Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Фенотипический и молекулярно-генетический анализ измененных вариантов Vibrio cholerae биовара эльтор

Диссертация: Фенотипический и молекулярно-генетический анализ измененных вариантов Vibrio cholerae биовара эльтор
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Штаммов V. cholerae OI классического и эльтор биоваров и дифференциации эльтор вибрионов на типичные и измененные методом мультилокусной полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов (Ген Vibrio cholerae вариант cí-xfí—РЭФ)" позволяет выявлять измененные варианты холерного вибриона биовара эльтор. Впервые проведенный комплексный фенотипический… Читать ещё >

Фенотипический и молекулярно-генетический анализ измененных вариантов Vibrio cholerae биовара эльтор (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • СПИСОК ПРИНЯТЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ
  • ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Фенотипические и генетические особенности измененных вирулентных вариантов V. ско1егае биовара эльтор
      • 1. 1. 1. Фенотипические особенности вирулентных геновариантов V. ско1егае биовара эльтор
      • 1. 1. 2. Генетические особенности строения профага СТХф измененных вирулентных вариантов V. ско1егае биовара эльтор
      • 1. 1. 3. Генетические особенности структуры локусов хромосомы измененных вариантов V. ско1егае биовара эльтор, связанных с вирулентностью и пандемичностью
    • 1. 2. Механизмы возникновения измененных вариантов холерных эльтор вибрионов
  • СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
  • ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
    • 2. 1. Бактериальные штаммы
    • 2. 2. Питательные среды и реактивы
    • 2. 3. Методы
      • 2. 3. 1. Культивирование штаммов
      • 2. 3. 2. Определение питательных потребностей, гемолитической активности, продукции растворимой гемагглютинин/протеазы, 43 фосфолипазы и подвижности
      • 2. 3. 3. Изучение продукции холерного токсина и токсинкорегулируемых пилей адгезии
      • 2. 3. 4. Определение чувствительности к антибактериальным препаратам
      • 2. 3. 5. Изучение вирулентности и токсигенности штаммов V. cholerae
      • 2. 3. 6. ПЦР-анализ
      • 2. 3. 7. ДНК-ДНК гибридизация по Саузерну
      • 2. 3. 8. Секвенирование

      ГЛАВА 3. КОНСТРУИРОВАНИЕ И АПРОБАЦИЯ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ТОКСИГЕННЫХ ШТАММОВ VIBRIO CHOLERAE OI КЛАССИЧЕСКОГО И ЭЛЬТОР БИОВАРОВ, ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЭЛЬТОР ВИБРИОНОВ НА ТИПИЧНЫЕ И ИЗМЕНЕННЫЕ МЕТОДОМ МУЛЬТИЛОКУСНОЙ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ С ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИМ УЧЕТОМ РЕЗУЛЬТАТОВ

      3.1. Выбор ДНК-мишеней, подбор праймеров

      3.2. Оптимизация параметров мультиплексной ПЦР

      3.3. Оптимизация схемы пробоподготовки и разработка набора реагентов для идентификации токсигенных штаммов Vibrio cholerae 01 классического и эльтор биоваров и дифференциации эльтор вибрионов на типичные и измененные методом мультилокусной полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов

      3.4. Изучение специфичности созданной мультиплексной ПЦР тест-системы «Ген Vibrio cholerae вариант сЬс5-РЭФ»

      3.5. Выявление генетически измененных вариантов возбудителя холеры среди клинических штаммов, выделенных на территории России и стран ближнего зарубежья, с помощью разработанного набора

      ГЛАВА 4. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ФЕНОТИПИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ВИРУЛЕНТНЫХ ШТАММОВ V. СНОЬЕМЕ БИОВАРА ЭЛЬТОР

      4.1. Продукция холерного токсина и токсин-корегулируемых пилей адгезии у типичных и измененных клинических штаммов V. ско1егае биовара эльтор

      4.2. Питательные потребности, гемолитическая, ферментативная активность и подвижность типичных штаммов и измененных вариантов V. ско1егае

      4.3. Антибиотикоустойчивость типичных штаммов и измененных вариантов холерных вибрионов биовара эльтор

      ГЛАВА 5. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИЗМЕНЕННЫХ ВАРИАНТОВ V. СНОЬЕЯАЕ БИОВАРА ЭЛЬТОР

      5.1. Изучение структуры генома профага СТХср измененных вариантов V. ско1егае биовара эльтор

      5.1.1 Определение аллелей генов сЬсВ и ШЯ

      5.1.2 Определение числа копий профага СТХф у измененных вариантов

      5.1.3 Структура промоторной области оперона с? хАВ

      5.2. Анализ структуры островов патогенности УР1−1 и УР1−2 у измененных вариантов V. ско1егае биовара эльтор методом ПЦР-анализа и секвенирования

Актуальность проблемы. Холера — особо опасная инфекционная болезнь с диарейным синдромом, вызываемая токсигенными штаммами Vibrio cholerae. По данным Всемирной Организации Здравоохранения в последние годы в мире ежегодно регистрируется 3,0−5,0 млн. случаев холеры и более 100−120 тыс. человек умирает (Информационный бюллетень ВОЗ, N107, 2011). Современный период характеризуется наличием стойких очагов холеры в Юго-Восточной Азии и Африке. Крупные эпидемии и вспышки холеры на эндемичной территории, занос инфекции из эндемичных очагов практически на все континенты и тенденция к росту мировой заболеваемости определяют неблагоприятный прогноз по холере (Онищенко Г. Г. с соавт., 2005; Москвитина Э. А. с соавт, 2011, 2012). Возникновение эпидемических осложнений по холере в России связано с реальной возможностью ее завоза из зарубежных стран, неблагополучных по этой инфекции. Так, с 2005 г. по 2010 г. в России было зарегистрировано 8 случаев завоза холеры из Индии и Таджикистана (Москвитина Э.А. с соавт, 2011).

К настоящему времени известно о семи пандемиях холеры, среди которых первые шесть (1817−1923 гг.) предположительно были вызваны V. cholerae Ol классического биовара (Бароян О.В., 1971). Одной из характерных особенностей этого возбудителя является его высокая патогенность, обусловленная эффективной продукцией основных факторов вирулентности — токсин-корегулируемых пилей адгезии (ТКПА) и холерного токсина (ХТ), которые соответственно определяют развитие двух ключевых этапов инфекционного процесса — колонизацию холерными вибрионами тонкого кишечника и развитие профузной диареи (Kaper J.B. et al., 1995; De Haan L. et al., 2004). Однако к началу прошлого столетия на эндемичных по холере территориях эти вибрионы были постепенно вытеснены V. cholerae Ol серогруппы, но другого биовара — эльтор. Вследствие этого события возбудителем текущей, 7-ой, пандемии холеры (с 1961 г. по настоящее время) 6 стали токсигенные штаммы V. cholerae Ol биовара эльтор, отличающиеся от классических вибрионов по ряду фенотипических и генетических свойств (Бароян О.В., 1971; Waldor М.К. et al., 1996; Dziejman М. et al., 2002). К одним из основных генетических различий классического и эльтор биоваров относят отличия в нуклеотидных последовательностях двух генов, входящих в состав профага СТХф — гена ctxB из оперона ctxAB, кодирующего биосинтез XT, и гена-репрессора rstR. Вследствие этого аллели указанных генов у классических вибрионов обозначены как ctxBclass (или ctxBl) и rstRclass, у вибрионов эльторctxBE" 01 ' (или ctxB3) и rstREltor. Разная нуклеотидная последовательность генов ctxBl и ctxB3 обуславливает различия в аминокислотной последовательности В-субъединицы их токсинов, поэтому различают XT 1-го типа, продуцируемый классическими вибрионами, и XT 2-го типа, характерный для вибрионов эльтор (Olsvik О. et al., 1993; Waldor М.К. et al., 1996, 1997).

В течение 7-ой пандемии холеры геном ее возбудителя претерпел различные изменения. Одно из важнейших событий в эволюции этого возбудителя в современный период — возникновение новых генетически измененных вариантов (геновариантов) с повышенной вирулентностью, в геноме профага СТХф которых содержится аллель ctxBl (Nair G.B. et al., 2002; MoritaM. et al., 2008; Safa A. et al., 2010; Borkakoty B. et al., 2012). К настоящему времени эти геноварианты стали не только доминировать во многих странах Азии и Африки, но и проникать на новые территории (Гаити, Доминиканская Республика, Венесуэла) (Москвитина Э.А. с соавт., 2012; Nair G.B. et al., 2006; Grim C.J. et al., 2010; Safa A. et al., 2010; Tappero J.W. et al. 2011). В Российской Федерации, согласно последним данным, эпидемические вспышки и единичные случаи холеры во время седьмой пандемии были вызваны как типичными штаммами, так и измененными вариантами V. cholerae биовара эльтор, завезенными из различных стран Азии (Миронова Л.В. с соавт., 2010; Савельев В. Н. с соавт., 2010; Смирнова Н. И. с соавт., 2010). Однако в нашей стране отсутствуют комплексные диагностические тест-системы, 7 позволяющие одновременно проводить идентификацию штаммов холерного вибриона 01 серогруппы, определять их биовар и дифференцировать типичные и генетически измененные варианты V. ско1егае биовара эльтор. Несмотря на то, что геноварианты биовара эльтор уже обнаружены на территории России и стран ближнего зарубежья, все еще остаются неизученными их фенотипические свойства, не исследована вирулентность и устойчивость к антибиотикам. Недостаточно сведений о структуре профага СТХф и острова патогенности УР1−1, несущих основные гены вирулентности с? сАВ и КрА-Е, кодирующие продукцию ХТ и ТКПА. Вместе с тем, изучение структуры генома и экспрессии генов вирулентности и жизнеобеспечения измененных вариантов эльтор необходимо для оценки их генетического разнообразия и выяснения механизма образования.

Все вышеперечисленное определяет актуальность диссертационной работы, целью которой является проведение сравнительного анализа фенотипических и молекулярно-генетических свойств типичных штаммов и измененных вариантов V. ско1егае 01 серогруппы биовара эльтор, выделенных на территории Российской Федерации и сопредельных государств.

Задачи исследования:

1. Разработать мультиплексную ПЦР тест-систему для идентификации токсигенных штаммов V. ско1егае 01 классического и эльтор биоваров с одновременной дифференциацией типичных штаммов и измененных вариантов эльтор вибрионов. С помощью разработанной тест-системы провести анализ клинических штаммов, завезенных на территорию Российской Федерации и стран ближнего зарубежья, и выявить измененные варианты возбудителя холеры эльтор.

2. Провести сравнительный анализ фенотипических свойств типичных штаммов и измененных вариантов V. ско1егае 01 биовара эльтор. Определить уровень продукции холерного токсина и оценить вирулентные свойства геновариантов.

3. Изучить структуру профага СТХ (р, кодирующего биосинтез холерного токсина, у измененных эльтор вариантов, завезенных в Российскую Федерацию в современный период. Определить генотипы исследованных штаммов.

4. Определить количество копий профага СТХф в геноме измененных вариантов холерных вибрионов биовара эльтор.

5. Выявить наличие островов патогенности VPI-1 и VPI-2 у геноваринтов V. cholerae биовара эльтор и провести сравнительный анализ нуклеотидной последовательности гена tcpA.

Научная новизна работы.

Впервые проведен комплексный фенотипический и молекулярно-генетический анализ 60 штаммов V. cholerae Ol серогруппы биовара эльтор, выделенных в Российской Федерации и странах ближнего зарубежья с 1970 по 2010 гг. Установлено, что, начиная с 1993 г., причиной эпидемических осложнений на территории Российской Федерации были измененные варианты, содержащие в геноме профага СТХф ген ctxB классического типа.

Впервые проведен сравнительный анализ продукции основных и дополнительных факторов патогенности у типичных штаммов и измененных вариантов V. cholerae биовара эльтор, выделенных на территории России и сопредельных государств с 1993 по 2010 гг. При определении экспрессии холерного токсина выявлено, что генетически измененные варианты в условиях in vitro синтезируют в 2−10 раз больше холерного токсина по сравнению с типичными клиническими штаммами V. cholerae биовара эльтор. Установлено, что геноварианты не отличаются от типичных штаммов по продукции гемолизина, но обладают повышенной подвижностью. На модели лабораторных животных подтверждена высокая токсигенность и вирулентность геновариантов по сравнению с типичными эльтор вибрионами.

Получены новые сведения о вариабельности профага СТХф измененных вариантов V. cholerae биовара эльтор, выделенных на территории Российской 9.

Федерации и стран ближнего зарубежья, выражающейся в присутствии в его геноме разных аллелей гена ctxB (ctxBl или ctxBT), rstR (rstRclass и/или rstREltor), а также разного числа тандемных гептаповторов в промоторной области оперона ctxAB (trp3, trp4, trp5). Полученные данные позволили отнести все изученные штаммы к 4-м генотипам: ctxB 1, rstREltor, trp3- ctxBl, rstRElt0 trp4- cixBl, rstRElior/rstRclass, trp4- ctxBl, rstREltorlrstRclass, trp5.

Впервые определено количество копий оперона ctxAB у геновариантов, выделенных на территории России и сопредельных государств. Установлено, что в хромосоме большинства изученных штаммов (90%) присутствует две копии оперона ctxAB, что свидетельствует о наличии в геноме двух копий профага СТХф.

При определении нуклеотидной последовательности гена tcpA, кодирующего основную субъединицу токсин-корегулируемых пилей адгезии и входящего в состав острова патогенности VPI-1, впервые установлено, что штаммы геновариантов, завезенные в Россию после 2006 г., имеют отличную как от классических, так и от типичных эльтор вибрионов нуклеотидную последовательность гена tcpA.

Приоритетность выполненных исследований подтверждена получением патента РФ на изобретение (патент № 2 458 141 от 05.03.2012г).

Практическая значимость работы.

Предложен способ идентификации токсигенных штаммов V. cholerae OI серогруппы, определения их биовара (классический или эльтор) и дифференциации типичных и генетически измененных холерных вибрионов биовара эльтор. На основе разработанного способа сконструирован «Набор реагентов для идентификации токсигенных штаммов Vibrio cholerae OI классического и эльтор биоваров и дифференциации эльтор вибрионов на типичные и измененные методом мультилокусной полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов (Ген Vibrio cholerae вариант с/х#-РЭФ)», зарегистрированный в Федеральной службе по надзору в.

10 сфере здравоохранения и социального развития (РУ № ФСР 2012/ 13 427 от 21.05.2012 г.) и рекомендованный для применения в Российской Федерации.

По результатам работы составлены методические рекомендации «Мультиплексный ПЦР-анализ для выявления измененных штаммов Vibrio cholerae 01 биовара эльтор, несущих профаг вирулентности СТХср с генами классических вибрионов», одобренные Ученым Советом РосНИПЧИ «Микроб» (протокол № 6 от 13.10.2010 г.) и утвержденные директором.

В Государственной коллекции патогенных бактерий депонированы:

— три штамма (V. cholerae OI серогруппы классического биовара, V. cholerae 01 серогруппы эльтор биовара и V. cholerae 0139 серогруппы) с изученными молекулярно-генетическими характеристиками, используемых в качестве референс-штаммов при проведении геномной паспортизации штаммов возбудителя холеры (КМ259, КМ260, КМ261);

— коллекция из 6 штаммов генетически измененных вариантов с изученным генотипом в качестве штаммов, несущих разный набор генов вирулентности (КМ265, КМ266, КМ267, КМ268, КМ269, КМ270).

Полученные в ходе выполнения данные по изучению генетической организации измененных вариантов V. cholerae OI биовара эльтор используются при чтении лекций «Микробиология и генетика возбудителя холеры» на курсах первичной специализации по особо опасным инфекциям при РосНИПЧИ «Микроб» и курсах повышения квалификации по программе усовершенствования врачей по специальности «бактериология» при РосНИПЧИ «Микроб».

Положения, выносимые на защиту: 1. Сконструированная мультиплексная ПЦР тест-система позволяет идентифицировать токсигенные штаммы холерного вибриона 01 серогруппы, определять принадлежность к классическому или эльтор биовару и проводить дифференциацию штаммов V. cholerae биовара эльтор на типичные изоляты и генетически измененные варианты.

2. На территории России вспышки и спорадические случаи заболевания холерой, начиная с 1993 года, были вызваны измененными вариантами холерных вибрионов биовара эльтор. Геноварианты V. cholerae биовара эльтор в отличие от типичных эльтор вибрионов в условиях in vitro синтезируют больше холерного токсина и являются более вирулентными для лабораторных животных — крольчат-сосунков.

3. Измененные варианты V. cholerae биовара эльтор, выделенные с 1993 по 2010 гг. на территории Российской Федерации при эпидемических вспышках и единичных случаях холеры, отличаются между собой по структуре профага СТХф, содержащего разные аллеи генов ctxB, rstR и разное количество тандемных повторов TTTTGAT в промоторной области оперона ctxAB. В геноме большинства изученных штаммов геновариантов профаг СТХф присутствует в количестве 2 копий. Штаммы измененных вариантов V. cholerae биовара эльтор несут полный набор генов островов патогенности VPI-1 и VPI-2. В составе VPI-1 геновариантов, выделенных после 2006 г., содержится аллель tcpETCIRS.

Апробация работы.

Материалы диссертации представлены на VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика — 2010» (Москва, 2010), на III научно-практической школе-конференции молодых ученых и специалистов научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора «Современные технологии обеспечения биологической безопасности» (Протвино, 2011), на совещании специалистов Роспотребнадзора по вопросам совершенствования эпидемиологического надзора за холерой (Ростов-на-Дону, 2011), проблемной комиссии (48.04) «Холера и патогенные для человека вибрионы» Координационного научного совета по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской.

Федерации (Ростов-на-Дону, 2012), на X съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2012), на IV Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2012), ежегодных научно-практических конференциях «Итоги и перспективы фундаментальных и прикладных исследований в РосНИПЧИ «Микроб» (Саратов, 2010;2012).

Работа выполнена в рамках плановой НИР 37−4-09 «Изучение природных и генетически измененных штаммов холерного вибриона и установление связи между вариабельностью генома и патогенными свойствами V. ско1егае" — Федеральной целевой программы «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009 — 2013 годы) в рамках государственных контрактов № 70-Д от 25.07.2011 г., лот 12, тема «Оценка изменчивости фенотипических и генетических свойств вирулентных штаммов возбудителей инфекционных болезней при смене ими экологических ниш обитания» и № 53-Д от 04.06.2012 г., лот 12, тема «Молекулярно-генетические особенности генетически измененных штаммов возбудителей опасных инфекционных болезней и их значимость в изменении вирулентных свойств и адаптации патогенов к меняющимся условиям окружающей среды».

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 10 работ, из которых 5 статей в рекомендованных ВАК изданиях и один патент.

Структура и объем диссертации

.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, трех глав собственных исследований, заключения, выводов и списка использованных источников, включающего 197 цитируемых работ, из них 35 отечественных и 162 зарубежных. Общий объем диссертации составляет 131 страницу. Текст иллюстрирован 16 таблицами и 12 рисунками.

выводы.

1. Разработан способ идентификации токсигенных штаммов V. cholerae Ol, определения их биовара и дифференциации холерных вибрионов биовара эльтор на типичные и измененные методом мультиплексной полимеразной цепной реакции.

2. Установлено, что причиной эпидемических вспышек и спорадических случаев заболевания холерой на территории России, начиная с 1993 г., являются измененные варианты холерных вибрионов биовара эльтор, несущие аллель ctxBl (классического типа).

3. При фенотипическом анализе показано, что изученные штаммы геновариантов V. cholerae Ol биовара эльтор продуцируют in vitro в 2−10 раз больше холерного токсина, чем типичные эльтор вибрионы, а также отличаются повышенной токсигенностью и вирулентностью для лабораторных животных.

4. Методом ПЦР и секвенирования выявлены значительные различия в структуре профага СТХср геновариантов V. cholerae биовара эльтор. Вариабельность профага выражается в присутствии разных аллелей гена ctxB (ctxBl, ctxB 7), rstR (rstREltor, rstRclass) и разного количества тандемных повторов (trp) в промоторной области оперона ctxAB. Полученные данные позволяют отнести все изученные штаммы к четырем генотипам: ctxBl, rstREltor, trp3- ctxBl, rstRmt0 trp4- ctxBl, rstREhorlrstRclas trp4- ctxB7, rstREltor/rstRclass, trp5. При этом в большинстве случаев эпидемические вспышки и спорадические случаи заболевания холерой на территории России с 1993 по 2010 гг. были вызваны штаммами с генотипом ctxBl, rstRE" °7rstRclass, trp4.

5. Установлено, что среди изученных с помощью блот-гибридизации штаммов измененных вариантов большинство изолятов содержат две копии профага СТХф.

6. Все исследованные штаммы измененных вариантов V. cholerae биовара эльтор содержат полный набор генов островов патогенности VPI-1 и VPI-2. При этом геноварианты, завезенные на территории России в 20 062 010 гг., содержат аллель tcpElrCIRS, который характерен для изолятов, выделяемых в настоящее время на эндемичных по холере территориях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

В 2011 г. на Всемирной Ассамблее Здравоохранения холера была признана серьезной проблемой для всех стран мирового сообщества. Особое внимание привлекает к себе эпидемия в республике Гаити, начавшаяся в 2010 г. и продолжающаяся до настоящего времени, где выявлено более 500 тыс. больных, из которых свыше 6 тыс. умерло. Наличие стойких эндемичных очагов в ряде стран Азии и Африки с сезонными подъемами заболеваемости увеличивает вероятность заноса возбудителя холеры на неэндемичные территории, в том числе и в развитые страны. Так, с 2002 по 2011 гг. было зарегистрировано 1173 импортированных случаев инфекции в США, Канаду, Испанию. Тенденция роста заболеваемости выявлена и при эпидемическом анализе заболеваемости в России и СНГ в последние годы (2002;2011 гг.) (Москвитина Э.А. с соавт., 2012).

На современном этапе седьмой пандемии холеры основным возбудителем являются холерные вибрионы 01 серогруппы биовара эльтор, несущие в своем геноме классический аллель гена ctxB. Данные геноварианты или измененные варианты), имея характерные признаки эльтор вибрионов, продуцируют XT первого (классического) типа и являются более вирулентными, вызывая тяжелые случаи заболевания с высокой летальностью.

В связи с этими обстоятельствами очевидной является необходимость разработки быстрых и специфичных методов выявления измененных вариантов.

V. cholerae биовара эльтор. Нами впервые на основе мультиплексной ПЦР разработан способ и набор для одновременной идентификации токсигенных штаммов V. cholerae 01 серогруппы, определения биовара исследуемого штамма и дифференциации эльтор вибрионов на типичные изоляты и измененные варианты. При этом ПЦР проводят в один прием в двух реакционных смесях, каждая из которых содержит праймеры к генам rfbOl, cas3, ctxBclass в первой, и rfbOl, rtxC, ctxBEltor во второй. В ходе экспериментов подобрано оптимальное сочетание компонентов реакционной смеси, а также.

102 режим амплификации, позволяющий получать достоверные и легко интерпретируемые результаты. Набор содержит все необходимые реагенты для проведения полимеразной цепной реакции и анализа полученных ампликонов. Токсигенные штаммы V. cholerae 01 серогруппы классического биовара идентифицируют по наличию ампликонов к генам rfbOl, cas3, ctxBclass. Типичные токсигенные штаммы эльтор вибрионов образуют ампликоны к генам rJbOl, rtxC, ctxBEltor. Для измененных вариантов эльтор вибрионов наряду с генами rfbOl и rtxC характерно наличие ампликона к гену ctxBclass. Специфичность сконструированного набора подтверждена с использованием штаммов гетерологичных бактерий и холерных вибрионов 0139 и не01/не0139 серогрупп. Набор реагентов для идентификации токсигенных штаммов Vibrio cholerae OI классического и эльтор биоваров и дифференциации эльтор вибрионов на типичные и измененные методом мультилокусной полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов (Ген Vibrio cholerae вариант с/х8-РЭФ) прошел государственную регистрацию (РУ № ФСР 2012/ 13 427 от 21.05.2012 г.) и рекомендован для применения в Российской Федерации.

С помощью сконструированного набора реагентов нами было изучено 58 штаммов холерных вибрионов биовара эльтор, выделенных на территории Российской Федерации и стран ближнего зарубежья с 1970 по 2010 гг. В результате установлено, что, начиная с 1993 г., эпидемические осложнения и единичные случаи заболевания холерой на территории России были вызваны измененными вариантами холерных вибрионов биовара эльтор, содержащими ген ctxBl (классического типа).

На следующем этапе работы был проведен фенотипический и молекулярно-генетический анализ выявленных измененных вариантов.

V. cholerae биовара эльтор. При изучении продукции холерного токсина установлено, что геноварианты синтезируют в 2−10 раз больше холерного токсина, чем типичные изоляты этого биовара. При этом часть штаммов измененных вариантов синтезировали повышенное количество ХТ в условиях.

103 оптимальных для продукции данного антигена классическими вибрионами. Эксперименты на лабораторных животных подтвердили высокую токсигенность и вирулентность измененных вариантов V. cholerae биовара эльтор.

Все исследованные штаммы геновариантов были прототрофами и не отличались от типичных изолятов по продукции термолабильного гемолизина, но имели незначительные отличия по экспрессии ферментов патогенности. В то же время установлено, что измененные варианты V. cholerae эльтор биовара в отличие от типичных штаммов являются более подвижными. При этом повышение продукции XT и подвижности можно рассматривать как один из механизмов, обеспечивающих повышенный уровень патогенности измененных вариантов по сравнению с типичными изолятами.

Учитывая, что множественная антибиотикоустойчивость циркулирующих в настоящее время штаммов холерного вибриона представляет большую проблему для здравоохранения стран Азии и Африки нами был проведен сравнительный анализ антибиотикоустойчивости штаммов V. cholerae эльтор биовара, выделенных на территории России и сопредельных государств с 1970 по 2010 гг. В результате установлено, что типичные штаммы, выделенные в начале седьмой пандемии, были устойчивы к 1−2 антибактериальным препаратам, в то время как исследованные штаммы измененных вариантов обладали устойчивостью уже к 3−5 антибиотикам. Полученные нами результаты подтверждают данные зарубежных исследователей, что характерной особенностью штаммов, выделяемых в последние годы, является множественная лекарственная устойчивость, выражающаяся в резистентности к противомикробным препаратам разных групп, в том числе и часто используемым для лечения холеры (Tran H.D. et al., 2012).

При молекулярно-генетическом исследовании измененных вариантов.

V. cholerae биовара эльтор особое внимание было уделено изучению структуры мобильных генетических элементов, содержащих основные гены.

104 вирулентности — профага СТХф и острова патогенности VPI-1, несущих соответственно гены ctxAB, кодирующие биосинтез холерного токсина, и tcpA-F, ответственные за продукцию токсин-корегулируемых пилей адгезии. ПЦР-анализ структуры профага вирулентности СТХф и фланкирующей его последовательности RS1 показал, что измененные варианты, как и типичные токсигенные штаммы, содержат все гены, входящие в состав данных мобильных элементов. Учитывая, что основные различия типичных штаммов и измененных вариантов заключаются в структуре генов cixB и rtsR, нами было проведено их секвенирование. При этом были подтверждены данные ПЦР и показано, что действительно штаммы, выделенные на территории России и стран ближнего зарубежья до 1991 г., содержали в геноме профага СТХф эльтор аллель ctxB3, а изолированные с 1991 по 2006 г., имели аллель ctxBl, характерный для классических вибрионов. При секвенировании нами было обнаружено три штамма, завезенных в 2010 г. (Москва), которые имели новый аллель — ctxBl. При изучении наличия гена rstR с помощью аллель-специфической ПЦР и секвенирования было показано, что все типичные штаммы содержали эльтор аллель этого гена. Среди изученных 32 измененных вариантов большинство штаммов (68,9%) содержали два аллеля гена rstRклассический и эльтор, что наряду с наличием генов ctxBl или ctxB7 указывает на присутствие двух профагов СТХф — классического (ctxBllctxB7 и rstRclass) и гибридного (ctxBl/ctxB7 и rstREltor). Менее распространенными (9 или 28,1%) были изоляты, которые несли только ген rstREltor, что свидетельствует о наличии в их хромосоме только гибридного профага СТХф. Среди исследованных нами штаммов обнаружен один штамм — V. cholerae PI5384, выделенный на Украине в 1991 г., который имел аллель rstRclass, т. е. содержал профаг СТХф классического типа.

При определении числа копий профага СТХф у 10 штаммов холерных вибрионов биовара эльтор методом ДНК-ДНК гибридизации по Саузерну с использованием СТ-зонда, созданного на основе амплифицированного фрагмента гена ctxA, было показано, что только штамм V. cholerae PI8899,.

105 завезенный в 2006 г. в Мурманск, содержал одну копию профага, соответствующую по размеру типичным штаммам холерного вибриона биовара эльтор. В то же время 9 штаммов имели две копии профага СТХф. При этом было обнаружено две группы штаммов, различающихся величиной РбИ-фрагментов, гибридизующихся с СТ-зондом. Первая группа включала 4 штамма — М1272, М1270, М1268, М1293, выделенных в 1993;1994 гг., которые содержали два фрагмента размером 7,0 и 9,0 т.п.н. Во вторую группу вошли 5 штаммов — М1345, М1429, М1430, Л3226, Л4150, изолированные в 20 012 010 гг. имеющих две копии профага СТХф размером 5,4 и 7,0 т.п.н. Учитывая данные зарубежных исследователей, показавших, что размер гибризационных фрагментов четко коррелирует с локализацией профагов СТХф на хромосомах (ВакЬвЫ В. е! а1., 2008), нами было высказано предположение о локализации профагов у изученных штаммов. У штаммов первой группы две копии локализованы в тандемном порядке на малой хромосоме, а у второй группытакже как утипичных холерных вибрионов эльтор в тандемном порядке на большой хромосоме. При этом локализация профага СТХф на малой хромосоме была подтверждена в дальнейшем с помощью ПЦР.

Исследование структуры промоторной области оперона с? кАВ показало, что большая часть геновариантов, как и типичные штаммы содержали по 4 копии гептаповтора ТТТГСАТ (1гр4), являющиеся сайтами связывания регуляторного белка ТохЫ при активации тарнскрипции оперона сЬсАВ. В то же время штаммы, выделенные в Ачинске и Иркутске в 1997 г., содержали по 3 копии ^грЗ), а штаммы, выделенные в Москве в 2010 г., имели 5 копий гептаповторов (Ър5).

Таким образом, при исследовании структуры профага СТХф измененных вариантов холерных вибрионов биовара эльтор установлена его вариабельность, что отличает их типичных изолятов, имеющих однородную структуру данного мобильного элемента. При этом вариабельность профага СТХф выражалась в наличии разных аллелей с1хВ (сЬс51 или с? хВ7), и/или Г81ЯШ10Г) и разного числа тандемных повторов ТТТГСАТ в.

106 промоторной области оперона ctxAB. На территорию России и сопредельных государств были завезены штаммы измененных вариантов V. cholerae биовара эльтор, относящиеся к четырем генотипам: ctxBX, rstREltor, trp3- ctxBX, rstREItor, trp4- ctxBX, rstREltor/rstRclass, trp4- ctxBl, rstREltorlrstRclas trp5. Среди которых наиболее распространенными были штаммы с генотипом ctxBX, rstREltorlrstRclass, trp4, содержащие две разные копии профага СТХф — классическую и гибридную.

Поскольку в вирулентности холерных вибрионов важную роль играют также антигены, кодируемые генами, расположенными на островах патогенности VPI-1 и VPI-2, в дальнейшем был изучен их генный состав. При ПЦР тестировании было показано, что измененные варианты содержат полноценные последовательности VPI-1 и VPI-2, что говорит о стабильности этих мобильных генетических элементов и их важной роли в реализации патогенеза. Поскольку последовательность гена tcpA, входящего в состав VPI-1 и кодирующего основную субъединицу токсин-корегулируемых пилей адгезии, отличается у классических и эльтор вибрионов, что имеет существенные значение для проявления вирулентности, нами было проведено секвенирование данного гена у пяти произвольно взятых штаммов измененных вариантов, выделенных на территории России. В результате было выявлено, что только последовательность гена tcpA штамма V. cholerae PI7644 (Ачинск, 1997) была идентична эльтор вибрионам. В то же время другие изученные штаммыPI8899 (Мурманск, 2006), Л3225, Л3226, JI4150 (Москва, 2010) содержали однонуклеотидную замену в положении 266 от начала гена. Сравнение полученных последовательностей с последовательностями гена tcpA, приведенными в GenBank, показало, что данные штаммы несут аллель tcpEIrCIRS, характерный для штаммов, выделяемых в настоящее время на эндемичных по холере территориях (Reimer A.R. et al., 2011; Talkington D. et al., 2011).

Итак, подводя итоги проведенной работе можно заключить, что сконструированный «Набор реагентов для идентификации токсигенных.

107 штаммов V. cholerae OI классического и эльтор биоваров и дифференциации эльтор вибрионов на типичные и измененные методом мультилокусной полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов (Ген Vibrio cholerae вариант cí-xfí—РЭФ)" позволяет выявлять измененные варианты холерного вибриона биовара эльтор. Впервые проведенный комплексный фенотипический и молекулярно-генетический анализ измененных вариантов V. cholerae биовара эльтор, завезенных на территории Россию с 1993 по 2010 гг., показал, что геноварианты в отличие от типичных клинических штаммов V. cholerae биовара эльтор являются более вирулентными. При этом повышение вирулентности может быть обусловлено несколькими различными механизмами, так как изученные нами геноварианты отличались по структуре генома. Выявлена вариабельность двух мобильных генетических элементовпрофага вирулентности СТХср и острова патогенности VPI-1, кодирующих продукцию основных факторов патогенности — холерного токсина и токсин-корегулируемых пилей адгезии. Дальнейшее изучение структуры и функции генома измененных вариантов V. cholerae биовара эльтор будет способствовать выявлению генетического разнообразия штаммов возбудителя холеры с повышенной вирулентностью, а также созданию новых диагностических тест-систем.

Показать весь текст

Список литературы

  1. О.В. Холера Эль-Тор. Текст. М., Медицина, 1971.
  2. А.Л., Янишевский Н. В., Мотин В. Л. с соавт. Организация и клонирование структурных генов энтеротоксина Vibrio cholerae eltor RV79 Текст. // Мол. генет., микробиол. и вирусол. 1984. — № 9. — С. 12−18-
  3. С.П., Ливанова Л. Ф., Крепостнова И. М. с соавт. Комплексная гено-и иммунодиагностическая тест-система для идентификации холерных вибрионов Ol и Ol39 серогруппы и оценки их вирулентности. Текст. Патент РФ № 2 404 257, опубликован 20.11.10 г.
  4. Информационный бюллетень ВОЗ, 2011. N107.
  5. Н.Д. Фенотипический и генетический анализ изогенных вариантов холерного вибриона с альтернативным уровнем экспрессии факторов патогенности и персистенции Текст.: диссертация. кандидата биологических наук: 03.00.07, 03.00.04. Саратов, 2007. 149с.
  6. И.А., Громова О. В., Джапаридзе М. Н. с соавт. Тест среды для определения активности твиназы, протеазы и фосфолипазы в холерной химической вакцины и её компонентах Текст. // Пробл. особо опасных инф. 2002. — Вып. 83. — С. 148−152.
  7. Лабораторная диагностика холеры. Методические указания МУ 4.2.2218−07. Текст. Москва. 2007.
  8. Ю.Ломов Ю. М. Эволюция возбудителя холеры и прогноз по этой инфекции на ближайшее будущее Текст. // Эпидемиология и инфекционные болезни. -2004.-№ 1.р. 7−12.
  9. П.Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование Текст. М., 1984.-480с.
  10. Л.В., Балахонов C.B., Урбанович Л .Я. с соавт. Обнаружение «гибридных» штаммов Vibrio cholerae Eltor при эпидемических осложнениях в Сибири и на Дальнем Востоке Тескт. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. — 2011. — N5. — С. 12−18.
  11. Е.В., Ломов Ю. М., Михась Н. К., Писанов Р. В. Структура и изменчивость неполного СТХ-элемента холерных вибрионов Текст. // Пробл. особо опасных инф. 2007. — Вып. 93. — С. 58−61.
  12. Э.А., Мазрухо А. Б., Адаменко О. Л., Кругликов В. Д. Холера в начале XXI века. Прогноз на глобальном уровне Текст. // Пробл. особо опасных инф.-2012.-Вып. 111.-С. 11−16.
  13. К.С. Сравнительный анализ фенотипических и молекулярно-генетических свойств холерных вибрионов эльтор, выделенных до начала и в период седьмой пандемии холеры Текст.: диссертация. кандидата медицинских наук: 03.00.07, Саратов, 2009. 153с.
  14. Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности МУ 1.3.2569 -09 Текст. М. 2009.
  15. A.B., Нефедов К. С., Ерошенко Г. А., Смирнова Н. И. Сравнительный анализ геномов холерных вибрионов эльтор, выделенных до начала и в разные периоды седьмой пандемии холеры Текст. // Генетика. 2005. — Т.41, № 1. — С.1−10.
  16. H.A., Бугоркова Т. В., Коннова С. С. с соавт. Способ детекции и определения биотипа, серогруппы и токсигенности возбудителя холеры и набор для его осуществления Текст. Патент РФ № 2 360 972, опубликован 10.07.10 г.
  17. JI. С. Холерные вибрионы, выделенные на территории СССР в период седьмой пандемии Текст.: автореф. диссертации. доктора медицинских наук. Саратов, 1993. — 44с.
  18. Н.И. Генетический контроль патогенности Vibrio cholerae: умеренный нитевидный фаг СТХ, кодирующий холерный токсин, и остров «патогенности» Текст. // Мол. генет., микробиол. и вирусол. 1999. — № 4. -С. 3−10.
  19. Н.И., Кутырев В. В. Эволюция возбудителя холеры Текст. // Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2004. — № 4. — С. 3−13.
  20. Н.И., Горяев A.A., Кутырев В. В. Эволюция генома возбудителя холеры в современный период Текст. // Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2010. -№ 4. — С.11−19.
  21. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования Текст. М., Медицина. 1982. С. 463.
  22. Н.Р., Непомнящая Н. Б., Винокур Н. И. Гемолизины холерных вибрионов как липопротеиновые полиферментные комплексы Текст. // Сборник материалов проблемной комиссии «Холера и патогенные вибрионы». Ростов-на-Дону, 2001. Вып. 14. — С. 52−55.
  23. Н.Р., Мишанькин М. Б. Биологическая роль гемоцитолизина холерных вибрионов Текст. // Сборник материалов проблемной комиссии «Холера и патогенные вибрионы». Ростов-на-Дону, 2002. Вып. 15. — С. 4649.
  24. В., Страти И. Оспа. Холера. Текст. Бухарест. -1981. 360с.
  25. Л.Я., Марамович A.C., Балахонов C.B. с соавт. Ускоренные методы лабораторной диагностики в системе эпиднадзора за холерой Текст. //113
  26. Сборник материалов проблемной комиссии «Холера и патогенные для человека вибрионы». Ростов-на-Дону. — 2007. — Вып. 20. — С. 43−46.
  27. Н.Б. Дифференциация штаммов Vibrio cholerae Ol с различной эпидемической значимостью на основании четырех генов вирулентности: ctxA, tcpA, toxR и hapA Текст.: диссертация. кандидата медицинских наук. -Саратов,-2002.- 173с.
  28. Е.Ю., Горяев A.A., Смирнова Н. И. Изменение генома профага СТХф Vibrio cholerae биовара эльтор, вызываемое транспозоном Tn5-Mob Текст. // Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2008. — № 3. — С. 11−17.
  29. Alam М., Nusrin S., Islam А. et al. Cholera between 1991 and 1997 in Mexico was associated with Infection by Classical, El Tor, and El Tor Variants of Vibrio cholerae Text. 11 J. Clin. Microbiol. 2010. — Vol. 48, N10. — P. 3666−3674.
  30. Albert M.J., Bhuiyan N.A., Talukder K.A. et al. Phenotypic and genotypic changes in Vibrio cholerae 0139 Bengal Text. // J. Clin. Microbiol. 1997. -Vol. 35, N10.-P. 2588−2592.
  31. Ang G.Y., Yu C.Y., Balqis K. et al. Molecular evidence of cholera outbreak caused by a toxigenic Vibrio cholerae Ol El tor variant strain in Kelantan, Malaysia Text. 11 J. Clin. Microbiol. 2010. — Vol. 48, N11. — P. 3963−3969.
  32. Bakhshi В., Pourshafie M.R., Navabakbar F., Tavakoli A. Genomic organization of the CTX element among toxigenic Vibrio cholerae isolates Text. // Clin. Microbiol. Infect. 2008. — Vol. 14. — P. 562−568.
  33. Beck N.A., Krukonis E.S., DiRita V.J. TcpH influences virulence gene expression in Vibrio cholerae by inhibiting degradation of the transcription activator TcpP Text. //J. Bacteriol. 2004. — Vol. 186, N24. — P. 8309−8316.
  34. Bhaskaran K., Rowley D. Nutritional studies on Vibrio cholerae Text. // J. Gen. Microbiol. 1956. — Vol. 15, N2. — P. All All.
  35. Bhuiyan N.A., Nusrin S., Alam M. et al. Changing genotypes of cholera toxin (CT) of Vibrio cholerae 0139 in Bangladesh and description of three new CT genotypes Text. //FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2009. — Vol. 57, N2. -P.136−41.
  36. Blokesch M., Schoolnik G.K. Serogroup conversion of Vibrio cholerae in aquatic reservoirs Text. // PLoS Pathog. 2007. — Vol. 3, N6. — e81.
  37. Booth B.A., Boesman-Finkelstein M., Finkelstein R.A. Vibrio cholerae hemagglutinin/protease nicks cholera enterotoxin Text. // Infect. Immun. 1984. -Vol. 45, N3.-P. 558−560.
  38. Borkakoty B., Biswas D., Devi U. et al. Emergence of classical ctxB genotype 1 and tetracycline resistant strains of Vibrio cholerae 01 El Tor in Assam, India 11 Tropical Med. Hyg. 2012. — Vol. 106. — P. 382−386.
  39. Carroll P.A., Tashima K.T., Rogers M.B. et al. Phase variation in tcpH modulates expression of the ToxR regulon in Vibrio cholerae Text. // Mol. Microbiol. -1997.-Vol. 25, N6.-P. 1099−1111.
  40. Chatterjee S., Patra T., Ghosh K. et al. Vibrio cholerae 01 clinical strains isolated in 1992 in Kolkata with progenitor traits of the 2004 Mozambique variant Text. //J. Med. Microbiol. 2009. — Vol. 58. — P. 239−247.
  41. Chiang S.L., Taylor R.K., Koomey M., Mekalanos J.J. Single amino acid substitutions in the N-terminus of Vibrio cholerae TcpA affect colonization, autoagglutination, and serum resistance Text. // Mol Microbiol. 1995. -Vol. 17, N6.-P. 1133−1142.
  42. Chin C.S., Sorenson J., Harris J.B. et al. Origin of the Haitian cholera outbreak strain Text. // N. Engl. J. Med. 2011. — Vol. 364, N1. — P. 33−42.
  43. Choi S.Y., Lee J.H., Jeon Y.S. et al. Multilocus variable-number tandem repeat analysis of Vibrio cholerae Ol El Tor strains harbouring classical toxin В Text. // J. Med. Microbiol. 2010. — Vol. 59. — P. 763−769.
  44. Chow K.H., Ng J.T.K., Yuen K.Y., Yami W.C. Detection of RTX toxin gene in Vibrio cholerae by PCR Text. I I J.Clin.Microbiol. 2001. — Vol. 30. — P. 25 942 597.
  45. Chun J., Grim C.J., Hasan N.A. et al. Comparative genomics reveals mechanism for short-term and long-term clonal transitions in pandemic Vibrio cholerae Text. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2009. — Vol. 106, N36. — P. 15 442−15 447.
  46. Cook W.L., Wachsmuth K., Johnson S.R. et al. Persistence of plasmids, cholera toxin genes, and prophage DNA in classical Vibrio cholerae Ol Text. 11 Infect. Immun. 1984.-Vol. 45, N1.-P. 222−226.
  47. Das В., Halder К., Pal P., Bhadra R.K. Small chromosomal integration site of classical CTX prophage in Mozambique Vibrio cholerae Ol biotype El Tor strain Text. // Arch. Microbiol. 2007. — Vol. 188, N6. — P. 677−683.
  48. Davis B.M., Kimsey H.H., Kane A.V., Waldor M.K. A satellite phage-encoded antirepressor induces repressor aggregation and cholera toxin gene transfer Text. // EMBO J. 2002. — Vol. 21. — P. 4240−4249.
  49. De Haan L., Hirst T.R. Cholera toxin: a paradigm for multi-functional engagement of cellular mechanisms Text. // Mol. Membr. Biol. 2004. — Vol. 21, N2. — P.77−92.
  50. De S.N., Chatterjee D.N. Experimental study of mechanism of action of Vibrio cholerae on intestional mucous membrane Text. // J. Path. Bacteriol. 1953. -Vol. 66.-P. 559−562.
  51. Dubey R.S., Lindblad M., Holmgren J. Purification of El Tor cholera enterotoxins and comparisons with classical toxin Text. // J. General Microbiol. 1990. — Vol. 136. — P.1839−1847.
  52. Dutta N.K., Habbu M.K. Experimental cholera in infant rabbits: a method for chemotherapeutic investigation Text. // Br. J. Pharmacol. Chemother. 1955. -Vol. 10, N2. -P.153−159.
  53. Dziejman M., Balon E., Boyd D. et al. Comparative genomic analysis of Vibrio cholerae: genes that correlate with cholera endemic and pandemic disease Text. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. — Vol. 99, N3. — P. 1556−1561.
  54. Dziejman M., Serruto D., Tam V.C. et al. Genomic characterization of non-Ol, non-0139 Vibrio cholerae reveals genes for a type III secretion Text. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. — Vol. 102, N9. — P. 3465−3470.
  55. Edwards M.C., Gibbs R.A. Multiplex PCR: adwantages, development and applications Text. // PCR Methods and Applications. 1994. — Vol.3. — P. 65−75.
  56. Epstein P.R., Ford T.E., Colwell R.R. Health and climate change: Marine ecosystems Text. // Lancet. 1993. — Vol. 342. — P. 1216−1219.
  57. Faruque S.M., Alim A.R., Rahman M.M. et al. Clonal relationships among classical Vibrio cholerae 01 strains isolated between 1961 and 1992 in Bangladesh Text. //J. Clin. Microbiol. 1993. — Vol. 31, N9. — P. 2513−2516.
  58. Faruque S.M., Nair G.B. Vibrio cholerae: Genomics and Molecular Biology. Text. Caister Academic Press. Eds. 2008.
  59. Faruque S.M., Zhu J., Asadulghani et al. Examination of diverse toxin-coregulated pilus-positive Vibrio cholerae strains fails to demonstrate evidence for Vibrio pathogenicity island phage Text. // Infect. Immun. 2003. — Vol. 71, N6. -P. 2993−2999.
  60. Faruque S.M.A., Kamruzzaman M., Nandi R.K., Ghosh A.N. et al. RSI of polymerase chain reaction-generated amplicons to identify three types of cholera toxin subunit B in Vibrio cholerae Ol strains Text. // J. Clin. Microbiol. 2002. -Vol. 31.-P. 22−25.
  61. Faruque S.M.A., Tarn V.C., Chowdhury N. et al. Genomic analysis of the Mozambique strain of Vibrio cholerae Ol reveals the origin of El Tor strains carrying classical CTX prophage Text. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2007. -Vol. 104.-P. 5151−5156.
  62. Fasano A., Baudry B., Pumplin D.W. et al. Vibrio cholerae produces a second en-terotoxin, which affects intestinal tight junctions Text. // Proc. Natl. Acad. Sei. -1991.-Vol. 88.-P. 5242−5246.
  63. Fields P.I., Popovic T., Wachsmuth K., Olsvik O. Use of polymerase chain reaction for detection of toxigenic Vibrio cholerae Ol strains from the Latin American cholera epidemic Text. // J. Clin. Microbiol. 1992. — Vol. 30, N8. — P. 21 182 121.
  64. Finkelstein R.A., Atthasampunna P., Chulasamaya M., Charunmethee P. Pathogenesis of experimental cholera: biologic activities of purified procholeragen a Text. // J. Immunol. 1966. — Vol. 96, N3. — P. 440−449.
  65. Finkelstein RA., Boesman-Finkelstein M., Chang Y., Hase С. Vibrio cholerae hemagglutinin/protease, colonial variation, virulence and detachment // Infect. Immun. 1992. — Vol. 60. — P. 472−478.
  66. Galen J.E., Ketley J.M., Fasano A. et al. Role of Vibrio cholerae neuraminidase in the function of cholera toxin Text. // Infect. Immun. 1992. — Vol. 60, N2. -P. 406−415.
  67. Ghosh-Banerjee J., Senoh M., Takahashi T. Cholera toxin production by the El Tor variant of Vibrio cholerae 01 compared to prototype El Tor and classical biotypes Text. // J. Clin. Microbiol. 2010. — Vol. 48, N 11. — P. 4283−4286.
  68. Goel A.K., Jain M., Kumar P. et al. A new variant of Vibrio cholerae Ol El Tor causing cholera in India // J. Infect. 2008. — Vol. 57. — P. 280−281.
  69. Goel A.K., Ponmariappan, S., Kamboj, D.V., Singh, L. Single multiplex polymerase chain reaction for environmental surveillance of toxigenic-pathogenic Ol and non-Ol Vibrio choleras Text. // Folia Microbiol. 2007. — Vol. 52. — P. 81−85.
  70. Grim C.J., Choi J., Chun J. et al. Occurrence of the Vibrio cholerae seventh pandemic VSP-I island and a new variant Text. //OMICS. 2010. — Vol. 14, N1. -P. 1−7.
  71. Grissa I., Vergnaud G., Pourcel C. The CRISPRdb database and tools to display CRISPRs and to generate dictionaries of spacers and repeats. BMC Bioinformatics 2007- 8:172. электронный ресурс. http://crispr.u-psud.fr/crispr/CRISPRHomePage.php.
  72. Halder K., Das B., Nair G.B., Bhadra R.K. Molecular evidence favouring stepwise evolution of Mozambique Vibrio cholerae Ol El Tor hybrid strain Text. // Microbiology. 2010. — Vol. 156. — P. 99−107.
  73. Haralalka S., Nandi S., Bhadra R.K. Mutation in the relA gene of Vibrio cholerae affects in vitro and in vivo expression of virulence factors Text. // J. Bacteriol. -2003. Vol. 185, N16. — P. 4672−4682.
  74. Hase C.C., Finkelstein R.A. Cloning and nucleotide sequence of the Vibrio cholerae hemagglutinin/protease (HA/protease) gene and construction of an HA/protease-negative strain Text. // J. Bacteriol. 1991. — Vol. 173, N 11. -P. 3311−3317.
  75. Hassan F., Kamruzzaman M., Mekalanos J.J., Faruque S.M. Satellite phage TLCcp enables toxigenic conversion by CTX phage through dif site alteration Text. // Nature.-2010.-Vol. 467, N7318.-P. 982−985.
  76. Heidelberg J.F., Eisen J.A., Nelson W.C. et al. DNA sequence of both chromosomes of the cholera pathogen Vibrio cholerae Text. // Nature. 2000. -Vol. 406.-P. 477−483.
  77. Heilpern A. J., Waldor M. K. pIIICTX, a predicted CTXcp minor coat protein, can expand the host range of coliphage fd to include Vibrio cholerae Text. // J. Bacteriol.-2003.-Vol. 185.-P. 1037−1044.
  78. Hendriksen R.S., Price L.B., Schupp J.M. et al. Population genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: evidence on the origin of the Haitian outbreak Text. // MBio. 2011. — Vol. 2, N4. — eOO 157−11.
  79. Iredell J.R., Manning P.A. Biotype-specific tcpA genes in Vibrio cholerae Text. // FEMS Microbiol. Lett. 1994. — Vol. 121. — P. 47−54.
  80. Iwanaga M., Yamamoto K., Higa N. et al. Culture conditions for stimulating cholera toxin production by Vibrio cholerae 01 El Tor Text. // Microbiol. Immunol. 1986.-Vol. 30, N11.-P. 1075−1083.
  81. Jermyn W.S., Boyd E.F. Characterization of a novel Vibrio pathogenicity island (VPI-2) encoding neuraminidase (nanH) among toxigenic Vibrio cholerae isolates Text. // Microbiology. 2002. — Vol. 148. — P. 3681−3693.
  82. Jermyn W.S., Boyd E.F. Molecular evolution of Vibrio pathogenicity island-2 (VPI-2): mosaic structure among Vibrio cholerae and Vibrio mimicus natural isolates Text. //Microbiology.-2005.-Vol. 151.-P. 311−322.
  83. Jonson G., Holmgren J., Svennerholm A. M. Identification of a mannose-binding pilus on Vibrio cholerae El Tor Text. // Microb. Pathog. 1991. -Vol. 11.-P. 433−441.
  84. Jonson G., Holmgren J., Svennerholm A.-M. Epitope differences in toxin-coregulated pili produced by classical and El Tor Vibrio cholerae 01 Text. // Microbial Pathogenesis. 1991.-Vol. 11.-P. 179−188.
  85. Joshi R.M., Albert M.J. Hybrid El Tor Vibrio cholerae Ol, Kuwait Text. // Emerg. Infect. Dis. 2009. — Vol. 15, N11.-P. 1879−1880.
  86. Kaper J.B., Morris J.G., Levine M.M. Cholera Text. // Clin. Microbiol. Rev. -1995.-Vol. 8.-P. 48−86.
  87. Karaolis D.K., Kaper J.B. Vibrio cholerae TCP: a trifunctional virulence factor? Response Text. // Trends Microbiol. 1999. — Vol. 7. — P. 393.
  88. Karaolis D.K., Johnson J.A., Bailey C.C. et al. A Vibrio cholerae pathogenicity island associated with epidemic and pandemic strains Text. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. — Vol. 95, N6. — P. 3134−3139.
  89. Karaolis D.K., Lan R., Reeves P.R. Molecular evolution of the sevenih-pandemic clone of Vibrio cholerae and its relationship to other pandemic and epidemic V cholerae isolates Text. // J. Bacteriol. 1994. — Vol. 176, N20. -P.6199−6206.
  90. Kato J., Zhu J., Liu C., Moss J. Enhanced sensivity to cholera toxin in ADPribosylarginine hydrolase-deficient mice Text. // Mol. Cell. Biol. 2007. — Vol.12 127, N 15.-P. 5534−5543.
  91. Keasler S.P., Hall R.H. Detecting and biotyping Vibrio cholerae 01 with multiplex polymerase chain reaction Text. // Lancet. 1993. — Vol.341. — P. 1661.
  92. Kimsey H.H., Waldor M.K. The CTXphi repressor RstR binds DNA cooperatively to form tetrameric repressor-operator complexes Text. // J. Biol. Chem. -2004. Vol. 279, N4. — P. 2640−2647.
  93. Kimsey H.H., Waldor M.K., CTXcp immunity: application in the development of cholera vaccines Text. // Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 1998. — Vol. 95. -P.7035−7039.
  94. Kirn T.J., Jude B.A., Taylor R.K. A colonization factor links Vibrio cholerae environmental survival and human infection Text. // Nature. 2005. — Vol. 438. -P. 863−866.
  95. Kitaoka M., Miyata S.T., Unterweger D., Pukatzki S. Antibiotic resistance mechanisms of Vibrio cholerae Text. // J. Med. Microbiol. 2011. — Vol. 60. -P. 397−407.
  96. Krukonis E.S., Yu R.R., Dirita V.J. The Vibrio cholerae ToxR/TcpP/ToxT virulence cascade: distinct roles for two membrane-localized transcriptional activators on a single promoter Text. // Mol Microbiol. 2000. — Vol. 38, N1. — P. 6784.
  97. Kumar P., Jain M., Goel A.K. et al. A large cholera outbreak due to a new cholera toxin variant of the Vibrio cholerae Ol El Tor biotype in Orissa, Eastern India // J. Med. Microbiol. 2009. — Vol. 58. — P. 234−238.
  98. Kumar P., Jain M., Goel A.K. et al. Rapid detection of virulence-associated genes in environmental strains of Vibrio cholerae by multiplex PCR Text. // Curr. Microbiol. 2010. — Vol. 60. — P. 199−202.
  99. Lee J.H., Choi S.Y., Jeon Y.S. et al. Classification of hybrid and altered Vibrio cholerae strains by CTX prophage and RSI element structure Text. // J. Microbiol. 2009. — Vol. 47, N6. — P.783−788.
  100. Lin W., Fullner K.J., Clayton R. et al. Identification of a Vibrio cholerae RTX toxin gene cluster that is tightly linked to the cholera toxin prophage Text. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1999. — Vol. 96, N3. — P. 1071−1076.
  101. Longini I.M. Jr., Yunus M., Zaman K. et al. Epidemic and endemic cholera trends over a 33-year period in Bangladesh Text. // J. Infect. Dis. 2002. — Vol. 186, N2.-P. 246−251.
  102. Mahon B.E., Mintz E.D., Greene K.D. et al. Reported cholera in the United States, 1992−1994: a reflection of global changes in cholera epidemiology Text. // JAMA. 1996. — Vol. 276, N4. — P. 307−312.
  103. Maiti D., Das B., Saha A. et al. Genetic organization of pre-CTX and CTX prophages in the genome of an environmental Vibrio cholerae non-Ol, non-0139 strain Text. //Microbiology. 2006. — Vol. 152, Pt.12. — P. 3633−3641.
  104. McLeod S.M., Kimsey H.H., Davis B.M., Waldor M.K. CTXphi and Vibrio cholerae: exploring a newly recognized type of phage-host cell relationship Text. // Mol. Microbiol. 2005. — Vol.57, N2. — P.347−356.
  105. McLeod S.M., Waldor M.K. Characterization of XerC- and XerD-dependent CTX phage integration in Vibrio cholerae Text. // Mol. Microbiol. 2004. — Vol. 54, N4.-P. 935−947.
  106. Meibom K.L., Blokesch M., Dolganov N.A. et al. Chitin induces natural competence in Vibrio cholerae Text. // Science. 2005. — Vol. 310, N5755. -P. 1824−1827.
  107. Mekalanos J.J. Duplication and amplification of toxin genes in Vibrio cholerae Text. // Cell. 1983. — Vol. 35, N 1. — P. 253−263.
  108. Miller V.L., Mekalanos J.J. Synthesis of cholera toxin is positively regulated at the transcrip-tional level by toxR Text. // Proc. Notl. Acad. Sei. USA. 1984. -Vol.81.-P. 3471−3475.
  109. Mojica F. J., Diez-Villasenor C., Garcia-Martinez J., Soria E. Intervening sequences of regularly spaced prokaryotic repeats derive from foreign genetic elements Text. // J. Mol. Evol. 2005. — Vol. 60. — P. 174−182.
  110. Mojica F. J., Diez-Villasenor C., Soria E., Juez G. Biological significance of a family of regularly spaced repeats in the genomes of Archaea, Bacteria and mitochondria Text. // Mol. Microbiol. 2000. — Vol. 36. — P. 244−246.
  111. Morita M., Ohnishi M., Arakawa E. et al. Emergence and genetic diversity of El Tor Vibrio cholerae 01 that possess classical biotype ctxB among travel-associated cases of cholera in Japan Text. // J. Med. Microbiol. 2010. — Vol.59.- P.708−12.
  112. Mukhopadhyay A.K., Garg S., Saha P.K. et al. Comparative analysis of factors promoting optimal production of cholera toxin by Vibrio cholerae 01 (classical and El Tor biotypes) and 0139 // Indian J. Med. Res. 1996. — Vol. 104. — P. 129 133.
  113. Murley Y.M., Carroll P.A., Skorupski K. et al. Differential transcription of the tcpPH operon confers biotype-specific control of the Vibrio cholerae ToxR virulence regulon Text.//Infect. Immun. 1999. -Vol. 67, N10.-p. 5117−5123.
  114. Murphy R.A., Boyd E.F. Three pathogenicity islands of Vibrio cholerae can excise from the chromosome and form circular intermediates Text. // J. Bacteriol.- 2008. Vol. 190, N2. — P. 636−647.
  115. Nair G. B., Qadri F., Holmgren J. et al. Cholera due to altered El Tor strains of Vibrio cholerae 01 in Bangladesh Text. // J. Clin. Microbiol. 2006. — Vol.44. -P.4211−4213.
  116. Na-Ubol M., Srimanote P., Chongsa-nguan M. et al. Hybrid & El Tor variant biotypes of Vibrio cholerae 01 in Thailand Text. // Indian. J. Med. Res. 2011. -Vol.133, N4.-P.387−394.
  117. Nguyen B.M., Lee J.H., Cuong N.T. et al. Cholera outbreaks caused by an altered Vibrio cholerae Ol El Tor biotype strain producing classical cholera toxin B in Vietnam in 2007 to 2008 // J. Clin. Microbiol. 2009. — Vol.47. — P. 1568−1571.
  118. Okada K., Chantaroj S., Roobthaisong A. et al. A cholera outbreak of the Vibrio cholerae Ol El Tor variant carrying classical ctxB in Northeastern Thailand in 2007 Text. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2010. — Vol.82, N5. — P.875−878.
  119. O’Shea Y.A., Boyd E.F. Mobilization of the Vibrio pathogenicity island between Vibrio cholerae isolates mediated by CP-T1 generalized transduction Text. // FEMS Microbiol. Lett. 2002. — Vol. 214, N2. — P. 153−157.
  120. O’Shea Y.A., Reen F.J., Quirke A.M., Boyd E.F. Evolutionary genetic analysis of the emergence of epidemic Vibrio cholerae isolates on the basis of comparative nucleotide sequence analysis and multilocus virulence gene profiles Text. // J
  121. Clin Microbiol. 2004. — Vol. 42, N10. — P. 4657−4671.125
  122. Panda S.K., Patra A.K., Kar R.N. Monitoring of multiple drug-resistant pathogens in a selected stretch of Bay of Bengal, India Text. // Environ. Monit. Assess. -2012.-Vol. 184, N1. P.193−200.
  123. Parsot C., Mekalanos J.J. Expression of the Vibrio cholerae gene encoding aldehyde dehydrogenase is under control of ToxR, the cholera toxin transcriptional activator Text. //J. Bacteriol. 1991. — Vol. 173, N9. — P. 2842−2851.
  124. Patra T., Chatterjee S., Raychoudhuri A. et al. Emergence and progression of Vibrio cholerae 01 El Tor variants and progenitor strains of Mozambique variants in Kolkata, India Text. // Int. J. Med. Microbiol. 2011. — Vol. 301, N4. — P. 310−317.
  125. Pearson G.D.N., Woods A., Chiang S.L., Mekalanos J.J. CTX genetic element encodes a site specific recombination system and an intestinal colonization factor Text. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993. — Vol.90. — P.3750−3754.
  126. Piarroux R., Barrais R., Faucher B. et al. Understanding the cholera epidemic, Haiti Text.//Emerg. Infect Dis.-2011.-Vol. 17, N7.-P. 1161−1168.
  127. Popovic T., Fields P.I., Olsvik O. Detection of cholera toxin genes / Vibrio cholerae and cholera: molecular to global perspectives. Ed. I.K. Wachsmuth, P.A. Blake, O. Olsvik. Washington. DC: American Society for Microbiology. 1994. -P. 1−52.
  128. Prouty M.G., Osorio C.R., Klose K.E. Characterization of functional domains of the Vibrio cholerae virulence regulator ToxT Text. 11 Mol. Microbiol. 2005. -Vol. 58, N4.-P. 1143−1156.
  129. Prouty M.G., Osorio C.R., Klose K.E.Characterization of functional domains of the Vibrio cholerae virulence regulator ToxT Text. // Mol. Microbiol. 2005. -Vol. 58, N4.-P. 1143−1156.
  130. Quilici M.L., Massenet D., Gake B. et al. Vibrio cholerae 01 variant with reduced susceptibility to ciprofloxacin, Western Africa Text. // Emerg.Infect. Dis. -2010.-Vol. 16, N11.-P. 1804−1805.
  131. Raychoudhuri A., Mukhopadhyay A.K., Ramamurthy T. Biotyping of Vibrio cholerae Ol: time to redefine the scheme Text. // Indian. J. Med. Res. 2008. -Vol. 128, N6.-P. 695−698.
  132. Reguera G., Kolter R. Virulence and the Environment: a Novel Role for Vibrio cholerae toxin-coregulated pili in biofilm formation on chitin Text. // J. Bacterid.-2005.- Vol. 187, N10.-P. 3551−3555.
  133. Reidl J., Klose K.E. Vibrio cholerae and cholera: out of the water and into the host Text. // FEMS Microbiol. Rev. 2002. — Vol. 26, N2. — P. 125−139.
  134. Reimer A.R., Van Domselaar G., Stroika S. et al. Comparative genomics of Vibrio cholerae from Haiti, Asia, and Africa Text. // Emerg. Infect. Dis. 2011 -Vol. 17, N11.-P. 2113−2121.
  135. Rhine J.A., Taylor R.K. TcpA pilin sequences and colonization requirements for Ol and 0139 Vibrio cholerae Text. // Mol.Microbiol. 1994. — Vol. 13. -P.1013−1020.
  136. Rolfs A., Shuller I., Finkch U., Weber-Rolfs I. PCR: clinical diagnostics and research Text. Springer-Verlag KG, Berlin. 1992. P. 74−77.
  137. Rollenhagen A., Lubke J.H. The morphology of excitatory central synapses: from structure to function Text. // Cell Tis. Res. 2006. — Vol.326, N2. — P.221−237.
  138. Rubin E.J., Lin W., Mekalanos J J., Waldor M.K. Replication and integration of a Vibrio cholerae cryptic plasmid linked to the CTX prophage Text. // Mol. Microbiol. 1998.-Vol. 28, N6.-P. 1247−1254.
  139. Safa A., Bhuyian N.A., Nusrin S. et al. Genetic characteristics of Matlab variants of Vibrio cholerae 01 that are hybrids between classical and El Tor biotypes Text. // J. Med. Microbiol. 2006. — Vol. 55. — P. 1563−1569.
  140. Safa A., Nair G.B., Kong R.Y.C. Evolution of new variants of Vibrio cholerae 01 Text. // Trends Microbiol. 2010. — Vol.18. — P.46−54.
  141. Safa A., Sultana J., Cam P.D. et al. Vibrio cholerae Ol hybrid El Tor strains in Asia and Africa Text. // Emerg. Infect. Dis. 2008. — Vol.14. — P.987−988.
  142. Salles C.A., Momen H., Vicente A.C., Coelho A. Vibrio cholerae in South America: polymerase chain reaction and zymovar analysis Text. // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1993. — Vol. 87, N3. — P. 272.
  143. Samadi A.R., Chowdhury M.K., Huq M.I., Khan M.U. Seasonality of classical and El Tor cholera in Dhaka, Bangladesh: 17-year trends Text. // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1983. -Vol.77, N6. — P.853−856.
  144. Sanchez J., Holmgren J. Cholera toxin a foe & a friend Text. // Indian J. Med. Res.-2011.-Vol. 133.-P. 153−163.
  145. Sandkvist M, Bagdasarian M, Howard S.P. Characterization of the multimeric Eps complex required for cholera toxin secretion Text. // J. Med. Microbiol. -2000. Vol. 290, N4−5. — P. 345−50.
  146. Schneider D.R., Parker C.D. Isolation and characterization of protcasc-deficient mutants of Vibrio cholerae Text. // J. Infect. Dis. 1978. — Vol. 138, N2. -P.143−151.
  147. Siddique A.K. Nair G.B., Alam M. et al. El Tor cholera with severe disease: a new threat to Asia and beyond Text. // Epidemiol. Infect. 2010. — Vol. 138, N3. — P.347−352.
  148. A.K., Baqui A.H., Eusof A., Zaman K. 1988 floods in Bangladesh: pattern of illness and causes of death Text. // J. Diarrhoeal Dis. Res. 1991. -Vol. 9, N4.-P. 310−314.
  149. Siddique A.K., Zaman K., Akram K. et al. Emergence of a new epidemic strain of Vibrio cholerae in Bangladesh. An epidemiological study Text. // Trop. Geogr. Med. 1994.-Vol. 46, N3.-P. 147−150.
  150. Singh D.V., Matte M.H., Matte G.R. et al. Molecular analysis of Vibrio cholerae 01, 0139, non-Ol, and non-0139 strains: clonal relationships between clinical and environmental isolates Text. // Appl. Environ. Microbiol. 2001. -Vol. 67, N2.-P. 910−921.
  151. Sinha V.B., Srivastava B.S. Plasmid-induced loss of virulence in Vibrio cholerae Text. // Nature. 1978. — Vol. 276, N5689. — P.708−709.
  152. Sporecke I., Castro D., Mekalanos J.J. Genetic mapping of Vibrio cholerae en-terotoxin structural genes Text. // J. Bacteriol. 1984. — Vol. 157, N1. — P. 253 261.
  153. Svennerholm A.M., Stromberg G.J., Holmgren J. Purification of Vibrio cholerae soluble hemagglutinin and development of enzyme-linked immunosorbent assays for antigen and antibody quantitations Text. // Infect. Immun. 1983. — Vol. 41, N1. — P. 237−243.
  154. Talkington D., Bopp C., Tarr C. et al. Characterization of toxigenic Vibrio cholerae from Haiti, 2010−2011 Text. // Emerg. Infect. Dis. 2011. — Vol. 17, N11.-P. 2122−2129.
  155. Tan N.H., Tan C.S. Acidimetric assay for phospholipase A using egg yolk suspension as substrate Text. // Anal. Biochem. 1988. — Vol. 170, N2. — P. 282 288.
  156. Taneja N., Mishra A., Sangar G., Singh G., Sharma M. Outbreaks caused by new variants of Vibrio cholerae Ol El Tor, India Text. // Emerg. Infect. Dis. -2009. Vol. 15, N 2. — P. 352−354.
  157. Tappero J.W., Tauxe R.V. Lessons learned during public health response to cholera epidemic in Haiti and the Dominican Republic Text. // Emerg. Infect. Dis. 2011. — Vol. 17, N11. — P. 2087−2093.
  158. Taviani E., Grim C.J., Choi J. et al. Discovery of novel Vibrio cholerae VSP-II genomic islands using comparative genomic analysis Text. // FEMS Microbiol Lett. 2010. — Vol. 308, N2. — P. 130−137.
  159. Taylor R.K., Miller V.L., Furlong D.B., Mekalanos J.J. Use of phoA gene fusions to identify a pilus colonization factor coordinately regulated with cholera toxin Text. // PNAS. 1987. — Vol. 84, N9. — P. 2833−2837.
  160. Tischler A.D., Camilli A. Cyclic diguanylate (c-di-GMP) regulates Vibrio cholerae biofilm formation Text. // Mol. Microbiol. 2004. — Vol. 53, N3. -P. 857−869.
  161. Tran H.D., Alam M., Trung N.V. et al. Multi-drug resistant Vibrio cholerae Ol variant El Tor isolated in northern Vietnam between 2007 and 2010 Text. // J. Med. Microbiol. 2012. — Vol. 61. — P. 431−437.
  162. Trucksis M., Galen J.E., Michalski J., Fasano A., Kaper J.B. Accessory cholera enterotoxin (Ace), the third toxin of a Vibrio cholerae virulence cassette Text. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1993.-Vol. 90, N11.-P. 5267−5271.
  163. Voss E., Stephen R. In vitro production of toxin-coregulated pili by Vibrio cholerae El Tor Text. // Attridge Microbial Pathogenesis. 1993. — Vol. 15. — P. 255−268.
  164. Waldor M.K., Mekalanos J.J. Lysogenic conversion by a filamentous bacteriophage encoding cholera toxin Text. // Science. 1996. — Vol. 272. — P. 1910−1914.
  165. Waldor M.K., Rubin E.J., Pearson G.D.N, et al. Regulation, replication, and integration functions of the Vibrio cholerae CTX (p are encoded by region RS2 Text. // Mol. Microbiol. 1997. — Vol. 24, N 5. — P. 917−926.
  166. Withey J.H., Dirita V.J. Vibrio cholerae ToxT independently activates the divergently transcribed aldA and tagA genes Text. // J. Bacteriol. 2005. — Vol. 187, N23.-P. 7890−7900.
  167. Yu R.R., DiRita V.J. Regulation of gene expression in Vibrio cholerae by ToxT involves both antirepression and RNA polymerase stimulation Text. // Mol. Microbiol. -2002. Vol. 43, N1. — P. 119−134.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!