Клинико-патогенетическое значение определения активности гуаниндезаминазы, гуанозиндезаминазы, пуриннуклеозидфосфорилазы и гуанозинфосфорилазы в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных системной красной волчанкой

В последние годы достигнуты определенные успехи в борьбе с системной красной волчанкой (СКВ), но распространенность ее остается относительно высокой и отмечается тенденция к ее росту.

Сложность первичной диагностики СКВ и ее рецидивов с минимальной активностью патологического процесса, длительная и стойкая потеря трудоспособности, высокая инвалидизация людей молодого трудоспособного возраста, высокая летальность, значительный экономический ущерб для общества — все это создает значительные трудности в вопросах борьбы с этим заболеванием и делает эту проблему весьма актуальной как в медицинском, так и социальном аспектах.

Появившиеся в последние годы новые комплексные методы терапии больных СКВ с включением больших доз глюкокортикоидов и иммуноде-пресантов (пульс-терапия, синхронная интенсивная терапия) позволили выводить больных из тяжелых кризисных состояний, но добиться полной клинической ремиссии и не допустить рецидивов обострений болезни до настоящего времени не удается (48, 92).

Во многом это связано с неясностью отдельных патогенетических механизмов СКВ и вероятно, что общепринятая используемая терапия больных не затрагивает эти неизвестные патогенетические звенья СКВ.

Патогенез СКВ достаточно сложен и включает в себя разнообразные воспалительные, аллергические, дистрофические, иммунологические и, возможно, инфекционные процессы, из которых наиболее изучены иммунологические механизмы на нормализацию которых и направлено основное лечение больных. В основе нарушений иммунорезистентности организма, координации иммунологических процессов лежат функциональные расстройства иммунокомпетентных клеток-лимфоцитов, макрофагов, метаболизм которых, к сожалению, изучен недостаточно.

Известно, что некоторые пуриновые метаболиты (гуанозин, аденозин и др.) оказывают существенное влияние на рефляцию иммунных процессов путем воздействия на функциональные свойства иммунокомпетентных клеток: лимфоцитов, макрофагов (35, 47, 104, 172). В то же время содержание, концентрация пуриновых метаболитов в клетках находится под контролем энзимов, регулирующих скорость метаболических реакций пу-ринового метаболизма (ПМ). При низкой активности аденозиндезаминазы (АДА), пуриннуклеозидфософрилазы происходит накопление токсических концентраций аденозина и гуанозина, что влечет за собой нарушения созревания, пролиферации и дифференциации лимфоцитов, вплоть до гибели Т-лимфоцитов (34, 83). Учитывая, что у всех энзимов имеются активаторы и ингибиторы, представляется возможным регулировать активность энзимов с их помощью и, таким образом, воздействовать косвенным путем на иммунокомпентентные клетки, их функции и иммунную регуляцию.

Подобный подход в лечении больных СКВ нам представляется достаточно перспективным, но предварительно необходимо иметь данные о состоянии активности энзимов ПМ в клетках крови. Кроме того, это создает возможности для более ясного понимания иммунологических механизмов, лежащих в основе патогенеза СКВ. Исходя из этого, в нашей работе были проведены исследования активности гуаниндезаминазы (ГДА), гуа-нозиндезаминазы (ГЗДА), пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ) и гуано-зинфосфорилазы (ГФ) в лимфоцитах, эритроцитах и плазме крови больных СКВ. Все эти ферменты являются функциональными единицами единого метаболического цикла и тесно связаны между собой.

Цель исследования. Повышение качества диагностики активности патологического процесса, контроля эффективности лечения больных СКВ и выявление особенностей ПМ при СКВ с использованием показателей активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лимфоцитах, эритроцитах и плазме крови больных СКВ.

Задачи исследования.

1. Отработать методы выделения лимфоцитов и эритроцитов из венозной крови, приготовления лизатов эритроцитов и лимфоцитов.

2. Отработать методы определения активности ПНФ, ГДА, ГЗДА и ГФ в плазме, лизатах лимфоцитов и эритроцитов здоровых людей. Установить границы нормы (референтные пределы) активности энзимов в клетках крови и плазме здоровых. Изучить зависимость активности энзимов от пола и возраста.

3. Изучить энзимологические особенности лимфоцитов, эритроцитов и плазмы крови больных СКВ в зависимости от активности процесса и характера течения заболевания.

4. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в клетках крови и плазме больных СКВ в процессе лечения: при поступлении в стационар, через 10−12 дней лечения и по окончании курса стационарного лечения.

5. Изучить корреляционные связи между активностями энзимов у здоровых и больных СКВ.

Научная новизна исследования.

Впервые в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови было проведено комплексное исследование активности четырех энзимов ПМ: ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ и показано, что изученные энзимные показатели вместе с клиническими данными могут быть использованы в уточнении степени активности патологического процесса, характера течения заболевания, объективизации оценки эффективности проводимой терапии.

Показано, что изменения активности ферментов обусловлены клиническими особенностями заболевания и его тяжестью.

Выявлены существенные нарушения ПМ в клетках крови и плазме, способные оказать негативное влияние на иммунекомпетентные клетки и регуляцию иммунных процессов при СКВ.

Практическая значимость.

Исследования активности ПНФ, ГФ, Г ДА и ГЗДА в комплексе с клиническими данными могут быть использованы в клинической практике для выявления и уточнения степени активности патологического процесса при СКВ, характера течения и назначения адекватной терапии. В процессе лечения энзимные показатели способствуют объективизации оценки эффективности проводимой терапии, прогнозированию ее длительности.

Внедрение в практику.

Методы определения активности ПНФ, ГФ, Г ДА и ГЗДА в лимфоцитах, эритроцитах и плазме крови для уточнения степени активности патологического процесса при СКВ внедрены в практику работы МУЗ «Городская клиническая больница № 25» г. Волгограда. С результатами энзимных исследований, возможностями энзимной диагностики в ревматологии, их перспективой систематически знакомятся студенты Волгоградского государственного медицинского университета, практические врачи на научно-практических и клинических конференциях.

Основные положения, выносимые на защиту.

Показатели активности ПНФ, ГФ, Г ДА и ГЗДА в лимфоцитах, эритроцитах и плазме крови больных СКВ в комплексе с клиническими данными способствуют уточнению степени активности патологического процесса, характера течения заболевания, объективизации контроля оценки эффективности проводимой терапии.

Публикации и апробация работы.

Основные положения диссертации опубликованы в 6 печатных работах. Материалы диссертации ежегодно докладывались на научно-практических конференциях Волгоградского государственного медицинского университета.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 188 страницах компьютерного текста и состоит из введения, части I — обзора литературы, представленного одной главой, содержащей основные сведения о медико-биологической роли ПМ, некоторых физико-химических свойств изучаемых ферментов и их использовании в клинической практике, части II : — собственных исследований, состоящей из 4 глав, включающих клиническую характеристику больных, методы исследований, результаты исследований, обсуждение полученных результатов, выводы и практические рекомендации.

ВЫВОДЫ.

1. В лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови выявлены существенные изменения активности энзимов пуринового метаболизма: ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ, зависящие от активности патологического процесса и характера течения заболевания.

2. У больных СКВ (всей группы) при поступлении на лечение выявлено: в плазме крови повышение активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и снижение активности ГФв эритроцитах повышение активности ГДА, ГЗДА и снижение активности ПНФ, ГФв лимфоцитах повышение активности ГДА, снижение активности ГЗДА и ПНФ.

3. Корреляционный анализ между энзимами выявил в плазме наличие прямых и обратных связей средней силы между всеми энзимами, за исключением пары ГДА—ГФ, где эти связи оказались слабымив лимфоцитах — прямые и обратные связи средней силы между всеми энзимами, за исключением пары ПНФ—ГФ, где эти связи слабыев эритроцитах — прямые связи средней силы между ГДА—ГЗДА и ПНФ—ГФ, остальные связи были слабыми.

4. У больных СКВ с I степенью активности процесса, по сравнению со здоровыми, в плазме крови выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже активность ГФ. Чем выше была степень активности процесса, тем ниже была активность ГЗДА и выше активность ГДА, ПНФ и ГФ.

5. У больных СКВ с I степенью активности процесса в эритроцитах, по сравнению со здоровыми, выше активность всех изученных энзимов. Чем выше степень активности процесса, тем ниже активность всех энзимов.

6. У больных СКВ с I степенью активности процесса в лимфоцитах, по сравнению со здоровыми, выше активность ГДА, ГФ и ниже активность.

ГЗДА и ПНФ. Чем выше степень активности процесса, тем ниже активность ГЗДА, ПНФ, ГФ и выше активность ГДА.

7. Выявлены энзимные различия между всеми степенями активности процесса. В плазме крови у больных СКВ с I степенью, по сравнению с II, ниже активность ГДА, ПНФ и ГФпо сравнению с III, ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ, но выше активность ГЗДА. При II степени, по сравнению с III, выше активность ГЗДА, но ниже активность ГДА, ПНФ и ГФ. В эритроцитах у больных СКВ с I степенью, по сравнению с II-III степенью и у больных с II степенью, по сравнению с III, выше активность всех энзимов. В лимфоцитах при I степени, по сравнению с II-III степенью, и при II степени, по сравнению с III, ниже активность ГДА, но выше активность ГЗДА, ПНФ и ГФ.

8. Некоторые энзимные показатели (ГДАэр, ГЗДАэр, ПНФлимф) оказались значительно более информативными в индикации минимальной активности процесса при СКВ, чем общепринятые иммунобиохимиче-ские показатели. У больных с I степенью активности процесса показатели активности ГДА и ГЗДА в эритроцитах были выше уровня нормы (М±2а) в 100% и 84,6% случаев, соответственно, а активность ПНФ в лимфоцитах — ниже в 76,9% случаев. У этих же больных имели отклонения от уровня здоровых показатели АНФ, антитела к н-ДНК и СРБ в 46,2%, СОЭ, ЦИК, иммуноглобулины G в 38,5% случаев.

9. У больных с хроническим течением заболевания, по сравнению со здоровыми, в плазме крови выше активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ниже активность ГФв эритроцитах выше активность ГДА, ГЗДА и ПНФв лимфоцитах выше активность ГДА, ГФ и ниже ГЗДА, ПНФ. В 100% случаев активность ГДА в эритроцитах выше уровня здоровых. Чем острее течение болезни, тем выраженнее изменения активности энзимов.

Ю.Выявлены энзимные различия между всеми вариантами течения СКВ, способствующие их дифференциации. В плазме у больных с хроническим течением, по сравнению с подострым и острым течением, и у больных с подострым, по сравнению с острым, ниже активность ГДА, ПНФ, ГФ, но выше активность ГЗДА. В эритроцитах у больных с хроническим течением, по сравнению с подострым и острым течением, и у больных с подострым, по сравнению с острым, выше активность всех изученных ферментов. В лимфоцитах при хроническом течении, по сравнению с подострым и острым, и у больных с подострым, по сравнению с острым, ниже активность ГДА, но выше активность ГЗДА, ПНФ и ГФ.

11 .В процессе лечения больных СКВ активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ варьирует в зависимости от меняющегося клинического состояния больных и, вследствие этого, энзимные показатели в комплексе с клиническими данными могут способствовать объективизации оценки эффективности проводимой терапии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Для определения границ условной нормы (референтных пределов) активности энзимов в крови здоровых людей использовалась формула: М±2а, исходя из которой 95% возможных результатов не должны выходить за эти границы. Плазма (нмоль/мин/мл): ГДА — 0,44−1,88- ГЗДА — 0,8−3,44- ПНФ — 0,32−1,32- ГФ — 0,36−1,6. Лимфоциты (нмоль/мин/мл=1×107 клеток): ГДА — 9,2−14,4- ГЗДА — 5,8−10,5- ПНФ — 26,9−41,5- ГФ — 6,9−18,1. Эритроциты: (нмоль/мин/мл=1×109 клеток): ГДА — 138−216- ГЗДА — 75−153- ГФ — 34−59- ПНФ (нмоль/мин/мл=1×108 клеток) — 140−227.

2. Для выявления минимальной активности «волчаночного» процесса целесообразно определять активность ГДА и ГЗДА в эритроцитах, которые превышают уровень нормы в 100% и 84,6% случаев, соответственно, а также активность ПНФ в лимфоцитах, которая ниже уровня здоровых в 77% случаев.

3. Для уточнения степени активности процесса целесообразно ориентироваться на следующие данные: если активность ГЗДАлимф<5,8 нмоль, ГФэр<34 нмоль, ПНФэр<140 нмоль, а ГДАлимф>14,4 нмоль, то подобная энзимная констелляция (набор) не наблюдается при I степени, а свойственна II и III степени активности «волчаночного» процесса.

4. В ранние сроки лечения больных СКВ (10−12 дней) для уточнения эффективности используемой терапии целесообразно ориентироваться на показатели активности ГФ в плазме, активности ГДА, ГЗДА и ГФ в эритроцитах, которые значительно меняются в положительную сторону в случаях эффективности терапии.

5. Период наступающей клинической ремиссии под влиянием терапии в условиях стационара характеризуется нормализацией активности ГЗДА и ГФ в плазме, ГЗДА в эритроцитах, ГЗДА и ГФ в лимфоцитах. Остальные энзимные показатели могут иметь существенные отклонения от уровня нормы.