Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Разработка микрометодов анализа аминокислот, коротких пептидов и олигонуклеотидов с использованием ОФ ВЭЖХ и капиллярного электрофореза

Диссертация: Разработка микрометодов анализа аминокислот, коротких пептидов и олигонуклеотидов с использованием ОФ ВЭЖХ и капиллярного электрофореза
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Актуальность работы. В настоящее время клинические исследования все больше ориентируются на использование инструментальных микрометодов анализа для диагностики наиболее распространенных и опасных социально-значимых заболеваний. Однако значительная часть этих методов не полностью и не всегда обеспечивает своевременное и качественное их диагностирование, что часто не отвечает современным… Читать ещё >

Разработка микрометодов анализа аминокислот, коротких пептидов и олигонуклеотидов с использованием ОФ ВЭЖХ и капиллярного электрофореза (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
  • 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
    • 1. 1. а-Аминокислоты и методы их анализа
      • 1. 1. 1. Общие положения
      • 1. 1. 2. Методы анализа
      • 1. 1. 3. Способы детектирования
    • 1. 2. Низкомолекулярные аминотиолы плазмы крови и методы их анализа
      • 1. 2. 1. Гомоцистеин и его метаболизм в организме человека
      • 1. 2. 2. Методы анализа гомоцистеина
      • 1. 2. 3. Способы идентификации гомоцистеина
        • 1. 2. 3. 1. Методы, не требующие предварительной дериватизации
        • 1. 2. 3. 2. Методы с предварительной дериватизацией
    • 1. 3. Методы разделения и идентификации полинуклеотидов
      • 1. 3. 1. Нуклеиновые кислоты. Общие положения
      • 1. 3. 2. Дезоксирибонуклеиновые кислоты. Методы анализа
      • 1. 3. 3. Капиллярный гель-электрофорез. Основы метода
  • Область применения
    • 1. 3. 4. Определение мутаций генов
  • 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТ
    • 2. 1. Реактивы и материалы
    • 2. 2. Приготовление рабочих растворов
    • 2. 3. Приборы и оборудование
    • 2. 4. Общая методология работы
      • 2. 4. 1. Анализ свободных генетически кодируемых аминокислот методом капиллярного электрофореза
      • 2. 4. 2. Анализ гомоцистеина, цистеина и глутатиона методами ОФ ВЭЖХ и капиллярного электрофореза
      • 2. 4. 3. Анализ олигонуклеотидов методом капиллярного гель-электрофореза
  • 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
    • 3. 1. Определение свободных кодируемых аминокислот
      • 3. 1. 1. Определение методом капиллярного зонального электрофореза
      • 3. 1. 2. Определение методом мицеллярной электрокинетической хроматографии
    • 3. 2. Определение гомоцистеина и других низкомолекулярных аминотилов плазмы крови
      • 3. 2. 1. Определение микроколоночной ОФ ВЭЖХ
      • 3. 2. 2. Определение методом капиллярного электрофореза
    • 3. 3. Определение мутаций в молекулах ДНК методом капиллярного гель-электрофореза
  • 4. ВЫВОДЫ

Актуальность работы. В настоящее время клинические исследования все больше ориентируются на использование инструментальных микрометодов анализа для диагностики наиболее распространенных и опасных социально-значимых заболеваний. Однако значительная часть этих методов не полностью и не всегда обеспечивает своевременное и качественное их диагностирование, что часто не отвечает современным требованиям мониторинга биохимического статуса человека.

Свободные аминокислоты и короткие пептиды, входящие в состав физиологических жидкостей, имеют важное функциональное значение. В ряде случаев они могут выступать в роли молекулярных маркеров определенных заболеваний. Изменение их концентрации часто связано с метаболическими нарушениями, которые свидетельствуют о развитии того или иного заболевания. Наряду с этим большинство существующих методов аминокислотного анализа является либо недостаточно чувствительными и селективными для их идентификации, либо требуют дериватизации аминокислот, что существенно усложняет процесс их определения. Проблема простого и экономичного анализа свободных генетически кодируемых аминокислот до сих пор до конца не решена. В то же время клинический анализ аминокислот требует их предили постколоночной модификации для высокочувствительного и селективного определения. Кроме того, изменение содержания молекулярных маркеров в физиологических жидкостях может быть связано с генетической предрасположенностью пациента к конкретному заболеванию. Отсюда следует необходимость проведения сравнительного анализа фрагментов ДНК с целью повышения достоверности определения причины исследуемого заболевания и более эффективной его терапии.

Между тем. необходимая для аминокислотного и нуклеотидного анализа аппаратура импортного производства, как правило, является дорогостоящей и малодоступной для большинства клинических лабораторий. Ситуация усугубляется еще и тем, что многие приборы являются узкоспециализированными для каждого вида заболевания, вследствие чего Автор выражает благодарность руководителю группы аналитической химии белка ИБХ РАН СТ.Н.С., К.Х.Н. И. В. Назимову за постоянную помощь, внимание и обсуждение результатов. наблюдается множественное дублирование диагностических методов как по аппаратуре, так и по методологии. Это резко повышает стоимость клинических исследований и усложняет сравнение полученных результатов анализа. Таким образом, разработка новых методик, расширяющих возможности использования общедоступного аналитического оборудования отечественного производства для высокочувствительного экспрессного и надежного определения свободных и модифицированных аминокислот, коротких пептидов и олигонуклеотидов как для структурного анализа биополимеров и их фрагментов, так и в клинико-диагностических целях является актуальной научной задачей.

Следует отметить, что наряду с широкоприменяемыми в классических схемах аминокислотного и нуклеотидного анализа хроматографическими методами разделения перспективно использовать метод капиллярного электрофореза. Этот метод позволяет существенно упростить существующие методики определения и обеспечивает большую разрешающую способность, а возможность его стыковки с рядом высокочувствительных детекторов делает его применение выгодным при анализе микроколичеств исследуемых соединений.

Цель работы. Целью диссертационной работы является разработка комплекса инструментальных высокочувствительных микрометодов анализа свободных и модифицированных аминокислот, коротких пептидов и олигонуклеотидов с использованием отечественной инструментальной базы.

Научная новизна.

1. Разработаны методики определения не модифицированных генетически кодируемых а-аминокислот с использованием методов капиллярного зонального электрофореза и мицеллярной электрокинетической хроматографии с прямым УФ-фотометрическим и рефрактометрическим способами детектирования.

2. Разработаны и применены в клинической практике методики совместного определения низкомолекулярных аминотиолов в плазме крови с использованием методов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярного зонального электрофореза с флуориметрическим и прямым УФ-фотометрическим способами детектирования.

3. Разработана методика определения фрагментов мутантного гена венозных тромбозов на основе анализа продуктов аллель-специфичной полимеразной цепной реакции методом капиллярного гель-электрофореза с флуориметрическим детектированием.

Практическая значимость. Разработанный метод аминокислотного анализа позволяет определять микроколичества генетически кодируемых аминокислот без их предварительной дериватизации, что существенно упрощает существующую схему анализа. Разработан и предложен для практического использования комплекс методов анализа молекулярных маркеров (гомоцистеин, цистеин, глутатион) сосудистых катастроф, а также фрагментов мутантного гена венозных тромбозов. В результате проведенной работы удалось показать возможность эффективного использования отечественной аппаратуры для проведения биохимического анализа как белковых, так и нуклеиновых компонентов на одном и том же приборе для капиллярного электрофореза. Определение серосодержащих аминокислот и пептидов в плазме крови по разработанной в данной работе методике использовали для оценки фактора риска десятков пациентов с достоверно установленным инфарктным и предынфарктным состоянием. Результаты проведенной работы использованы при создании и апробировании в практике биомедицинского анализа универсального экономичного автоматизированного комплекса приборов и методов молекулярной диагностики некоторых социально-значимых заболеваний (инфаркты, инсульты, тромбозы), разрабатываемого в институте аналитического приборостроения РАН.

На защиту выносятся: способы определения генетически кодируемых аминокислот в водном растворе без их предварительной дериватизации с использованием капиллярного зонального электрофореза и мицеллярной электрокинетической хроматографии;

— оптимизированные условия дериватизации низкомолекулярных аминотиолов плазмы с использованием флуорогенных реагентов (монобромобиман и 5-иодоацетамидофлуоресцеин) — методика анализа низкомолекулярных аминотиолов плазмы крови с использованием ОФ ВЭЖХ и капиллярного электрофореза;

— результаты определения содержания гомоцистеина в плазме крови методами ОФ ВЭЖХ и капиллярного зонального электрофореза;

— способ определения мутантного гена венозных тромбозов с использованием капиллярного гель-электрофореза в линейном поли-N, N' -диметилакриламиде.

Апробация работы. Основные результаты работы были представлены на 8-м Всероссийском симпозиуме по молекулярной жидкостной хроматографии и капиллярному электрофорезу (15−19 октября 2001 г. Москва, Россия), 3-м Международном симпозиуме по методам разделения в бионауках (13−18 мая 2003 г., Москва, Россия,), Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2005» (Секция химия. 1215 апреля 2005 г., Москва, Россия), 2-ой научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицинской биотехнологии» (12−14 сентября 2005 г., Анапа, Россия), 3-м съезде общества биотехнологов России им. Ю. А. Овчинникова (25−27 октября 2005 г., Москва, Россия), 1-ой конференции молодых ученых МИТХТ им. МБ. Ломоносова (13−14 октября 2005 г., Москва, Россия), Международном конгрессе по аналитическим наукам ICAS-2006 (2530 июня 2006 г., Москва, Россия), 31-м Международном конгрессе федерации европейских биохимических обществ (24−29 июня 2006 г., Стамбул, Турция), 26-м Международном симпозиуме по разделению белков, пептидов и полинуклеотидов (16−20 октября 2006 г., Инсбрук, Австрия).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 работ в виде статей и тезисов докладов.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, экспериментальной части, обсуждения результатов, выводов и списка цитируемой литературы.

4. ВЫВОДЫ.

1. Разработаны методики анализа генетически кодируемых аминокислот без их предварительной дериватизации методами мицеллярной электрокинетической хроматографии и капиллярного зонального электрофореза с рефрактометрическим и прямым УФ детектированием. Изучено влияние состава и значения рН фонового электролита, а также добавок органических растворителей на эффективность разделения.

2. Методом мицеллярной электрокинетической хроматографии с прямым УФ детектированием проведено количественное определение модельной смеси 14 свободных генетически кодируемых аминокислот.

3. Разработана методика быстрого и достоверного определения содержания низкомолекулярных аминотиолов в плазме крови здоровых и больных пациентов методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием. Показана принципиальная возможность применения данной методики для определения пониженного содержания гомоцистеина в плазме крови. Разработанная методика апробирована на реальных образцах плазмы крови пациентов.

4. Показана возможность определения патологически высоких концентраций гомоцистеина в плазме крови методом капиллярного зонального электрофореза с фотометрическим детектированием. Разработанная методика апробирована на реальных образцах плазмы крови пациентов. Изучена возможность применения 5-иодоацетамидофлуоресцеина в качестве поглощающей и флуорогенной метки.

5. Разработана методика селективного определения фрагментов мутантного гена венозных тромбозов (мутация FV Leiden) методом капиллярного гель-электрофореза с флуориметрическим детектированием. Показана возможность анализа нуклеотидов с длиной цепи до 100 н.о. и с разницей по длине в 1 н.о.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. // М.: Медицина, -1998,-704 с.
  2. Johansson L., GafVelin G., Arner E.S. Selenocysteine in proteins-properties and biotechnological use. //Biochim. Biophys. Acta. -2005. -V. 1726. -1.1. -P. 1−13.
  3. Kiyukov G.V., Castellano S., Novoselov S.V., Lobanov A.V., Zehtab O., Guigo R., Gladyshev V.N. Characterization of mammalian selenoproteomes. // Science -2003. -V. 300. -1.5624. -P. 1439−1443.
  4. Srinivasan G., James C.M., Krzycki J.A. Pyrrolysine encoded by UAG in Archaea: charging of a UAG-decoding specialized tRNA // Science -2002. -V. 296. -1.5572.-P. 1459−1462.
  5. P., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека. // Пер. с англ.: М.: Мир, 1993, — Т. 1. — 384 с.
  6. Fisher G, Lorenzo N, Abe H, Fujita E, Frey WH, Emory C, Di Fiore MM, D' Aniello A. Free D- and L-amino acids in ventricular cerebrospinal fluid from Alzheimer and normal subjects. // Amino Acids. -1998. -V.15. -I. 3. -P. 263 269.
  7. Castillo J., Martinez F., Corredera E., Aldrey J.M., Noya M. Amino Acid Transmitters in Patients With Headache During the Acute Phase of Cerebrovascular Ischemic Disease. // Stroke. -1995. -V. 11. -I. 11 -P. 20 352 039.
  8. Hanley W.B. Adult phenylketonuria. // Am. J. Med. -2004. -V. 117. -I. 8. -P. 590−595.
  9. Garibotto G, Tessari P, Verzola D, Dertenois L. The metabolic conversion of phenylalanine into tyrosine in the human kidney: does it have nutritional implications in renal patients? // J. Ren. Nutr. -2002. -V. 12. -1.1. -P. 8−16.
  10. Lee K.S., Drescher D.G. Fluorometric amino-acid analysis // Int. J. Biochem. -1978.-V. 9.-1.7.-P. 457−467.
  11. Дейл 3., Мацек К., Янак Я. Жидкостная колоночная хроматография. // Пер. с англ.: М.: Мир, 1978,-Т. 2. — 471 с.
  12. Экспериментальные методы исследования белков и нуклеиновых кислот. // Под ред. М. А. Прокофьева. М.: Изд-во МГУ, 1985, — 248 с.
  13. Э. Хроматография. Практическое приложение метода. // Пер. с англ.: М.: Мир, 1986, -Т. 1. — 336с.
  14. Cole W.G., Chan D., Chambers G.W., Walker I.D., Bateman J.F. Deletion of 24 amino acids from the pro-alpha 1(1) chain of type I procollagen in a patient with the Ehlers-Danlos syndrome type VII. // J. Biol. Chem. -1986. -V. 261. -1.12. -P. 5496−5503.
  15. Shively J.E. The chemistry of protein sequence analysis. // EXS. -2000. -V. 88. -P. 99−117.
  16. Nazimov I.V., Levina N.B. Unified system for high speed analysis of DNS- and PTG amino acidsIII Chem. Pept. and Prot. -1986. -Vol. 3. -P. 119−126.
  17. С. А., Макаров К. А., Тонкослойная хроматография в органической химии. М.: Наука, 1974, 156 с.
  18. Bhushan R., Reddy G.P. Thin layer chromatography of dansyl and dinitrophenyl derivatives of amino acids. A review. // Biomed. Chromatogr. -1989. -V. 3. -I. 6.-P. 233−240.
  19. Практическая химия белка. // Под ред. А. Дарбре, пер. с англ. Н. А. Алданова, И. В. Назимова, П. Д. Решетова, М.: Мир, 1989, 611 с.
  20. Hara S., Hayashi S. Correlation of retention behaviour of steroidal pharmaceuticals in polar and bonded reversed-phase liquid column chromatography. //J. Chromatogr. A. -1977. -V. 142. -P. 689−703.
  21. Ivanov A. R., Nazimov I. V., Lobazov A. P., Popkovich G. B. Direct determination of amino acids and carbohydrates by high-performance capillaiy electrophoresis with refractometric detection. // J. Chromatogr. A. -2000. -V.894.-1.1−2.-P. 253−257.
  22. О.В., Сидоров А. И., Сульман Э. М. Экспресс-определение аминокислот методом капиллярного электрофореза без их предварительной дериватизации. // Ж. Анал. Хим. -2003. -Т. 58. -№ 10. -С. 1093−1096.
  23. Melnikov I.O., Nazimov I.V., Lobazov A.F., Popkovich G.B. Capillary Electrophoresis Of Coded Nonmodified Amino Acids With Refractometric Detection. // 3rd International Symposium on Separations in Biosciences, Москва, май 2003, -P. 263.
  24. И.О., Глубокое Ю. М., Назимов И. В. Капиллярный электрофорез свободных аминокислот с рефрактометрическим и прямым УФ-детектированием. // Инф.-анал. бюлл. «Ученые записки МИТХТ». М.: МИТХТ. -2004. Вып. 11. -С. 54−57.
  25. К., Экштайн X. Аналитические и препаративные лабораторные методы. // Справ. Изд.: Пер. с нем. М.: Химия, 1994, — 416 с.
  26. Carducci C., Birarelli M., Leuzzi V., Santagata G., Serafini P., Antonozzi I. Automated method for measurement of amino acids in urine by high-perfomance liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. -1996. -V. 729. -1.1. -P. 173−180.
  27. Yang L.-L., Zhang De.-Q., Yuan Z.-B. Enantioseparation of o-phthaldiadehyde derivatized amino acids using (3-CD-modified micellar electrokinetic chromatography in the mixed aqueous-organic media. // Anal. Chim. Acta. -2001.-V. 433.-1.1.-P. 23−30.
  28. Paez X., Rada P., Hernandez L. Neutral amino acids monitoring in phenylketonuric plasma microdialysates using micellar electrokinetic chromatography and laser-induced fluorescence detection. // J. Chromatogr. B. -2000.-V. 739.-P. 247−254.
  29. Thorsen G., Bergquist J. Chiral separation of amino acids in biological fluids by micellar electrokinetic chromatography with laser-induced fluorescence detection. // J. Chromatogr. B. -2000. -V. 745. -P. 389−397.
  30. Qi M., Li X-F, Stathakis C., Dovichi N.J. Capillary electrochromatography with thermo-optical absorbance detection for the analysis of phenylthiohydantoin-amino acids. Ill Chromatogr. A. -1999. -V. 853. -1.1−2. -P. 131−140.
  31. K.B., Пирогов A.B., Шпигун O.A. Идентификация электрофоретических пиков фенилтиогидантоиновых производных аминокислот. //Ж. Анал. Хим.-2006. -Т.61. -№ 1. -С. 10−17.
  32. Xu J.-J, Peng Y., Bao N., Xia Х.-Н., Chen H.-Y. Simple method for the separation and detection of native amino acids and the identification of electroactive and non-electroactive analytes. // J. Chromatogr. A. -2005.-V. 1095.-1.1−2.-P. 193−196.
  33. Klampfl C.W. Recent advances in the application of capillary electrophoresis with mass spectrometric detection. // Electrophoresis. -2006. -V. 27. -1.1. -P. 3−34.
  34. Poinsot V., Lacroix M., Mauiy D., Chataigne G., Feurer В., Couderc F. Recent advances in amino acid analysis by capillary electrophoresis. // Electrophoresis. -2006.-V.27.-I. l.-P. 176−194.
  35. Satake K., Take Т., Matsuo A., Tazaki K., Nigara Y. Amino Acid Analyzer Using 2,4, 6-Trinitrobenzenesulfonic Acid. // J. Biochem. -1966. -V.60. -I. 1. -P. 12−16.
  36. Lau O.W., Mok C.S. Indirect conductimetric detection of amino acids after liquid chromatographic separation. // Anal. Chim. Acta. -1995. -V. 300. -1.1−3. -P. 183−191.
  37. Tcherkas Y.V., Kartseva L.A., Krasnova I.N. Analysis of amino acids in human serum by isocratic reversed-phase high-performance liquid chromatography with electrochemical detection. //J. Chromatogr. A. -2001. -V. 913. -1.1−2. -P. 303−308.
  38. Collins R.N. Separation of low-molecular mass organic acid-metal complexes by high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. -2004. -V. 1059.1.1−2.-P. 1−12.
  39. Whitehead К., Hedges J.I. Electrospray ionization tandem mass spectrometric and electron impact mass spectrometric characterization of mycosporine-like amino acids. // Rapid. Commun. Mass Spectrom. -2003. -V. 17. -V. 18. -P. 2133−2138.
  40. Buczek O., Yoshikami D., Watkins M., Bulaj G., Jimenez E.C., Olivera B.M. Characterization of D-amino-acid-containing excitatory conotoxins and redefinition of the I-conotoxin superfamily. // FEBS J. -2005. -V. 272. -1.16. -P. 4178−4188.
  41. A.T. Масс-спектрометрия в органической химии. М.: Бином, 2003,-493 с.
  42. EJ., Gage D.A., Watson J. Т. Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Mass Spectrometiy: Applications in Peptide and Protein Characterization // Protein Expr. Purif. -1995. -V. 6. -1.2. -P. 109−123.
  43. Zoppa M., Gallo L., Zacchello F., Giordano G. Method for the quantification of underivatized amino acids on dry blood spots from newborn screening by HPLC-ESI-MS/MS. //J. Chromatogr. B. -2006. -V. 831. -1.1−2. -P. 267−273.
  44. Song Y., Shenwu M., Zhao S., Hou D., Liu Y.M. Enantiomeric separation of amino acids derivatized with 7-fluoro-4-nitrobenzoxadiazole by capillary liquid chromatography/tandem mass spectrometiy. // J. Chromatogr. A. -2005. -V. 1091.-1.1−2.-P. 102−109.
  45. Starke I., Kleinpeter E., Kamm B. Separation, identification, and quantification of amino acids in 1-lysine fermentation potato juices by gas chromatography-mass spectrometry. //Fresenius J. Anal. Chem. -2001. -V. 371. -P. 380−384.
  46. Minniti G., Piana A., Armani U., Cerone R. Determination of plasma and serum homocysteine by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection.//J. Chromatogr. A.-1998.-V. 828.-1.1−2.-P. 401−405.
  47. Bolander-Gouzille С. Determination of homocysteine. Why, when and how. Stockholm. 1999.71 p.
  48. Magera M.J., Lacey J.M., Casseta В., Rinaldo P. Method for the determination of total homocysteine in plasma and urine by stable isotope dilution and electrospray tandem mass spectrometry. // Clin.Chem. -1999. -V. 45. -I. 9. -P. 1517−1522.
  49. Dalton M.L., Gadson P.F., JR., Wrenn W.R., Rosenquist Т.Н. Homocysteine signal cascade: Production of phospholipids, activation of protein-kinase С and the induction of c-fos and c-myb in smooth muscle cells. // FASEB J. -1997. -V.ll.-1.8.-P. 703−711.
  50. Dudman N.P.B., Tyrrell P.A., Wilcken D.E.L Homocysteinemia: depressed plasma serine levels. // Metabolism. -1987. -V. 36. -1.2. -P. 198−201.
  51. Fortin L.-J., Genest Jr J. Measurement of homocysteine in prediction of arteriosclerosis // Clin. Biochem. -1995. -V. 28. -1.2. -P. 155−162.
  52. Clarke R, Lewington S., Landray M. Homocysteine, renal function, and risk of cardiovascular disease. // Kidney Int. -2003. -V. 63. -S. 84. -P. S131-S133.
  53. Aronow W.S., Ahn C. Association between plasma homocysteine and coronary artery disease in older persons. // Am. J. Cardiol. -1997.-V.80. -I. 9. -P. 12 161 218.
  54. Gomes C., Rolin Т., Regland В., Oreland L. Decreased methionine adenosyitransferase activity in erythrocytes of patient with dementia disorders. // Eur. Neuropsychopharmacol. -1995. -V. 5. -1.2. -P. 107−114.
  55. Wilcken D.E.L., Reddy S.G., Gupta V.J. // Homocysteinemia, ischemic heart diseas, and the carrier state for homocystinuria. // Metabolism. -1983. -V. 32. -1.4.-P. 363−370.
  56. Refsum H., Wesenberg F., Ueland P.M. Plasma homocysteine in children with acute lymphoblastic leukemia: changes during a chemotherapeutic regimen including methotrexate.//Cancer Res.-1991.-V.51.-1.3.-P. 828−835.
  57. Refsum H., Helland S., Ueland P.M. Radioenzymic determination of homocysteine in plasma and urine. // Clin. Chem. -1985. -V. 31. -1.4.624−628.
  58. Ubbink J.B. Assay methods for the measurement of total homocysteine in plasma. // Semin. Thromb. Hemost -2000. -V. 26. -P. 233−241.
  59. Powers HJ., Moat SJ. Developments in the measurement of total plasma homocysteine. // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. -2000. -V. 3. -P. 391−397.
  60. Andersson A., Isaksson A., Hultberg B. Homocysteine export from erythrocytes and its implication for plasma sampling. // Clin. Chem. -1992. -V. 38. -I. 7. -P. 1311−1315.
  61. Rasmussen K., Moller J. Total homocysteine determination in clinical practice. // Ann. Clin. Biochem. -2000. -V. 37. -P. 627−648.
  62. Nauck M., Bisse E., Nauk M., Wieland H. Pre-analytical conditions affecting the determination of the plasma homocysteine concentration. // Clin. Chem. Lab. Med.-2001.-P. 675−680.
  63. O.E., Исследование специфических антител к возбудителям инфекционных заболеваний методом иммуноферментного анализа, 21.07.2003, ЗАО «А/О ЮНИМЕД»
  64. Sundrehagen Е. Enzymatic Assay for homocysteine and a kit therefore. // Axis Biochemicals ASA. EP 623 174/US5631127
  65. Ubbink J.B., Hayward Vermaak WJ., Van der Merwe A., Becker PJ. The effect of blood sample aging and food consumption on plasma total homocysteine levels. // Clin. Chim. Acta. -1992. -V. 207. -1.1−2. -P. 119−128.
  66. Тест-система, предназначенная для количественного определения общего L-гомоцистеина в человеческой сыворотке или плазме методом иммуноферментного анализа http://www.biochemmack.ru
  67. Gupta V.J., Wilcken D.E.L. The detection of cysteine-homocysteine mixed disulphide in plasma of normal fasting man. // Eur. J. Clin. Invest. -1978. -V. 8. -1.4.-P. 205−207.
  68. Araki A., Sako Y. Determination of free and total homocysteine in human plasma by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection. //J. Chromatogr. B. -1987. -V.422. -P. 43−52.
  69. Feussner A., Rolinski В., Weiss N., et al. Determination of total homocysteine in human plasma by isocratic high-performance liquid chromatography. // Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. -1997. -V.35. -1.9 -P. 687−691.
  70. Ubbink J.B., Hayward Vermaak W.J., Bissbort S. Rapid high-performance liquid chromatographic assay for total homocysteine levels in human serum // J. Chromatogr. B. -1991. -V. 565 -1.1−2. -P. 441−446.
  71. Moat S.J., Bonham J. R, Tanner M.S., et al. Recommended approaches for the laboratory measurement of homocysteine in the diagnosis and monitoring of patients with hyperhomocysteinaemia. // Ann. Clin. Biochem. -1999. -V. 36. -P. 372−379.
  72. Myung S.-W., Kim M., Min H.-K., Yoo E.-A., Kim K.-R. Determination of homocysteine and its related compounds by solid phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry. // J. Chromatogr. B. -1999. -V. 727. -I. 1−2.-P. 1−8.
  73. Kataoka H., Takagi K., Makita M. Determination of total plasma homocysteine and related aminothiols by gas chromatography with flame photometric detection. // J. Chromatogr. B. -1995. -V. 664. -1.2. -P. 421−425.
  74. Chu R.C., Hall C.A. The total serum homocysteine as an indicator of vitamin B12 and folate status // Am. J. Clin. Path. -1988. -V. 90. -P. 446.
  75. Ueland P.M., Refsum H., Stabler S.P., Malinow M.R., Andersson A., Allen R.H. Total homocysteine in plasma or serum. Methods and clinical applications. // Clin. Chem. -1993. -V. 39. -1.9. -P. 1764−1779.
  76. Saetre R., Rabenstein D.L. Determination of cysteine in plasma and urine and homocysteine in plasma by high-pressure liquid chromatography. // Anal. Biochem. -1978. -V. 90 -1.2. -P. 684−692.
  77. Rabenstein D.L., Yamashita G.T. Determination of homocysteine, penicilamine, and their symmetrical and mixed disulfides by liquid chromatography with electrochemical detection. // Anal. Biochem. -1989. -V. 180. -1.2. -P. 259−263.
  78. Pfeyffer C.M., Huff D.L., Gunter E.W. Rapid and accurate HPLC assay for plasma total homocysteine and cysteine in a clinical laboratory setting. // Clin. Chem. -1999. -V. 45. -1.2. -P. 290−292.
  79. Causse E., Siri N., Bellet H., Champagne S., Bayle C., Valdiguie P., Salvayre R., Couderc F. Plasma homocysteine determined by capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection. // Clin. Chem. -1999. -V.45. -I. 3. -P. 412−414.
  80. Kang S.-S., Wong P.W.K., Curley K. The effect of D-penicillamine on protein-bound homocysteine in homocystinurics. // Pediatr. Res. -1982. -V. 16. -I. 5. -P. 370−372.
  81. Nakashima K., Umekawa C., et al., High-performance liquid chromatography/chemiluminiscence determination of biological thiols with N-4-(6-dimethylamino-2-benzofuranyl)phenyl.maleimide. // -1987. J. Chromatogr. В. -V. 414. -P. 11−17.
  82. Stabler S.P., Marcell P.D., Podell R., Allen R.H. Quantitation of total homocysteine, total cysteine, and methionine in normal serum and urine capillary gas chromatography-mass spectrometry. // Anal. Biochem. -1987. -V. 162.-1.1. -P. 185−196.
  83. Jacobsen D.J., Gatautis V.J., Green R Determination of plasma homocysteine by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection. // Anal. Biochem.-1989.-V. 178.-1.1.-P. 208−214.
  84. Chou S.-T., Ко L.-E., Yang C.-S. High performance liquid chromatography with fluorimetric detection for the determination of total homocysteine in human plasma: method and clinical applications. //Anal. Chim. Acta. -2001. -V. 429. -1.2.-P. 331−336.
  85. Kang S.H., Kim J.-W., Chung D.S. Determination of homocysteine and other thiols in human plasma by capillary electrophoresis. // J. Pharm. Biomed. Anal. -1997.-V. 15.-1.9−10.-P. 1435−1441.
  86. Kim I.-J., Park S.-J., Kim H.-J. Chiral separation of homocysteine by derivatization with 4-aminosulfonyl-7-fluoro-2,l, 3-benzoxadiazole followed by capillary electrophoresis using y-cyclodextrin. // J. Chromatogr. A. -2000. -V. 877.-1.1−2.-P. 217−223.
  87. Kosower E.M., Kosower N.S. Bromobimane probes for thiols in Methods Enzymol. //Acad. Press Inc.-1995. -V. 251. -P. 133−148.
  88. Fontana A., Toniolo C. Detection and determination of thiols, in Methods Enzymol. // Acad. Press Inc. -1999. -V. 251. -P. 271−324.
  89. Haugland R.P. Handbook of fluorescent probes and research chemicals. Sixth edition 1996 Molecular Probes Inc. 680.22,48−52
  90. Carducci C, Birarelli M, Nola M, Antonozzi I. Automated high-performance liquid chromatographic method for the determination of homocysteine in plasma samples. // J Chromatogr A. -1999. -V. 846. -1.1−2. -P. 93−100.
  91. Chwatko G., Bald E. Determination of cysteine in human plasma by high-performance liquid chromatography and ultraviolet detection after pre-column derivatization with 2-chloro-l-methylpyridinium iodide. // Talanta. -2000. -V. 52.-1.3. -P. 509−515.
  92. Bald E., Kaniowska E., Chwatko G., Glowacki R. Liquid chromatographic assessment of total and protein-bound homocysteine in human plasma. // Talanta. -2000. -V. 50. -1.6. -P. 1233−1243.
  93. Cole D.E.C., Lehotay D.C., Evrovski J. Simplified simultaneous assay of total plasma homocysteine and methionine by hplc and pulsed integrated amperometry. // Clin. Chem. -1998. -V. 44. -1.1. -P. 188−190.
  94. Pietzsch J., Julius U., Hanefeld M. Rapid determination of total homocysteine in human plasma by using N (0,S)-ethoxycarbonyl ethyl ester derivatives and gas chromatography-mass spectrometry. // Clin. Chem. -1997. -V. 43. -I. 10. -P. 2001−2004.
  95. Myung S.-W., Kim M., Min H.-K., Yoo E.-A., Kim K.-R. Determination of homocysteine and its related compounds by solid-phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry. // J. Chromatogr. B. -1999. -V. 727. -I. 1−2.-P. 1−8.
  96. Chwatko G., Bald E. Determination of different species of homocysteine in human plasma by high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection. // J. Chromatogr. A. -2002. -V. 949. -1.1−2. -P. 141−151.142
  97. Stabler S.P., Marcell P.D., Podell E.R., Allen R.H. Elevation of serum cystathionine levels in patients with cobalamin and folate deficiency. // Blood. -1993. -V. 81. -1.12. -P. 3404−3413.
  98. Pasas S. A., Lacher N. A., Davies M.I., Lunte S.M. Detection of homocysteine by conventional and microchip capillary electrophoresis/electrochemistry. // Electrophoresis. -2002. -V. 23. -1.5. -P. 759−766.
  99. Uji Y., Motomiya Y., Hanyu N., Ukaji F., Okabe H. Protein-bound homocystamide measured in human plasma by HPLC. // Clin. Chem. -2002. -V.48.-1.6.-P. 941−944.
  100. Kang S.H., Wei W., Yeung E.S. On-column derivatization for the analysis of homocysteine and other thiols by capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection. //J. Chromatogr. В.: Biomed. Sci. Appl. -2000. -V. 744. -I. l.-P. 149−156.
  101. H.A., Евстигнеева Р. П. Химия биологически активных природных соединений. // Химия. -1970. -512 с.
  102. М., Берг П. Гены и геномы // Мир. -1998. т. 1. -374 с.
  103. Huber C.G. Micropellicular statiohary phases for high-performance liquid chromatography of double-stranded DNA. // J. Chromatogr. A. -1998. -V. 806. -I. l.-P.3−30.
  104. Westman E., Eriksson S., Laas Т., Pernemalm P.-A., Skold S.-E. Separation of DNA restriction fragments by ion-exchange chromatography on FPLC columns Mono P and Mono Q.// Anal. Biochem. -1987. -V. 166.-I. l.-P. 158−171.
  105. Е.Л., Ициксон Л. Б., Брауде E.B. Практическаявысокоэффективная жидкостная хроматография. // -1986. -Москва. -224 с.
  106. Eriksson S., Glad G., Pernemalm P.-A., Westman E. Separation of DNA restriction fragments by ion-pair chromatography. // J. Chromatogr. -1986. -V. 359.-1.1.-P. 265−274.
  107. Dickman MJ. Effects of sequence and structure in separation of nucleic acids using ion pair reversed phase liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. -2005. -V. 1076.-1.1−2.-P. 83−89.
  108. Lee G.-Y., Chen C.-H., Wang T.-H., Lee W.-C. Affinity chromatography of DNA nonporous copolymerized particles of styrene and glycidyl methacrylat with immobilized polynucleotide. // Anal. Biochem. -2003. -V. 312. -1.2. -P. 235−241.
  109. Huber C.G., Oberacher H. Analysis of nucleic acid by on-line liquid chromatography-mass spectrometry. // Mass Spectr. Rev. -2001. -V. 20. -I. 5. -P. 310−343.
  110. Ghourchian H., Elyasvandi H. Capacitively-induced pulsed-field gel electrophoresis: A novel method for DNA separation. // Med. Engineer. Phys. -2005. -V. 27. -1.8. -P. 723−727.
  111. Brody J. R, Kern S.E. Histoiy and principles of conductive media for standart DNA separation. // Anal. Biochem. -2004. -V. 333. -1.1. -P. 1−13.
  112. Л.И. Экспрессия генов. // M.: Наука, 2000. — 780 с.
  113. Salimullah М., Mori М., Nishigaki К. High-throughput three-dimensional gel electrophoresis for versatile utilities: A stacked slice-gel system for separations and reactions. // Geno. Prot. Bioinfo. -2006. -V. 4. -1.1. -P. 26−33.
  114. Liu S., Guttman A. Electrophoresis microchips for DNA analysis. // Trends Anal. Chem. -2004. -V. 23. -1.6. -P. 422−431.
  115. Huber C.G., Oefher PJ., Preuss E., Bonn G.K. High-resolution liquid chromatography of DNA fragments on non-porous poly (styrene-divinyIbenzene) particles. //Nucleic Acid Res. -1993. -V 21. -1.5. -P.1061−1066.
  116. Oefher P.J., Huber C.G., Puchhammer-Stockl E., Umlauft F., Grunewald K., Bonn G.K., Kunz C. High-Performance Liquid Chromatography for Routine Analysis of Hepatitis С Virus cDNA/PCR Products. // BioTechniques. -1994. -V.16. -1.5. -P. 898−908.
  117. Chen G., Han X., Zhang L., Ye J. Determination of purine and pyrimidine bases by micellar electrokinetic capillaiy chromatography with electrochemical detection. // J. Chromatogr. A. -2002. -V. 954. -1.1−2. -P. 267−276.
  118. Lin Y.-W., Chiu T.-C., Chang H.-T. Laser-indused fluorescence technique for DNA and protein separation by capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. B. -2003.-V. 793.-I. l.-P. 37−48.
  119. Stults J.T., Marsters J.C. Improved electrospray ionization of synthetic oligodeoxynucleotides. // Rapid Commun. Mass Spectrom. -1991. -V. 5. -P. 359−363.
  120. Huber C.G., Buchmeiser M. R- On-line cation-exchange for suppression of adduct formation in negative-ion electrospray mass spectrometry of nucleic acids. // Anal. Chem. -1998. -V. 70. -P. 5288−5295.
  121. Brezinschek H.P., Brezinschek R.I., Lipsky P.E. Analysis of the heavy chain repertoire of human peripheral В cells using single-cell polymerase chain reaction. //J. Immunol. -1995. -V. 155: -P. 190−202.
  122. Liu C., Wu Q., Harms A.C., Smith R.D. On-line microdialysis sample cleanup for electrospray ionization mass spectrometry of nucleic acid samples. // Anal. Chem. -1996. -V. 68. -P. 3295−3299.
  123. Van Breemen R.B., Martin L.B., Le J.C. Continuous-flow fast atom bombardment mass spectrometry of oligonucleotides. // J. Am. Soc. Mass Spectrom. -1991. -V. 2. -P. 157−163.
  124. Wu K.J., Steding A., Becker C.H. Matrix-assisted laser desorption time-of-flight mass specrtrometry of oligonucleotides using 3-hydroxypicolinic acid as an ultraviolet-senistive matrix. // Rapid Commun. Mass Spectrom. -1993. -V. 7. -P. 142−146.
  125. Edwards J. R, Ruparel H., Ju J. Mass-spectrometry DNA sequencing. // Mutation Res. -2005. -V. 573. -1.1−2. -P. 3−12.
  126. Cohen A.S., Karger B.L. High-performance sodium dodecyl sulfate polyacrylamide capillary gel electrophoresis of peptides and proteins. // J. Chromatogr. -1987. -V. 397. -P. 409−417.
  127. Cohen A.S., Najarian D., Smith J.A., Karger B.L. Rapid separation of DNA restriction fragments using capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. -1988. -V. 458.-P. 323−333.
  128. Li S.F.Y. Capillary electrophoresis: principles, practice and applications. // Elsevier Science Publishers B.V. -1992. -P. 556.
  129. Introduction to capillary electrophoresis // Beckman Instruments Inc. -1994. -P. 44
  130. Olivera B.M., Baine P., Davidson N. Electrophoresis of the nucleic acids. // Biopolymers -1964. -V. 2. -1.3. -P. 245−257.
  131. Kleparnik K., Mala Z., Doskar J., Rosypal S., Bocek P. An improvement of restriction analysis of bacteriophage DNA using capillary electrophoresis in agarose solution. // Electrophoresis. -1995. -V. 16. -1.1. -P. 366−376.
  132. Chiu T.-C., Chang H.-T. Comparison of the separation of large DNA fragments in the presence and absence of electroosmotic flow at high pH. // J. Chromatogr. A. -2002. -V. 979. -1.1−2.-P. 299−306.
  133. Kang D., Chung D.S., Kang S.H., Kim Y. Separation of DNA with hydroxypropylmetyl cellulose and poly (ethylene oxide) by capillary gel electrophoresis. //Microchem. J. -2005. -V. 80. -P. 121−125.
  134. Jung H.J., Bae Y.C. Theory for capillary electrophoretic separation of DNA in polymer solutions. // J. Chromatogr. A. -2002. -V. 967. -1.2.-P. 279−287.
  135. Menchen S., Johnson В., Winnik M.A., Xu B. Flowable networks as DNA sequencing media in capillary columns. // Electrophoresis. -1996. -V. 17. -I. 9. -P. 1451 -1459.
  136. Yoshioka H., Mori Y., Shimizu M. Separation and recovery of DNA fragments through a thermoreversible hydrogel composed of poly (ethylene oxide) and polypropylene oxide). // Anal. Biochem. -2003. -V. 323. -12. -P. 218−223.
  137. Ren J., Fang N., Wu D. Inverse-flow derivatization for capillary electrophoresis of DNA fragments with laser-indused fluorescence detection. // Anal. Chim. Acta. -2002. -V. 470. -1.2. -P. 129−135.
  138. Vegvari A., Hjerten S. Stable homogeneous gel for molecular-sieving of DNA fragment in capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. -2002. -V. 960. -1.1−2.-P. 221−227.
  139. Barbier V., Viovy J.-L. Advanced polymers for DNA separation. // Curr. Opin. Biotech. -2003. -V. 14. -P. 51−57.
  140. Song L., Liang D., Chen Z., Fang D., Chu B. DNA sequensing by electrophoresis using mixture of polyacrylamide and poly (N, N-dimethylacrylamide). //J. Chromatogr. A. -2001.-V. 915. -1.1−2. -P. 231−239.
  141. Chu В., Liang D. Copolimers solutions as separation media for DNA capillary electrophoresis. //J. Chromatogr. A. -2002. -V. 966. -1.1−2. -P. 1−13.
  142. Middaugh C.R., Evans R.K., Montgomery D.L., Casimiro D.R. Analysis of plasmid DNA from pharmaceutical perspective. // J. Pharm. Sci. -1998. -V. 87. -1.2.-P. 130−146.
  143. Ren J., Ulvik A., Refsum H., Ueland P.M. Chemical mismatch cleavage combined with capillary electrophoresis: detection of mutations in exon 8 of the cystathionin (3-synthase gene. // Clin. Chem. -1998. -V. 44. -1.10. -P. 2108−2114.
  144. Tian H., Brody L.C., Landers J.P. Rapid detection of deletion, insertion and substitution mutations via heteroduplex analysis using capillary- and microchip-based electrophoresis.//Genome Res.-2000.-V. 10.-P. 1403−1413.
  145. Brown N.M., Pratt V.M. et al. Detection of 677CT/1298AC «double variant» chromosomes: Implications for interpretation of MTHFR genotyping results. // Genet. Med. -2005. -V. 7. -1.4. -P. 278−282.
  146. Michaud E.J., Culiat T.C. et al. Efficient gene-driven germ-line point mutagenesis of C57BL/6J mice. // BMC Genomics. -2005. -V. 6. -P. 164−182.
  147. Torres J.M., Ortega E. Quantitation of mRNA levels of steroid 5-a-reductase isozymes: a novel methods that combines quantitative RT-PCR and capillary electrophoresis. // Int. J. Biochem. Cell Biol. -2004. -V. 36. -P. 78−88.
  148. Hizli Z.B., Ozarda Ilcol Y., Asian D. Plasma amino acid concentration in healthy pediatric and adult subjects. // FEBS J. -2006. -V. 273. -S. 1. -P. 334.
  149. Fiskerstrand T, Refsum H, Kvalheim G, Ueland PM. Homocysteine and other thiols in plasma and urine: automated determination and sample stability. // Clin. Chem. -1993. -V. 39. -1.2. -P. 263−271.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!