Применение. 
Биологические технологии

Области применения моноклональных антител:

идентификация субпопуляций лимфоцитов человека истощение клеточных популяций выделение клеток установление функций молекул клеточной поверхности определение группы крови — диагностика опухолей локализация опухолей.

иммунорадиометрический анализ анализ сложных смесей антигенов анализ эмбрионального развития.

моноклональные мутантные антитела квадромы анализ иммунного ответа.

— искусственные ферменты. [8].

Обычные поликлональные антитела давно и широко применяются для определения биологически активных веществ — белков крови и других биологических жидкостей, гормонов, ростовых факторов, клеточных рецепторов, медиаторов воспаления и иммунитета, бактериальных и вирусных антигенов, различных ядов и т. п. Моноклональные антитела из-за высочайшей специфичности, стандартности и технологичности получения успешно вытесняют и заменяют иммунные сыворотки.

Далее гибридомы создают уникальные возможности в аналитических целях: их можно применять как «иммунологический микроскоп» с чрезвычайно высоким разрешением. Так, например, если нужно сравнить две клеточные линии, отличающиеся одним или немногими антигенами, и надо выявить такие антигены, то метод гибридом предоставляет для этого исключительные возможности. Проиммунизировав мышей одной из линий и получив сотни гибридом, продуцирующих антитела к антигенам этой линии, можно найти одну или две с антителами только к данной линии. Размножив такую гибридому в пробирке или вырастив ее на мышах, можно получить огромное количество антител к уникальному антигену (или детерминантной группе), затерянному среди других компонентов клетки подобно иголке в стоге сена. Это будет продукт одного клона. В крови иммунизированного животного среди множества других антител он никак не проявится из-за чисто количественных отношений. Благодаря же гибридомам его можно не только обнаружить, но и вывести в линию и получить любое количество соответствующих антител. С помощью гибридом можно обнаружить антигены, характерные для опухолей определенных тканей, получить к ним антитела и использовать их для диагностики и типирования опухолей.

Последовательные срезы через желудок (жел) и пищевод (пищ) мыши, окрашенные двумя моноклональными антителами: 1 — первое моноклональное антитело реагирует с эпителием пищевода и слабее с эпителием желудка; 2 — второе моноклональное антитело реагирует только с эпителием желудка.

Такие моноклональные антитела нашли широкое применение в онкологической клинике. Наконец, во всем мире ведутся активные исследования по использованию моноклональиых антител в качестве специфических переносчиков токсических веществ в опухолевые клетки. Пока же с помощью моноклональных антител в опухоль и ее метастазы доставляются радиоактивные вещества, позволяющие обнаружить небольшие узелки опухоли по локализации в них радиоактивности.

Гибридомы сыграли и продолжают играть огромную роль в фундаментальной и прикладной иммунологии. Они созданы на основе клонально-селекционной теории иммунитета и явились самым ярким и окончательным доказательством этой теории. Гибридомы сделали реальностью предполагаемые клоны антителообразующих клеток и позволили даже обнаружить их существование в организме до введения соответствующего антигена. Гибридомы революционизировали иммунологическую промышленность и создали в ней совершенно новые области. Благодаря гибридомам возникли методы диагностики многих заболеваний и появились новые пути для изучения злокачественных опухолей. И хотя гибридомы скорее относят к гениальным изобретениям, а не к открытиям, они были отмечены в 1984 году Нобелевской премией, высшей научной наградой, присуждаемой за выдающиеся открытия. (Келер и Мильштейн) К настоящему времени получено громадное количество гибридом-продуцентов моноклональных антител к различным, в том числе к опухоле-ассоциированным антигенам. Наиболее популярными препаратами МКА в настоящее время являются Мабтера и Герцептин (Швейцария). Первый применяется для лечения некоторых злокачественных заболеваний крови человека, второй — при раке молочной железы. Эти антитела специфически связываются с антигеном злокачественных клеток, вызывая их гибель в результате каскада иммунологических реакций. Первые клинические результаты применения Мабтера показали, что у 50% пациентов с большими опухолями и рецидивами при неблагоприятном прогнозе заболевания наступает стабилизация процесса. Герцептин сравнительно недавно вошел в арсенал терапевтических средств, применяемых в онкологии, но уже зарекомендовал себя как эффективный препарат при раке молочной железы, устойчивом к обычному лечению. Использование Герцептина у больных раком молочной железы вместе с химиопрепаратами позволяет повысить эффективность лечения особенно в тех случаях, когда заболевание не поддается обычной химиотерапии. Интенсивные работы по получению новых моноклональных антител и разработке на их основе лекарственных и диагностических средств ведутся и в нашей стране. Перспективным является еще одно направление. Это — использование моноклональных антител для создания иммуномагнитного фильтра, «сорбента». Сущность метода состоит в том, что привязанные к ферромагнитным микрочастицам моноклональные антитела, находясь в магнитном поле, могут высоко специфично извлекать клетки, например, из костного мозга или из опухоли. Затем иммуномагнитный сорбент отделяют и остаются только извлеченные клетки. С помощью такого сорбента можно связывать и удалять клетки (например, злокачественные) или получать из костного мозга здоровые клетки — родоначальники кроветворения, которые могут использоваться для введения этому же больному в случае повреждения кроветворения. [3].

Моноклональные антитела для направленной доставки препаратов Ограничения применения цитостатиков.

— высокая общая токсичность низкий терапевтический индекс недостаточная специфичность Преимущества направленной доставки препаратов:

Доставка тысяч молекул лекарства, при использовании нескольких десятков молекул МКА;

Возможное проявление аддитивного/синергического эффекта МКА и лекарственного препарата;

Возможность присоединения МКА, обладающих уникальными сигнальными свойствами;

Защита окружающих тканей организма от цитотоксического действия препаратов;

Возможность «адресно» доставлять препарат в органы, ткани и отдельные клетки;

Характеристики МКА, используемых в конструировании нанопрепаратов Сохранение специфичности при конъюгации с носителем;

Афинность, достаточная для связывания низкой концентрации препарата;

Низкая иммуногенность;

Эффективная интернализация клетками-мишенями;

Технологичность в производстве;

Достаточный срок хранения.

Конструкции иммунолипосом для направленного транспорта препаратов.

• — анти-CD20 для лечения В-клеточных лимфом и ХЛЛ;
• — анти-CD5 для лечения Т-клеточных лимфом и ХЛЛ;
• — анти-Her2/neu для лечения рака молочной железы;
• — анти-Muc-1 для лечения рака яичника;
• — анти-ПСА для лечения рака предстательной железы; [6]

Способы получения рекомбинантных АТ.

Клонирование последовательности Fab из ДНК или мРНК из гибридом, экспрессирующих конкретное мышиное МКА. Генно-инженерное слияние с последовательностями Ig человека;

• — Клонирование полноразмерных генов Ig из В-клеток человека;
• — Создание мышей, несущих активные кластеры генов человеческих Ig и их последующая иммунизация с получением гибридом. [1]