Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Разработка и усовершенствование средств и методов иммунодиагностики аденовирусной инфекции

Диссертация: Разработка и усовершенствование средств и методов иммунодиагностики аденовирусной инфекции
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Методы исследования. Использованы различные методы работы с клеточными культурами, вирусологические, серологические, биохимические, молекулярно-биологические и электронно-микроскопические методы исследования, методы гибридомной технологии, очистки и концентрирования вирусных белков, очистки моноклональных антител с помощью аффинной хроматографии, а также статистические приемы обработки и анализа… Читать ещё >

Разработка и усовершенствование средств и методов иммунодиагностики аденовирусной инфекции (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • ГЛАВА 1. АДЕНОВИРУСЫ, ИХ ОБЩАЯ И АНТИГЕННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА, ЭПИДЕМИОЛОГИЯ. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ. ПРОТИВОАДЕНОВИРУСНЫЕ ПРЕПАРАТЫ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
    • 1. 1. Строение вирионов АВ
    • 1. 2. Структурные белки аденовирусов
    • 1. 3. Неструктурные (ранние) белки
    • 1. 4. Репликация аденовирусов
    • 1. 5. Классификация АВ
    • 1. 6. Клинико-эпидемиологическая характеристика и патогенез АВ-инфекции
    • 1. 7. Современные методы диагностики аденовирусной инфекции
      • 1. 7. 1. Выделение вируса в культуре клеток
      • 1. 7. 2. Иммунофлуоресцентный метод
      • 1. 7. 3. Иммуноферментный анализ (ИФА)
      • 1. 7. 4. Моноклональные антитела
      • 1. 7. 5. Иммунохроматографический анализ
      • 1. 7. 6. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
    • 1. 8. Противоаденовирусные препараты
      • 1. 8. 1. Основные направления получения противоаденовирусных препаратов
      • 1. 8. 2. Эффективность и недостатки препаратов, используемых для лечения и профилактики аденовирусных инфекций
  • ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
    • 2. 1. Материалы
      • 2. 1. 1. Клеточные культуры
      • 2. 1. 2. Вирусы
      • 2. 1. 3. Моноклональные антитела
    • 2. 2. Методы
      • 2. 2. 1. Вирусологические методы
      • 2. 2. 2. Методы гибридомной технологии
      • 2. 2. 3. Электронно-микроскопический анализ
      • 2. 2. 4. Взятие и подготовка клинических образцов
      • 2. 2. 5. Биохимические методы
      • 2. 2. 6. Иммунохимические методы
      • 2. 2. 7. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
      • 2. 2. 8. Статистическая обработка
  • ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОЛИ- И МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К АДЕНОВИРУСУ
    • 3. 1. Оценка специфической активности гипериммунных аденовирусных сывороток кролика в непрямом методе флуоресцирующих антител
    • 3. 2. Первичное тестирование полученных МКА
      • 3. 2. 1. Изучение специфической активности в ИФА
      • 3. 2. 2. Изучение специфической активности МКА с помощью Н-МФА
    • 3. 3. Определение эпитопной направленности МКА#
  • ГЛАВА 4. ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ФИТЦ-КОНЬЮГАТОВ ПОЛИ- И МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ
    • 4. 1. Получение и изучение активности ФИТЦ-коньюгатов ПКА
    • 4. 2. Лабораторная апробация МКА#6 при дифференциальной диагностике аденовирусной инфекции непрямым иммунофлуоресцентным методом
    • 4. 3. Получение и изучение активности ФИТЦ-коньюгатов МКА#
    • 4. 4. Клинико-лабораторная апробация ФИТЦ-коньюгатов МКА#6 при дифференциальной диагностике аденовирусной инфекции прямым иммунофлуоресцентным методом
  • ГЛАВА 5. КОНСТРУИРОВАНИЕ И ЛАБОРАТОРНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ИНДИКАЦИИ АДЕНОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
    • 5. 1. Изучение специфической активности МКА#6 и 7F
    • 5. 2. Получение и изучение специфической активности пероксидазных коньюгатов МКА#6 и МКА 7F
    • 5. 3. Конструирование иммуноферментных тест-систем, предназначенных для детекции аденовирусных антигенов в клеточных культурах и клинических материалах
  • ГЛАВА 6. ДИЗАЙН И КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ «АДЕНОВИР» ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ АДЕНОВИРУСНЫХ АНТИГЕНОВ В КЛИНИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛАХ ОТ БОЛЬНЫХ
    • 6. 1. Клинико-лабораторная апробация ИФТС «АДЕНОВИР»
      • 6. 1. 1. Возможности выявление аденовирусного антигена в носоглоточных смывах при использовании ИФТС «АДЕНОВИР»
      • 6. 1. 2. Изучение возможности индикации аденовирусных антигенов в копрофильтратах
    • 6. 2. Дизайн ИФТС «АДЕНОВИР»
  • ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
  • ВЫВОДЫ

Актуальность исследования. Аденовирусы (АВ) представляют собой обширное семейство вирусов (Adenoviridae), патогенных для человека, млекопитающих и птиц. АВ человека циркулируют повсеместно и во всех частях мира. По своей распространенности они занимают третье место после гриппа и респираторно-синцитиальной инфекции. Их удельный вес в структуре ОРЗ составляет около 9% [8, 9, 34, 44].

ОРЗ негриппозной (в том числе аденовирусной) этиологии вносят важный вклад в структуру общей инфекционной патологии. В отличие от эпидемий гриппа, имеющих выраженную сезонность, они регистрируются на протяжении всего года, вызывая подъемы заболеваемости, в основном, среди детских групп населения [52, 53, 54, 56, 59, 67, 108].

АВ, как и вирусы гриппа, способны вызывать тяжелые поражения не только верхних, но и нижних отделов дыхательного тракта в виде пневмоний, бронхитов и бронхиолитов [1, 4, 18, 57, 79, 88], а также других систем и органов [43, 71, 106].

Известно, что АВ являются причиной вспышек фарингоконъюнктивальной лихорадки среди детей и новобранцев и нозокомиальных заболеваний, в том числе в офтальмологических отделениях. АВ вызывают также лимфоаденопатии, острые и хронические тонзиллиты, отиты, фарингиты, протекающие с явлениями интоксикации и гипертермии, поражения печени и миокарда [6, 44, 71, 79]. Отдельные серотипы АВ (12, 18, 31, 40, 41) вызывают обширные вспышки гастроэнтеритов, а серотипы 12, 18 и 31 обладают повышенными онкогенными потенциями [1, 4, 73, 84].

Появляется все больше данных о тяжелом генерализованном течении АВ инфекций у пациентов с иммуносупрессией, которым осуществляется трансплантация органов или костного мозга [32, 47, 61, 63, 82, 101], а также у онкологических больных при проведении химиотерапии [37, 41, 106]. Подчеркивается важность распознавания АВ инфекции у доноров органов в предоперационном периоде во избежание тяжелых осложнений, способных приводить к летальным исходам у иммуносупрессированных реципиентов [67, 113].

Рост заболеваемости аденовирусой этиологии регистрировался в детских группах населения, проживающих на территориях, загрязненных радионуклидами в результате аварии на Чернобыльской АЭС в 1986 г. [11, 14].

Эффективность надзора за аденовирусной инфекцией и ее терапии зависит от раннего диагностирования инфекции с ее дифференциацией от других вирусных заболеваний со сходными симптомами [18, 47], что определяет важность применения строго специфичных и высоко чувствительных методов дифференциальной лабораторной диагностики [24, 38, 40]. Разработка современных диагностических подходов осуществляется по двум основным направлениям, первое из которых связано с совершенствованием иммунологических тестов детекции вирусных антигенов или антител, а другое — с выявлением специфических последовательностей вирусного генома в материалах от больных [49, 52, 60].

Разработка современных диагностических подходов осуществляется по двум основным направлениям, первое из которых связано с совершенствованием иммунологических тестов детекции вирусных антигенов или антител, а другое — с выявлением специфических последовательностей вирусного генома в материале от больных [25, 42, 52, 60].

Для ранней дифференциальной диагностики ОРВИ необходимо создание простых, быстрых и недорогих тестов, к числу которых относятся усовершенствованные варианты иммуноферментного (ИФА) [5, 78, 79, 88] и иммунофлуоресцентного анализа [24, 52, 55, 68, 110]. Целесообразность их использования обоснована не только медицинскими показаниями, но и существенной экономической выгодой, достигаемой, главным образом, за счет отмены антибиотиков при острых респираторных инфекциях вирусной природы (ОРВИ) и сокращения сроков госпитализации [75, 92].

Одним из ведущих направлений в области совершенствования диагностических иммунотестов является введение в их состав моноклональных антител (МКА) к возбудителям ОРВИ, обеспечивающих наиболее высокую чувствительность, специфичность и необходимый уровень стандартизации препаратов [3, 10, 46, 83].

Целью настоящей работы явилось создание усовершенствованных тест-систем для диагностики аденовирусной инфекции.

Задачи исследования: • - разработка методики получения высокоочищенного гексонного антигена аденовируса;

— разработка технологии производства коньюгатов поликлонального типа с флуоресцеинизотиоцианатом для быстрой диагностики аденовирусной инфекции;

— получение и скрининг моноклональных антител к различным сайтам в составе гексона аденовируса, общим для разных семейств аденовирусов;

— разработка технологии получения коньюгатов моноклональных антител с флуоресцеинизотиоцианатом;

— дизайн новых моноклональных иммуноферментных тест-систем для" ранней диагностики аденовирусной инфекции;

— клинико-лабораторная апробация разработанных препаратов с оценкой их диагностических параметров в сравнении с другими методами (электронная микроскопия, ПЦР, выделение аденовирусов в культуре клеток, серологический анализ).

Научная новизна работы. Научно обоснована целесообразность получения для диагностических целей моноклональных антител направленных к консервативным детерминантам в составе гексонного белка аденовируса.

Впервые в России детально отработана методика получения высокоочищенного (до кристаллического состояния) гексонного белка аденовирусов.

Впервые в России получена панель моноклональных антител к гексонному антигену аденовируса 6 серотипа. Дана характеристика биологических и диагностических свойств полученных моноклональных антител в различных иммунологических реакциях.

Экспериментально обосновано, что разработанные моноклональные антитела позволяют диагностировать заболевания, вызываемые аденовирусами, принадлежащими к различным группам (В, С, Е и F) семейства Adenoviridae.

Практическая значимость работы. Разработаны новые тест-системы для ранней диагностики аденовирусной инфекции на основе иммунофлуоресцентного и иммуноферментного анализа. В клинико-лабораторных исследованиях обоснована перспективность их применения в условиях практического здравоохранения как для индивидуальной диагностики в госпитальных условиях, так и для расшифровки природы эпидемических вспышек неясной этиологии, в т. ч. в отдаленных точках страны.

Впервые в России получены коньюгаты моноклональных антител к гексонному антигену аденовируса 6 серотипа с флуоресцеинизотиацианатом и пероксидазой хрена без снижения специфической активности препаратов.

Высокие показатели чувствительности и специфичности разработанной ИФТС «АДЕНОВИР» в сравнении с данными, полученными в ПЦР и при электронной микроскопии, позволяют рекомендовать ее для использования в лабораторной практике при диагностике аденовирусных инфекций.

Положения, выносимые на защиту:

1. Полученные моноклональные антитела # 6 (МКА#6)к гексонному антигену аденовируса 6 серотипа являются перспективными иммунореагентами и могут быть использованы в различных иммунологических тестах детекции аденовирусных антигенов.

2. Применение МКА #6 к гексонному антигену аденовируса 6 серотипа повышает чувствительность и специфичность ранее разработанных диагностических тестов.

3. Использование ФИТЦ-коньюгатов моноклональных антител позволяет выявлять аденовирусы, принадлежащие к различным группам (В, С, Е) семейства аденовирусов и облегчает интерпретацию результатов за счет большей яркости специфической флуоресценции.

4. Разработанная иммуноферментная тест-система «Аденовир» характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью и может быть рекомендована для диагностики аденовирусной инфекции, как при респираторных, так и при кишечных формах заболевания.

Методы исследования. Использованы различные методы работы с клеточными культурами, вирусологические, серологические, биохимические, молекулярно-биологические и электронно-микроскопические методы исследования, методы гибридомной технологии, очистки и концентрирования вирусных белков, очистки моноклональных антител с помощью аффинной хроматографии, а также статистические приемы обработки и анализа полученных результатов. В работе использовали пакет прикладных программ.

Statistika-5,0 для непараметрических выборок. Для расчета показателей диагностической эффективности препарата рассчитывали суммарный показатель совпадения результатов с референтной системой и средний квадрат.

12 сопряженности phi .

Оценка диагностических свойств новых тест-систем для определения аденовирусной инфекции проведена на материалах от 574 больных ОРВИ. Методами сравнения служили: иммунофлуоресцентный анализ детекции аденовирусных антигенов в эпителиальных клетках носоглоточного эпителия,-иммуноферментный анализ для выявления аденовирусных антител класса IgG (ИФТС-AB-IgG), выделение аденовирусов в культуре клеток, а также выявление ДНК аденовирусов при помощи полимеразной цепной реакции.

Внедрение результатов в практику. Разработана научно-технологическая документация (НТД) на препарат «Иммуноглобулин диагностический флуоресцирующий антигексоновый аденовирусный» («ИДФАГ»). Регламент производства № 4 429 427−001−09 и технические условия № 93 8837−001−4 429 427−2008 на препарат «ИДФАГ» согласованы с ФГУН ГИСК им. Л. А. Тарасевича Роспотребнадзора, Инструкция по применению № 01−11/131−08 от 15.08.2008 г. утверждена Главным государственным санитарным врачом РФ. Препарат «ИДФАГ» зарегистрирован на территории России (Регистрационное удостоверение № ФСР 2008/3 940), внедрен в производство на базе ООО «Предприятие по производству диагностических препаратов» и используется в различных организациях практического здравоохранения (ФГУЗ ЦГЭ, глазные клиники, инфекционные стационары), включая сеть базовых лабораторий по мониторингу за гриппом и ОРВИ в составе Референс-центра при НИИ гриппа СЗО РАМН.

Материалы исследования используются в учебном процессе в курсе тематического усовершенствования, профессиональной переподготовки и сертификационном курсе по специальности «Вирусология» на базе ПДО СПб ГОУВ Государственной Медицинской академии им. И. И. Мечникова совместно с НИИ гриппа СЗО РАМН.

Апробация работы. Материалы исследования были доложены на Международной научно-практической конференции «Молекулярная диагностика инфекционных болезней» (Республика Беларусь, Минск, 2007), на заседании Санкт-Петербургского научного общества микробиологов и эпидемиологов (Россия, Санкт-Петербург, 2008) и на XXXI Итоговой научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционных заболеваний у детей» (Россия, Санкт-Петербург, 2009), а также представлены на международной конференции «Options for the control of Influenza VI» (Канада, Торонто, 2007).

Публикации. По материалам исследований опубликовано 20 работ, из-них — 6 статей в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, определенных ВАК и Методические рекомендации «Быстрая диагностика гриппа и других ОРВИ иммунофлуоресцентным методом».

Структура и объем диссертации

Диссертация представлена на 120 печатных листах, иллюстрирована 15 таблицами и 19 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», 4 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 113 источников, из них 14 отечественных и 99 иностранных авторов, 5 приложений.

ВЫВОДЫ.

1. Разработан и внедрен в производство препарат поликлонального типа «Иммуноглобулин диагностический флуоресцирующий аденовирусный антигексоновый сухой» («ИДФАГ») для ранней диагностики аденовирусной инфекции по детекции вирусных антигенов в клинических материалах. Препарат зарегистрирован на территории РФ.

2. В Государственных испытаниях установлено, что препарат «ИДФАГ» по показателям качества не уступает одному из лучших зарубежных аналогов («IMAGEN» фирмы «DAKO», Дания).

3. Получена и криоконсервирована в Государственной коллекции клеточных культур при НИИ гриппа СЗО РАМН панель гибридом, продуцирующих МКА к различным сайтам в составе гексонного антигена аденовируса, в т. ч. моноклональные антитела 6, обладающие наиболее широким спектром активности в отношении различных серотипов аденовирусов.

4. Установлено по результатам клинико-лабораторных исследований, что коньюгаты моноклональных антител#6 с флуоресцеинизотиоцианатом в сравнении с «ИДФАГ» дают равноценные показатели чувствительности и специфичности при более яркой специфической флуоресценции, что значительно облегчает интерпретацию результатов анализа.

5. Впервые в России осуществлен дизайн иммуноферментной тест-системы «АДЕНОВИР» на основе моноклональных антител#6 и 7F1. Определена оптимальная композиция всех составляющих тест-системы с итоговым лимитом чувствительности 20 нг/мл по белку (2 нг в пробе).

6. Показана высокая чувствительность и специфичность разработанной ИФТС «АДЕНОВИР» (96% и 93%, соответственно), при диагностике аденовирусных инфекций в сравнительных клинико-лабораторных исследованиях с наиболее чувствительным тестом — полимеразной цепной реакцией.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. -М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2001.-736 с.
  2. Вирусология: в 3-х т.: Пер. с англ. / Под ред. Б. Филдса, Д. Найпа и др. -М.: Мир, 1989.- 456с.
  3. Вопросы общей вирусологии: учебное пособие / Под ред. Киселева О. И., Жилинской И. Н. СПб: СПбГМА им. И. И. Мечникова, 2007 г.-374 с.
  4. Н.С. Аденовирус, клетка, организм.-Киев: Наукова Думка, 1988.-232с.
  5. A.M. Теория и практика иммуноферментного анализа.- М.: Высш. шк., 1991 г.-288с.
  6. А.П. Справочник по инфекционным болезням: 3 изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 1986.-320с.
  7. Л.Г. Изучение диагностической эффективности препарата «Иммуноглобулина диагностического флуоресцирующего аденовирусного антигексонового сухого» // Сб. «Проблемы инфекционных болезней», ч. 2- М., 2000.-С. 146−149.
  8. Л.В. Клиника и лечение гриппа // Русский медицинский журнал.-2001.-Т.9.-710с.
  9. В.В. Птичий грипп: эпидемиология, клиника и лечение / В «Грипп птиц: происхождение инфекционных биокатастроф»: Сб. статей / Под ред. В. И. Покровского.- СПб.: Росток, 2006.-С.103−130.
  10. А.О. Получение и характеристика моноклональных антител к аденовирусу в иммуноферментных и иммунофлюоресцентных реакциях // Вопросы вирусологии.-2000.-№ 5.-С.30−33.
  11. Т.Л. Изменение структуры циркулирующих вирусных популяций в условиях воздействия неблагоприятных экологических факторов // Материалы VII съезда всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов.- М., 1997.-т. 1.-С.499−500.
  12. А.А. Анализ этиологической структуры гриппоподобнойзаболеваемости и мониторинг эпидемии гриппа 1998 — 1999 г.г. с использованием методов лабораторной диагностики // Вестник РАМН-2001.-№ 3.-С.8−12.
  13. А. А. Быстрая диагностика гриппа и других ОРВИ иммунофлуоресцентным методом: методические рекомендации. СПб: ГУ НИИ гриппа РАМН, 2006.-1 Ос.
  14. JI.M. Острые и хронические заболевания у лиц, подвергшихся воздействию радиации // Тезисы юбилейной международной научной конференции «Грипп 21 век».- СПб., 1997.-С.41.
  15. Adenoviruses: Basic Biology to Gene Therapy / Ed: by Prem Seth, 1999.- 30p.
  16. Adrian T. DNA restriction analysis of adenovirus prototrype 1 to 41 // Arch. Virol.-1986.-Vol.91 .-P.277−290.
  17. Andreasi M.S.A. Adenovirus, calicivirus and astrovirus detection in fecal samples of hospitalized children with acute gastroenteritis from" Campo, Grande, MS, Brazil //Mem Inst Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro.-2008.-Vol. 103.-P.741−744.
  18. Avellon A. Rapid and sensitive diagnosis of human adenovirus infections by a generic polymerase chain reaction / A. Avellon, P. Perez, J.C. Aquilar // J. Virol, Methods—2001 .-Vol.92.-P. 113−120.
  19. Baum S.G. Adenoviruses // In: Mandell G.L., Bennet J.I., Dolin R., eds. Principles and practice of infectious diseases.- N.Y., 2000.-P. 1624−1630.
  20. Bellau-Pujol S. Development of three multiplex RT-PCR assays for the detection of 12 respiratory viruses // J. Virol. Methods.-2005.-Vol.126.-P.53−63.
  21. Blyn L.B. Rapid Detection and Molecular Serotyping of Adenovirus by Use of PCR Followed by Electrospray Ionization Mass Spectrometry // J. Clin.
  22. Microbiol.-2008.-№ 2.-P.644−651.
  23. Chakrabarti S. Adenovirus infections in stem cell transplant recipients: Recent developments in understanding of pathogenesis, diagnosis and // Leukemia and Lymphoma-2004.-Vol.45.-P.873−885.
  24. Qi
  25. Cockerill, F. R. Application of rapid-cycle real-time polymerase chain reaction for diagnostic testing in the clinical microbiology laboratory // Arch. Pathol. Lab. Med.-2003.-Vol. 127.-P. 1112−1120.
  26. Coiras M.T. Simultaneous detection of influenza А, В, С viruses, respiratory syncytial virus, and adenoviruses in clinical samples by multiplex reverse transcription nested-PCR assay // J. Med. Virol.-2003.- Vol. 69.-P. 132−144.
  27. Dagher H. Rhinovirus detection: comparison of real-time and conventional-PCR // J. Virol. Methods-2004.-Vol.l 17.-P.113−121.
  28. Damen M. Real-Time PCR with an Internal Control for Detection of All Known Human Adenovirus Serotypes //J. of clinical microbiology.-2008.-№ 12.-P.3997−4003.
  29. Doane F.W. Electron microscopy for the detection of gastroenteritis viruses // In A.Z. Kapikian (ed), Viral infections of the gastrointestinal tract, 2nd ed. Marcel Dekker, Inc.- N.Y., 1994.-P.101−130.
  30. Erdman D.D. GeneScan reverse transcription-PCR assay for detection of six common respiratory viruses in young children hospitalized with acute respiratory illness //J. Clin. Microbiol.-2003.-Vol.41.-P.4298−43 03.
  31. Echavarria M. PCR method for detection of adenovirus in urine of healthy and human immunodeficiency virus infected individuals // J. Clin. Microbiol.-1998.-Vol.36.-P.3323−3326.
  32. Echavarria M.S. PCR detection of adenovirus in a bone morrow transplant recipient: hemorrhagic cystitis as a presenting manifestation of disseminated disease//J. Clin. Microbiol.-1999.-Vol.37.-P.686−689.
  33. Echavarria M. Rapid detection of Adenovirus in throat swab specimens by PCR during respiratory disease outbreaks among military recruits // J. of Clinical Microbiology.-2003.-Vol.41.-P.810−812.
  34. Echavarria M. Adenoviruses in immunocompromised hosts // Clin. Microbiol. Rev.-2008.-Vol.21.- P.704−715.
  35. Epstein S.P. Topical cobalt chelate CTC-96 for the treatment of adenovirus conjunctivitis in a rabbit model // Investigative Ophthalmology and Visual Science.-2003.-Vol.44.-E-abstract 4650.
  36. Everitt E. Structural proteins of adenoviruses. XII. Location and neighbor relationship among proteins of adenovirion type 2 as revealed by enzymatic iodination, immunoprecipitation and chemical cross-linking // Virology.-1975.-V.67.-P. 197−208.
  37. Gavin P.J. Intravenous ribavirin treatment for severe adenovirus disease in immunocompromised children // Paediatrics.-2002.-Vol.110.-P.9.
  38. Gavin P.J. Review of rapid diagnostic tests for influenza // Clinical and applied immunology reviews-2003 -Vol.4.-P. 151 -172.
  39. Gruteke P. Practical implementation of a multiplex PCR for acute respiratory tract infections in children // J. Clin. Microbiol.-2004.-Vol.42.-P.5596−5603.
  40. Henrickson K.J. Diagnostic assays for respiratory syncytial virus disease // J. The pediatric infectious diseas.-2007.-Vol.26.-P.36−40.
  41. Hierholzer J.C. Adenoviruses in the immunocompromized host // Clinical Microbiology Reviews.-1992.-Vol.5.-P.262−274.
  42. Hijazi Z. Laboratory diagnosis of acute lower respiratory tract viral infections in children // J. Trop. Pediatr.-1996.-Vol.42.-P.276−280.
  43. Hillenkamp J. The effects of cidofovir 1% with and without cyclosporin A 1% as a topical treatment of acute adenoviral keratoconjunctivitis—a controlled clinical pilot study // Ophthalmology.-2002.-Vol.l09.-P.845−850.
  44. Irmen K.E. Use of monoclonal antibodies for rapid diagnosis of respiratory viruses in a community hospital // Clin. Diagn. Lab. Immunol.-2000.-Vol.7-P.396−403.
  45. Kang G. Etiology of diarrhea in patients undergoing allogeneic bone marrow transplantation in South India// Transplantation.-2002.-Vol.73.-P.1247−1251.
  46. Kim S.R. Rapid detection and identification of 12 respiratory viruses using a dual priming oligonucleotide system-based multiplex PCR assay // J. of Virological methods.-2009.-Vol. 156.- P. l 11−116.
  47. Kinchington P.R. Sequence changes in the human adenovirus type 5 DNA polymerase associated with resistance to the broad spectrum antiviral cidofovir // Antiviral Research.-2002.-Vol.56.- P.73−84.
  48. Kinchington P. R. Prospects for adenovirus antivirals // Journal of Antimicrobial Chemotherapy: Review.-2005.-Vol.55.-P.424−429.
  49. Kuroiwa Y. Comparison of an Immunochromatography Test with Multiplex Reverse Transcription-PCR for Rapid Diagnosis of Respiratory Syncytial Virus Infections // J. Clin. Microbiol.-2004.-Vol.42.-P.4812−4814.
  50. Kuypers J. Evaluation of quantitative and type-specific real-time PCR assays for detection of RSV in respiratory specimens from children // J. Clin. Virol.-2004.-Vol.31.-P. 123−129.
  51. Kuypers J. Comparison of Real-Time PCR Assays with Fluorescent-Antibody Assays for Diagnosis of Respiratory Virus Infections in Children // J. Clin. Microbiol.-2006.-Vol.44.- P.2382−2388.
  52. Lagos R. Systematic surveillance of influenza, syncytial respiratory, parainfluenza and adenovirus in children with acute respiratory infections // Rev. Med. Chil.-1999.-Vol.127.-P.1063 1072.
  53. Landry M.L. SimulFluor respiratory screen for rapid detection of multiple respiratory viruses in clinical specimens by immunofluorescence staining // J.
  54. Clin. Microbiol.-2000.-Vol.38.-P.708−711.
  55. Levent F. Performance of a new immunochromatographic assay for detection of adenoviruses in children // J. of Clinical Virology.-2009.-Vol.44.-P.173−175.
  56. Leung A.Y. Quantification of adenovirus in the lower respiratory tract of patients without clinical adenovirus-related respiratory disease // Clin. Infect. Dis.-2005 .-Vol.40.-P. 1541 -1544.
  57. Mahony J. Development of a Respiratory Virus Panel Test for Detection of Twenty Human Respiratory Viruses by Use of Multiplex PCR and a Fluid Microbead-Based Assay // J. Clin. Microbiol.-2007.-Vol.45.-P.2965−2970.
  58. Maitreyi R.S. Rapid detection of respiratory viruses by centrifugation enhanced cultures from children with acute lower respiratory tract infections // J. Clin. Virol.-2000.-Vol.l6.-P.41−47.
  59. Marinheiro J.C. Duplex-PCR assay for the detection of adenovirus and respiratory syncytial virus in nasopharyngeal samples // Mem. Inst. Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro.-2009.-Vol.l04.-P.l 18−120.
  60. Matar L.D. Respiratory viral infections in lung transplant recipients: radiologic findings with clinical correlation // Radiology.-1999.-Vol.213.-P.735−742.
  61. Mentel R. Inhibition of adenovirus DNA polymerase by modified nucleoside triphosphate analogs correlate with their antiviral effects on cellular level // Medical Microbiology & Immunology.- 2000.-Vol.l89.-P.91−95.
  62. Miura-Ochiai R. Quantitative detection and rapid identification of human adenoviruses // J. Clin. Microbiol.-2007.-Vol.45.-P.958−967.
  63. Moore P.L. Relevance of commercial diagnostic tests to detection of enteric adenovirus infections in South Africa // J. Clin. Microbiol.-2000.-V.38.-P.1661−1663.
  64. Monto A. S. Epidemiology of viral respiratory infections //Am. J. Med.- 2002.-Vol.112.-P.4−12.
  65. Morfin F. Differential susceptibility of adenovirus clinical isolates to cidofovir and ribavirin is not related to species alone // Antivir. Ther.- 2009.-Vol.14.-P.55−61.
  66. Newton D.W. Clinical and laboratory diagnosis of influenza virus infections // The American journal of managed care.-2000:-Vol.6.-P.265−275.
  67. Ozbay Ho§ nut F. Adenovirus infection as possible: cause of acute liver failure in a healthy child: A case report//Turk. J. Gastroenterol.-2008.-Vol.19.-P.281−283. v
  68. Perkins S.M. Comparison of a Real-Time Reverse Transcriptase PCR Assay and a Culture Technique for Quantitative Assessment of Viral Load in Children Naturally Infected with Respiratory Syncytial Virus // J. Clin. Microbiol.-2005.-Vol.43.-P.2356−2362.
  69. Poon L.L. Detection of SARS coronavirus in patients with severe acute respiratory syndrome by conventional and real-time quantitative reversetranscription-PCR assays // Clin. Chem.-2004.-Vol.50.-P.67−72.
  70. Puppe W. Evaluation of a multiplex reverse transcriptase PCR ELISA for the detection of nine respiratory tract pathogens // J. Clin. Virol. -2004.-Vol.30.-P.165−174.
  71. Raboni S.M. Comparison of PCR, enzyme immunoassay and conventional culture for adenovirus detection in bone marrow transplant patients with hemorragic cystitis //J. of Clin. Virology -2003 .-Vol.27.-P.270−275.
  72. Romanowski E.G. Antiviral prophylaxis with twice daily topical cidofovir protects against challenge in the adenovirus type 5/New Zealand rabbit ocular model // Antiviral Research.- 2001.-Vol.52.-P.275−280.
  73. Romanowski E.G. Beyond cidofovir: the in vitro evaluation of newer potential antiviral agents against ocular isolates of adenovirus // Investigative Ophthalmology and Visual Science.-2001.-Vol.42.-P.579.
  74. La Rosa A. M. Adenovirus infections in adult recipients of blood and marrow transplants // Clinical Infectious Diseases.-2001.-Vol.32.-P.871−876.
  75. Rovida F. Monoclonal antibodies versus reverse transcription-PCR. for detection of respiratory viruses in a patient population with respiratory tract infections admitted to hospital // J. Med. Virol.-2005.-Vol.75.-P.336−347.
  76. Saderi H. Incidence of enteric adenovirus gastroenteritis in Iranian children // J. Clin. Virol.-2002.-Vol.24.-P.l-5.
  77. Samransamruajkit R. Prevalence, clinical presentations and complications among hospitalized children with influenza pneumonia // Jpn. J. Infect. Dis.-2008.-Vol.61.-P.446−449.
  78. Selvaraj G. Molecular Epidemiology of Adenovirus Isolates from Patients Diagnosed with Intussusception in Melbourne, Australia // J. Clin. Microbiol.-2006.-Vol.44.-P.3371−3373.
  79. Smith R.M. Monoclonal antibodies: Harnessing the potential / R.M. Smith, P.J. Fairchild // Sci. Progress Oxford.-1992.-P.323−343.
  80. Suga T. Analysis of adenoviruses isolated in Cobe City, Japan, from 2000 to 2007 // Jpn. J. Infect. Dis.-2008.-Vol.61.-P.503−504.
  81. Syrmis M. W. A sensitive, specific, and cost-effective multiplex reverse transcriptase-PCR assay for the detection of seven common respiratory viruses in respiratory samples // J. Mol. Diagn.-2004.~Vol.6.-P.125−131.
  82. Takimoto S. Comparison of enzyme-linked immunosorbent assay, indirect immunofluorescence assay and virus isolation for detection of respiratory viruses in nasopharyngeal secretions // J. Clin. Microbiol.-1991.-Vol.29.-P.470−474.
  83. Templeton К. E. Improved diagnosis of the etiology of community-acquired pneumonia with real-time polymerase chain reaction // Clin. Infect. Dis.-2005.-Vol.41.-P.345−351.
  84. Tijssen P. Practice and Theory- of Enzyme Immunoassay // In: Laboratory. Techniques in Biochemistry and Molecular Biology. (Ed. By R.H.Burdon, P.H.Knippenberg): Amsterdam- New York- Oxford- Elsevier.-1985. -Vol.15 -549p.
  85. Tsutsumi H. Imunochromatography test for rapid diagnosis of adenovirus respiratory tract infections: comparison with virus isolation in tissue culture // J. Clin. Microbiol.-1999.-Vol. 37.-P.2007−2009.
  86. Tuteja U. Generation and characterization of monoclonal antibodies to adenovirus // Indian. J. Exp. Biol.-2000.-Vol.38.-P.1259−1262.
  87. Family Adenoviridae / In: Virus taxonomy: classification and nomenclature of viruses. Seventh report of the International Committee on Taxonomy of Viruses (ed. by M.H.V. van Regenmortel et al.).- San Diego: Academic Press., 1999.-P.227−23 7.
  88. Wadell G. Molecular epidemiology of human adenoviruses // Curr. Top. Microbiol. Immunol.-1984.-Vol. 110.-P. 191 -220.
  89. Wadell G. Enteric adenoviruses / In: Viral Infections of the Gastrointestinal Tract, (ed. by Kapikian A.Z. N.Y.), 1994.- P.519−548.
  90. Wadell G. Adenoviruses // In: Principles and Practice of Clinical Virology. 4th Edition, (ed. by Zuckeman A.E. et al.), 2000.-P.307−327.
  91. Walls T. Adenovirus: an increasingly important pathogen in pediatric bone marrow transplant patients // Lancet Infectious Diseases.-2003.-Vol.3.-P.79−86.
  92. Waters V. Etiology of community-acquired pediatric viral diarrhea: a prospective longitudinal study // Pediatr. Infect. Dis. J.-2000.-V.19.-P.843−848.
  93. Weinberg G.A. Superiority of reverse-transcription polymerase chain reaction to conventional viral culture in the diagnosis of acute respiratory tract infections in children // J. Infect. Dis.-2004-Vol.l89.-P.706−710.
  94. Weitzel T. Field Evaluation of a Rota- and Adenovirus Immunochromatographic Assay Using Stool Samples from Children with
  95. Acute Diarrhea in Ghana // J. Clin. Microbiol.-2007.-Vol.45.-P.2695−2697.
  96. Wood S.R. Rapid detection and serotyping of adenovirus by direct immunofluorescence//J. Med.Virol.-1997.-Vol. 51.-P. 198−201.
  97. Yeung R. Characterization of culture-positive adenovirus serotypes from respiratory specimens in Toronto, Ontario, Canada: September 2007-June 2008 // Virology Journal.-2009.-VoL6.-P.6-l 1.
  98. Zarubaev V.V. Effect of 6-azacytidine to experimental adenoviral infection // Antiviral Research.-2000.-Vol.46.-P.66.
  99. Zheng X. Identification of Adenoviruses in Specimens from High-Risk Pediatric Stem Cell Transplant Recipients and Controls // J. Clin. Microbiol.-2008.-Vol.46.-P.317−320.шетаШййве
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!