ΠŸΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒ Π² написании студСнчСских Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚
АнтистрСссовый сСрвис

Π Π°Π·Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚ΠΊΠ° ΠΈ ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅Ρ€Π½Ρ‹Ρ… красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с большим стоксовым сдвигом

Π”ΠΈΡΡΠ΅Ρ€Ρ‚Π°Ρ†ΠΈΡΠŸΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒ Π² Π½Π°ΠΏΠΈΡΠ°Π½ΠΈΠΈΠ£Π·Π½Π°Ρ‚ΡŒ ΡΡ‚ΠΎΠΈΠΌΠΎΡΡ‚ΡŒΠΌΠΎΠ΅ΠΉ Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Ρ‹

Π’ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ диссСртационной Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Π΅ ΠΏΡ€ΠΈΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Ρ‹ Ρ€Π΅Π·ΡƒΠ»ΡŒΡ‚Π°Ρ‚Ρ‹ Ρ€Π°Π·Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚ΠΊΠΈ ΠΈ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ структурно-Ρ„ΡƒΠ½ΠΊΡ†ΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… свойств Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… красных РРэ Π¬58-Ρ‚ΠšΠ°!Π΅1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅2 с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом: аминокислотной ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΠΈ ΠΈ Π·Π°ΠΌΠ΅Π½, отвСтствСнных Π·Π° ΠΊΡ€Π°ΡΠ½ΡƒΡŽ Ρ„Π»ΡƒΠΎΡ€Π΅ΡΡ†Π΅Π½Ρ†ΠΈΡŽ с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом, ΡΠΊΠΎΡ€ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΠΈ ΡΡ„Ρ„Π΅ΠΊΡ‚ΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒ созрСвания Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π°, Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡ‚ΡŒ интСнсивности флуорСсцСнции ΠΎΡ‚ Ρ€Π. ΠŸΡ€ΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Ρ‹… Π§ΠΈΡ‚Π°Ρ‚ΡŒ Π΅Ρ‰Ρ‘ >

Π Π°Π·Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚ΠΊΠ° ΠΈ ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅Ρ€Π½Ρ‹Ρ… красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с большим стоксовым сдвигом (Ρ€Π΅Ρ„Π΅Ρ€Π°Ρ‚, курсовая, Π΄ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½Ρ‚Ρ€ΠΎΠ»ΡŒΠ½Π°Ρ)

Π‘ΠΎΠ΄Π΅Ρ€ΠΆΠ°Π½ΠΈΠ΅

  • 1. ΠžΠ‘Π—ΠžΠ  Π›Π˜Π’Π•Π ΠΠ’Π£Π Π«
    • 1. 1. Π‘Ρ‚Ρ€ΡƒΠΊΡ‚ΡƒΡ€Π½Ρ‹Π΅ свойства Π‘Π–Π -ΠΈΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½Ρ‹Ρ… красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²
      • 1. 1. 1. ΠšΡ€ΠΈΡΡ‚Π°Π»Π»ΠΈΡ‡Π΅ΡΠΊΠ°Ρ структура флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²
      • 1. 1. 2. Π‘Ρ‚Ρ€ΡƒΠΊΡ‚ΡƒΡ€Π° ΠΈ ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π°
    • 1. 2. Π€ΠΈΠ·ΠΈΠΊΠΎ-химичСскиС свойства красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²
      • 1. 2. 1. Π˜ΡΡ‚ΠΎΡ‡Π½ΠΈΠΊΠΈ флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² ΠΈ Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΠΏΡ€ΠΎΡ‚Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²
      • 1. 2. 2. АгрСгация
      • 1. 2. 3. ΠžΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠΌΠ΅Ρ€ΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΡ
      • 1. 2. 4. Π‘ΠΎΠ·Ρ€Π΅Π²Π°Π½ΠΈΠ΅: Ρ„ΠΎΠ»Π΄ΠΈΠ½Π³ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° ΠΈ ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π°
      • 1. 2. 5. Π€ΠΎΡ‚ΠΎΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ
      • 1. 2. 6. рН-ΡƒΡΡ‚ΠΎΠΉΡ‡ΠΈΠ²ΠΎΡΡ‚ΡŒ флуорСсцСнции
    • 1. 3. Π£Π»ΡƒΡ‡ΡˆΠ΅Π½Π½Ρ‹Π΅ ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅Ρ€Π½Ρ‹Π΅ красныС флуорСсцСнтныС Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ
    • 1. 4. Π€ΠΎΡ‚ΠΎΡ„ΠΈΠ·ΠΈΠΊΠ° ΠΈ Ρ„отохимия флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом
    • 1. 5. ΠŸΡ€ΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²
      • 1. 5. 1. ΠšΡ€Π°ΡΠ½Ρ‹Π΅ флуорСсцСнтныС Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ ΠΊΠ°ΠΊ Ρ€Π΅ΠΏΠΎΡ€Ρ‚Π΅Ρ€Π½Ρ‹Π΅ ΠΌΠ°Ρ€ΠΊΠ΅Ρ€Ρ‹
      • 1. 5. 2. ΠœΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Ρ‹, основанныС Π½Π° ΠΈΠ½Π΄ΡƒΠΊΡ‚ΠΈΠ²Π½ΠΎ-рСзонансном пСрСносС энСргии
  • 2. ΠœΠΠ’Π•Π Π˜ΠΠ›Π« И ΠœΠ•Π’ΠžΠ”Π«
    • 2. 1. ΠœΠ°Ρ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ°Π»Ρ‹
      • 2. 1. 1. Π Π΅Π°ΠΊΡ‚ΠΈΠ²Ρ‹
      • 2. 1. 2. ΠžΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ΄Π΅Π·ΠΎΠΊΡΠΈΡ€ΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡƒΠΊΠ»Π΅ΠΎΡ‚ΠΈΠ΄Ρ‹, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ использовались дляПЦР
      • 2. 1. 3. Π‘ΡƒΡ„Π΅Ρ€Π½Ρ‹Π΅ растворы
      • 2. 1. 4. ΠŸΠΈΡ‚Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½Ρ‹Π΅ срСды для микробиологичСских исслСдований
      • 2. 1. 5. Π‘Ρ€Π΅Π΄Ρ‹ для ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½ΠΎΠΉ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ
    • 2. 2. ΠœΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Ρ‹ молСкулярной Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ
      • 2. 2. 1. Амплификация Π³Π΅Π½ΠΎΠ²
      • 2. 2. 2. Π“ΠΈΠ΄Ρ€ΠΎΠ»ΠΈΠ· Π”ΠΠš эндонуклСазой рСстрикции
      • 2. 2. 3. Π›ΠΈΠ³ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅
      • 2. 2. 4. Врансформация Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΉ
      • 2. 2. 5. Π’Ρ‹Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄
      • 2. 2. 6. ΠžΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π½ΡƒΠΊΠ»Π΅ΠΎΠ³ΠΈΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΠΈ
      • 2. 2. 7. ΠœΡƒΡ‚Π°Π³Π΅Π½Π΅Π· со ΡΠ»ΡƒΡ‡Π°ΠΉΠ½Ρ‹ΠΌΠΈ Π·Π°ΠΌΠ΅Π½Π°ΠΌΠΈ
      • 2. 2. 8. НаправлСнный ΠΌΡƒΡ‚Π°Π³Π΅Π½Π΅Π·
      • 2. 2. 9. Π­Π»Π΅ΠΊΡ‚Ρ€ΠΎΡ„ΠΎΡ€Π΅Π· Π² Π°Π³Π°Ρ€ΠΎΠ·Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅
      • 2. 2. 10. Π‘ΠΊΡ€ΠΈΠ½ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π±ΠΈΠ±Π»ΠΈΠΎΡ‚Π΅ΠΊ ΠΌΡƒΡ‚Π°Π½Ρ‚ΠΎΠ²
      • 2. 2. 11. ΠšΠΎΠ½ΡΡ‚Ρ€ΡƒΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄ для ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ ΠΌΠ»Π΅ΠΊΠΎΠΏΠΈΡ‚Π°ΡŽΡ‰ΠΈΡ…
    • 2. 3. Π’Ρ‹Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈ Ρ…арактСрнзация Ρ€Π΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½Ρ‚Π½Ρ‹Ρ… Π Π Π±
      • 2. 3. 1. Π’Ρ‹Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈ ΠΎΡ‡ΠΈΡΡ‚ΠΊΠ° Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²
      • 2. 3. 2. Π­Π»Π΅ΠΊΡ‚Ρ€ΠΎΡ„ΠΎΡ€Π΅Π· Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²
      • 2. 3. 3. ΠžΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ основных характСристик Ρ€Π΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½Ρ‚Π½Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²
      • 2. 3. 4. ΠšΡ€ΠΈΡΡ‚Π°Π»Π»ΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅
      • 2. 3. 5. Π‘Π±ΠΎΡ€ Π΄Π°Π½Π½Ρ‹Ρ… рСнтгСновской Π΄ΠΈΡ„Ρ€Π°ΠΊΡ†ΠΈΠΈ, Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈ ΡƒΡ‚ΠΎΡ‡Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ кристалличСских структур
    • 2. 4. ΠœΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Ρ‹ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½ΠΎΠΉ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ
      • 2. 4. 1. ΠšΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΠ²Π°Ρ†ΠΈΡ ΠΈ Ρ‚рансфСкция ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ НСЬа
      • 2. 4. 2. ΠšΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΠ²Π°Ρ†ΠΈΡ ΠΈ Ρ‚рансфСкция ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΉ МВΠͺΠΏΠ—,
  • МВΠͺΠΏΠ— со ΡΠ²Π΅Ρ€Ρ…экспрСссиСй Π•Π³Π¬Π’1 ΠΈ ΠœΠ‘А-ΠœΠ’
    • 2. 4. 3. ΠŸΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹Ρ… Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΉ ΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎ ΡΠΊΡΠΏΠ΅Ρ€ΡΡΠΈΡ€ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΡ… флуорСсцСнтныС Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ
    • 2. 4. 4. Врансплантация Ρ€Π°ΠΊΠΎΠ²Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ Π² ΠΌΠΎΠ»ΠΎΡ‡Π½ΡƒΡŽ ΠΆΠ΅Π»Π΅Π·Ρƒ Π’ΠšΠ˜Π” ΠΌΡ‹ΡˆΠ΅ΠΉ
    • 2. 5. ЀлуорСсцСнтная микроскопия
    • 2. 5. 1. ΠœΠΈΠΊΡ€ΠΎΡΠΊΠΎΠΏΠΈΡ Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ½ΠΈΠΉ
    • 2. 5. 2. ЀлуорСсцСнтная микроскопия ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡ‚Π½Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ
    • 2. 5. 3. ЀлуорСсцСнтная микроскопия ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡ‚Π½Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ Π² ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΡƒΡ€Π΅ Π² Ρ€Π΅ΠΆΠΈΠΌΠ΅ Ρ€Π΅Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π²Ρ€Π΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ
    • 2. 5. 4. ΠŸΡ€ΠΈΠΆΠΈΠ·Π½Π΅Π½Π½Π°Ρ двухфотонная микроскопия ΠΌΠΈΠ³Ρ€Π°Ρ†ΠΈΠΈ Ρ€Π°ΠΊΠΎΠ²Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ Π² ΠΎΠΏΡƒΡ…ΠΎΠ»ΠΈ
    • 2. 5. 5. Анализ поляризации ΠΏΠ°Ρ€ ядро-комплСкс Π“ΠΎΠ»ΡŒΠ΄ΠΆΠΈ Π² ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ°Ρ… ΠΎΠΏΡƒΡ…ΠΎΠ»ΠΈ
    • 2. 6. ΠžΠ±Ρ‰Π°Ρ схСма создания Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… красных Π–Π 
    • 2. 6. 1. БтратСгия Π½Π°ΠΏΡ€Π°Π²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ молСкулярной ΡΠ²ΠΎΠ»ΡŽΡ†ΠΈΠΈ
  • 3. РЕЗУЛЬВАВЫ
    • 3. 1. Π‘ΠΎΠ·Π΄Π°Π½ΠΈΠ΅ красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом
    • 3. 2. ΠžΡΠ½ΠΎΠ²Π½Ρ‹Π΅ Ρ„ΠΈΠ·ΠΈΠΊΠΎ-химичСскиС характСристики ΠΎΡ‡ΠΈΡ‰Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π¬88-Ρ‚Πš^Π΅1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ° (Π΅
    • 3. 3. ΠšΡ€ΠΈΡΡ‚Π°Π»Π»ΠΈΡ‡Π΅ΡΠΊΠ°Ρ структура Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π¬88-Ρ‚ΠšΠ° (Π΅1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅
    • 3. 4. ΠœΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΎΠΊΡ€ΡƒΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€ΠΎΠ² Π² Π±Π΅Π»ΠΊΠ°Ρ… Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1с1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚Πš^Π΅
    • 3. 5. Π—Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡ‚ΡŒ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… свойств Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²
  • Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅2 ΠΎΡ‚ Ρ€Π
    • 3. 6. Π’Π΅ΠΌΠΏΠ΅Ρ€Π°Ρ‚ΡƒΡ€Π½Ρ‹Π΅ ΠΈ ΠΈΠ·ΠΎΡ‚ΠΎΠΏΠ½Ρ‹Π΅ эффСкты Π² Π±Π΅Π»ΠΊΠ°Ρ… Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅
    • 3. 7. ΠšΠΎΠ½Π²Π΅Ρ€ΡΠΈΡ стандартных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π²ΠΎ Ρ„луорСсцСнтныС Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом
    • 3. 8. Π₯арактсризация Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ LSS-mKate2 Π² ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ°Ρ…
    • 3. 9. ΠœΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ†Π²Π΅Ρ‚Π½Π°Ρ двухфотонная микроскопия Π² ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… ΠΌΡ‹ΡˆΠ°Ρ…
  • 4. ΠžΠ‘Π‘Π£Π–Π”Π•ΠΠ˜Π•
    • 4. 1. Π₯арактСристики красных РРэ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π¬88-шКа1Π΅
    • 4. 2. Π—Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡ‚ΡŒ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… свойств Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²
  • Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ 1,88-Ρ‚ΠšΠ–Π΅2 ΠΎΡ‚ Ρ€Π
    • 4. 3. ΠŸΡ€Π΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅ΠΌΡ‹ΠΉ Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΡ†ΠΈΠΊΠ» для Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅
    • 4. 4. Бвойства ΠΌΡƒΡ‚Π°Π½Ρ‚Π½Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом, ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… ΠΈΠ· ΡΡ‚Π°Π½Π΄Π°Ρ€Ρ‚Π½Ρ‹Ρ… Π•Π Π²
    • 4. 5. ΠœΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ†Π²Π΅Ρ‚Π½Π°Ρ двухфотонная микроскопия Π² ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… ΠΌΡ‹ΡˆΠ°Ρ…
  • Π’Π«Π’ΠžΠ”Π«

ΠΠΊΡ‚ΡƒΠ°Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ Ρ‚Π΅ΠΌΡ‹

Π’ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄Π½Π΅Π΅ дСсятилСтиС ΠΎΠ΄Π½ΠΈΠΌ ΠΈΠ· Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΏΡ€ΠΈΠΎΡ€ΠΈΡ‚Π΅Ρ‚Π½Ρ‹Ρ… ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΎΠ² исслСдований Π² Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ ΠΈ ΠΌΠ΅Π΄ΠΈΡ†ΠΈΠ½Π΅ стала визуализация Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹Ρ… процСссов, происходящих Π² ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… ΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ°Ρ…, тканях ΠΈΠ»ΠΈ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ°Ρ… Π² Ρ€Π΅ΠΆΠΈΠΌΠ΅ Ρ€Π΅Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π²Ρ€Π΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ с ΠΏΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒΡŽ флуорСсцСнтных ΠΌΠ°Ρ€ΠΊΠ΅Ρ€ΠΎΠ². ОсобоС мСсто срСди Π½ΠΈΡ… Π·Π°Π½ΠΈΠΌΠ°Π΅Ρ‚ Π·Π΅Π»Π΅Π½Ρ‹ΠΉ флуорСсцСнтный Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ (Π²Π Π ), Π΅Π³ΠΎ Π²Π°Ρ€ΠΈΠ°Π½Ρ‚Ρ‹ ΠΈ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈ. Π“Π»Π°Π²Π½Ρ‹ΠΌΠΈ прСимущСствами ΠžΠ‘Π -ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² ΠΏΡ€ΠΈ ΠΈΡ… ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΡΠ²Π»ΡΡŽΡ‚ΡΡ высокая ΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΠΈ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΠΊ Ρ„ΠΎΡ€ΠΌΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡŽ Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π° Π±Π΅Π· участия ΠΊΠΎΡ„Π°ΠΊΡ‚ΠΎΡ€ΠΎΠ², Ρ„Π΅Ρ€ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² ΠΈΠ»ΠΈ ΠΊΠ°ΠΊΠΈΡ…-Π»ΠΈΠ±ΠΎ субстратов, ΠΊΡ€ΠΎΠΌΠ΅ молСкулярного кислорода [1, 2]. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·ΠΎΠΌ, Π²ΠΎΠ·Π½ΠΈΠΊΠ°Π΅Ρ‚ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ образования Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π° ΠΈ Π²ΠΎΠ·Π½ΠΈΠΊΠ½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΡ свСчСния нСпосрСдствСнно Π² ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… ΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ°Ρ…, тканях ΠΈΠ»ΠΈ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ°Ρ… [3]. Оказалось, Ρ‡Ρ‚ΠΎ Ии Π‘-ΠΊΠΎΠ½Ρ†Ρ‹ флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² (ИРб) доступны для создания Π³ΠΈΠ±Ρ€ΠΈΠ΄Π½Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², Ρ‡Ρ‚ΠΎ позволяСт ΠΎΡΡƒΡ‰Π΅ΡΡ‚Π²Π»ΡΡ‚ΡŒ ΡΡˆΠΈΠ²ΠΊΡƒ флуорСсцСнтного Π±Π΅Π»ΠΊΠ° с Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ-мишСнью. ΠŸΡ€ΠΈ этом флуорСсцСнтный Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ (Π‘Π ) Π½Π΅ ΠΎΠΊΠ°Π·Ρ‹Π²Π°Π΅Ρ‚ влияниС Π½Π° Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΡŽ ΠΈ Ρ„ΡƒΠ½ΠΊΡ†ΠΈΡŽ исслСдуСмого Π±Π΅Π»ΠΊΠ°. Π­Ρ‚ΠΎ свойство Π΄Π΅Π»Π°Π΅Ρ‚ ΠžΠ‘Π -ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½Ρ‹Π΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ ΡƒΠ½ΠΈΠΊΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΌΠΈ гСнСтичСски ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡ€ΡƒΠ΅ΠΌΡ‹ΠΌΠΈ флуорСсцСнтными ΠΌΠ°Ρ€ΠΊΠ΅Ρ€Π°ΠΌΠΈ, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ стали Π½Π΅Π·Π°ΠΌΠ΅Π½ΠΈΠΌΡ‹ΠΌΠΈ инструмСнтами для изучСния взаимодСйствия Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², ΠΈΡ… Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΠΈ ΠΈ Ρ‚ранспорта [4, 5], Π° Ρ‚Π°ΠΊΠΆΠ΅ биосСнсоров Π²Π½ΡƒΡ‚Ρ€ΠΈΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹Ρ… ΠΌΠ΅Ρ‚Π°Π±ΠΎΠ»ΠΈΡ‚ΠΎΠ², ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡŽΡ‰ΠΈΡ… ΠΎΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»ΡΡ‚ΡŒ ΠΊΠΎΠ½Ρ†Π΅Π½Ρ‚Ρ€Π°Ρ†ΠΈΡŽ Π‘Π°2+ ΠΈ Ρ†ΠΠœΠ€, рН, ΠΌΠ΅ΠΌΠ±Ρ€Π°Π½Π½Ρ‹ΠΉ ΠΏΠΎΡ‚Π΅Π½Ρ†ΠΈΠ°Π», Π°ΠΊΡ‚ΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒ Π½Π΅ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Ρ… Ρ„Π΅Ρ€ΠΌΠ΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² (Π½Π°ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Ρ€, каспаз, ΠΊΠΈΠ½Π°Π· ΠΈ ΠΏΡ€ΠΎΡ‚Π΅Π°Π·) Π² ΠΆΠΈΠ²ΠΎΠΉ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ΅ [6, 7, 8]. Π Π°Π·Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Π°Π½Ρ‹ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Ρ‹, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡŽΡ‰ΠΈΠ΅ Π΄Π΅Ρ‚Π΅ΠΊΡ‚ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ взаимодСйствия ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρƒ ΠΈΠ½Ρ‚Π΅Ρ€Π΅ΡΡƒΡŽΡ‰ΠΈΠΌΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ [9, 10].

ΠšΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² ОРР-ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², Ρ„Π»ΡƒΠΎΡ€Π΅ΡΡ†ΠΈΡ€ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΡ… Π² ΠΆΠ΅Π»Ρ‚ΠΎΠΉ, ΠΎΡ€Π°Π½ΠΆΠ΅Π²ΠΎΠΉ, красной ΠΈ Π΄Π°Π»ΡŒΠ½Π΅ΠΉ красной областях спСктра, явилось ΠΎΡ‡Π΅Ρ€Π΅Π΄Π½Ρ‹ΠΌ этапом Π² ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² ΠΏΡ€ΠΈ ΠΏΡ€ΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠΈ исслСдований Π² ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡ‚ΠΈ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ [11]. ΠžΠ΄Π½ΠΎΠ²Ρ€Π΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠ΅ использованиС Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡŒΠΊΠΈΡ… Π‘Π Π± с Ρ€Π°Π·Π½Ρ‹ΠΌΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΌΠΈ характСристиками ΠΏΡ€ΠΈΠ²Π΅Π»ΠΎ ΠΊ Ρ€Π°Π·Π²ΠΈΡ‚ΠΈΡŽ соврСмСнных ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΎΠ² исслСдований, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡŽΡ‰ΠΈΡ… ΠΈΠ·ΡƒΡ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ„Π°ΠΊΡ‚ΠΎΡ€Π½Ρ‹Ρ… процСссов Π² ΠΆΠΈΠ²ΠΎΠΉ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ΅ ΠΈ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½ΠΎΠΌ ΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ [12]. ΠŸΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΠ΅ Π½Π°ΡƒΡ‡Π½Ρ‹Π΅ исслСдования посттрансляционной Ρ…ΠΈΠΌΠΈΠΈ, структуры ΠΈ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡ‚Π² ОРР-ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ»ΠΈ Ρ€Π°Π·Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Π°Ρ‚ΡŒ ΠΏΠΎΠ΄Ρ…ΠΎΠ΄Ρ‹ ΠΊ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π½ΠΈΡŽ Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с ΡƒΠ»ΡƒΡ‡ΡˆΠ΅Π½Π½Ρ‹ΠΌΠΈ ΠΈ Π΄Π°ΠΆΠ΅ Π·Π°Π΄Π°Π½Π½Ρ‹ΠΌΠΈ свойствами, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ нашли своС ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π² Π±ΠΈΠΎΡ‚Π΅Ρ…Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ ΠΈ ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΡΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ [13−18].

ВсС красныС Π‘Π Π± Π΄ΠΈΠΊΠΎΠ³ΠΎ Ρ‚ΠΈΠΏΠ°, Ρ‚Π°ΠΊ ΠΆΠ΅ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ ΠΏΠ΅Ρ€Π²Ρ‹Π΅ ΡƒΠ»ΡƒΡ‡ΡˆΠ΅Π½Π½Ρ‹Π΅ вСрсии Π½Π° ΠΈΡ… ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅, ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°Π»ΠΈ рядом сущСствСнных нСдостатков, Ρ‚Π°ΠΊΠΈΡ… ΠΊΠ°ΠΊ Π½Π΅ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΠ΅ ΠΈ ΠΌΠ΅Π΄Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ΅ ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π°, ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅ΡΡŒ Π·Π΅Π»Π΅Π½ΠΎΠΉ флуорСсцСнтной Ρ„ΠΎΡ€ΠΌΡ‹ Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π°, ΡΠΊΠ»ΠΎΠ½Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΠΊ Π°Π³Ρ€Π΅Π³Π°Ρ†ΠΈΠΈ ΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠΌΠ΅Ρ€ΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΠΈ [19]. Π›ΡŽΠ±ΠΎΠΉ ΠΈΠ· ΠΏΠ΅Ρ€Π΅Ρ‡ΠΈΡΠ»Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… нСдостатков Π·Π½Π°Ρ‡ΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎ ΠΎΠ³Ρ€Π°Π½ΠΈΡ‡ΠΈΠ²Π°Π΅Ρ‚ ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π Π . ΠŸΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠΏΡ‚ΠΈΠΌΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… красных Π Π Π± являСтся ΠΎΡ‡Π΅Π½ΡŒ Π°ΠΊΡ‚ΡƒΠ°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΡ€ΠΎΠ±Π»Π΅ΠΌΠΎΠΉ, Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€ΠΎΠΉ Π·Π½Π°Ρ‡ΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎ Ρ€Π°ΡΡˆΠΈΡ€ΡΠ΅Ρ‚ возмоТности примСнСния Π‘Π Π² Π² Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ ΠΈ Π±ΠΈΠΎΡ‚Π΅Ρ…Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ. Π’ Π½Π°ΡΡ‚оящСС врСмя Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ эффСктивным ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΎΠΌ получСния ΡƒΠ»ΡƒΡ‡ΡˆΠ΅Π½Π½Ρ‹Ρ… вСрсий красных Π Π Π± являСтся сочСтаниС случайного ΠΈ ΡΠ°ΠΉΡ‚Π½Π°ΠΏΡ€Π²Π°Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΡƒΡ‚Π°Π³Π΅Π½Π΅Π·Π° с Π²Ρ‹ΡΠΎΠΊΠΎ эффСктивными Ρ‚Π΅Ρ…Π½ΠΈΠΊΠ°ΠΌΠΈ сортировки ΠΈ ΠΎΡ‚Π±ΠΎΡ€Π° ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ [20, 21]. Данная стратСгия ΡƒΠΆΠ΅ Π±Ρ‹Π»Π° ΡƒΡΠΏΠ΅ΡˆΠ½ΠΎ использована для получСния ряда Π Π Π± с Π·Π°Ρ€Π°Π½Π΅Π΅ Π·Π°Π΄Π°Π½Π½Ρ‹ΠΌΠΈ Ρ„ΠΈΠ·ΠΈΠΊΠΎ-химичСскими характСристиками [22−24].

ΠŸΡ€Π°ΠΊΡ‚ΠΈΡ‡Π΅ΡΠΊΠ°Ρ Π·Π½Π°Ρ‡ΠΈΠΌΠΎΡΡ‚ΡŒ красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² особСнно Π²Π΅Π»ΠΈΠΊΠ° для микроскопии Ρ‚ΠΊΠ°Π½Π΅ΠΉ ΠΈ Ρ†Π΅Π»Ρ‹Ρ… ΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ², Ρ‚Π°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ свСт с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠ΅ΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ‹ Π»ΡƒΡ‡ΡˆΠ΅ ΠΏΡ€ΠΎΠ½ΠΈΠΊΠ°Π΅Ρ‚ Π² Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡ‡Π΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·Ρ†Ρ‹. Π­Ρ‚ΠΎ ΠΎΠ±ΡŠΡΡΠ½ΡΠ΅Ρ‚ΡΡ Ρ‚Π΅ΠΌ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ Π²ΠΎΠ΄Π°, ΠΌΠ΅Π»Π°Π½ΠΈΠ½ ΠΈ Π³Π΅ΠΌΠΎΠ³Π»ΠΎΠ±ΠΈΠ½, основныС вСщСства, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ ΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡ‰Π°ΡŽΡ‚ свСт Π² Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡ‡Π΅ΡΠΊΠΈΡ… тканях, ΠΈΠΌΠ΅ΡŽΡ‚ ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΉ коэффициСнт экстинкции Π² Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π΅ Π΄Π»ΠΈΠ½ Π²ΠΎΠ»Π½ ΠΎΡ‚ 600 Π΄ΠΎ 1100 Π½ΠΌ [25]. Π”Π°Π½Π½Ρ‹ΠΉ Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½ Π΄Π»ΠΈΠ½ Π²ΠΎΠ»Π½ называСтся «ΠΎΠΏΡ‚ичСским ΠΎΠΊΠ½ΠΎΠΌ» ΠΈ ΡΠ²Π»ΡΠ΅Ρ‚ся ΠΎΠΏΡ‚ΠΈΠΌΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΌ для микроскопии биологичСских Ρ‚ΠΊΠ°Π½Π΅ΠΉ ΠΈ Ρ†Π΅Π»Ρ‹Ρ… ΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ². Π‘ΠΎΠ»Π΅Π΅ Ρ‚ΠΎΠ³ΠΎ, использованиС РРэ с ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΡƒΠΌΠΎΠΌ флуорСсцСнции Π²Ρ‹ΡˆΠ΅ 600 Π½ΠΌ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ ΠΏΠΎΠ²Ρ‹ΡΠΈΡ‚ΡŒ Ρ‡ΡƒΠ²ΡΡ‚Π²ΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ Π΄Π΅Ρ‚Π΅ΠΊΡ†ΠΈΠΈ флуорСсцСнции. Π­Ρ‚ΠΎ связано с Ρ‚Π΅ΠΌ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ автофлуорСсцСнция ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ (флуорСсцСнция Ρ„Π»Π°Π²ΠΈΠ½ΠΎΠ², Π²ΠΈΡ‚Π°ΠΌΠΈΠ½ΠΎΠ², ЫАО (Π )Н) ΠΈ ΡΠ²Π΅Ρ‚орассСиваниС Π² Ρ‚канях ΡƒΠΌΠ΅Π½ΡŒΡˆΠ°ΡŽΡ‚ΡΡ с ΡƒΠ²Π΅Π»ΠΈΡ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ‹ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ‹.

На Π΄Π°Π½Π½Ρ‹ΠΉ ΠΌΠΎΠΌΠ΅Π½Ρ‚ ΠΎΠ΄Π½ΠΈΠΌ ΠΈΠ· Π»ΡƒΡ‡ΡˆΠΈΡ… ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΎΠ², ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡŽΡ‰ΠΈΡ… ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π°Ρ‚ΡŒ высококачСствСнноС Ρ‚Ρ€Π΅Ρ…ΠΌΠ΅Ρ€Π½ΠΎΠ΅ ΠΈΠ·ΠΎΠ±Ρ€Π°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… Ρ‚ΠΊΠ°Π½Π΅ΠΉ Π½Π° Π³Π»ΡƒΠ±ΠΈΠ½Ρƒ Π²ΠΏΠ»ΠΎΡ‚ΡŒ Π΄ΠΎ 1 ΠΌΠΈΠ»Π»ΠΈΠΌΠ΅Ρ‚Ρ€Π°, являСтся ΠΌΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΡ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½Π°Ρ микроскопия [26]. Π’ Π΄Π²ΡƒΡ…Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠΌ микроскопС ΠΎΠ±Ρ‹Ρ‡Π½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΠ΅Ρ‚ΡΡ сапфировый Π»Π°Π·Π΅Ρ€, ΠΈΡΠΏΡƒΡΠΊΠ°ΡŽΡ‰ΠΈΠΉ инфракрасноС ΠΈΠ·Π»ΡƒΡ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅. ИспользованиС красных Π Π Π² Π² ΠΌΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΡ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ микроскопии ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ ΠΎΡ‚ΠΊΡ€Ρ‹Ρ‚ΡŒ Π½ΠΎΠ²Ρ‹Π΅ возмоТности для провСдСния исслСдований ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… Ρ‚ΠΊΠ°Π½Π΅ΠΉ ΠΈ Ρ†Π΅Π»Ρ‹Ρ… ΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² с ΡΡƒΠ±ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹ΠΌ Ρ€Π°Π·Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π² Ρ€Π΅ΠΆΠΈΠΌΠ΅ Ρ€Π΅Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π²Ρ€Π΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ. Однако красныС Π Π Π± Π½Π΅ ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ эффСктивно Π²ΠΎΠ·Π±ΡƒΠΆΠ΄Π΅Π½Ρ‹ стандартным коммСрчСски доступным инфракрасным Π»Π°Π·Π΅Ρ€ΠΎΠΌ, Ρ‚Π°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ спСктры ΠΈΡ… Π΄Π²ΡƒΡ…Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ поглощСния Π»Π΅ΠΆΠ°Ρ‚ Π² Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π΄Π»ΠΈΠ½Π½ΠΎΠ²ΠΎΠ»Π½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ области ΠΎΡ‚Π½ΠΎΡΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎ Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‡Π΅Π³ΠΎ Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π° Π΄Π»ΠΈΠ½ Π²ΠΎΠ»Π½ Π΄Π²ΡƒΡ…Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π»Π°Π·Π΅Ρ€Π° [27]. Π’ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½Ρ‹ΠΌ ΠΏΠΎΠ΄Ρ…ΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΊ Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½ΠΈΡŽ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΏΡ€ΠΎΠ±Π»Π΅ΠΌΡ‹ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ Ρ€Π°Π·Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚ΠΊΠ° красного FP спСктр возбуТдСния ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€ΠΎΠ³ΠΎ смСщСн Π² ΠΊΠΎΡ€ΠΎΡ‚ΠΊΠΎΠ²ΠΎΠ»Π½ΠΎΠ²ΡƒΡŽ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡ‚ΡŒ, ΠΈΠ»ΠΈ, Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΠΈΠΌΠΈ словами, красного FP с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом.

Π’ Π½Π°ΡΡ‚оящСС врСмя сущСствуСт острая Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ…ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΡΡ‚ΡŒ дальнСйшСго развития ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ΠΎΠ² Π²ΠΈΠ·ΡƒΠ°Π»ΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΠΈ биологичСских ΠΎΠ±ΡŠΠ΅ΠΊΡ‚ΠΎΠ² для выяснСния Ρ„ΡƒΠ½Π΄Π°ΠΌΠ΅Π½Ρ‚Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… основ ΠΆΠΈΠ·Π½Π΅Π΄Π΅ΡΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΠΈ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ Π² ΡƒΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ… Π½ΠΎΡ€ΠΌΡ‹ ΠΈ ΠΏΠ°Ρ‚ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΉ Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½ΠΎΠ³ΠΎ происхоТдСния. Π‘ΠΎΠ·Π΄Π°Π½ΠΈΠ΅ Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… Π²Π°Ρ€ΠΈΠ°Π½Ρ‚ΠΎΠ² флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ‹ флуорСсцСнции Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ 600 Π½ΠΌ ΠΈ ΠΏΡ€ΠΈ этом Ρ…Π°Ρ€Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ·ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΠ΅ΡΡ большим Бтоксовым сдвигом являСтся Π°ΠΊΡ‚ΡƒΠ°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠΉ Π·Π°Π΄Π°Ρ‡Π΅ΠΉ, которая ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ‚ большоС тСорСтичСскоС ΠΈ ΠΏΡ€Π°ΠΊΡ‚ичСскоС Π·Π½Π°Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅. Π‘ΠΎΠ»Π΅Π΅ Ρ‚ΠΎΠ³ΠΎ, сочСтаниС ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с Π·Π΅Π»Π΅Π½Ρ‹ΠΌ ΠΈΠ»ΠΈ синим FPs ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ Ρ‚Π°ΠΊΠΆΠ΅ использовано для ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ†Π²Π΅Ρ‚Π½ΠΎΠΉ ΠΌΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΡ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ микроскопии, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΡ‚ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²Ρ€Π΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ Π½Π°Π±Π»ΡŽΠ΄Π°Ρ‚ΡŒ Π·Π° Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡŒΠΊΠΈΠΌ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹ΠΌΠΈ процСссами.

Π’Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅

этих Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π² ΠΏΡ€Π°ΠΊΡ‚ΠΈΠΊΡƒ ΡΠΊΡΠΏΠ΅Ρ€ΠΈΠΌΠ΅Π½Ρ‚Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠΉ Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Ρ‹ Π½Π΅Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π±Π΅Π· выяснСния ΠΌΠ΅Ρ…Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ², Π»Π΅ΠΆΠ°Ρ‰ΠΈΡ… Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… свойств FPs, Π° Ρ‚Π°ΠΊΠΆΠ΅ изучСния связи ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρƒ ΠΈΡ… ΡΡ‚Ρ€ΡƒΠΊΡ‚ΡƒΡ€ΠΎΠΉ ΠΈ ΠΎΠΏΡ‚ичСскими, Π° Ρ‚Π°ΠΊΠΆΠ΅ биохимичСскими характСристиками. Π˜Π·ΡƒΡ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅Ρ…Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° большого Бтоксового сдвига Π² ΠΊΡ€Π°ΡΠ½Ρ‹Ρ… флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠ°Ρ… ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΡ‚ΡŒ Ρ€Π°Ρ†ΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΉ Π΄ΠΈΠ·Π°ΠΉΠ½ Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… красных FPs с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ΡΡƒΡ‰Π΅ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΡ… стандартных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ².

ЦСль ΠΈ Π·Π°Π΄Π°Ρ‡ΠΈ исслСдования

ЦСлью Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Ρ‹ являлось созданиС Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ Π³Π΅Π½Π° Π±Π΅Π»ΠΊΠ° mKate Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅Ρ€Π½Ρ‹Ρ… красных FPs с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом, с Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ‹ максимума флуорСсцСнции Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ 600 Π½ΠΌ, исслСдованиС связи особСнностСй ΠΏΠ΅Ρ€Π²ΠΈΡ‡Π½ΠΎΠΉ структуры Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с ΠΈΡ… ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΌΠΈ свойствами ΠΈ Ρ„отохимичСскими характСристиками, Π° Ρ‚Π°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΎΡ†Π΅Π½ΠΊΠ° возмоТности практичСского примСнСния Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… красных FPs Π² Π±Π΅Π»ΠΊΠ°Ρ… слияния с Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹ΠΌΠΈ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹ΠΌΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ Π² ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ°Ρ… Π² ΠΊΠ°Ρ‡Π΅ΡΡ‚Π²Π΅ флуорСсцСнтного ΠΌΠ°Ρ€ΠΊΠ΅Ρ€Π° для ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ†Π²Π΅Ρ‚Π½ΠΎΠΉ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΈ ΠΌΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΠΈΡ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ микроскопии in vivo.

Для достиТСния этой Ρ†Π΅Π»ΠΈ Π±Ρ‹Π»ΠΈ поставлСны ΡΠ»Π΅Π΄ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΠ΅ Π·Π°Π΄Π°Ρ‡ΠΈ:

1. ΠœΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Π°ΠΌΠΈ молСкулярного клонирования ΠΈ ΡΠ²ΠΎΠ»ΡŽΡ†ΠΈΠΈ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Ρ‚ΡŒ Π½ΠΎΠ²Ρ‹Π΅ красныС флуорСсцСнтныС Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом, ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡŽΡ‰ΠΈΠ΅ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ‹ максимума флуорСсцСнции Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ 600 Π½ΠΌ Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ Π³Π΅Π½Π° ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅Ρ€Π½ΠΎΠ³ΠΎ красного FP mKate (Π΄Π»ΠΈΠ½Π° Π²ΠΎΠ»Π½Ρ‹ флуорСсцСнции 635 Π½ΠΌ).

2. Π˜Π·ΠΌΠ΅Ρ€ΠΈΡ‚ΡŒ спСктры возбуТдСния ΠΈ ΡΠΌΠΈΡΡΠΈΠΈ флуорСсцСнции, спСктры Π΄Π²ΡƒΡ…Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ поглощСния, ΠΎΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»ΠΈΡ‚ΡŒ Π²Π΅Π»ΠΈΡ‡ΠΈΠ½Ρ‹ Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΠΈ, ΠΊΠ²Π°Π½Ρ‚ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ Π²Ρ‹Ρ…ΠΎΠ΄Π°, коэффициСнта экстинкции. яркости, скорости созрСвания Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π° ΠΈ Ρ€Π-ΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΠΈ флуорСсцСнции, ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠΌΠ΅Ρ€Π½ΠΎΠ΅ состояниС LSS-mKate Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ². Π‘Ρ€Π°Π²Π½ΠΈΡ‚ΡŒ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Π΅ характСристики с ΡΠΎΠΎΡ‚Π²Π΅Ρ‚ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΠΌΠΈ значСниями для ΡΡƒΡ‰Π΅ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‰Π΅Π³ΠΎ красного флуорСсцСнтного Π±Π΅Π»ΠΊΠ° с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом mKeima (Бтоксов сдвиг состовляСт 180 Π½ΠΌ) ΠΈ Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΠΈΠΌΠΈ страндартыми флуорСсцСнтными Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΠΈΡ… Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠΎΠ·ΠΎΠ½ΠΎΠ² флуорСсцСнции.

3. Π£ΡΡ‚Π°Π½ΠΎΠ²ΠΈΡ‚ΡŒ аминокислотныС Π·Π°ΠΌΠ΅Π½Ρ‹, отвСтствСнныС Π·Π° ΡƒΠ²Π΅Π»ΠΈΡ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ Бтоксового сдвига флуорСсцСнции, Π° Ρ‚Π°ΠΊΠΆΠ΅ Π²Π»ΠΈΡΡŽΡ‰ΠΈΠ΅ Π½Π° Π±ΠΈΠΎΡ…имичСскиС характСристики Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… LSS-mKate Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ². Π£ΡΡ‚Π°Π½ΠΎΠ²ΠΈΡ‚ΡŒ молСкулярный ΠΌΠ΅Ρ…Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ флуорСсцСнции LSS-mKate Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ².

4. ΠŸΡ€ΠΎΠ°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ возмоТности практичСского использования Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² LSS-mKate Π² ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ°Ρ… ΠΏΡƒΡ‚Π΅ΠΌ создания ΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° экспрСссии Π΅Π³ΠΎ Ρ…ΠΈΠΌΠ΅Ρ€Π½Ρ‹Ρ… гСнСтичСских конструкций с ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹ΠΌΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ Π² ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ°Ρ… ΠΌΠ»Π΅ΠΊΠΎΠΏΠΈΡ‚Π°ΡŽΡ‰ΠΈΡ…, Π° Ρ‚Π°ΠΊΠΆΠ΅ с ΠΏΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒΡŽ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ микроскопии ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Ρ‚ΡŒ возмоТности ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ†Π²Π΅Ρ‚Π½ΠΎΠ³ΠΎ мСчСния ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ Π½ΠΎΠ²Ρ‹ΠΌΠΈ LSS-mKate 1 ΠΈ LSS-mKate2 ΠΈ ΡƒΠΆΠ΅ извСстными красными FPs Π² ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… тканях.

5. Π˜ΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ возмоТности практиктичСского использования Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² LSS-mKate 1 ΠΈ LSS-mKate2 для ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ†Π²Π΅Ρ‚Π½ΠΎΠΉ Π΄Π²ΡƒΡ…Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ микроскопии ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… Ρ‚ΠΊΠ°Π½Π΅ΠΉ ΠΈ ΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ².

ΠžΠ±ΡŠΠ΅ΠΊΡ‚ исслСдования — ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄ создания ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅Ρ€Π½Ρ‹Ρ… флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ‹ флуорСсцСнции Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ 600 Π½ΠΌ ΠΈ Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтокосовым сдвигом, связь ΠΏΠ΅Ρ€Π²ΠΈΡ‡Π½ΠΎΠΉ структуры с Ρ„луорСсцСнтными ΠΈ Π±ΠΈΠΎΡ…имичСскими свойствами Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… FPsΠ²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΠΈΡ… ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ Π² ΠΊΠ»Π΅Ρ‚Ρ‡Π½ΠΎΠΉ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ ΠΈ ΠΎΠ½ΠΊΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ.

ΠŸΡ€Π΅Π΄ΠΌΠ΅Ρ‚ исслСдования — Π³Π΅Π½ FP mKate, ΠΌΡƒΡ‚Π°Π½Ρ‚Π½Ρ‹Π΅ Π²Π°Ρ€ΠΈΠ°Π½Ρ‚Ρ‹ mKate, флуорСсцСнтныС Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ LSS-mKate, ΠΈΡ… ΠΏΠ΅Ρ€Π²ΠΈΡ‡Π½Π°Ρ, вторичная ΠΈ Ρ‚рСтичная структуры, ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Π΅ ΠΈ Ρ„отохимичСскиС характСристики, Ρ…ΠΈΠΌΠ΅Ρ€Π½Ρ‹Π΅ конструкции LSS-mKate Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹ΠΌΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ.

ΠœΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Ρ‹ исслдования — молСкулярноС ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π½ΠΈΠ΅, элСктрофорСз Π² ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ°ΠΊΡ€ΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄Π½ΠΎΠΌ Π³Π΅Π»Π΅, ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Ρ‹ трансфСкции ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ Π² ΠΊΡƒΠ»ΡŒΡ‚ΡƒΡ€Π΅, случайный ΠΈ ΡΠ°ΠΉΡ‚-Π½Π°ΠΏΡ€Π°Π²Π»Π΅Π½Π½Ρ‹ΠΉ ΠΌΡƒΡ‚Π°Π³Π΅Π½Π΅Π·Ρ‹, Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· ΠΏΠ΅Ρ€Π²ΠΈΡ‡Π½ΠΎΠΉ структуры Π”ΠΠš, кристаллизация Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², спСктрофотомСтрия, спСктрофлуоримСтрия, проточная цитофлуоримСтрия, флуорСсцСнтная ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΈ двухфотонная микроскопии.

Научная Π½ΠΎΠ²ΠΈΠ·Π½Π° ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… Ρ€Π΅Π·ΡƒΠ»ΡŒΡ‚Π°Ρ‚ΠΎΠ². Π‘ΠΎΠ·Π΄Π°Π½Ρ‹ Π΄Π²Π° Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… красных Π Π Π± Π¬Π‘Π‘-шКа1Π΅1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅2 с ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΡƒΠΌΠ°ΠΌΠΈ возбуТдСния ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 460 Π½ΠΌ ΠΈ ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΡƒΠΌΠ°ΠΌΠΈ флуорСсцСнции Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ 600 Π½ΠΌ. ΠŸΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Π΅ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°Π»ΠΈ ΡƒΠ»ΡƒΡ‡ΡˆΠ΅Π½Ρ‹ΠΌΠΈ Ρ„ΠΈΠ·ΠΈΠΊΠΎ-химичСскими свойствами ΠΏΠΎ ΡΡ€Π°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡŽ с Ρ‚Π°ΠΊΠΎΠ²Ρ‹ΠΌΠΈ для СдинствСнного Ρ€Π°Π½Π΅Π΅ ΠΎΠΏΡƒΠ±Π»ΠΈΠΊΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ красного Π±Π΅Π»ΠΊΠ° с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом Ρ‚ΠšΠ΅ΠΏΠΏΠ°. ΠžΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Ρ‹ аминокислотныС ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ². УстановлСны аминокислотныС остатки, отвСтствСнныС Π·Π° ΡΠ΄Π²ΠΈΠ³ максимумов возбуТдСния Π² ΠΊΠΎΡ€ΠΎΡ‚ΠΊΠΎΠ²ΠΎΠ»Π½ΠΎΠ²ΡƒΡŽ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡ‚ΡŒ ΠΈ Π±ΠΈΠΎΡ…имичСскиС свойтсва Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ².

ΠžΠΏΠΈΡΠ°Π½Ρ‹ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Π΅ ΠΈ Ρ„отохимичСскиС свойства Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°Π³Π΅1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠœΠ΅2. Π˜Π·ΠΌΠ΅Ρ€Π΅Π½Ρ‹ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΠΏΠ΅Ρ€ΠΈΠΎΠ΄Ρ‹ формирования Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π°, ΡΡ„Ρ„Π΅ΠΊΡ‚ΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒ созрСвания Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π° ΠΈ Ρ€Π-Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡ‚ΡŒ интСнсивности флуорСсцСнции для Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ². УстановлСно, Ρ‡Ρ‚ΠΎ флуорСсцСнция Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π 88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅2 являСтся самой рН-ΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· Π²ΡΠ΅ извСстных красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ². УстановлСны структурно-Ρ„ΡƒΠ½ΠΊΡ†ΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Π΅ измСнСния Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Ρ‚ΠšΠ°{Π΅, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ ΠΎΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»ΡΡŽΡ‚ флуорСсцСнтныС ΠΈ Π±ΠΈΠΎΡ…имичСскиС свойства Π¬Π—Π²-шКагС Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π² ΠΏΡ€ΠΎΡ†Π΅ΡΡΠ΅ искусствСнного ΠΎΡ‚Π±ΠΎΡ€Π°.

Π’ΠΏΠ΅Ρ€Π²Ρ‹Π΅ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΠΏΡ€ΠΈ сравнСнии с Π°Π½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈΡ‡Π½Ρ‹ΠΌΠΈ характСристиками ΡƒΠΆΠ΅ ΡΡƒΡ‰Π΅ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‰Π΅Π³ΠΎ красного Π Π’ Ρ‚ΠšΠ΅ΠΏΠΏΠ° с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом, Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡŽΡ‚ сущСствСнными прСимущСствами для примСнСния Π² ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½ΠΎΠΉ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ.

Π‘Ρ‹Π»ΠΈ Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½Ρ‹ кристалличСскиС структуры Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1с1 ΠΈ 1>88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅2 Π²ΠΎ Ρ„луорСсцСнтных состояниях с Ρ€Π°Π·Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ 2.0 ΠΈ 1.5 А. Π˜Π·ΡƒΡ‡Π΅Π½Ρ‹ зависимости ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… характСристик Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π¬88-шКа1Π΅2 ΠΎΡ‚ Ρ‚Π΅ΠΌΠΏΠ΅Ρ€Π°Ρ‚ΡƒΡ€Ρ‹, рН ΡΡ€Π΅Π΄Ρ‹, ΠΏΡ€ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎ-Π΄Π΅ΠΉΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ состава растворитСля. На ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… Π΄Π°Π½Π½Ρ‹Ρ… Π±Ρ‹Π»ΠΈ ΠΏΡ€Π΅Π΄Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½Ρ‹ молСкулярныС ΠΌΠ΅Ρ…Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΡ‹ большого Бтоксового сдвига для Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π 88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅2.

Π’ΠΏΠ΅Ρ€Π²Ρ‹Π΅ Π±Ρ‹Π»Π° ΠΏΡ€Π΅Π΄Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π° схСма Ρ€Π°Ρ†ΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΈΠ·Π°ΠΉΠ½Π° Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ΡƒΠΆΠ΅ ΡΡƒΡ‰Π΅ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΡ… стандартных красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ². Π˜ΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΡ Π΄Π°Π½Π½ΡƒΡŽ ΡΡ‚Ρ€Π°Ρ‚Π΅Π³ΠΈΡŽ, Π±Ρ‹Π»Π° ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π° сСрия флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡŽΡ‚ максимумами флуорСсцСнции Π² ΡˆΠΈΡ€ΠΎΠΊΠΎΠΌ Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π΅ Π΄Π»ΠΈΠ½ Π²ΠΎΠ»Π½ ΠΎΡ‚ 560 Π΄ΠΎ 640 Π½ΠΌ.

Показано, Ρ‡Ρ‚ΠΎ Π½ΠΎΠ²Ρ‹Π΅ РРэ Π¬88-шКа1Π΅ Ρ€Π°ΡΡˆΠΈΡ€ΡΡŽΡ‚ возмоТности ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ†Π²Π΅Ρ‚Π½ΠΎΠ³ΠΎ мСчСния ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ для Π΄Π²ΡƒΡ…Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ микроскопии, добавляя Π½ΠΎΠ²Ρ‹ΠΉ красный Ρ†Π²Π΅Ρ‚, ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎ ΠΎΡ‚Π»ΠΈΡ‡Π°ΡŽΡ‚ΡΡ ΠΎΡ‚ ΡΡƒΡ‰Π΅ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΡ… красных Π Π Π± ΠΏΡ€ΠΈ использовании для ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ†Π²Π΅Ρ‚Π½ΠΎΠΉ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ микроскопии. Π’ΠΏΠ΅Ρ€Π²Ρ‹Π΅ Π±Ρ‹Π»Π° ΠΏΡ€ΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Π° многоцвСтовая двухфотонная микроскопия с ΡΡƒΠ±ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹ΠΌ Ρ€Π°Π·Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π² Ρ€Π΅ΠΆΠΈΠΌΠ΅ Ρ€Π΅Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π²Ρ€Π΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… Ρ‚ΠΊΠ°Π½Π΅ΠΉ. Π”Π°Π½Π½ΠΎΠ΅ прСимущСство Π±Ρ‹Π»ΠΎ использовано для Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎ располоТСния ΠΎΡ€Π³Π°Π½Π΅Π»Π» ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ Π² Ρ€Π°ΠΊΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΎΠΏΡƒΡ…ΠΎΠ»ΠΈ ΠΊΠ°ΠΊ Ρ„ΡƒΠ½ΠΊΡ†ΠΈΠΈ расстояния Π΄ΠΎ Π±Π»ΠΈΠΆΠ°ΠΉΡˆΠ΅Π³ΠΎ кровСносного сосуда. Высокая Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ LSS-mKate Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² сдСлала Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½Ρ‹ΠΌ Π΄Π»ΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ΅ наблюдСниС Π·Π° ΠΎΡ‚Π΄Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎ взятой ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠΎΠΉ ΠΏΡ€ΠΈ Π΅Π΅ ΠΌΠΈΠ³Ρ€Π°Ρ†ΠΈΠΈ Π² Ρ€Π°ΠΊΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΎΠΏΡƒΡ…ΠΎΠ»ΠΈ. Анализ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… ΠΈΠ·ΠΎΠ±Ρ€Π°ΠΆΠ΅Π½Π½Ρ‹ΠΉ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π», ΠΏΠΎΠ»ΡΡ€ΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΡŽ ΠΏΠ°Ρ€ комплСкс Π“ΠΎΠ»ΡŒΠ΄ΠΆΠΈ-ядро Π² Ρ€Π°ΠΊΠΎΠ²Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ°Ρ…, располоТСнных Π² Π½Π΅ΠΏΠΎΡ€Π΅Π΄ΡΡ‚Π²Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ близости ΠΎΡ‚ ΠΊΡ€ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ сосуда (ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ 40 ΠΌΠΊΠΌ).

ΠŸΡ€Π°ΠΊΡ‚ΠΈΡ‡Π΅ΡΠΊΠΎΠ΅ Π·Π½Π°Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… Ρ€Π΅Π·ΡƒΠ»ΡŒΡ‚Π°Ρ‚ΠΎΠ². ΠŸΡ€Π°ΠΊΡ‚ΠΈΡ‡Π΅ΡΠΊΠΎΠ΅ Π·Π½Π°Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ Ρ€Π΅Π·ΡƒΠ»ΡŒΡ‚Π°Ρ‚ΠΎΠ² диссСртационной Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Ρ‹ состоит ΠΏΡ€Π΅ΠΆΠ΄Π΅ всСго Π² Ρ‚ΠΎΠΌ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ Π½ΠΎΠ²Ρ‹Π΅ красныС флуорСсцСнтныС Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ LSS-mKate ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ эффСктивно ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ‹ для ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ†Π²Π΅Ρ‚Π½ΠΎΠΉ Π΄Π²ΡƒΡ…Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ микроскопии ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… Ρ‚ΠΊΠ°Π½Π΅ΠΉ. Π‘ΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Π΅ характСристики LSS-mKate Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² ΠΎΠΏΡ‚ΠΈΠΌΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹ для Π²ΠΈΠ·ΡƒΠ°Π»ΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΠΈ ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ ΠΈ Ρ‚ΠΊΠ°Π½Π΅ΠΉ с ΡΡƒΠ±ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹ΠΌ Ρ€Π°Π·Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π² Ρ‚Π΅Ρ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π»ΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π²Ρ€Π΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ. Π‘Π΅Π»ΠΊΠΈ LSS-mKate Π»ΠΈΡˆΠ΅Π½Ρ‹ Ρ‚Π°ΠΊΠΈΡ… ΡΠ΅Ρ€ΡŒΠ΅Π·Π½Ρ‹Ρ… нСдостатков, ΠΊΠ°ΠΊ ΡΠΊΠ»ΠΎΠ½Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΠΊ Π°Π³Ρ€Π΅Π³Π°Ρ†ΠΈΠΈ Π² ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ°Ρ…, низкая рН-ΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΠΈ ΠΎΡΡ‚аточная зСлСная флуорСсцСнция ΠΈ, Ρ‚Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·ΠΎΠΌ, ΠΈΠΌΠ΅ΡŽΡ‚ большой ΠΏΠΎΡ‚Π΅Π½Ρ†ΠΈΠ°Π» примСнСния Π² Π±ΠΈΠΎΡ‚Π΅Ρ…Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ. Π‘ΠΎΠ·Π΄Π°Π½Π½Ρ‹Π΅ FPs Ρ€Π°ΡΠΊΡ€Ρ‹Π²Π°ΡŽΡ‚ Π½ΠΎΠ²Ρ‹Π΅ возмоТности ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ†Π²Π΅Ρ‚Π½ΠΎΠ³ΠΎ мСчСния биологичСских ΠΎΠ±ΡŠΠ΅ΠΊΡ‚ΠΎΠ², ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡŒΠΊΡƒ ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ эффСктивно ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎ Ρ€Π°Π·Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½Ρ‹ с Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΠΈΠΌΠΈ стандартными флуорСсцСнтными Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ. Π’ ΠΏΠ°Ρ€Π΅ с ΡƒΠΆΠ΅ ΡΡƒΡ‰Π΅ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΠΌΠΈ синими FPs, LSS-mKatel ΠΈ LSS-mKate2 ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒΡΡ для создания молСкулярных биосСнсоров, Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Π°ΡŽΡ‰ΠΈΡ… Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ Π±Π΅Π·ΠΈΠ·Π»ΡƒΡ‡Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ пСрСноса энСргии (FRET). Π‘Π΅Π»ΠΊΠΈ LSS-mKate Π²ΠΎΠ·Π±ΡƒΠΆΠ΄Π°ΡŽΡ‚ΡΡ стандартными синими Π»Π°Π·Π΅Ρ€Π°ΠΌΠΈ 407 ΠΈΠΌ ΠΈ 457 Π½ΠΌ ΠΏΡ€ΠΎΡ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹Ρ… Ρ†ΠΈΡ‚ΠΎΡ„Π»ΡƒΠΎΡ€ΠΈΠΌΠ΅Ρ‚Ρ€ΠΎΠ², благодаря Ρ‡Π΅ΠΌΡƒ ΠΌΠΎΠ³ΡƒΡ‚ ΡΡ‚Π°Ρ‚ΡŒ ΠΏΠΎΠ»Π΅Π·Π½Ρ‹ΠΌ инструмСнтом для биомСдицинских исслСдований.

ΠŸΡ€Π΅Π΄Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π½Π°Ρ схСма Ρ€Π°Ρ†ΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΈΠ·Π°ΠΉΠ½Π° красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ использована для получСния Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½Ρ‹Ρ… FPs с ΡƒΠ»ΡƒΡ‡ΡˆΠ΅Π½Π½Ρ‹ΠΌΠΈ ΠΈ Π·Π°Π΄Π°Π½Π½Ρ‹ΠΌΠΈ свойствами.

1. ΠžΠ‘Π—ΠžΠ  Π›Π˜Π’Π•Π ΠΠ’Π£Π Π«.

Π’ 1663 Π³ΠΎΠ΄Ρƒ английский Π΅ΡΡ‚Π΅ΡΡ‚Π²ΠΎΠΈΡΠΏΡ‹Ρ‚Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒ Π ΠΎΠ±Π΅Ρ€Ρ‚ Π“ΡƒΠΊ, рассматривая Ρ‚ΠΎΠ½ΠΊΠΈΠΉ срСз Π±ΡƒΡ‚Ρ‹Π»ΠΎΡ‡Π½ΠΎΠΉ ΠΏΡ€ΠΎΠ±ΠΊΠΈ ΠΏΠΎΠ΄ ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠΈΡ‚ΠΈΠ²Π½Ρ‹ΠΌ микроскопом, Π·Π°ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΈΠ», Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΠΈΠ·ΡƒΡ‡Π°Π΅ΠΌΡ‹ΠΉ ΠΏΡ€Π΅Π΄ΠΌΠ΅Ρ‚ ΠΏΡ€ΠΎΠ½ΠΈΠ·Π°Π½ ΠΌΠ΅Π»ΡŒΡ‡Π°ΠΉΡˆΠΈΠΌΠΈ отвСрстиями ΠΈ ΠΏΠΎΡ€Π°ΠΌΠΈ. НаблюдаСмоС Π½Π°ΠΏΠΎΠΌΠ½ΠΈΠ»ΠΎ Π“ΡƒΠΊΡƒ ΠΌΠ΅Π΄ΠΎΠ²Ρ‹Π΅ соты ΠΈΠ»ΠΈ монашСскиС кСльи, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ Π½Π°Π·Ρ‹Π²Π°Π»ΠΈΡΡŒ «cellula». Π ΠΎΠ±Π΅Ρ€Ρ‚ Π“ΡƒΠΊ Π΄Π°Π» ΠΈΠΌ Π½Π°Π·Π²Π°Π½ΠΈΠ΅ ячСйки ΠΈΠ»ΠΈ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠΈ, Ρ‚Π΅ΠΌ самым ввСдя Ρ‚Π΅Ρ€ΠΌΠΈΠ½ для обозначСния ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… ΡΡ‚Ρ€ΠΎΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… Π±Π»ΠΎΠΊΠΎΠ² всСх ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… ΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ². Π˜Π·ΠΎΠ±Ρ€Π΅Ρ‚Π΅Π½Π½Ρ‹ΠΉ Π“ΡƒΠΊΠΎΠΌ микроскоп с 50 ΠΊΡ€Π°Ρ‚Π½Ρ‹ΠΌ ΡƒΠ²Π΅Π»ΠΈΡ‡Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ» Π·Π°Π³Π»ΡΠ½ΡƒΡ‚ΡŒ Π² Ρ€Π°Π½Π½Π΅Π΅ Π½Π΅ Π²ΠΈΠ΄ΠΈΠΌΡ‹ΠΉ микроскопичСский ΠΌΠΈΡ€. Бпустя 330 Π»Π΅Ρ‚ Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΠΎΠ΅ Π·Π½Π°ΠΌΠ΅Π½Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ΅ ΠΎΡ‚ΠΊΡ€Ρ‹Ρ‚ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ»ΠΎ Π²Π·Π³Π»ΡΠ½ΡƒΡ‚ΡŒ Π½Π° ΠΌΠΈΡ€ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ Π² Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΠΎΠΌ свСтС. Π­Ρ‚ΠΎ Π±Ρ‹Π» 1994 Π³ΠΎΠ΄, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΠœΠ°Ρ€Ρ‚ΠΈΠ½ Π§Π°Π»Ρ„ΠΈ с ΡΠΎΡ‚Ρ€ΡƒΠ΄Π½ΠΈΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΠΎΠΏΡƒΠ±Π»ΠΈΠΊΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ Π² ΠΆΡƒΡ€Π½Π°Π»Π΅ Science ΡΡ‚Π°Ρ‚ΡŒΡŽ, Π² ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΈ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ GFP ΠΈΠ· ΠΌΠ΅Π΄ΡƒΠ·Ρ‹ Aequorea victoria ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ использован ΠΊΠ°ΠΊ ΠΌΠ°Ρ€ΠΊΠ΅Ρ€ Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², Π³Π΅Π½Ρ‹ ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Ρ… ΡΠΊΡΠΏΡ€Π΅ΡΡΠΈΡ€ΡƒΡŽΡ‚ΡΡ Π² ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ°Ρ… Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΉ ΠΈ Ρ‡Π΅Ρ€Π²Π΅ΠΉ [28]. БовмСстно с Π½ΠΎΠ²Ρ‹ΠΌΠΈ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Π°ΠΌΠΈ микроскопии ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π³Π΅Π½Π° GFP ΠΈ Π΅Π³ΠΎ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΎΠ² ΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡƒΡŽΡ‰Π΅Π΅ ΡƒΡΠΏΠ΅ΡˆΠ½ΠΎΠ΅ ΠΈΡ… ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π² ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ°Ρ… качСствСнно ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½ΠΈΠ»ΠΎ ΠΏΡ€ΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ исслСдований Π² Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ ΠΈ ΠΌΠ΅Π΄ΠΈΡ†ΠΈΠ½Π΅. Π’ Π½Π°ΡΡ‚оящСС врСмя GFP ΠΈ Π΅Π³ΠΎ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈ ΡΠ²Π»ΡΡŽΡ‚ΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΈΠΌΠΈ ΠΈΠ· Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡˆΠΈΡ€ΠΎΠΊΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΠ΅ΠΌΡ‹Ρ… гСнСтичСски ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡ€ΡƒΠ΅ΠΌΡ‹Ρ… ΠΌΠ°Ρ€ΠΊΠ΅Ρ€ΠΎΠ² Π² Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹Ρ… областях Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ ΠΈ ΠΌΠ΅Π΄ΠΈΡ†ΠΈΠ½Ρ‹.

Π²Ρ‹Π²ΠΎΠ΄Ρ‹.

Π’ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ диссСртационной Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Π΅ ΠΏΡ€ΠΈΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Ρ‹ Ρ€Π΅Π·ΡƒΠ»ΡŒΡ‚Π°Ρ‚Ρ‹ Ρ€Π°Π·Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚ΠΊΠΈ ΠΈ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ структурно-Ρ„ΡƒΠ½ΠΊΡ†ΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… свойств Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… красных РРэ Π¬58-Ρ‚ΠšΠ°!Π΅1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅2 с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом: аминокислотной ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΠΈ ΠΈ Π·Π°ΠΌΠ΅Π½, отвСтствСнных Π·Π° ΠΊΡ€Π°ΡΠ½ΡƒΡŽ Ρ„Π»ΡƒΠΎΡ€Π΅ΡΡ†Π΅Π½Ρ†ΠΈΡŽ с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом, ΡΠΊΠΎΡ€ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΠΈ ΡΡ„Ρ„Π΅ΠΊΡ‚ΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒ созрСвания Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π°, Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡ‚ΡŒ интСнсивности флуорСсцСнции ΠΎΡ‚ Ρ€Π. ΠŸΡ€ΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Ρ‹ измСрСния ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… ΠΈ Ρ„отохимичСских характСристик Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π¬88-шКа1Π΅2 ΠΈ ΠΈΡ… ΡΡ€Π°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ с ΡΠΎΠΎΡ‚Π²Π΅Ρ‚ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΠΌΠΈ ΠΏΠ°Ρ€Π°ΠΌΠ΅Ρ‚Ρ€Π°ΠΌΠΈ СдинствСнного извСстного красного Π‘Π  с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом Ρ‚ΠšΠ΅Ρ‚Π°. Π‘Π΅Π»ΠΊΠΈ 1Π₯8-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°Π³Π΅2 Ρ…Π°Ρ€Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ·ΡƒΡŽΡ‚ΡΡ быстрым ΠΈ ΠΏΠΎΠ»Π½Ρ‹ΠΌ созрСваниСм Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π°, высокой рН ΠΈ Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒΡŽ ΠΈ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΎΠΉ Ρ†ΠΈΡ‚ΠΎΡ‚ΠΎΠΊΡΠΈΡ‡Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒΡŽ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ Π΄Π΅Π»Π°Π΅Ρ‚ эти Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ ΠΏΡ€ΠΈΠ²Π»Π΅ΠΊΠ°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΌΠΈ флуорСсцСнтными ΠΌΠ°Ρ€ΠΊΠ΅Ρ€Π°ΠΌΠΈ для молСкулярной ΠΈ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½ΠΎΠΉ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ. Π Π΅ΡˆΠ΅Π½Ρ‹ кристалличСскиС структуры Π¬Π—ΠΉ-Ρ‚ΠšΠ°Π‘Π΅ 1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅2 Π² ΠΈΡ… Ρ„луорСсцСнтном состоянии с Ρ€Π°Π·Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ 2.0 ΠΈ 1.5 А, соотвСтствСнно. Анализ кристалличСских структур Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°Π³Π΅1 ΠΈ Π¬88-шКа1Π΅2 совмСстно с Π΄Π°Π½Π½Ρ‹ΠΌΠΈ ΠΌΡƒΡ‚Π°Π³Π΅Π½Π΅Π·Π° ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚роскопичСскими исслСдованиями ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ»ΠΈ ΡƒΡΡ‚Π°Π½ΠΎΠ²ΠΈΡ‚ΡŒ молСкулярный ΠΌΠ΅Ρ…Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ красной флуорСсцСнции с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом. ПониманиС структурных особСнностСй Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ»ΠΎ Ρ€Π°Π·Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Π°Ρ‚ΡŒ ΡΡ‚Ρ€Π°Ρ‚Π΅Π³ΠΈΡŽ для Ρ€Π°Ρ†ΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΈΠ·Π°ΠΉΠ½Π° Π Π Π± с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом. Данная стратСгия Π±Ρ‹Π»Π° ΡƒΡΠΏΠ΅ΡˆΠ½ΠΎ использована для получСния сСрии Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… ΠΎΡ€Π°Π½ΠΆΠ΅Π²Ρ‹Ρ… ΠΈ ΠΊΡ€Π°ΡΠ½Ρ‹Ρ… Π‘Π Π± с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом. ΠŸΡ€ΠΎΠ΄Π΅ΠΌΠΎΠ½ΡΡ‚Ρ€ΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½Ρ‹ возмоТности ΠΈ ΠΏΡ€Π΅ΠΈΠΌΡƒΡ‰Π΅ΡΡ‚Π²Π° практичСского примСнСния Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π¬88-шКа1Π΅2 ΠΊΠ°ΠΊ Π΄ΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ красного Ρ†Π²Π΅Ρ‚Π° Π² ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½ΠΎΠΉ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ Π½Π° ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Ρ€Π°Ρ… флуорСсцСнтной микроскопии.

1. ΠœΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Π°ΠΌΠΈ молСкулярного клонирования ΠΈ ΡΠ²ΠΎΠ»ΡŽΡ†ΠΈΠΈ Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ΠΊΠ”ΠΠš ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅Ρ€Π½ΠΎΠ³ΠΎ красного Π‘Π  шКа! Π΅ (максимумы возбуТдСния 588 Π½ΠΌ ΠΈ Ρ„луорСсцСнции 635 Π½ΠΌ), созданы ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅Ρ€Π½Ρ‹ΠΉ красный флуорСсцСнтныС Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π¬88-шКа1Π΅2 с ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΡƒΠΌΠ°ΠΌΠΈ возбуТдСния ΠΈ Ρ„луорСсцСнции 463/624 Π½ΠΌ ΠΈ 460/605 Π½ΠΌ, соотвСтствСнно.

2. УстановлСно, Ρ‡Ρ‚ΠΎ аминокислотнаС ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΠΈ Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°Π“Π΅2 отличаСтся ΠΎΡ‚ ΠΈΡΡ…ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ Ρ‚ΠšΠ°1Π΅ Π·Π°ΠΌΠ΅Π½Π°ΠΌΠΈ ΡˆΠ΅ΡΡ‚ΠΈ аминокислотных остатков, Π° ΠΈΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ Π¬ΡƒΠ‘Π±9Π’ΡƒΠ³, Π Π³ΠΎ13ПΠͺΠ³, 8Π΅Π³14 801Ρƒ, МСаб701ΠΈ, Π’Π«-Π¨Π‘Π΅Π³, МСП96Π£Π°1 ΠΈ Π¬ΡƒΠ²69Π’ΡƒΠ³, Π Π³ΠΎΠ¨Π’Π¬Π³, 8Π΅Π³14 801Ρƒ, МСаб7Азр, Π’Π¬Π³1838Π΅Π³, МС1196Π£Π°1, соотвСствСнно.

Π’Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅

Π³Π»ΡƒΡ‚Π°ΠΌΠΈΠ½ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ аспарагиновой аминокислот (167Glu ΠΈΠ»ΠΈ 167Asp), ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ находятся Π² ΠΌΠΈΠΊΡ€ΠΎΠΎΠΊΡ€ΡƒΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π½ΠΎΠ³ΠΎ Ρ„Π΅Π½ΠΎΠ»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Ρ†ΠΈΠΊΠ»Π°, ΠΏΡ€ΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ‚ ΠΊ Π²ΠΎΠ·Π½ΠΈΠΊΠΎΠ½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΡ красной флуорСсцСнции с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом. ΠœΡƒΡ‚Π°Ρ†ΠΈΠΈ Lys69Tyr ΠΈ Serl48Gly Π·Π½Π°Ρ‡ΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ²Ρ‹ΡˆΠ°ΡŽΡ‚ рНи Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ, Π° Π·Π°ΠΌΠ΅Π½Ρ‹ ProlSlThr ΠΈ Thrl83Ser ΡƒΠ²Π΅Π»ΠΈΡ‡ΠΈΠ²Π°ΡŽΡ‚ ΡΠΊΠΎΡ€ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΠΈ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡ‚Ρƒ созрСвания Ρ…Ρ€ΠΎΠΌΠΎΡ„ΠΎΡ€Π°.

3. Π’ Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Π΅ прСдставлСны Ρ€Π΅Π·ΡƒΠ»ΡŒΡ‚Π°Ρ‚Ρ‹ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Ρ€Π΅Π½ΠΈΠΉ основных Ρ„ΠΈΠ·ΠΈΠΊΠΎ-химичСских характСристик FP LSS-mKatel ΠΈ LSS-mKate2: ΠΊΠ²Π°Π½Ρ‚ΠΎΠ²Ρ‹Π΅ Π²Ρ‹Ρ…ΠΎΠ΄Ρ‹ Ρ€Π°Π²Π½Ρ‹ 0.08 ΠΈ 0.17- молярныС коэффициСнты экстинкции Ρ€Π°Π²Π½Ρ‹ 31,200 ΠΈ 26,000 М^см" 1- рН-ΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»Ρ‹ΡŽΡΡ‚ΡŒ с Π²Π΅Π»ΠΈΡ‡ΠΈΠ½Π°ΠΌΠΈ Ρ€ΠšΠ° Ρ€Π°Π²Π½Ρ‹ΠΌΠΈ 3.2 ΠΈ 2.7- ΠΏΠΎΠ»ΡƒΠΏΠ΅Ρ€ΠΈΠΎΠ΄ фотообСсцвСчивания — 60 ΠΈ 44 сСкундполупСриоды созрСвания ΠΏΡ€ΠΈ 37 Β°C Ρ€Π°Π²Π½Ρ‹Π΅ 100 ΠΈ 150 ΠΌΠΈΠ½ΡƒΡ‚Π°ΠΌΠΈ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½Π° ΠΌΠΎΠ½ΠΎΠΌΠ΅Ρ€Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ². ΠžΠΏΡ€Π΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Ρ‹ Π΄Π²ΡƒΡ…Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½Ρ‹Π΅ характСристики LSS-mKatel ΠΈ LSS-mKate2 Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², Ρ‚Π°ΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠ°ΠΊ Π΄Π²ΡƒΡ…Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½Ρ‹Π΅ спСктры возбуТдСния ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΠΏΠ΅Ρ€ΠΈΠΎΠ΄Ρ‹ фотообСсцвСчивания ΠΏΡ€ΠΈ Π΄Π²ΡƒΡ…Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠΌ Π²ΠΎΠ·Π±ΡƒΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠΈ.

4. Показано, Ρ‡Ρ‚ΠΎ, ΠΏΠΎ ΡΡ€Π°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡŽ с Π΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡ‚Π²Π΅Π½Π½Ρ‹ΠΌ описанным красным FPs с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом mKeima, LSS-mKatel ΠΈ LSS-mKate2 ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡŽΡ‚ рядом прСимущСств, Ρ‚Π°ΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΊΠ°ΠΊ высокая рН-ΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ ΠΈ Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ, отсутствиС остаточной красной флуорСсцСнции со ΡΡ‚Π°Π½Π΄Π°Ρ€Ρ‚Π½Ρ‹ΠΌ Бтоксовым сдвигом. Π‘ΠΎΠ»Π΅Π΅ Ρ‚ΠΎΠ³ΠΎ LSS-mKatel ΠΈ LSS-mKate2 ΡΠ²Π»ΡΡŽΡ‚ΡΡ самыми рН-ΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΌΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ срСди всСх красных FPs извСстных Π½Π° Π΄Π°Π½Π½Ρ‹ΠΉ ΠΌΠΎΠΌΠ΅Π½Ρ‚.

5. Π‘Ρ‹Π»ΠΈ Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½Ρ‹ кристалличСскиС структуры Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² LSS-mKatel ΠΈ LSS-mKate2 Π²ΠΎ Ρ„луорСсцСнтных состояниях с Ρ€Π°Π·Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ 2.0 ΠΈ 1.5 А. Π˜Π·ΡƒΡ‡Π΅Π½Ρ‹ зависимости ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… характСристик Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² LSS-mKatel ΠΈ LSS-mKate2 ΠΎΡ‚ Ρ‚Π΅ΠΌΠΏΠ΅Ρ€Π°Ρ‚ΡƒΡ€Ρ‹. рН ΡΡ€Π΅Π΄Ρ‹, ΠΏΡ€ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎ-Π΄Π΅ΠΉΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ состава растворитСля. На ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… Π΄Π°Π½Π½Ρ‹Ρ… Π±Ρ‹Π»ΠΎ Π΄ΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ пСрСнос ΠΏΡ€ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π° Π² Π²ΠΎΠ·Π±ΡƒΠΆΠ΄Π΅Π½Π½ΠΎΠΌ состянии ESPT отвСтсвСнСн Π·Π° Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΎΠΉ Бтоксов сдвиг Π² Π±Π΅Π»ΠΊΠ°Ρ… LSS-mKatel ΠΈ LSS-mKate2.

6. Π’ΠΏΠ΅Ρ€Π²Ρ‹Π΅ Π±Ρ‹Π»Π° ΠΏΡ€Π΅Π΄Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π° схСма Ρ€Π°Ρ†ΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΈΠ·Π°ΠΉΠ½Π° Π½ΠΎΠ²Ρ‹Ρ… красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ΡƒΠΆΠ΅ ΡΡƒΡ‰Π΅ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΡ… стандартных красных флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ². Π˜ΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΡ Π΄Π°Π½Π½ΡƒΡŽ ΡΡ‚Ρ€Π°Ρ‚Π΅Π³ΠΈΡŽ, Π±Ρ‹Π»Π° ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π° сСрия флуорСсцСнтных Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² с Π±ΠΎΠ»ΡŒΡˆΠΈΠΌ Бтоксовым сдвигом, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡŽΡ‚ максимумами флуорСсцСнции Π² ΡˆΠΈΡ€ΠΎΠΊΠΎΠΌ Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π΅ Π΄Π»ΠΈΠ½ Π²ΠΎΠ»Π½ ΠΎΡ‚ 560 Π΄ΠΎ 640 Π½ΠΌ.

7. На ΠΌΠΎΠ΄Π΅Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… экспСримСнтах продСмонстрированы возмоТности Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π¬Π‘Π‘-шКа1Π΅2 ΠΊΠ°ΠΊ флуорСсцСнтных ΠΌΠ°Ρ€ΠΊΠ΅Ρ€ΠΎΠ². Π‘ΠΎΠ·Π΄Π°Π½Ρ‹ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ слияния Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅1 ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅2 с 6-ю Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹ΠΌΠΈ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹ΠΌΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΠΈ 3-мя Π»ΠΎΠΊΠ°Π»ΠΈΠ·ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΠΌΠΈ ΠΏΠ΅ΠΏΡ‚ΠΈΠ΄Π°ΠΌΠΈ. ΠžΡ‚ΠΌΠ΅Ρ‡Π΅Π½Π° спСцифичСская локализация всСх ΠΌΠ΅Ρ‡Π΅Π½Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², отсутствиС Π°Π³Ρ€Π΅Π³Π°Ρ‚ΠΎΠ² ΠΈ Π²Ρ‹ΡΠΎΠΊΠ°Ρ рНи Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ, Ρ‡Ρ‚ΠΎ ΡΠ²ΠΈΠ΄Π΅Ρ‚Π΅Π»ΡŒΡΡ‚Π²ΡƒΠ΅Ρ‚ ΠΎΠ± ΠΎΠΏΡ‚ΠΈΠΌΠ°Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΠΈ Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Π² ΠΊΠ°Ρ‡Π΅ΡΡ‚Π²Π΅ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ°Ρ€ΠΊΠ΅Ρ€Π°.

8. Показано, Ρ‡Ρ‚ΠΎ Π½ΠΎΠ²Ρ‹Π΅ Π Π Π± Π¬88-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅ Ρ€Π°ΡΡˆΠΈΡ€ΡΡŽΡ‚ возмоТности ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ†Π²Π΅Ρ‚Π½ΠΎΠ³ΠΎ мСчСния ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ для Π΄Π²ΡƒΡ…Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ микроскопии, добавляя Π½ΠΎΠ²Ρ‹ΠΉ красный Ρ†Π²Π΅Ρ‚, ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡ‚Ρ€Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎ ΠΎΡ‚Π»ΠΈΡ‡Π°ΡŽΡ‚ΡΡ ΠΎΡ‚ ΡΡƒΡ‰Π΅ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΡ… красных Π Π Π± ΠΏΡ€ΠΈ использовании для ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡ†Π²Π΅Ρ‚Π½ΠΎΠΉ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡ„ΠΎΡ‚ΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ микроскопии.

9. Π’ΠΏΠ΅Ρ€Π²Ρ‹Π΅ Π±Ρ‹Π»Π° ΠΏΡ€ΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Π° многоцвСтовая двухфотонная микроскопия с ΡΡƒΠ±ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΡ‡Π½Ρ‹ΠΌ Ρ€Π°Π·Ρ€Π΅ΡˆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π² Ρ€Π΅ΠΆΠΈΠΌΠ΅ Ρ€Π΅Π°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π²Ρ€Π΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ ΠΆΠΈΠ²Ρ‹Ρ… Ρ‚ΠΊΠ°Π½Π΅ΠΉ. Π”Π°Π½Π½ΠΎΠ΅ прСимущСство Π±Ρ‹Π»ΠΎ использовано для Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎ располоТСния ΠΎΡ€Π³Π°Π½Π΅Π»Π» ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΎΠΊ Π² Ρ€Π°ΠΊΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΎΠΏΡƒΡ…ΠΎΠ»ΠΈ ΠΊΠ°ΠΊ Ρ„ΡƒΠ½ΠΊΡ†ΠΈΠΈ расстояния Π΄ΠΎ Π±Π»ΠΈΠΆΠ°ΠΉΡˆΠ΅Π³ΠΎ кровСносного сосуда. Высокая Ρ„ΠΎΡ‚ΠΎΡΡ‚Π°Π±ΠΈΠ»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ Π¬Π‘8-Ρ‚ΠšΠ°1Π΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² сдСлала Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½Ρ‹ΠΌ Π΄Π»ΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ΅ наблюдСниС Π·Π° ΠΎΡ‚Π΄Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎ взятой ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠΎΠΉ ΠΏΡ€ΠΈ Π΅Π΅ ΠΌΠΈΠ³Ρ€Π°Ρ†ΠΈΠΈ Π² Ρ€Π°ΠΊΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΎΠΏΡƒΡ…ΠΎΠ»ΠΈ. Анализ ΠΏΠΎΠ»ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… ΠΈΠ·ΠΎΠ±Ρ€Π°ΠΆΠ΅Π½Π½Ρ‹ΠΉ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π» ΠΏΠΎΠ»ΡΡ€ΠΈΠ·Π°Ρ†ΠΈΡŽ ΠΏΠ°Ρ€ комплСкс Π“ΠΎΠ»ΡŒΠ΄ΠΆΠΈ-ядро Π² Ρ€Π°ΠΊΠΎΠ²Ρ‹Ρ… ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ°Ρ…, располоТСнных Π² Π½Π΅ΠΏΠΎΡ€Π΅Π΄ΡΡ‚Π²Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ близости ΠΎΡ‚ ΠΊΡ€ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ сосуда (ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ 40 ΠΌΠΊΠΌ).

ΠŸΠΎΠΊΠ°Π·Π°Ρ‚ΡŒ вСсь тСкст

Бписок Π»ΠΈΡ‚Π΅Ρ€Π°Ρ‚ΡƒΡ€Ρ‹

  1. Heim R. Wavelength mutations and posttranslational autoxidation of green fluorescent protein / R. Heim, D. C. Prasher, R. Y. Tsien // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. — 1994. — V. 91. — P. 1 250 112 504.
  2. Tsien R. Y. The green fluorescent protein / R. Y. Tsien // Annu. Rev. Biochem. 1998. — V. 67. -P. 509−544.
  3. Understanding, improving and using green fluorescent proteins / A. B. Cubitt, R. Heim, S. R. Adams et al. // Trends Biochem. Sei. 1995. — V. 20. — P. 448−455.
  4. Review — The fluorescent toolbox for assessing protein location and function / B. N. G. Giepmans, S. R. Adams, M. H. Ellisman and R. Y. Tsien // Science. 2006. — V. 312. — P. 217 224.
  5. Fluorescent proteins as biomarkers and biosensors: throwing color lights on molecular and cellular processes / O.V. Stepanenko, V.V. Verkhusha, I.M. Kuznetsova et al. // Curr. Protein Pept. Sei. 2008. — V. 9. — P. 338−369.
  6. Zacharias D. A. Recent advances in technology for measuring and manipulating cell signals / D. A. Zacharias, G. S. Baird, R. Y. Tsien // Curr. Opin. Neurobiol. 2000. — V. 10. — P. 416−421.
  7. Dynamic redistribution of calmodulin in HeLa cells during cell division as revealed by a GFP-calmodulin fusion protein technique / C. J. Li, R. Heim, P. Lu et al. // J. Cell Sei. 1999.- V. 112. -P. 1567−1577.
  8. Transgenic mice expressing a pH and Cl-sensing yellow-fluorescent protein under the control of a potassium channel promoter / F. Metzger, V. Repunte-Canonigo, S. Matsushita et al. // Eur. J. Neurosci. 2002. — V. 15. — P. 40−50.
  9. Hu C. D. Simultaneous visualization of multiple protein interactions in living cells using multicolor fluorescence complementation analysis / C. D. Ни, Π’. K. Kerppola // Nat. Biotechnol. — 2003.-V. 21.-P. 539−545.
  10. Shaner N.C. Advances in fluorescent protein technology / Shaner N.C., Patterson G.H., Davidson M.W. // J. Cell Sei. 2007. — V. 120. — P. 4247−4260.
  11. Heim R. Engineering green fluorescent protein for improved brightness, longer wavelengths and fluorescence energy transfer / R. Heim, R.Y.Tsien // Curr. Biol. 1996. — V. 6. — P. 178−182.
  12. Far-red fluorescent proteins evolved from a blue chromoprotein from Actinia equina / Shkrob, M.A., Yanushevich, Y.G., Chudakov D.M. et al. // Biochem. J. 2005. — V. 392. — P. 649−654.
  13. The first mutant of the Aequorea victoria green fluorescent protein that forms a red chromophore / Mishin A.S., Subach F.V., Yampolsky I.V. et al. // Biochemistry. 2008. — V. 47. -P. 4666−4673.
  14. Optimized and far-red-emitting variants of fluorescent protein eqFP611 / Kredel S., Nienhaus K., Oswald F. et al. // Chem. Biol. 2008. — V. 15. — P. 224−233.
  15. Global Protein Stability Profiling in Mammalian Cells / Yen H. C. S., Xu Q. K., Chou D. M. et al. // Science. 2008. — V. 322. — P. 918−923.
  16. Wu L. Syntheses of highly fluorescent GFP-chromophore analogues / L. Wu, K. J. Burgess // Am. Chem. Soc. 2008. — V. 130. — P. 4089−4096.
  17. Piatkevich, K.D., Efremenko, E.N., Verkhusha, V.V., and Varfolomeev, S.D. Red fluorescent proteins and their properties. Russ. Chem. Reviews 2010, 79: 243−258.
  18. Campbell RE, Tour O, Palmer AE, Steinbach PA, Baird GS, Zacharias DA, Tsien RY. A monomeric red fluorescent protein. Proc Natl Acad Sei USA. 2002 Jun 11−99(12):7877−82.
  19. Shaner NC, Campbell RE, Steinbach PA, Giepmans BN, Palmer AE, Tsien RY. Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein. Nat Biotechnol. 2004 Dec-22(l2): 1567−72.
  20. Subach OM, Gundorov IS, Yoshimura M, Subach FV, Zhang J, Gruenwald D, Souslova EA, Chudakov DM, Verkhusha VV. Conversion of red fluorescent protein into a bright blue probe. Chem Biol. 2008 Oct 20−15(10):1116−24.
  21. Subach FV, Subach OM, Gundorov IS, Morozova KS, Piatkevich KD, Cuervo AM, Verkhusha VV. Monomeric fluorescent timers that change color from blue to red report on cellular trafficking. Nat Chem Biol. 2009 Feb-5(2):l 18−26.
  22. Subach FV, Patterson GH, Manley S, Gillette JM, Lippincott-Schwartz J, Verkhusha VV. Photoaetivatable mCherry for high-resolution two-color fluorescence microscopy. Nat Methods. 2009 Feb-6(2): 153−9.
  23. Konig K. Multiphoton microscopy in life sciences. J Microsc. 2000 Nov-200(Pt 2):83−104.
  24. Zipfel WR, Williams RM, Webb WW. Nonlinear magic: multiphoton microscopy in the biosciences. Nat Biotechnol. 2003 Nov-21(l 1): 1369−77.
  25. Drobizhev M, Tillo S, Makarov NS, Hughes TE, Rebane A. Absolute two-photon absorption spectra and two-photon brightness of orange and red fluorescent proteins. J Phys Chem B. 2009 Jan 29−113(4):855−9.
  26. Green fluorescent protein as a marker for gene expression / M. Chalfle, Y. Tu, G. Euskirchen et al. // Science. 1994,-V. 263.-P. 802−805.
  27. Wall MA, Socolich M, Ranganathan R. The structural basis for red fluorescence in the tetrameric GFP homolog DsRed. Nat Struct Biol. 2000 Dec-7(12):l 133−8.
  28. Yarbrough D, Wachter RM, Kallio K, Matz MV, Remington SJ. Refined crystal structure of DsRed, a red fluorescent protein from coral, at 2.0-A resolution. Proc Natl Acad Sei USA. 2001 Jan 16−98(2):462−7.
  29. Vrzheshch PV, Akovbian NA, Varfolomeyev SD, Verkhusha VV. Denaturation and partial renaturation of a tightly tetramerized DsRed protein under mildly acidic conditions. FEBS Lett. 2000 Dec 29−487(2):203−8.
  30. Petersen J, Wilmann PG, Beddoe T, Oakley AJ, Devenish RJ, Prescott M, Rossjohn J. The 2.0-A crystal structure of eqFPoll, a far red fluorescent protein from the sea anemone Entacmaea quadricolor. J Biol Chem. 2003 Nov 7−278(45):44 626−31.
  31. He X, Bell AF, Tonge PJ. Synthesis and spectroscopic studies of model red fluorescent protein chromophores. Org Lett. 2002 May 2−4(9): 1523−6.
  32. Gross LA, Baird GS, Hoffman RC, Baldridge KK, Tsien RY. The structure of the chromophore within DsRed, a red fluorescent protein from coral. Proc Natl Acad Sei USA. 2000 Oct 24−97(22): 11 990−5.
  33. Remington SJ, Wachter RM, Yarbrough DK, Branchaud B, Anderson DC, Kallio K, Lukyanov KA. zFP538, a yellow-fluorescent protein from Zoanthus, contains a novel three-ring chromophore. Biochemistry. 2005 Jan 11−44(1):202−12.
  34. Quillin ML, Anstrom DM, Shu X, O’Leary S, Kallio K, Chudakov DM, Remington SJ. Kindling fluorescent protein from Anemonia sulcata: dark-state structure at 1.38 A resolution. Biochemistry. 2005 Apr 19−44(15):5774−87.
  35. Yampolsky IV, Remington SJ, Martynov VI, Potapov VK, Lukyanov S, Lukyanov KA. Synthesis and properties of the chromophore of the asFP595 chromoprotein from Anemonia sulcata. Biochemistry. 2005 Apr 19−44(15):5788−93.
  36. Ugalde JA, Chang BS, Matz MV. Evolution of coral pigments recreated. Science. 2004 Sep 3−305(5689):1433.
  37. Sniegowski JA, Lappe JW, Patel HN, Huffman HA, Wachter RM. Base catalysis of chromophore formation in Arg96 and Glu222 variants of green fluorescent protein. J Biol Chem. 2005 Jul 15−280(28):26 248−55.
  38. Bulina ME, Chudakov DM, Mudrik NN, Lukyanov KA. Interconversion of Anthozoa GFP-like fluorescent and non-fluorescent proteins by mutagenesis. BMC Biochem. 2002 Apr 24−3:7.
  39. Lin MZ, McKeown MR, Ng HL, Aguilera TA, Shaner NC, Campbell RE, Adams SR, Gross LA, Ma W, Alber T, Tsien RY. Autofluorescent proteins with excitation in the optical window for intravital imaging in mammals. Chem Biol. 2009 Nov 25−16(11):1169−79.
  40. Nienhaus K, Nar H, Heilker R, Wiedenmann J, Nienhaus GU. Trans-cis. isomerization is responsible for the red-shifted fluorescence in variants of the red fluorescent protein eqFP611. J Am Chem Soc. 2008 Sep 24−130(38):12 578−9.
  41. Remington S. J. Structural basis for understanding spectral variations in green fluorescent protein / S. J. Remington // Methods Enzymol. 2000. — V. 305. — P. 196−211.
  42. Defining the role of arginine 96 in green fluorescent protein fluorophore biosynthesis / T.I. Wood, D.P. Barondeau, C. Hitomi et al. // Biochemistry. 2005. — V. 44. — P. 16 211−16 220.
  43. Amino acid substitutions around the chromophore of the chromoprotein Rtms5 influence polypeptide cleavage / K. Turcic, A. Pettikiriarachchi, J. Battad et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. -2006. V. 340. — P. 1139−1143.
  44. Voliani V, Bizzarri R, Nifosi R, Abbruzzetti S, Grandi E, Viappiani C, Beltram F. Cis-trans photoisomerization of fluorescent-protein chromophores. J Phys Chem B. 2008 Aug 28- 112(34): 10 714−22.
  45. Day RN, Davidson MW. The fluorescent protein palette: tools for cellular imaging. Chem Soc Rev. 2009 0ct-38(10):2887−921.
  46. Labas Y A, Gurskaya NG, Yanushevich YG, Fradkov AF, Lukyanov KA, Lukyanov SA, Matz MY. Diversity and evolution of the green fluorescent protein family. Proc Natl Acad Sci USA. 2002 Apr 2−99(7):4256−61.
  47. Wiedenmann J, Elke C, Spindler KD, Funke W Cracks in the beta-can: fluorescent proteins from Anemonia sulcata (Anthozoa, Actinaria). Proc Natl Acad Sci USA. 2000 Dec 19−97(26):14 091−6.
  48. Gurskaya NG, Fradkov AF, Terskikh A, Matz MV, Labas YA, Martynov VI, Yanushevich YG, Lukyanov KA, Lukyanov SA. GFP-like chromoproteins as a source of far-red fluorescent proteins. FEBS Lett. 2001 Oct 19−507(l):16−20.
  49. Shcherbo D, Merzlyak EM, Chepurnykh TV, Fradkov AF, Ermakova GV, Solovieva EA, Lukyanov KA, Bogdanova EA, Zaraisky AG, Lukyanov S, Chudakov DM. Bright far-red fluorescent protein for whole-body imaging. Nat Methods. 2007 Sep-4(9):741−6.
  50. Karasawa S, Araki T, Nagai T, Mizuno H, Miyawaki A. Cyan-emitting and orange-emitting fluorescent proteins as a donor/acceptor pair for fluorescence resonance energy transfer. Biochem J. 2004 Jul l-381(Pt 1):307−12.
  51. Yanushevich YG, Staroverov DB, Savitsky AP, Fradkov AF, Gurskaya NG, Bulina ME, Lukyanov KA, Lukyanov SA. A strategy for the generation of non-aggregating mutants of Anthozoa fluorescent proteins. FEBS Lett. 2002 Jan 30−511(1−3):11−4.
  52. Baird GS, Zacharias DA, Tsien RY. Biochemistry, mutagenesis, and oligomerization of DsRed, a red fluorescent protein from coral. Proc Natl Acad Sci USA. 2000 Oct 24−97(22):11 984−9.
  53. Bevis BJ, Glick BS. Rapidly maturing variants of the Discosoma red fluorescent protein (DsRed). Nat Biotechnol. 2002 Jan-20(l):83−7.
  54. Mizuno H, Sawano A, Eli P, Hama H, Miyawaki A. Red fluorescent protein from Discosoma as a fusion tag and a partner for fluorescence resonance energy transfer. Biochemistry. 2001 Feb 27−40(8):2502−10.
  55. Lauf U, Lopez P, Falk MM. Expression of fluorescently tagged connexins: a novel approach to rescue function of oligomeric DsRed-tagged proteins. FEBS Lett. 2001 Jun 1−498(1):11−5.
  56. Heikal AA, Hess ST, Baird GS, Tsien RY, Webb WW. Molecular spectroscopy and dynamics of intrinsically fluorescent proteins: coral red (dsRed) and yellow (Citrine). Proc Natl Acad Sci U S A. 2000 Oct 24−97(22): 11 996−2001.
  57. Kogure T, Karasawa S, Araki T, Saito K, Kinjo M, Miyawaki A. A fluorescent variant of a protein from the stony coral Montipora facilitates dual-color single-laser fluorescence cross-correlation spectroscopy. Nat Biotechnol. 2006 May-24(5):577−81.
  58. Wang Z, Shah JV, Chen Z, Sun CH, Berns MW. Fluorescence correlation spectroscopy investigation of a GFP mutant-enhanced cyan fluorescent protein and its tubulin fusion in living cells with two-photon excitation. J Biomed Opt. 2004 Mar-Apr-9(2):395−403.
  59. Subach FV, Patterson GH, Renz M, Lippincott-Schwartz J, Verkhusha VV. Bright monomeric photoactivatable red fluorescent protein lor two-color super-resolution sptPALM of live cells. J Am Chem Soc. 2010 May 12- 132(18>:6481−91.
  60. Jain RK, Joyce PB, Molinete M, Halban PA, Gorr SU. Oligomerization of green fluorescent protein in the secretory pathway of endocrine cells. Biochem J. 2001 Dec 15−360(Pt 3):645−9.
  61. Chen JC, Viollier PH, Shapiro L. A membrane metalloprotease participates in the sequential degradation of a Caulobacter polarity determinant. Mol Microbiol. 2005 Feb-55(4):1085−103.
  62. Fradkov AF, Verkhusha W, Staroverov DB, Bulina ME, Yanushevich YG, Martynov VI, Lukyanov S, Lukyanov KA. Far-red fluorescent tag for protein labelling. Biochem J. 2002 Nov 15−368(Pt 1): 17−21.
  63. Kogure T, Kawano H, Abe Y, Miyawaki A. Fluorescence imaging using a fluorescent protein with a large Stokes shift. Methods. 2008 Jul-45(3):223−6.
  64. Shcherbo D, Murphy CS, Ermakova GV, Solovieva EA, Chepurnykh TV, Shcheglov AS, Verkhusha VV, Pletnev VZ, Hazelwood KL, Roche PM, Lukyanov S, Zaraisky AG, Davidson
  65. MW, Chudakov DM. Far-red fluorescent tags for protein imaging in living tissues. Biochem J. 2009 Mar 15−418(3):567−74.
  66. Shaner NC, Lin MZ, McKeown MR, Steinbach PA, Hazelwood KL, Davidson MW, Tsien RY. Improving the photostability of bright monomeric orange and red fluorescent proteins. Nat Methods. 2008 Jun-5(6):545−51.
  67. Shaner NC, Steinbach PA, Tsien RY. A guide to choosing fluorescent proteins. Nat Methods. 2005 Dec-2(12):905−9.
  68. Chudakov DM, Matz MV, Lukyanov S, Lukyanov KA. Fluorescent proteins and their applications in imaging living cells and tissues. Physiol Rev. 2010 Jul-90(3):l 103−63.
  69. Wang L, Jackson WC, Steinbach PA, Tsien RY. Evolution of new nonantibody proteins via iterative somatic hypermutation. Proc Natl Acad Sei USA. 2004 Nov 30- 101 (48): 16 745−9.
  70. Shu X, Royant A, Lin MZ, Aguilera TA, Lev-Ram V, Steinbach PA, Tsien RY. Mammalian expression of infrared fluorescent proteins engineered from a bacterial phytochrome. Science. 2009 May 8−324(5928):804−7.
  71. Violot S, Carpentier P, Blanchoin L, Bourgeois D. Reverse pH-dependence of chromophore protonation explains the large Stokes shift of the red fluorescent protein mKeima. J Am Chem Soc. 2009 Aug 5−131(30):10 356−7.
  72. Shu X, Wang L, Colip L, Kallio K, Remington SJ. Unique interactions between the chromophore and glutamate 16 lead to far-red emission in a red fluorescent protein. Protein Sei. 2009 Feb-18(2):460−6.
  73. Morozova KS, Piatkevich KD, Gould TJ, Zhang J, Bewersdorf J, Verkhusha VV. Far-red fluorescent protein excitable with red lasers for flow cytometry and superresolution STED nanoscopy. Biophys J. 2010 Jul 21−99(2):L13−5.
  74. Wiehler J, Jung G, Seebacher C, Zumbusch A, Steipe B. Mutagenic stabilization of the photocycle intermediate of green fluorescent protein (GFP). Chembiochem. 2003 Nov 7−4(11):1164−71.
  75. Shu X, Leiderman P, Gepshtein R, Smith NR, Kallio K, Huppert D, Remington S J. An alternative excited-state proton transfer pathway in green fluorescent protein variant S205V. Protein Sei. 2007 Dec-16(12):2703−10.
  76. McAnaney TB, Shi X, Abbyad P, Jung H, Remington SJ, Boxer SG. Green fluorescent protein variants as ratiometric dual emission pH sensors. 3. Temperature dependence of proton transfer. Biochemistry. 2005 Jun 21−44(24):8701−11.
  77. Stoner-Ma D, Jaye AA, Ronayne KL, Nappa J, Tonge PJ, Meech SR. Ultrafast Electronic and Vibrational Dynamics of Stabilized A State Mutants of the Green Fluorescent Protein (GFP): Snipping the Proton Wire. Chem Phys. 2008 Jun 23−350(1−3):193−200.
  78. Nienhaus K, Renzi F, Vallone B, Wiedenmann J, Nienhaus GU. Chromophore-protein interactions in the anthozoan green fluorescent protein asFP499. Biophys J. 2006 Dec 1−91(11):4210−20.
  79. Girkin JM, Poland S, Wright AJ. Adaptive optics for deeper imaging of biological samples. Curr Opin Biotechnol. 2009 Feb-20(l):106−10.
  80. Gould TJ, Gunewardene MS, Gudheti MV, Verkhusha W, Yin SR, Gosse JA, Hess ST. Nanoscale imaging of molecular positions and anisotropics. Nat Methods. 2008 Dec-5(12):1027−30.
  81. Piatkevich KD, Verkhusha VV. Advances in engineering of fluorescent proteins and photoactivatable proteins with red emission. Curr Opin Chem Biol. 2010 Feb-14(l):23−9.
  82. Lukyanov KA, Chudakov DM, Lukyanov S, Verkhusha W. Innovation: Photoactivatable fluorescent proteins. Nat Rev Mol Cell Biol. 2005 Nov-6(l 1):885−91.
  83. Chudakov DM, Lukyanov S, Lukyanov KA. Fluorescent proteins as a toolkit for in vivo imaging. Trends Biotechnol. 2005 Dec-23(12):605−13.
  84. EGFP and DsRed expressing cultures of Escherichia coli imaged by confocal, two-photon and fluorescence lifetime microscopy / S. Jakobs, V. Subramaniam, A. Schonle et al. // FEBS Lett. 2000. — V. 479.-P. 131−135.
  85. Red fluorescent protein (DsRed) as a reporter in Saccharomyces cerevisiae / F. Rodrigues, M. van Hemert, H. Y. Steensma et al. //J. Bacteriol. 2001. -V. 183. — P. 3791−3794.
  86. An enhanced mutant of red fluorescent protein DsRed for double labeling and developmental timer of neural fiber bundle formation / V. V. Verkhusha, H. Otsuna, T. Awasaki et al. // J. Biol. Chem. 2001. — V. 276. — P. 29 621−29 624.
  87. Werdien D. FLP and Cre recombinase function in Xenopus embryos / D. Werdien, G. Peiler, G.U. Ryffel //Nucleic Acids Res. 2001. -V. 29. — P. 53.
  88. Kawano H, Kogure T, Abe Y, Mizuno H, Miyawaki A. Two-photon dual-color imaging using fluorescent proteins. Nat Methods. 2008 May-5(5):373−4.
  89. Gould TJ, Verkhusha VV, Hess ST. Imaging biological structures with fluorescence photoactivation localization microscopy. Nat Protoc. 2009−4(3):291−308
  90. Chudakov DM, Verkhusha W, Staroverov DB, Souslova EA, Lukyanov S, Lukyanov KA. Photoswitchable cyan fluorescent protein for protein tracking. Nat Biotechnol. 2004 Nov-22(ll): 1435−9.
  91. Chudakov DM, Lukyanov S, Lukyanov KA. Tracking intracellular protein movements using photoswitchable fluorescent proteins PS-CFP2 and Dendra2. Nat Protoc. 2007−2(8):2024−32
  92. Domingo B, Sabariegos R, Picazo F, Llopis J. Imaging FRET standards by steady-state fluorescence and lifetime methods. Microsc Res Tech. 2007 Dec-70(12):1010−21.
  93. Anderson KI, Sanderson J, Gerwig S, Peychl J. A new configuration of the Zeiss LSM 510 for simultaneous optical separation of green and red fluorescent protein pairs. Cytometry A. 2006 Aug l-69(8):920−9.
  94. Cyan-emitting and orange-emitting fluorescent proteins as a donor/acceptor pair for fluorescence resonance energy transfer / S. Karasawa, T. Araki, T. Nagai et al.} // Biochem J. -2004.-V. 381.-P. 307−312.
  95. Cyan and yellow super fluorescent proteins with improved brightness, protein folding, and FRET Forster radius / G.-J. Kremers, J. Goedhart, E. B. van Munster, T. W. Gadella // Biochemistry. 2006 — V. 45. — P. 6570−6579.
  96. Galperin E. Three-chromophore FRET microscopy to analyze multiprotein interactions in living cells / E. Galperin, V.V. Verkhusha, A. Sorkin // Nat Methods. 2004. — V. 1. — P. 209−217.
  97. Tavare L. Some probabilistic and statistical problems of the analysis of DNA sequences / L. Tavare // Lect. Math. Life Sei. 1986. -V. 17. P. 57−86.
  98. Neylon C. Chemical and biochemical strategies for the randomization of protein encoding DNA sequences: library construction methods for directed evolution / C. Neylon // Nucleic. Acids. Res. 2004. — V. 32. — P. 1448−1459.
  99. Site-directed mutagenesis by overlap extension using the polymerase chain reaction / S.N. Ho, H.D. Hunt, R.M. Horton et al. // Gene. 1989. -V. 77. — P. 51−59.
  100. Laemmli. U. K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4 / U. K. Laemmli //Nature. 1970. — V. 227. — P.680−685.
  101. Born M. Principles of Optics: Electromagnetic Theory of Propagation, Interference and Diffraction of Light / M. Born, E. Wolf // New York: Cambridge University Press. 1997.
  102. Hillesheim LN, Chen Y, Miiller JD. Dual-color photon counting histogram analysis of mRFPl and EGFP in living cells. Biophys J. 2006 Dec 1−91(11):4273−84.
  103. Nagy A, Wu J, Berland KM. Observation volumes and {gamma}-factors in two-photon fluorescence fluctuation spectroscopy. Biophys J. 2005 Sep-89(3):2077−90.
  104. Z Otwinowski, W Minor Processing of X-ray diffraction data collected in oscillation mode Methods in enzymology, 1997,276, 307−326.
  105. Storoni LC, McCoy AJ, Read RJ. Likelihood-enhanced fast rotation functions. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 2004 Mar-60(Pt 3):432−8.
  106. Collaborative Computational Project, Number 4. The CCP4 suite: programs for protein crystallography. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 1994 Sep l-50(Pt 5):760−3.
  107. Emsley P, Cowtan K. Coot: model-building tools for molecular graphics. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 2004 Dec-60(Pt 12 Pt l):2126−32.
  108. Hooft RW, Vriend G, Sander C, Abola EE. Errors in protein structures. Nature. 1996 May 23−381(6580):272.
  109. R. A. Laskowski, M. W. MacArthur, D. S. Moss and J. M. Thornton PROCHECK: a program to check the stereochemical quality of protein structures J. Appl. Cryst. (1993). 26, 283 291.
  110. Krissinel E, Henrick K. Secondary-structure matching (SSM), a new tool for fast protein structure alignment in three dimensions. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 2004 Dec-60(Pt 12 Pt l):2256−68.
  111. Segall JE, Tyerech S, Boselli L, Masseling S, Helft J, Chan A, Jones J, Condeelis J. EGF stimulates lamellipod extension in metastatic mammary adenocarcinoma cells by an actin-dependent mechanism. Clin Exp Metastasis. 1996 Jan-14(l):61−72.
  112. Bailly M, Yan L, Whitesides GM, Condeelis JS, Segall JE Regulation of protrusion shape and adhesion to the substratum during chemotactic responses of mammalian carcinoma cells. Exp Cell Res. 1998 Jun 15−241(2):285−99.
  113. Hernandez L, Smirnova T, Kedrin D, Wyckoff J, Zhu L, Stanley ER, Cox D, Muller WJ, Pollard JW, Van Rooijen N, Segall JE. The EGF/CSF-1 paracrine invasion loop can be triggered by heregulin betal and CXCL12. Cancer Res. 2009 Apr l-69(7):3221−7.
  114. Sternberg S.R. Biomedical image processing / S.R. Sternberg // IEEE Comput. 1983. — V. 16.-P. 22−34.
  115. Rasband WS (1997−2006) ImageJ. National Institutes of Health, Bethesda, MD, http://rsb.info.nih.gov/ij/
  116. Kedrin D, Gligorijevic B, Wyckoff J, Verkhusha W, Condeelis J, Segall JE, van Rheenen J. Intravital imaging of metastatic behavior through a mammary imaging window. Nat Methods. 2008 Dec-5(12):1019−21.
  117. Wyckoff J, Wang W, Lin EY, Wang Y, Pixley F, Stanley ER, Graf T, Pollard JW, Segall J, Condeelis J. A paracrine loop between tumor cells and macrophages is required for tumor cell migration in mammary tumors. Cancer Res. 2004 Oct l-64(19):7022−9.
  118. Condeelis J, Segall JE. Intravital imaging of cell movement in tumours. Nat Rev Cancer. 2003 Dec-3(12):921−30.
  119. Bogdanov AM, Mishin AS, Yampolsky IV, Belousov VV, Chudakov DM, Subach FV, Verkhusha VV, Lukyanov S, Lukyanov KA. Green fluorescent proteins are light-induced electron donors. Nat Chem Bioh 2009 Jul-5(7):459−61.
  120. Nobes CD, Hall A. Rho GTPases control polarity, protrusion, and adhesion during cell movement. J Cell Biol. 1999 Mar 22- 144(6): 1235−44.
  121. Wyckoff JB, Jones JG, Condeelis JS, Segall JE. A critical step in metastasis: in vivo analysis of intravasation at the primary tumor. Cancer Res. 2000 May 1 -60(9):2504-l 1.
  122. Flores-Ramirez G, Rivera M, Morales-Pablos A, Osuna J, Soberon X, Gaytan P. The effect of amino acid deletions and substitutions in the longest loop of GFP. BMC Chem Biol. 2007 Jun 26−7:1.
  123. Kupfer A, Louvard D, Singer SJ. Polarization of the Golgi apparatus and the microtubule-organizing center in cultured fibroblasts at the edge of an experimental wound. Proc Natl Acad Sci USA. 1982 Apr-79(8):2603−7.
  124. Bershadsky AD, Futerman AH. Disruption of the Golgi apparatus by brefeldin A blocks cell polarization and inhibits directed cell migration. Proc Natl Acad Sci USA. 1994 Jun 7−91(12):5686−9.
  125. Gotlieb AI, Spector W. Migration into an in vitro experimental wound: a comparison of porcine aortic endothelial and smooth muscle cells and the effect of culture irradiation. Am J Pathol. 1981 May-103(2):271−82.
  126. Wyckoff JB, Wang Y, Lin EY, Li JF, Goswami S, Stanley ER, Segall JE, Pollard JW, Condeelis J. Direct visualization of macrophage-assisted tumor cell intravasation in mammary tumors. Cancer Res. 2007 Mar 15−67(6):2649−56
  127. Devreotes P, Janetopoulos C. Eukaryotic chemotaxis: distinctions between directional sensing and polarization. J Biol Chem. 2003 Jun 6−278(23):20 445−8.
Π—Π°ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡ‚ΡŒ Ρ„ΠΎΡ€ΠΌΡƒ Ρ‚Π΅ΠΊΡƒΡ‰Π΅ΠΉ Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚ΠΎΠΉ