболический способ введения метки
        • 1. 2. 3. 2. Химические способы введения метки
        • 1. 2. 3. 3. Использование меченых синтетических аминокислот и пептидов
        • 1. 2. 3. 4. Протеолитические способы введения метки
      • 1. 2. 4. Масс-спектрометрическое определение концентрации белков без использования изотопов
      • 1. 2. 5. Применение технологий получения изотопомеров для решения реальных задач в последние годы
      • 1. 2. 6. Преимущества и недостатки существующих на данный момент способов получения изотопомеров белков
    • 1. 3. Дезамидирование остатков аспарагина и глутамина
    • 1. А. Свойства белков, использованных в работе
      • 1. 4. 1. Свойства альбумина
      • 1. 4. 2. Альфа-1-антитрипсин
        • 1. 4. 2. 1. Биохимические свойства
        • 1. 4. 2. 2. Методы анализа а!-антитрипсина
        • 1. 4. 3. Альфа-2-макроглобулин
        • 1. 4. 4. Стрептокиназа как активатор плазминогена
      • 1. 5. Цель и задачи работы
  • Материалы и методы
  • Глава 2. Получение изотопно-модифицированных пептидов и белков для масс-спектрометрического определения их концентрации
    • 2. 1. Предпосылки для разработки нового способа получения изотопомеров
    • 2. 2. Новый способ получения изотопомеров
    • 2. 3. Оптимизация условий проведения изотопного обмена
    • 2. 4. Дезамидирование в условиях изотопного обмена
    • 2. 5. Точность определения концентрации белков
    • 2. 6. Выводы по главе 2
  • Глава 3. Практическое использование изотопомеров
    • 3. 1. Схемы масс-спектрометрического определения концентрации белков
      • 3. 1. 1. Схема масс-спектрометрического определения концентрации альбумина в сыворотке крови
      • 3. 1. 2. Схема масс-спектрометрического определения концентрации аг антитрипсина и а2-макроглобулина
    • 3. 2. Определение активности стрептокиназы
    • 3. 3. Выводы по главе 3

Актуальность работы.

Определение концентрации пептидов и белков — целевых продуктов при производстве лекарственных препаратов, диагностических наборов, реагентов для биохимических исследований — является актуальной задачей. В последние годы для определения концентрации белков, помимо традиционных методов анализа, успешно используются масс-спектрометрия. Это произошло после внедрения в практику мягких методов ионизации электроспрей (Е81-М8) и матричной лазерной десорбционной ионизации (МЛДИ, МАЫ)1). Сегодня по достоверности идентификации и точности определения масс масс-спектрометрии нет равных. Тем не менее, при проведении количественных измерений белков в биопробах имеются трудности. Они связаны с тем, что интенсивности сигналов могут не соответствовать даже относительным концентрациям соединений, а абсолютные интенсивности — не воспроизводиться. В то же время, интенсивности изотопных распределений воспроизводятся хорошо и, более того, соответствуют теоретически рассчитанным соотношениям.

Именно этот факт используют в количественной масс-спектрометрии. Обычно для каждого анализируемого соединения применяют его изотопно-меченый аналог, называемый изотопомером. Он идентичен анализируемому соединению по химической структуре, но отличается изотопным составом.

Существуют три группы традиционных способов получения изотопомеров: метаболический, химический и ферментативный. Первый способ подразумевает добавление в питательную среду аминокислот, меченных стабильными изотопами В, 13с, 15и и О. Химический способ подразумевает модификацию образца химическими группировками в двух формах: первую — с природным изотопным составом (аналит), вторуюхимически идентичную первой, но содержащую различные изотопы, такие.

1 3 1 ^ как дейтерий, углерод С или азот N. Третий способ подразумевает проведение ферментативного гидролиза в присутствии воды Н2180. Таким путем получают пептидные фрагменты белка с изотопно-меченной карбоксильной группой. Их смешивают с аналогичным набором пептидных фрагментов белка с природным изотопным составом. Все перечисленные способы введения метки успешно применяют в практике, но они не свободны от различных недостатков.

А именно, метаболический способ нельзя применять для анализа биологических жидкостей (он подходит только для исследований ш vivo).

Химический и ферментативный способы сопровождаются изменением структуры белка, что может существенно повлиять на его свойства. Кроме того, существующие коммерческие наборы для получения изотопомеровдостаточно дороги, не являются универсальными и рассчитаны лишь на ограниченный список конкретных соединений.

Таким образом, поиск способа получения изотопомеров белков без нарушения их химической структуры является актуальной задачей.

Цель и задачи работы.

Целью диссертационной работы была разработка способа масс-спектрометрического определения концентрации индивидуальных белков без нарушения их химической структуры.

Для достижения цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Разработать способ получения стабильных изотопомеров белков и пептидов без нарушения их химической структуры.

2. Изучить процесс дезамидирования остатков аспарагина и глутамина в условиях изотопного обмена.

3. Разработать подходы для масс-спектрометрического определения концентрации белков с использованием предложенного нового способа получения изотопомеров путем проведения модельных экспериментов.

4. Разработать схемы определения концентрации белков сыворотки крови: альбумина, агантитрипсина, а2-макроглобулина, а также — активности стрептокиназы в коммерческих лекарственных препаратах для апробации предложенного нового способа получения изотопомеров.

Научная новизна.

1. Предложен способ масс-спектрометрического определения концентрации индивидуальных белков с использованием стабильных изотопомеров.

2. Разработан новый способ получения стабильных изотопомеров пептидов и белков без разрушения пептидных связей, основанный на обмене кислорода.

16 18 18 О на О в карбоксильных группах этих соединений в воде Н2 О в присутствии трифторуксусной кислоты (TFA).

3.Показано, что изотопную метку можно вводить на любой стадии пробоподготовки — как до триптического гидролиза, так и после.

Практическая значимость работы.

1. Предложенный способ получения изотопомеров является универсальным решением для любых пептидов, белков, а также их смесей. Аминокислотные остатки, которые подвергаются обмену (Asp и Glu), присутствуют практически во всех белках, к тому же в любых неамидированных пептидах есть С-концевая карбоксильная группа.

2. Разработаны схемы количественного определения белков сыворотки крови, а также ряда белков, содержащихся в лекарственных препаратах.

Положения, выносимые на защиту.

1. Новый способ получения стабильных изотопомеров пептидов и белков,.

18 заключающийся в обработке образца водой Н21О0 в присутствии трифторуксусной кислоты при нагревании.

2. Скорости дезамидирования остатков аспарагина и глутамина в условиях изотопного обмена.

3. Схема проведения масс-спектрометрического определения концентрации белков с помощью нового способа получения изотопомеров.

4. Схемы масс-спектрометрического определения концентрации белков альбумина, аi-антитрипсина, а2-макроглобулина в сыворотке крови, а также — активности стрептокиназы в лекарственных препаратах, содержащих стрептокиназу.

Степень достоверности результатов проведенных исследований.

Представленные в диссертационной работе результаты прямых и косвенных измерений получены с использованием независимых физико-химических методов исследования, таких как количественная высокоэффективная жидкостная хроматография, количественная масс-спектрометрия, УФ-спектроскопия. Каждое измерение повторяли от 3-х до 7-ми раз. При определении концентрации белков на основе их триптических пептидов получалось до 20-ти триптических пептидов смеси аналита и его изотопомера. На основании определения соотношения анализируемого образца и стандарта некоторого количества триптических пептидов (не менее 3-х) получали результат с достоверностью 95%.

Личный вклад автора.

Изначально идея введения изотопной метки с использованием трифторуксусной кислоты была высказана и опробована доктором химических наук O.A. Миргородской. Но до начала работы автора публикаций, описывающих способ введения метки, изложенный в положении 1, не было. Все эксперименты, проведенные в Лаборатории биомедицинской масс-спектрометрии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института аналитического приборостроения.

Российской академии наук (ИАП РАН), выполнены автором лично. Полученные масс-спектрометрические данные обрабатывались автором лично. Помимо этого, проделанные эксперименты на приборе с ионизацией «электроспрей» повторены O.A. Миргородской на приборе Bruker Ultraflex с ионизацией MALDI (Институт биомедицинской химии РАМН, Москва). Также в рамках данной работы предложены и апробированы алгоритмы для расчета соотношения аналита и внутреннего стандарта на основе масс-спектра смеси. Автор алгоритмов — к.ф.-м.н. Козьмин Ю. П. Постановка задач и обсуждение результатов проводилась автором совместно с О. А. Миргородской.

Апробация работы.

Работа апробирована на четырех конференциях, в том числе на 18-той международной масс-спектрометрической конференции 2009 года в Г. Бремен и V-м международном научном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития», в 2009;м году в Москве. Работа поддержана грантом 4/04.05/035 для студентов, аспирантов вузов и академических институтов, расположенных на территории Санкт-Петербурга.

Публикации.

Разработанный новый способ получения изотопомеров защищен патентом РФ с приоритетом от 13.02.2008. Основные результаты работы опубликованы в четырех научных статьях, в журналах, входящих в перечень ВАК.

Структура и объем диссертации

.

Диссертационная работа состоит из введения, 3-х глав, раздела «Материалы и методы», заключения и списка литературы, состоящего из 89 источников. Материал содержит 116 страниц, 38 рисунков и 16 таблиц.

Основные результаты и выводы.

1. Впервые предложен способ введения изотопной метки, позволяющий в лабораторных условиях получать изотопомеры любых белков и пептидов без нарушения их химической структуры. Он заключается в обработке образца 18 водой н2°о в присутствии трифторуксусной кислоты при нагревании.

2. В результате специального эксперимента определены скорости дезамидирования остатков аспарагина и глутамина. Константа скорости дезамидирования остатка аспарагина составила 0.032±0.005 ч" 1, остатка глутамина — 0.108±0.017 ч" 1. Эти скорости позволят определить степень превращения амида в кислоту во время получения изотопомера. В образующихся кислотах Asp и Glu может также проходить изотопный обмен.

3.С помощью модельных экспериментов разработаны новые методические подходы для масс-спектрометрического определения концентрации белков в биологических образцах без нарушения их структуры. Таким образом, расширен класс анализируемых белков. Показано, что изотопную метку можно вводить на любой стадии пробоподготовки — как до триптического гидролиза, так и после.

4. Разработаны новые схемы масс-спектрометрического определения концентрации белков сыворотки крови: альбумина, aj-антитрипсина, а2-макроглобулина, а также — активности стрептокиназы в лекарственных препаратах, содержащих стрептокиназу.

Список публикаций по теме диссертации.

1 Бубляев P.A., Козьмин Ю. П., Краснов Н. В., Манойлов A.B., Миргородская O.A., Новиков A.B. Способ получения изотопно-модифицированных пептидов и белков // Патент РФ. RU № 2 399 627, с приоритетом от 13.02.2008.

2 Манойлов A.B., Новиков A.B., Бубляев P.A., Серебрякова М. В., Козьмин Ю. П., Краснов Н. В., Миргородская O.A. Особенности.

1Я включения стабильного изотопа О в сильнокислой среде в карбоксильные группы пептидов // Научное приборостроение, 2008, Т. 18, № 4, С. 61−72.

3 Манойлов A.B., Торопыгин И. Ю., Козьмин Ю. П., Краснов Н. В., Самус Н. Л., Новиков A.B., Бубляев P.A., Миргородская O.A. Клиническая протеомика: новые диагностические возможности масс-спектрометрии // Научное приборостроение, 2008, Т. 18, № 4, С. 16−23.

4 Манойлов A.B., Серебрякова М. В., Козьмин Ю. П., Миргородская O.A.

Новая технология введения изотопной метки О в карбоксилсодержащие соединения, включая пептиды и белки // V международный научный конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы развития», Москва. 2009, Сборник тезисов, часть 1, С. 4950.

5 Манойлов A.B., Миргородская O.A. Количественный масс-спектрометрический анализ функциональных белков плазмы крови без фракционирования // V международный научный конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы развития», Москва, 2009, Сборник тезисов, часть 1, С. 173.

6 Манойлов A.B., Серебрякова М. В., Козьмин Ю. П., Миргородская O.A. Прямое введение изотопа 180 в пептиды и белки для получения изотопомеров // Политехнический Симпозиум «Молодые ученые промышленности Северо-Западного региона». 2009, Сборник тезисов, С.174−175.

7 Manoylov A.V., Serebryakova M.V., Kozmin Yu. P, Mirgorodskaya O.A. Direct Incorporation of the lsO Isotope into Peptides and Proteins for Quantitative Analysis. 18th International Mass Spectrometry Conference, Bremen. 2009, Abstract LS/SIT — 03.

8 Манойлов A.B., Торопыгин И. Ю., Козьмин Ю. П., Новиков A.B., Бубляев P.A., Миргородская O.A. Комплексный анализ лекарственных препаратов содержащих стрептокиназу с использованием масс-спектрометрии // Научное приборостроение, 2010, Т. 20, № 4, С. 120— 128.

9 Козьмин Ю. П., Манойлов A.B., Серебрякова М. В., Миргородская O.A.

1 о.

Прямое введение изотопов О в пептиды и белки для количественного анализа // Биоорганическая химия, 2011, Т. 37, № 6, С. 793−806.

Заключение

.

В работе представлена методологическая и теоретическая база масс-спектрометрического определения концентрации различных белков и пептидов, основанная на использовании изотопомеров. Она обеспечивает развитие методов и средств проведения масс-спектрометрического анализа сложных биохимических объектов в комплексе с химической подготовкой образцов и автоматизированной обработкой масс-спектрометрических данных с использованием баз данных последовательностей различных белков.

Разработан новый способ получения изотопомеров. С его помощью можно получать изотопомеры любых белков и пептидов, а также — любых соединений, содержащих карбоксильную группу. Он позволил расширить диапазон белков, которые можно определить количественно. Изотопную метку можно вводить на любой стадии пробоподготовки. При проведении любых операций соотношение концентраций образца и его изотопомера остается одинаковым. Разработаны оригинальные схемы определения концентрации различных белков сыворотки крови. С использованием данных методик можно будет в дальнейшем проводить диагностику различных заболеваний на ранней стадии, в том числе онкологических, а также — проводить фармацевтический контроль лекарственных препаратов.

На основе экспериментальных исследований проведена апробация нового способа получения изотопомеров. Разработаны схемы масс-спектрометрического определения концентрации различных белков сыворотки крови: 1. альбумина, 2. а]-антитрипсина, 3. а2-макроглобулинаа также — активности стрептокиназы. Погрешности измерений экспериментальных данных, полученных при проверке схем анализа, составляют 3−8%, что является допустимым при проведении биохимических анализов.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Н.В., Куснер Ю. С., Миргородская O.A. и др. О механизмах образования квазимолекулярных ионов при испарении многозарядных ионных кластеров в газодинамических столкновениях // Журнал технической физики. Т. 58. 1988. С. 2113−2123.
  2. Zenobi R., Knochenmuss R. Ion Formation in MALDI Mass Spectrometry // Mass Spectrometry Reviews. Vol. 17. 1998. P. 337−366.
  3. Cech N.B., Enke C.G. Practical implications of some recent studies in electrospray ionization fundamentals // Mass Spectrometry Reviews. Vol. 20. 2001. P. 362−387.
  4. Dole. M., Mack, L.L., Hines, R.L. Molecular Beams of Macroions // Journal of Chemical Physics. Vol. 49. 1968. P. 2240−2249.
  5. M.JI., Галль Л. Н., Краснов H.B. и др. Экстракция ионов из растворов при атмосферном давлении новый метод масс-спектрометрического анализа // ДАН СССР. Т. 277. 1984. С. 379−383.
  6. Yamashita М., Fenn J.B. Electrospray Ion Source. Another Variation of Free-Jet Theme // The Journal of Physical Chemistry. Vol. 88. 1984. P. 4451−4459.
  7. Fenn J.B., Mann, M., Meng C.K. et al. Electrospray ionization for mass spectrometry of large biomolecules // Science. Vol. 246. 1989. P. 64−71.
  8. J.B. Fenn, M. Mann. Mass Spectrometry, Clinical and Biomedical Applications // Plenum Press, New York. 1992, Vol. 1, 355 p.
  9. Karas M., Bachmann D., Bahr U. et al. Matrix-assisted ultraviolet-laser desorption of nonvolatile compounds // Int. J. Mass Spectrom. & Ion Processes. Vol. 78. 1987. P. 53−68.
  10. Karas M., Hillenkamp F. Laser desorption ionization of proteins with molecular masses exceeding 10,000 Daltons // Anal. Chem. Vol. 60. 1988. P. 2299−2301.
  11. Tanaka K., Waki H., Ido Y. et al. Protein and Polymer Analyses up to m/z 100 000 by Laser Ionization Time-of flight Mass Spectrometry // Rapid Commun. Mass Spectrom. Vol. 2. 1988. P. 151−153.
  12. Karas M., Hillennkamp F. Matrix-assisted laser desorbtion/ionisation, an experience // International Journal of Mass Spectrometry. Vol. 200. 2000. P. 7177.
  13. Vorderwulbecke S., Cleverley S., Weinberger S.R. et al. Protein quantification by SELDI-TOF-MS-based ProteinChipT System // Nat. Methods. Vol. 2. 2005. P. 393−395.
  14. Tang N., Tornatore P., Weinberge S.R. Current Developments in SELDI Affinity Technology // Mass Spectrometry Reviews. Vol.23. 2004. P. 34−44.
  15. Hancock W.S. ed. New Methods in Peptide Mapping for the Characterisation of Proteins // CRC Press, Boca Raton, FL, 1996. 246 p.
  16. Jespersen, S, Niessen, W.M.A., Tjaden U.R. et al. Quantitative Bioanalysis Using Matrix-assisted Laser Desorbtion/ionisation Mass Spectrometry // Journal of Mass Spectrometry. Vol. 30. 1995. P. 357−364.
  17. Ong S.E., Mann M. Mass spectrometry-based proteomics turns quantitative // Nature Chemical Biology. Vol. 1. 2005. P. 252−262.
  18. Oda Y., Huang K., Cross F.R. et al. Accurate quantitation of protein expression and site-specific phosphorylation // Proc. Natl. Acad. Sei. Vol. 96. 1999. P. 6591−6596.
  19. Ong S.E., Blagoev B., Kratchmarova I. et al. Stable isotope labeling by amino acids in cell culture, SILAC, as a simple and accurate approach to expression proteomics // Mol. Cell. Proteomics. V. 1. 2002. P. 376−386.
  20. Gygi S.P., Rist B., Gerber S.A. et al. Quantitative analysis of complex protein mixtures using isotope-coded affinity tags // Nat. Biotechnol. V. 17. 1999. P. 994−999.
  21. Ross P.L., Huang Y.L.N., Marchese J.N. et al. Multiplexed protein quantitation in Saccharomyces cerevisiae using amine-reactive isobaric tagging reagents // Molecular & cellular proteomics. Vol. 3. 2004. P. 1154−1169.
  22. Schmidt A., Kellermann J., Lottspeich F. A novel strategy for quantitative proteornics using isotope-coded protein labels // Proteomics. Vol. 5. 2004. P. 415.
  23. Kellermann J. ICPL-isotope-coded protein label // Methods Mol. Biol. Vol. 424. 2008. P. 113−123.
  24. Zappacosta F., Annan R.S. N-terminal isotope tagging strategy for quantitative proteomics: results-driven analysis of protein abundance changes // Anal. Chem. Vol. 76. 2004. P. 6618−6627.
  25. Thompson A, Schafer J, Kuhn K. et.al. Tandem mass tags: a novel quantification strategy for comparative analysis of complex protein mixtures by MS/MS // Anal. Chem. Vol. 75. 2003. P. 1895−1904.
  26. Dayon L.A. Hainard V. Licker N. et al. Relative quantification of proteins in human cerebrospinal fluids by MS/MS using 6-plex isobaric tags // Anal. Chem. Vol. 80. 2008. P. 2921−2931.
  27. Zhang J., Wang Y., Li S. Deuterium Isobaric Amine-Reactive Tags for Quantitative Proteomics // Anal. Chem. Vol. 82. N. 18. 2010. P. 7588−7595.
  28. Gerber S.A., Rush J., Stemman O. et al. Absolute quantification of proteins and phosphoproteins from cell lysates by tandem MS // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 100. 2003. P. 6940−6945.
  29. Pan S., Zhang H., Rush. J. et al. High throughput proteome screening for biomarker detection // Mol. Cell Proteomics. Vol. 4. 2005. P. 182−190.
  30. Beynon R.J., Doherty M.K., Pratt J.M. et al. Multiplexed absolute quantification in proteomics: expression and use of artificial QCAT proteins containing concatenated signature peptides // Nature Methods. Vol. 2. 2005. P. 587−589.
  31. Bantscheff M., Schirle M., Sweetman G. et al. Quantitative mass spectrometry in proteomics: a critical review // Anal. Bioanal. Chem. Vol. 389. 2007. P. 1017−1031.
  32. Mirgorodskaya O.A., Koerner R., Novikov A.V. et al. Absolute quantitation of proteins by a combination of acid hydrolysis and matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry // Anal. Chem. Vol. 76. 2004. P. 35 693 575.
  33. A.B., Савельева H.B., Краснов H.B. и др. Использование ESI-MS и изотопно-меченых аминокислотных стандартов для определения концентрации белков // Научное приборостроение. Т. 12. № 4. 2002. С. 7080.
  34. Miyagi M., Sekhar Rao K.C. Proteolytic 180-Labeling Strategies for Quantitative Proteomics // Mass Spectrometry reviews. Vol. 26. 2007. P. 121— 136.
  35. Yan W., Chen S. Mass spectrometry-based quantitative proteomic profiling // Briefings in Functional Genomics and Proteomics. Vol. 4. N. 1. 2005. P. 1−12.
  36. Patel K., Borchardt R.T. Chemical Pathways of Peptide Degradation. II. Kinetics of Deamidation of an Asparaginyl Residue in a Model Hexapeptide // Pharmaceutical research. Vol. 7. N. 7. 1990. P. 703−711.
  37. Patel K., Borchardt R.T. Chemical Pathways of Peptide Degradation. III. Effect of Primary Sequence on the Pathways of Deamidation of an Asparaginyl Residue in Hexapeptides // Pharmaceutical research. Vol. 7. N. 8. 1990. P. 787 793.
  38. Oliyay C., Borchardt R.T. Chemical Pathways of Peptide Degradation. IV. Pathways, Kinetics and Mechanism of an Aspartyl Residue in a Model Hexapeptide // Pharmaceutical research. Vol. 10. N. 1. 1990. P. 95−102.
  39. Meloun B., Moravek L., Kostka V. Complete amino-acid sequence of humanserum albumin // FEBS Letters. Vol. 58. N. 1. 1975. P. 134−137.
  40. The Plasma Proteins, 2nd Ed. / Putnam F. W. Ed. // Academic Press, New York. 1975.V. 1,650 p.
  41. Steiner R.F., Roth, J., Robbins, J. The binding of thyroxine by serum albumin as measured by fluorescence quenching // J. Biol. Chem. Vol. 241. 1966. P. 560 567.
  42. Petitpas I., Bhattacharya A.A., Twine S. et al. Crystal structure analysis of warfarin binding to human serum albumin // The Journal of Biological Chemistry. Vol. 276. N. 25. 2001. P. 22 804−22 809.
  43. Inoue M., Hirata E., Morino Yo. et al. The Role of Albumin in the Hepatic Transport of Bilirubin: Studies in Mutant Analbuminemic Rats // J. Biochem. Vol. 97. N. 3. 1985. P. 737−743.
  44. Boggs J.M., Moscarello M.A., Papahadjopoulos, D. Lipid-protein interactions // Wiley-Interscience, New York. 1982. V. 2, 320 p.
  45. Saroff H.A., Lewis M. S. The Binding of Calcium Ions to Serum Albumin // J. Phys. Chem. Vol. 67. N. 6. 1963. P. 1211−1216.
  46. Quinlan G.J. Albumin: Biochemical properties and therapeutic potential // Hepatology. Vol. 41. 2005. P. 1211−1219.
  47. Jalan R, Schnurr K., Mookerjee R.P. et al. Alterations in the functional capacity of albumin in patients with decompensated cirrhosis is associated with increased mortality // Hepatology. Vol. 50. N. 2. 2009. P. 555−564.
  48. Geers A.B., Koomans H.A., Roos J.C. et al. Functional relationships in the nephrotic syndrome // Kidney Int. Vol. 26. N. 3. 1984. P. 324−330.
  49. Arques S., Ambrosi P. Human serum albumin in the clinical syndrome of heart failure // J. Card. Fail. Vol. 17. N. 6. 2011. P. 451158.
  50. Martini W.Z., Wolf S.E., Chinkes D.L. et al. Enhanced albumin synthesis in severely burned adults // Shock. V. 34. N. 4. 2010. P. 364−368.
  51. Sullivan D.H., Johnson L.E., Dennis R.A. et al. The Interrelationships among albumin, nutrient intake, and inflammation in elderly recuperative care patients // J. Nutr. Health Aging. Vol. 15. N. 4. 2011. P. 311−315.
  52. Rasouli M., Okhovatian A., Enderami A. Serum proteins profile as an indicator of malignancy: multivariate logistic regression and ROC analyses // Clin. Chem. Lab. Med. Vol. 43. N. 9. 2005. P. 913−918.
  53. Ashkenazi I., Epshtein Y. Alternations in plasma volume and protein during and after a continuous 110-kilometer march with 20-kilogram backpack load // Mil. Med. Vol. 163, N. 10. 1998. P. 687−691.
  54. Matthew J. McQueen M.J., Don-Wauchope A.C. Requesting and Interpreting Urine Albumin Measurements in the Primary Health Care Setting // Clinical Chemistry. Vol. 54. 2008. P. 1595−1597.
  55. Henskens Y.M., van der Velden U., Veerman E.C. et al. Protein, albumin and су statin concentrations in saliva of healthy subjects and of patients with gingivitis or periodontitis // J. Periodontal Res. Vol. 28. N. 1. 1993. P. 43−48.
  56. Li K., Chen Z., Duan F. et al. Quantification of tear proteins by SDS-PAGE with an internal standard protein: a new method with special reference to small volume tears // Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. Vol. 248. N. 6. 2010. P. 853−862.
  57. .Ю., Раков C.C., Ткачев Г. А. Методические аспекты лабораторного определения низких концентраций белка в биологических жидкостях (опыт применения математического анализа) // Вопросы медицинской химии. №. 4. 2001.
  58. Kumarasamy R., Bausch J., Kopcha D. et al. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for quantitation of adducts of granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and human serum albumin
  59. HSA) in stressed solution mixtures // Pharm. Res. Vol. 11. N. 3. 1994. P. 365 371.
  60. O’connell T. Understanding and Interpreting Serum Protein Electrophoresis // American Family Physician. Vol. 71. 2005. P. 105−112.
  61. Levreri I., Musante L., Petretto A. et al. Separation of human serum proteins using the Beckman-Coulter PF2D system: analysis of ion exchange-based first dimension chromatography // Clin. Chem. Lab. Med. Vol. 43. N. 12. 2005. P. 1327−1333.
  62. Gettins P.G. Serpin structure, mechanism, and function // Chem. Rev. 2002. Vol. 102. N. 12. P. 4751^*804.
  63. Kushner I., Mackiewicz A., Baumann H. Acute Phase Proteins // CRC Press. 1993. 703 p.
  64. Harris C.C., Primack A., Cohen M.H. Elevated alpharantitrypsin serum levels in lung cancer patients // Cancer. Vol. 34. 1974. P. 280−281.
  65. Ganrot P.O., Bjerre B. Alpha-I antitrypsin and alpha-2 macroglobulin concentration in serum during pregnancy // Acta Obstet. Gynecol. Scand. Vol. 46. 1967. P. 126−137.
  66. Cleve H., Behrend T. Quantitative immunological determination of alpha-1 acid glycoprotein and alpha-I antitrypsin in the sera of patients with rheumatoid arthritis // Z. Rheumatol. Vol. 25. 1966. P. 278−283.
  67. Alkins S.A., O’Malley P. Should health-care systems pay for replacement therapy in patients with alpha (l)-antitrypsin deficiency? A critical review and cost-effectiveness analysis // Chest. Vol. 117. N. 3. 2000. P. 3875−3880.
  68. Kolarich D., Weber A., Turecek P.L. et al. Comprehensive glyco-proteomic analysis of human alpha 1-antitrypsin and its charge isoforms // Proteomics. Vol. 6. N. 11.2006. P. 3369−3380.
  69. Guanti G., Di Loreto M. Alpha 1-Antitrypsin quantitative and qualitative (Pi phenotyping) characterization in Down syndrome subjects and in their parents // Am. J. Hum. Genet. Vol. 32. N. 2. 1980. P. 174−178.
  70. Triger D.R., Millward-Sadler G.H., Czaykowski A.A. et al. Alpha-1-antitrypsin Deficiency and Liver Disease in Adults // QJM: An International Journal of Medicine. Vol. 45. N. 2. 1976. P. 351−372.
  71. Gupta A.K., Sarin G.S. Immunoassay of serum alpha-1 antitrypsin level in uveitis // British Journal of Ophthalmology. Vol. 68. 1984. P. 242−244.
  72. Corda L, Medicina D, La Piana G.E. Population Genetic Screening for Alphal-Antitrypsin Deficiency in a High-Prevalence Area // Respiration. International Journal of Thoracic Medicine. Vol. 82. N. 5. 2011. P. 41825.
  73. Ferrarotti I., Scabini R., Campo I. et al. Laboratory diagnosis of alphal-antitrypsin deficiency // Transl. Res. Vol. 150. N. 5. 2007. P. 267−274.
  74. Wasiluk A, Dabrowska M, Jaworski S. et al. Levels of alpha-2-macroglobulin in blood serum of women giving birth to hypotrophic and eutrophic newborns // Przegl. Lek. Vol. 57. N. 12. 2000. P. 717−719.
  75. Blacker D, Wilcox M.A., Laird N.M. et al. Alpha-2 macroglobulin is genetically associated with Alzheimer disease // Nature Genetics. Vol. 19. N. 4. 1998. P. 357−360.
  76. Kovacs D.M. Alpha2-macroglobulin in late-onset Alzheimer’s disease // Exp. Gerontol. Vol. 35. N. 4. 2000. P. 473−479.
  77. Petersen C.M., Povlsen J.V., Ingerslev J. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the measurement of small quantities of a2-macroglobulin // Scandinavian Journal of Clinical and Laboratory Investigation. Vol. 45. N. 8. 1985. P. 735−740.
  78. Ponting C.P., Marshall J.M., Cederholm-Williams S.A. Plasminogen: a structural review // Blood Coag. Fibrin. Vol. 3. 1992. P. 605−614.
  79. Henkin J., Marcotte P., Yang H. The plasminogen-plasmin system // Prog. Card Disease. Vol. 2. 1991. P. 135−164.
  80. Hach-Wunderle V., Scharrer L, Lottenberg R. Congenital deficiency of plasminogen and its relationship to venous Thrombosis // Thromb. Haem. Vol. 59. N. 2. 1988. P. 277−280.
  81. Hermentin P., Cuesta-Linker Т., Weisse J. Comparative analysis of the activity and content of different streptokinase preparations // Eur. Heart J. Vol. 26. N. 9. 2005. P. 933−940.
  82. Tsugita A., Takamoto K., Kamo M. et al. C-terminal sequencing of protein. A novel acid hydrolysis and analysis by mass spectrometry // Eur. J. Biochem. Vol. 206. 1992. P. 691−696.
  83. E.C., Овчаров JI.A. Теория вероятностей и ее инженерные приложения // М., 2000, 135 с.
  84. Sottrup-Jensen L. Alpha-macroglobulins: structure, shape, and mechanism of proteinase complex formation // J. Biol. Chem. Vol. 264. N. 20. 1989. P. 1 153 911 542.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!