Риф: принцип, варианты, задачи, компоненты, достоинства и недостатки

Принцип РИФ основан на использовании явления флюоресценции, который состоит в испускании света атомами вещества, поглотившими избыточную внешнюю энергию и пришедшими в состояние возбуждения. При этом используют люминесцентную микроскопию. Метод основан на использовании антител, связанных с красителем, например флюоресцеинизотиоцианатом.

Варианты. вакцина серологический вирус РИФ.

При прямом методе РИФ мазок — отпечаток обрабатывают сывороткой, меченной антителами, гомологичными тому вирусу, наличие которого предполагается. Если в мазке содержится антиген, гомологичный антителам сыворотки, то образуется комплекс антиген + антитело. Препараты отмывают, сушат и исследуют под люминесцентным микроскопом, который устроен так, что на препарат падает пучок сине-фиолетовых лучей, а в глаз наблюдателя попадают только желто-зеленые лучи, которые испускает комплекс антиген + антитело. По этому свечению и судят о наличии в материале антигенов, гомологичных антителам меченой сыворотки.

Непрямой метод состоит в том, что мазок — отпечаток обрабатывают дважды: вначале немеченой антивирусной сывороткой, а затем после отмывания — меченной антивидовой. После второго отмывания препарат высушивают и исследуют под люминесцентным микроскопом. Обнаружение в препарате специфической флюоресценции указывают на наличие в материале антигенов, гомологичных использованной противовирусной сыворотке.

Задачи метода — экспресс-диагностика инфекционных заболеваний.

Компоненты:

В диагностических исследованиях методом РИФ в качестве объекта исследования могут быть мазки — отпечатки, срезы органов и тканей, соскобы, гистологические срезы, препараты тканевых культур.

Учет результатов реакции осуществляется с помощью люминесцентного микроскопа, в оптическую систему которого устанавливается набор светофильтров, обеспечивающих освещение препарата ультрафиолетовым или сине-фиолетовым светом с заданной длинной волны. Это заставляет флюорохром светиться в заданном диапазоне спектра. Исследователь оценивает характер свечения, форму, размер объектов и их взаимное расположение.

Недостатки и достоинства метода:

Основным недостатком РИФ является ее субъективность. Классическими критериями специфичности этой реакции являются:

с характерная морфология, размеры и расположение возбудителя в мазке;

с периферический характер свечения объекта;

с цвет флюоресценции;

с интенсивность флюоресценции.

При исследовании крупных объектов (трихомонады, гарднереллы, клетки пораженные вирусами) эти критерии позволяют получить высокодостоверный результат. В то же время, элементарные тельца хламидий и микоплазмы имеют размеры, лежащие на пределе разрешающей способности люминесцентного микроскопа. При этом оценка морфологии микроорганизмов затруднена, а свечение теряет периферический характер. Остающихся критериев явно недостаточно для уверенной идентификации наблюдаемого микроорганизма. В связи с вышесказанным, субъективный характер учета реакции предъявляет особые требования к квалификации персонала проводящего исследования.

Популярность РИФ объясняется экономичностью, наличием широкого спектра диагностических наборов, быстротой получения ответа. Сегодня в этой реакции используются как поликлональные сыворотки, так и моноклональные антитела меченые флюоресцеина изотиоцианатом (ФИТЦ). Для уменьшения неспецифического свечения фона применяют обработку мазка бычьим сывороточным альбумином, меченным родамином или голубым Эванса.